Kërkesat për mbledhjen dhe përgatitjen e materialit biologjik për studime hematologjike.

Kërkesat për transportin dhe ruajtjen e materialit biologjik për studime hematologjike.

Mbushja e saktë e drejtimit për studimin e sistemit të hemostazës:

Emri i plotë, mosha, gjinia e pacientit

Koha e marrjes së mostrave të gjakut për kërkime

Diagnoza klinike (shkurtimisht)

Hematokriti

Sindroma hemorragjike (gjakderdhje hundore, uterine, etj.), tromboza (tregon lokalizim), shoku, dështimi i shumëfishtë i organeve, trauma, sindroma e ngjeshjes së zgjatur, djegiet, etj.)

Tregoni barnat e marra që ndikojnë në parametrat e hemostazës, duke treguar dozën, mënyrën dhe datën e administrimit të fundit

Intervali kohor për marrjen e mostrave (gjaku), kufizimet dietike dhe ushtrimet respektohen:

Kampionimi i planifikuar i gjakut kryhet nga ora 7 deri në 9 orët e mëngjesit me pacientin të shtrirë ose ulur. Kur studioni hemostazën në dinamikë, është e dëshirueshme që gjaku të merret në të njëjtin pozicion të trupit si ai i mëparshmi.

Gjaku merret në stomak bosh, 12-14 orë pas vaktit të fundit.

Para marrjes së gjakut, është e dëshirueshme që pacienti të pushojë për 15 minuta.

Përjashtimet: studimet e hemostazës nga cito, vlerësimi i APTT.

Në prag të një studimi të planifikuar (brenda 24 orëve), pacienti përmbahet nga të rëndësishmet Aktiviteti fizik, marrja e alkoolit. Është e dëshirueshme që pacienti të mos hajë ushqime yndyrore në prag të marrjes së mostrave të gjakut.

Ndërhyrja kirurgjikale çon në një ndryshim të hemostazës për një periudhë prej disa ditësh deri në disa javë.

Faktorët që ndikojnë në hemostazën përfshijnë injeksione, infuzione, transfuzione, punksione, biopsi, masazh, dializë, futja e agjentëve radiopakë, imunoskintiografia, rrezatimi jonizues, ekzaminimi endoskopik, dieta speciale.

RREGULLAT PËR MARRJEN E GJAKUT

Gjaku merret nga një venë periferike (zakonisht kubitale).

Marrja e mostrave të gjakut kryhet vetëm duke përdorur një sistem kampionimi me vakum në epruveta me një shenjë të veçantë me ngjyra në varësi të antikoagulantit të përdorur ( citrat natriumi 3.2%) në raport: 1 vëllim citrat natriumi me 9 vëllime gjaku.

Për kërkime nivelet e trombociteve marrja e gjakut në një provëz me EDTA(kodimi me ngjyra jargavan). Studimi i nivelit të trombociteve përshkruhet në mungesë të një testi klinik të gjakut ose kur vlerat patologjike të nivelit të trombociteve merren në një test klinik të gjakut.

Lejohet një turne i shkurtër, jo më shumë se 60 sekonda. Hiqeni turniket menjëherë pasi gjilpëra të ketë hyrë në venë. Për marrjen e mostrave të gjakut për studimin e sistemit të koagulimit, është e rëndësishme që të mos masazhoni venat, t'i trokasni ato.

Përdorni një gjilpërë për grumbullimin e gjakut me një diametër të brendshëm 0,7-1 mm (madhësia 19-22).

Përdorimi i shiringës është i papranueshëm për shkak të aktivizimit të trombociteve dhe faktorëve të koagulimit të gjakut nga lëvizja e turbullt e gjakut dhe përzierja e tij me ajrin (shkumë). Përjashtohet kur përdorni kontejnerë me vakum.

Pas futjes së gjilpërës në venë, lidhni enën me vakum, gjaku do të fillojë të rrjedhë në enë nga graviteti.

Merrni gjak për ekzaminim koagulologjik e dyta epruvetë, fillimisht përdoret për studime të tjera, për shembull, biokimik. Nëse së pari duhet të nxirret epruveta e koagulimit, tërhiqeni 5 ml gjakun e parë në një epruvetë të zbrazët dhe hidhni në parandalojnë hyrjen e tromboplastinës së indeve në mostër.

Përziejeni lehtë gjakun menjëherë pas marrjes pa shkumë me antikoagulantin (përmbysni tubin 3-4 herë).

Pas marrjes së mostrës së materialit biologjik, kontrolloni mostrën e gjakut. Kontrolli i saktë i mostrave të gjakut shmang gabimet e mëposhtme: raporti i gabuar i vëllimeve të gjakut/citrateve; gjak i mpiksur pjesërisht.

Gjaku dorëzohet në laborator brenda 45 minutave pas marrjes së tij. Gjatë transportit, gjaku nuk duhet të lëkundet. Mostrat e gjakut nuk duhet të transportohen në temperatura nën 4°C dhe mbi 30°C.

Asistent paramedik-laborator (teknolog mjekësor) kryen:

kontrolli i hyrjes së gjakut të dhënë, duke përfshirë: 1) duke kontrolluar korrektësinë e plotësimit të formularit të referimit. 2) kontrollimi i përshtatshmërisë së vëllimit të gjakut të dhënë sipas etiketës në tub, 3) kontrollimi i mostrës për mungesën e mpiksjes kur tubi anohet ngadalë.

centrifugimi i gjakut të dhënë për të marrë:

plazma e pasur me trombocite ( Parametrat e centrifugimit: rpm = 1000 rpm (rreth 150-200g), koha e centrifugimit 5-7 minuta.

Për përzgjedhje kushte optimale centrifugimi udhëhiqet nga forca centrifugale (g). Ju mund të përdorni formulën:

g = 1,118 x 0,00001r x n2,

ku r është rrezja e centrifugës - distanca në centimetra midis boshtit të rotorit dhe qendrës së epruvetës në sediljen e centrifugës; n është numri i rrotullimeve në minutë.

plazma e varfër me trombocitet Parametrat e centrifugimit: rpm = ~2500-3000 rpm (rreth 1500-2000g), koha e centrifugimit 10-20 minuta. Për heqjen e plotë të trombociteve, kryhet centrifugimi i përsëritur, parametrat e centrifugimit mbeten të njëjta.

3. Pas centrifugimit, kontrollon plazmën për ngjyrën dhe transparencën: mostra e hemolizuar, plazma ikterike ose lipemike (kiloze) nuk i nënshtrohen ekzaminimit.

Pas centrifugimit, supernatanti hiqet.

E dëshirueshme studimi i parametrave të hemostazës gjatë 2 orë pas marrjes së mostrës së gjakut, por lejohet studimi i parametrave koagulologjikë në brenda 4 orëve nëse plazma është ndarë nga sedimenti i eritrociteve dhe leukociteve.

Nëse është e nevojshme ruajtje afatgjatë Mostrat "të freskëta" (jo më vonë se 2 orë pas marrjes së mostrës së gjakut) plazma pa trombocite mund të jetë një herë të ngrijë dhe ruhet deri në 2 javë në -20°C ose deri në 6 muaj në -70°C. Plazma duhet të shkrihet shpejt ujë të ngrohtë(+36°C), përzieni tërësisht dhe ekzaminojeni menjëherë. Pas ngrirjes, një ndryshim në APTT është i mundur.

Metoda e përgatitjes së mikropreparateve për studime hematologjike, metodat e fiksimit dhe ngjyrosjes.

Metoda e përgatitjes së strisheve të gjakut për studime hematologjike.

Përgatitja dhe përpunimi i gotave. Syzet e reja të pastra mund të përdoren pas heqjes së yndyrës në një përzierje Nikiforov (pjesë të barabarta prej 96% alkool etilik dhe eter). Syzet e përdorura ngjyhen për një ditë në një solucion të ngrohtë me sapun ose në një zgjidhje pluhuri larës (1 lugë gjelle pluhur për 5 litra ujë). Një ditë më vonë, tretësira kullohet, gota lahet me ujë të rrjedhshëm. Pastaj derdhen përsëri me një solucion të ngrohtë sapuni ose një tretësirë ​​pluhuri larës dhe vihen në valë, zihen në të njëjtën tretësirë ​​për 5-10 minuta (jo më shumë, për të shmangur turbullimin e gotave). Pas ftohjes së tretësirës, ​​kullohet sërish, rrëshqitjet shpëlahen me ujë të rrjedhshëm dhe çdo rrëshqitje lahet me furçë nën ujë të rrjedhshëm. Gotat e trajtuara në këtë mënyrë shtrihen në një fletë të pastër për t'u tharë. Gotat e pastra për heqjen e yndyrës vendosen në një përzierje Nikiforov ose alkool etilik 96% për 60 minuta, më pas fshihen të thata dhe ruhen në një enë të pastër me qafë të gjerë. Syzet e pastra rekomandohet të merren ose me piskatore ose me dorë nga skajet anësore.

Përgatitja e njollave. Një pikë e vogël gjaku aplikohet në një rrëshqitje qelqi të përgatitur të thatë më afër anës së shkurtër me një shufër qelqi (ose direkt nga vendi i shpimit të gishtit). Lëreni gotën në një pozicion horizontal dhe lyeni gjakun në gotë me një gotë të thatë, të pastër dhe të bluar, duke e mbajtur atë në një kënd prej 45°. Me një buzë të shkurtër, pasi presin derisa i gjithë gjaku të jetë përhapur mbi të, ato vizatohen shpejt mbi një rrëshqitje xhami. Presioni i fortë në rrëshqitjen e xhamit nuk duhet të jetë, pasi kjo mund të dëmtojë qelizat e gjakut. Njollat ​​thahen në ajër dhe shënohen (mundësisht me laps të thjeshtë). Ngjyrosja e tharë duhet të jetë njëtrajtësisht e hollë, me ngjyrë të verdhë, me përmasa të mjaftueshme, e vendosur në një distancë prej 1,0-1,5 cm nga skajet e xhamit, të zërë pothuajse të gjithë gjatësinë e xhamit dhe të përfundojë me një "panikë". Nuk duhen përdorur njolla të trasha (rozë të thellë), pasi morfologjia e qelizave është e vështirë të dallohet në to.

Smeat me cilësi standarde merren duke përdorur pajisje automatike të dizajnuara për përgatitjen e njollave dhe të prodhuara nga kompani të ndryshme.

Fiksimi dhe ngjyrosja e njollave të gjakut. Përpara ngjyrosjes, njollat ​​e gjakut zakonisht fiksohen për 5-10 minuta në alkool metil për të parandaluar hemolizën, e cila mund të ndodhë me kontakt me ujin gjatë procesit të ngjyrosjes me një ngjyrë të tretshme në ujë ose kontaktin e mëvonshëm me ujin. Teknikat e fiksimit janë përshkruar më poshtë së bashku me teknikat e ngjyrosjes. Fiksimi nuk kërkohet për njollat ​​Wright dhe Leishman, pasi këto njolla përmbajnë alkool metil.

Tamponët e thatë mund të ruhen për 2 ditë në një vend të thatë dhe të ngrohtë; në një atmosferë të nxehtë dhe të lagësht pa fiksim, ato ruhen shumë më pak.

Qelizat e gjakut përmbajnë struktura bazofile dhe acidofile që ndryshojnë në reagim (pH). Bërthamat janë bazofile dhe kanë ngjyrë blu. Granulat bazofile shumë bazofile (acide) janë gjithashtu blu. Hemoglobina (duke qenë bazike) ngjyroset në mënyrë acidofile, pra me ngjyrë të kuqe. Ngjyrosja me një kombinim të ngjyrave acidike dhe bazike quhet ngjyrosje Romanovsky dhe ka modifikime të ndryshme (Pappenheim, Wright, Noht, Leishman, Giemsa, Jayner, etj.). Blu metilen zakonisht përdoret si bojë kryesore, por përdoret gjithashtu bluja e toluidinës. Si ngjyrues acid, përdoren eozina, azure I dhe azure II.

Kriteret për ngjyrosje të mirë: ngjyra rozë e eritrociteve, ngjyrosje vjollcë e grimcave të neutrofileve në sfond rozë, granularitet i butë azurofilik i monociteve.

Për të holluar bojën, është mirë të përdorni ujë neutral të distiluar të freskët. Uji i ndenjur i distiluar bëhet acid për shkak të kapjes së dioksidit të karbonit nga atmosfera. Nëse uji i distiluar është alkalik, qelizat e kuqe të gjakut marrin një ngjyrë të ndyrë kaltërosh-jeshile; ajo pjesë e leukociteve që duhet të ngjyroset blu bëhet vjollcë, granulat e eozinofileve bëhen kaltërosh dhe jeshile në vend të trëndafilit, dhe granula neutrofile mbahen. Në ujin acid, eritrocitet kthehen në portokalli të ndezur dhe bërthamat e leukociteve janë shumë të zbehta. Ideali është uji i distiluar me një pH prej 7.0, i cili fshihet për ta ruajtur atë. Ju mund të përdorni tableta buferike të gatshme për përdorim që janë të tretura në ujë të distiluar.

Për ngjyrosjen e njollave të palcës së eshtrave, një njollë pH 7,4-7,5 është ideale.

Metodat e ngjyrosjes sipas Noht dhe Pappenheim pranohen si të unifikuara.

Reagentët për fiksim: 1) alkool metil ose 2) tretësirë ​​May-Grunwald eozinë-metilen blu.

Reagentët për ngjyrosjen e njollave sipas Nokht: 1) tretësirë ​​bazë e azure I: 1 g bojë tretet në 1 litër ujë të distiluar, lihet në një enë qelqi të errët për 12-14 ditë në temperaturën e dhomës, pas së cilës përdoret; 2) tretësira bazë e eozinës së kaliumit: 1 g bojë tretet në 1 litër ujë të distiluar, lihet në një enë qelqi të errët për 12-14 ditë në temperaturën e dhomës, pas së cilës përdoret; 3) tampon fosfati (përzierje Weise), pH 7,4-7,5: përzieni 0,49 g dihidrogjen fosfat kaliumi (KH2PO4) dhe 0,909 g hidrogjen fosfat natriumi (Na2HPO4) dhe shpërndajeni në 1 litër ujë të distiluar; 4) tretësira e punës e azure-eozinës: para përdorimit, përzieni 25 ml tretësirë ​​rezervë të azure II, 20 ml tretësirë ​​rezervë të eozinës së kaliumit dhe 55 ml tretësirë ​​tampon (proporcionet e ngjyrave mund të ndryshojnë, ato janë përcaktuar në mënyrë empirike kur përgatiten tufa të freskëta të solucioneve stok).

Reagentët për ngjyrosjen e njollave sipas Pappenheim: 1) një tretësirë ​​e eozinës-metilen blu sipas May-Grunwald. Në mungesë të një solucioni të gatshëm ngjyrues, përgatitet duke tretur 1 g bojë të thatë në 1 litër alkool metil; 2) tretësira punuese e azure-eozinës sipas Nokht.

Fiksimi i njollave. Tretësira e fiksimit derdhet në një kuvetë ose në një enë me grykë të gjerë me tapë të bluar. Njollat ​​vendosen në një enë, e cila zhytet në një kuvetë ose vendoset një nga një në një enë për 5-10 minuta. Ena me gota hiqet nga solucioni fiksues (ose gotat nxirren me piskatore dhe vendosen në një mbajtëse) dhe lihen në ajër derisa të thahen plotësisht.

Ngjyrosja sipas Nocht. Njollat ​​fikse të thara, pa hequr nga ena, vendosen në një kuvetë me një tretësirë ​​bojë pune për një kohë të përcaktuar rreptësisht (20-45 minuta), e cila zgjidhet në mënyrë empirike për çdo grumbull boje. Në mungesë të kuvetës me enë, gotat vendosen horizontalisht në dy shufra qelqi (“bina”) të vendosura paralelisht me goditjen lart dhe mbi to derdhen 3–4 ml tretësirë ​​të bojës së punës. Ena me gota nxirret nga kuveta me bojë dhe vendoset në një kavo me ujë çezme (në mungesë të enës, boja nga gotat lahet me ujë pa i hequr nga shufrat e xhamit). Njollat ​​thahen me ajër.

Ngjyrosje Pappenheim. Njollat ​​e thata të gjakut jo të fiksuara vendosen në një enë dhe ulen në një kuvetë me tretësirë ​​May-Grunwald për 3-5 minuta (ose 3-4 ml bojë derdhen në një njollë jo të fiksuar me pipetë). Ena me njolla shpëlahet në një kuvetë me ujë të distiluar dhe më pas vendoset në një kuvetë me njollë azure-eozine sipas Nokht për 8-15 minuta. Uji i distiluar shtohet në rrëshqitjet e vendosura në "shina", pa kulluar bojën, për 1 minutë, dhe më pas boja derdhet mbi njollë për 8-15 minuta, më pas boja lahet me ujë. Njollat ​​thahen me ajër.

Ngjyrosja sipas Romanovsky-Giemsa. Prodhuar në të njëjtën mënyrë si sipas Nokht. Si ngjyrë, përdoret një zgjidhje e gatshme Romanovsky-Giemsa, e cila hollohet para përdorimit në shkallën 1 pikë bojë për 1 ml ujë të distiluar. Koha e ngjyrosjes caktohet në mënyrë empirike për secilën grumbull të bojës (25-40 min).

Ngjyrosje Wright. Reagentët. 0,2 g njollë Wright (pluhur i thatë, BDH/E. Merck) tretet në 100 ml metanol dhe lihet të qëndrojë për disa ditë. Nëse eritrocitet nuk janë ngjyrosur mjaft qartë, përgatitni një tretësirë ​​0,25% ose 0,3%.

Përparimi i ngjyrosjes. Disa (rreth 8) pika bojë aplikohen në njollë, lihen të qëndrojnë për 2-3 minuta (sigurohuni që boja të mos thahet), më pas derdhet një sasi e barabartë e ujit të pastruar mbi njollë. Nëse bojë është pjekur, një shkumë ose film me një shkëlqim metalik do të shfaqet në sipërfaqen e bojës së holluar. Boja e holluar lihet në njollë për 2-3 minuta dhe më pas lahet me një tretësirë ​​tampon ose ujë. Bojë nuk duhet të lejohet të vendoset në sipërfaqen e njollës. Nëse kjo ndodh, njollosja mbushet me bojë të paholluar për 15-20 sekonda dhe më pas përsëri me një zgjidhje tampon ose ujë.

Përgatitja e buferit të fosfatit.

Tretësira A (0,2 M KH2PO4): Shkrihet 27,2 g kripë në 1 litër ujë të distiluar.

Tretësirë ​​B (0,2 M Na2HPO4): Shkrihet 35,6 g Na2HPO4 × 2H20 në 1 litër ujë të distiluar.

Për të marrë 100 ml tretësirë ​​tampon me pH të dëshiruar, tretësira A dhe B duhet të kullohen në sasitë e treguara në tabelë. Vlera e pH kontrollohet me një matës pH.

Përgatitja e tretësirës buferike të fosfatit

Tretësirë, ml	vlera e pH

Ngjyrosja e Leishman. Reagentët. 0,15 g bojë të thatë Leishman shpërndahet në 133 ml alkool metil absolut. Bojë duhet të shpërndahet plotësisht, këshillohet që paraprakisht të bluani kristalet e bojës në një llaç. Ruajeni bojën në një shishe me tapë qelqi, mos e filtroni.

Përparimi i ngjyrosjes. Kryhet në mënyrë të ngjashme me njollën Wright, por me një hollim të dyfishtë të tretësirës tampon. Disa pika bojë (rreth 8) derdhen në një njollë, e cila mbahet për 2 minuta. Shtoni një sasi të dyfishtë të tretësirës buferike (16 pika), përzieni duke e tundur dhe lëreni për 7-10 minuta. Bojëja lahet me ujë të distiluar në 2-3 sekonda. Me larje më të gjatë, ngjyra përkeqësohet. Njollat ​​thahen në një raft në ajër.

Përgatitja e një pike të trashë gjaku. Tre pika gjaku të depozituara në një rrëshqitje xhami në një distancë nga njëra-tjetra zgjerohen me këndin e një rrëshqitjeje të pastër qelqi në një madhësi prej rreth 1 cm në diametër, të shënuar me një laps dhe më pas thahen në ajër për 1-2 orë.

Ngjyrosja e një pike të trashë gjaku. Pikat e trasha të gjakut nuk fiksohen. Rrëshqitjet e qelqit me pika të trasha të thara mirë vendosen në "shina" në një distancë nga njëra-tjetra, dhe tretësira e punës e azure-eozinës sipas Nokht derdhet mbi to për 8-10 minuta. Ka një "shpëlarje" të eritrociteve. Pastaj boja kullohet dhe një pjesë e re e tretësirës së punës të azure-eozinës sipas Nokht derdhet mbi përgatitjet për 30-35 minuta. Më pas rrëshqitjet shpëlahen me kujdes me ujë të distiluar dhe thahen.

Ngjyrosje automatike e njollave

Duke qenë se një nga funksionet më të kërkuara në laboratorin e hematologjisë është përgatitja dhe ngjyrosja e strisheve të gjakut, përpjekjet për automatizimin e tyre janë të natyrshme.

Sistemi i parë i përgatitjes automatike të njollosjes u zhvillua nga Sysmex (Japoni) në vitin 1990, dhe aktualisht janë instaluar më shumë se 1600 sisteme në mbarë botën. Përvoja e madhe e fituar gjatë kësaj periudhe u përdor në zhvillimin e një sistemi të gjeneratës së re - një stacion përgatitjeje dhe ngjyrosjeje plotësisht të automatizuar SP-1000i me një kapacitet deri në 120 njollosje në orë. SP-1000i realizon një shkallë të lartë standardizimi dhe cilësie në përgatitjen e njollosjes duke përdorur metodën inteligjente të pykës, e cila i lejon përdoruesit të rregullojë sasinë e mostrës së gjakut të aplikuar, këndin e tehut lyer, shpejtësinë e aplikimit dhe kohën e pritjes, në varësi të në hematokritin e kampionit testues, duke përdorur nga 8 deri në 16 nivele të ndryshme rregullimi. Marrja e mostrave të gjakut mund të bëhet manualisht ose automatikisht nga tubat e hapur ose të mbyllur. Stacioni i automatizuar i përgatitjes dhe ngjyrosjes së njollosjes Sysmex SP-1000i (Japoni)

Sistemi përdor deri në shtatë protokolle ngjyrosjeje të personalizueshme në mënyrë fleksibël që ju lejojnë të standardizoni cilësinë e ngjyrosjes së njollosjes dhe të përmbushni kërkesat më të larta. Mund të përdoren protokollet e mëposhtme për ngjyrosje të dyfishtë dhe të vetme: May-Grunwald-Giemsa, Romanovsky dhe Romanovsky-Giemsa. Njollat ​​e gjakut ngjyrosen në një sistem të veçantë kasetë i cili përmban vetëm një rrëshqitje për kasetë. Me këtë metodë garantohet një marrëdhënie e mirë midis njollosjes së gjakut dhe reagentëve ngjyrues dhe nuk ka avullim të metanolit nga reagenti në ajër. Për të siguruar fiksim të mirë të gjakut përpara ngjyrosjes, një hap i veçantë për parafiksimin e metanolit është integruar në procesin e ngjyrosjes.

Për shkak të fleksibilitetit të protokollit të ngjyrosjes, mund të përdoret një protokoll specifik për ngjyrosjen e palcës kockore.

Metoda e përgatitjes së strisheve të palcës kockore për studime hematologjike.

Ekzaminimi i palcës së eshtrave - Mielogrami Pyetja e parë që duhet të përgjigjet një ekzaminim i palcës së eshtrave është aspekti sasior i qelizave. Dihet mirë se në lidhje me gjakun periferik mund të përcaktohen një sërë vlerash numerike për numrin dhe përqindjen e llojeve të ndryshme të qelizave, pasi ato janë në gjendje të lirë dhe të shpërndara relativisht uniforme në pezullimin e gjakut vaskular. Një gjë krejtësisht e ndryshme mund të thuhet për palcën e eshtrave: përbërja e indit hematopoietik është shumë heterogjene dhe shpërndarja e qelizave të palcës kockore nuk është e njëjtë. Kështu, numri i drejtpërdrejtë i mielokariociteve në dhomë luhatet në një gamë shumë të gjerë, si në gjendjen normale ashtu edhe në kuadrin e së njëjtës sëmundje. Vlerat që kemi gjetur tek individët normalisht varionin nga 27,000 në 112,000 elemente bërthamore për mm3 (Ursya). Të dhënat e literaturës luhaten edhe më gjerësisht, me kufij 12,000 dhe 300,000 për mm3 (Cartwright, Page). Pas centrifugimit, në tubin e hematokritit gjenden 4 shtresat e mëposhtme: 1) shtresa e sipërme e verdhë yndyrore; 2) plazma; 3) një shtresë gri-bardhë e formuar nga qelizat bërthamore; 4) një shtresë e kuqe e përbërë nga eritrocite. Matja e shtresës gri-të bardhë të qelizave bërthamore (mielokriti) është me vlerë të kufizuar apo edhe mashtruese, pasi vlerat e gjetura tek individët normalë tregojnë gjithashtu luhatje të konsiderueshme. Përveç kësaj, qelizat bërthamore gjenden jo vetëm në këtë shtresë, por edhe në shtresat yndyrore dhe eritrocitare. Por njollat ​​e koncentratit të palcës së eshtrave mund të përgatiten nga shtresa gri-bardhë pas heqjes së plazmës supernatante. Ato kanë rezultuar të dobishme në procesin e diagnostikimit në rastet kur njollat ​​direkte janë të dobëta në qeliza. Duke qenë se numri i dhomës së mielokariociteve dhe përcaktimet e mielokritit janë vetëm rezultate të përafërta me riprodhueshmëri të kufizuar, këto metoda sasiore nuk janë të kënaqshme. Materiali i nxjerrë gjatë punksionit me thithje është një mostër e palcës kockore të përzier me gjak në përmasa të ndryshme. Shkalla e hollimit të palcës së eshtrave me gjak varet nga një sërë faktorësh. Etiketimi 32P vërtetoi se hollimi i palcës kockore të aspiruar me gjak varion nga 40% në 100%. Megjithatë, duhet theksuar se studimi i palcës së eshtrave për të bërë një diagnozë bazohet kryesisht në një studim cilësor të përmbajtjes qelizore dhe vetëm në radhë të dytë në vlerat sasiore të kësaj përmbajtjeje. Kjo është arsyeja pse metodat sasiore për përcaktimin e qelizave të palcës kockore konsistojnë në një vlerësim gjysmë sasior të përbërjes qelizore të palcës kockore, krahasuar me mostrat normale, në: a) njolla me gunga të grimcuara; b) seksionet histologjike. Studimi i strishit kryhet kryesisht me lente të thatë, në disa strisho, me synimet e mëposhtme: a) vlerësim gjysmë sasior i masës qelizore të palcës kockore; b) përcaktimi i pranisë dhe densitetit të megakariociteve; c) zbulimin e qelizave gjigante ose foletë e qelizave anormale; d) identifikimin e zonave më të përshtatshme për kërkime me anë të zhytjes. Në njollat ​​e marra nga shtypja e grimcave të palcës kockore, dallohen tre zonat koncentrike të mëposhtme: a) qendrore; b) të jashtme; c) të ndërmjetme. Zona qendrore formohet nga vakuola yndyrore, qeliza stromale, granulocitet dhe qeliza të shumta të shkatërruara. Zona e jashtme përmban një sasi të madhe gjaku, e cila hollon qelizat e palcës së eshtrave. Ashtu si njollat ​​e holla, ai kontribuon vetëm në studimin e detajeve morfologjike të qelizave mieloide dhe eritrociteve. Masa qelizore më e dendur ndodhet në zonën e ndërmjetme, e cila lejon një studim optimal që mund të sqarojë të gjitha pyetjet që janë përshkruar. Këtu qelizat e palcës janë të ruajtura mirë dhe të renditura në ishuj ose fole, ashtu siç shihet në palcë. Duke ruajtur topografinë e palcës kockore, rezultatet e studimit të kësaj zone janë më homogjene dhe korrespondojnë me gjendjen aktuale të palcës kockore, gjë që vërtetohet nga krahasimi me imazhet histologjike të saj. Përcaktimi gjysëm sasior i densitetit të qelizave shprehet si: a) normale, b) e pasur ose c) e dobët në krahasim me palcën e eshtrave normale. Identifikimi i një mase qelizore normale ose të bollshme është një zbulim i vlefshëm, ndërsa palca e pakët e eshtrave duhet të konsiderohet me kujdes. Për të vërtetuar praninë e hipoplazisë aktuale, duhet të ekzaminohen disa pllaka, të bëhet një punksion në disa zona kockore dhe / ose një biopsi kockore. Informacioni më i saktë për masën qelizore të palcës kockore merret duke ekzaminuar seksionet histologjike. Në një të rritur, raporti i hapësirës së zënë nga yndyra dhe parenkima qelizore aktive është normalisht 1:1 ose 2:1. Disa autorë e konsiderojnë palcën e eshtrave si hipoqelizore kur qelizat hematopoietike zënë më pak se një të katërtën e gungave të palcës së eshtrave. Një ekzaminim cilësor i palcës së eshtrave është thelbësor për të vendosur një diagnozë. Ajo kryhet, me zhytje, si në njolla të holla dhe, veçanërisht, në njolla me gunga të grimcuara nga zona e ndërmjetme. Rekomandohet përzgjedhja e njollave më të mira të shtrira dhe të njollosura me qeliza të përcaktuara qartë dhe të ruajtura mirë morfologjikisht. Ky studim përshkruan: a) identifikimin e llojeve të ndryshme të qelizave mieloide; b) përcaktimi i shkallës së maturimit të çdo rreshti qelizor; c) sqarimi i lidhjes midis granulociteve dhe eritroblasteve (G/E) d) identifikimi i qelizave ne fazen e mitozes; e) përshkrimin e qelizave atipike të hasura. Pas ekzaminimit të disa njollave, ose përpilohet një "mielogram" përshkrues i detajuar (që përmban përfundimet e bëra pas deshifrimit të njollave), ose një mielogram në përqindje, i përcaktuar nga të paktën 300-500 elementë. Ka dy mënyra për të përpiluar një mielogram në përqindje: 1) caktimi i rreshtave të qelizave të mbetura në 100 granulocite; 2) shfaqja e përqindjes së secilit lloj qelizash nga numri i përgjithshëm i qelizave të palcës kockore. Nga pikëpamja statistikore, metoda e fundit duket të jetë më e saktë dhe në dukje pasqyron pamjen reale të përbërjes qelizore të palcës kockore. Formulat e vendosura nga autorë individualë ndryshojnë ndjeshëm, pasi është e vështirë të përcaktohen vlerat mesatare reale në një ind kaq heterogjen si palca e eshtrave. Tabela tregon, sipas Wintrobe, rezultatet e studimit të mostrave të përzgjedhura të palcës kockore nga 12 individë normalë. Mielogrami normal

Parametrat e mielogramit Vlera mesatare (%) Gama e luhatjeve (%)

Qeliza retikulare 0,9 0,1-1,6 Bllaste të padiferencuara 0,6 0,1-1,1 Mieloblaste 1,0 0,2-1,7

Promielocitet 2,5 1,0-4,1

Neutrofilet e mielociteve 9,6 7,0-12,2 neutrofilet e metamyelociteve 11,5 8,0-15,0 Neutrofile thike 18,2 12,8-23,7 Neutrofile te segmentuara 18,6 13,1-24,1 Totali i qelizave neutrofile 60,8 52,7-68,9 Mielocitet eozinofile 0,1 0,0-0,2 Metamyelocitet eozinofile 0,2 0,1-0,4 Eozinofile 2,8 0,4-5,2

Qelizat totale të serisë eozinofilike 3,2 0,5-5,8 Mielocitet bazofile 0,1 0-0,3

Bazofilet 0,1 0-0,3

Qelizat totale të serisë bazofile 0,2 0-0,5 Limfoblaste 0,1 0-0,2

Prolimfocitet 0,1 0-0,2

Limfocitet 8.8 4.3-13.3

Qelizat totale limfoide 9.0 4.3-13.7 Monoblaste 0,1 0-0,2

Monocitet 1,9 0,7-3,1

Plazmablaste 0,1 0-0,2

Proplazmocitet 0,1 0,1-0,2

Qelizat plazmatike 0,9 0,1-1,8

Eritroblaste 0,6 0,2-1,1

Normoblaste bazofile 3,6 1,4-5,8 Normoblaste polikromatofile 12,9 8,9-16,9 Normoblaste oksifile 3,2 0,8-5,6

Qelizat totale eritroide 20,5 14,5-26,5 Megakariocitet 0,4 0,2-0,6

Sipas studimeve tona mbi njerëz të shëndetshëm, rezultatet janë si më poshtë:

një numër granulocitesh 56-70%,

seri eritroblastike 23-30%, seri limfoplazmocitare 5-10%, seri monocito-makrofage 1-2% dhe seri megakariocitare 0,1-0,8% (Ursya). Një ndryshim në proporcionin e rreshtave mieloide normale ose zëvendësimi i tyre me qeliza jonormale shpesh sugjeron llojin e sëmundjes. Qelizat retikulare shfaqen më rrallë dhe, për më tepër, në numër të vogël. Krejt rastësisht, njollat ​​(ose mbresat e palcës kockore) tregojnë osteoblaste dhe/ose osteoklast, të cilat nuk duhet të ngatërrohen me qeliza neoplazike. Prania e tyre vihet re më shpesh tek fëmijët, më rrallë tek të rriturit me mielofibrozë primare ose dytësisht, pas metastazave karcinomatoze, me leuçemi akute, osteoporozë etj. Raporti G/E fitohet nga pjesëtimi i granulociteve me numrin e eritroblasteve. Në një të rritur normal, ky raport është mesatarisht 3/1 ose 4/1, me kufij të vlerësuar në 2/1 (kur përfshihen vetëm granulocitet e papjekura) dhe 5/1 (kur bëhet fjalë për të gjithë granulocitet - të pjekur dhe të papjekur). Raporti H/E luhatet me moshën: në lindje është i vogël (1.8/1), në moshën 2 javësh rritet në 11/1, më pas zvogëlohet gradualisht dhe tek fëmijët një vjeç arrin vlerat. të një të rrituri. Raporti H/E është normal në rastet e hipo- ose hiperplazisë globale të palcës kockore, si dhe në proliferimin e qelizave individuale që nuk përfshihen në llogaritjen e këtij raporti, për shembull, në plazmocitomë. Në leuçemi, reaksione të ngjashme me leukomën dhe eritroblastopeni, raporti është i lartë, ndërsa në anemi me hiperplazi eritroblastike është i ulët ose i kundërt (anemi megaloblastike, hemolitike). Përpara nxjerrjes së të dhënave të mielogramit të marra pas studimit të njollave, është e nevojshme të sqarohet: a) vendi i shpimit; b) dendësia kockore; c) kushtet në të cilat u zhvillua thithja; d) aspektin makroskopik të materialit të përzgjedhur. Ekzaminimi i palcës kockore është një proces kompleks i bazuar në integrimin e të dhënave të shumta dhe të ndryshme. Rezultati i tij duhet të pasqyrojë përfundime të përgjithshme, të bazuara më shumë në konkluzion sesa në regjistrimin mekanik të figurave individuale, të cilat, për më tepër, luhaten. Përfundimi i çdo mielogrami duhet të qartësojë ose diagnozën ose indikacionet për studime shtesë që dalin nga studimi i palcës së eshtrave. Në sëmundjet e gjakut, punksioni me thithje ndihmon në sqarimin e diagnozës me ndihmën e njollave dhe seksioneve me gunga në 80% të rasteve. Në raste të tjera, indikohet biopsia e kockës dhe ekzaminimi histologjik i palcës së eshtrave. Përzgjedhja bioptike dhe ekzaminimi histologjik duket i nevojshëm për: a) mielofibrozën primare ose dytësore; b) aplazia ose hipoplazia e palcës kockore; c) sëmundjet që shfaqen me lezione të tipit granulomatoz (p.sh. , sëmundja e Godgkin, sarkoidoza, tuberkulozi etj.); d) metastaza karcinomatoze; e) në të gjitha rastet kur materiali i përzgjedhur me punksion është i pakënaqshëm ose aspekti i palcës kockore nuk është bindës. Pas marrjes së mostrave bioptike, mbresat përgatiten për ekzaminim citologjik, pasi seksionet histologjike japin pak informacion në lidhje me detajet strukturore të qelizave hematopoietike që janë në formë të mbushur me njerëz, jo të shpërndarë dhe të pa standardizuar. Përveç kësaj, fiksimi shkakton tërheqjen e qelizave dhe ngjyrosja histologjike është më pak selektive se ngjyrosja citologjike. Kjo është arsyeja pse një ekzaminim i plotë i palcës së eshtrave përfshin si citologjik - në njolla ose mbresa, ashtu edhe histologjik - në seksione të studimit. Duhet mbajtur mend se metodat citologjike dhe histologjike të ekzaminimit të palcës së eshtrave nuk përjashtohen, por, përkundrazi, janë plotësuese: biopsia është një metodë sasiore dhe arkitekturore, ndërsa mielograma është cilësore dhe citologjike.

Metoda për numërimin e qelizave të gjakut në dhomën e Goryaev.

Dhoma e Goryaev - një pajisje e krijuar për të numëruar numrin e qelizave në një vëllim të caktuar lëngu. Zakonisht përdoret për të përcaktuar numrin e elementëve të formuar në një mostër gjaku. Dhomat përbëhen nga një rrëshqitje e trashë qelqi me vrima tërthore të aplikuara mbi to, duke formuar tre zona të sheshta të rregulluara në mënyrë tërthore. Platforma e mesme ndahet nga një çarje gjatësore në dy, secila prej të cilave ka një rrjetë të gdhendur në të. Në të dy anët e platformës së mesme në dhomën e Goryaev ka dy të tjera 0,1 mm më të larta (në dhomën Fuchs-Rosenthal 0,2 mm) më të larta se ajo e mesme. Rrafshët e këtyre vendeve shërbejnë për bluarjen e mbulesës derisa të shfaqen të ashtuquajturat unaza Njutoniane. Pas bluarjes së xhamit të kapakut krijohet një dhomë e mbyllur nga dy anët dhe në dy të tjerat ka zbrazëtira (hapësira kapilare) nëpër të cilat mbushet dhoma. Parimi i rrjetës është i njëjtë. Ato ndahen në një ose një numër tjetër katrorësh, të grupuar në mënyra të ndryshme. Një vlerë konstante në të gjitha rrjetet është i ashtuquajturi "katror i vogël", ana e të cilit është 1/20 mm, pra sipërfaqja e tij është 1/400 mm2. Duke përdorur kamerën Goryaev, është gjithashtu e mundur të përcaktohet zmadhimi i mikroskopit. Nga ana e jashtme, është një paralelipiped transparent (rrëshqitje qelqi), me brazda dhe një rrjet mikroskopik të aplikuar. Dimensionet e ndarjeve të vogla të qelizës së rrjetës janë 0,05 mm, dhe ndarjet e mëdha janë 0,2 mm. Në këtë rast, rrjeti aplikohet në një platformë (seksion xhami) që ndodhet 0,1 mm më poshtë se dy platforma ngjitur. Këto zona përdoren për mbështjelljen e mbulesës. Si rezultat, vëllimi i lëngut mbi katrorin e formuar nga ndarjet e mëdha të rrjetit Goryaev është 0.004 mikrolitra. Duke numëruar numrin e qelizave në një katror të madh, mund të llogarisni densitetin e një lloji të caktuar qelize në pezullim duke përdorur formulën: Numri i qelizave/ml = numri i qelizave mbi katrorin e madh * 2,5 10^5 Duke përdorur kamerën Goryaev si një lloj standardi, mund të përcaktoni zmadhimin e mikroskopit me formulën: Kg=(m2-m1)/(a*N) ku kgështë zmadhimi i mikroskopit; m 1 - pozicioni i kufirit të majtë të qelizës së dhomës Goryaev; m 2 - pozicioni i kufirit të djathtë të një qelize ose grupi qelizash; N- numri i qelizave ndërmjet kufijve të matur; a- madhësia e qelizës së dhomës Goryaev (e barabartë me 0,05 mm). Dhoma Goryaev përdoret gjithashtu për të numëruar numrin e qelizave në kulturë. Formula për numërimin e qelizave të gjakut në dhomën e Goryaev është - x = (a 400 c) / b, ku x është numri i dëshiruar i elementeve të formës në 1 mm3; a - shuma e elementeve në formë të numëruara në një vëllim të caktuar të dhomës; b - numri i katrorëve të vegjël të numëruar; c - hollimi i gjakut.

Metoda për numërimin e oocisteve në dhomën e Goryaev. Kjo metodë zakonisht përdoret kur infektohen në mënyrë eksperimentale kafshët me një sasi të përcaktuar saktësisht të oocisteve (një sasi e përshtatshme mililitra suspensioni injektohet në kafshë). 1 ml suspension që përmban oociste vendoset në dhomën e Goryaev. Meqenëse vëllimi i dhomës Goryaev është 0,9 m3, numri i oocisteve të numëruara shumëzohet me 1111. Numri që rezulton është adekuat me numrin e oocisteve në 1 cm3 tretësirë. Për një përcaktim më të saktë, llogaritjet duhet të kryhen të paktën tre herë, dhe më pas duhet të nxirret mesatarja aritmetike. Numri i oocisteve të nevojshme për infeksion matet duke përdorur një pipetë të shkallëzuar. Për një shpërndarje më uniforme të oocisteve në mjedisin e inkubacionit, përmbajtja e epruvetës duhet të tundet në mënyrë të përsëritur.

Numri i eritrociteve në dhomën e Goryaev Parimi. Sasia e saktë e gjakut përzihet në mënyrë të barabartë në një sasi të caktuar lëngu dhe vendoset në një dhomë me një vëllim të njohur në të cilën suspensioni i gjakut shpërndahet në një shtresë të vetme. Fundi i dhomës është i grafikuar, gjë që bën të mundur numërimin e saktë të eritrociteve. Reagentët: tretësirë ​​0.9% klorur natriumi. Pajisje speciale: mikroskop, kamera e Goryaev, epruveta laboratorike ose një kapilar nga hemometri i Saly. Përparimi i përkufizimit. Shtoni 8 ml tretësirë ​​klorur natriumi 0,9% dhe 0,02 ml gjak në një provëz të thatë dhe të pastër. Maja e pipetës fshihet paraprakisht, gjaku fryhet në fund të tubit dhe pipeta lahet plotësisht me shtresën e sipërme të lëngut. Përzieni mirë përmbajtjen e tubit. Përftohet një hollim i gjakut prej 1:400, d.m.th., gjaku hollohet 400 herë. Me trashjen e gjakut, këshillohet hollimi i tij me 500, 600, 700, 800 herë. Dhoma dhe mbulesa duhet të lahen dhe të fshihen të thata. Kapaku fërkohet në dhomë në mënyrë që të shfaqen unaza të ylbertë. Merrni një pikë gjaku të holluar nga epruveta dhe mbushni dhomën me të, duke e aplikuar në skajin e mbulesës. Eritrocitet numërohen 1 min pas mbushjes së dhomës nën një mikroskop me zmadhim të ulët (objektiv x8, x10 ose x15 okular) me një diafragmë e mbuluar ose kondensator i ulur (në një fushë shikimi të errësuar) . Eritrocitet numërohen në pesë katrorë të mëdhenj (ose 80 të vegjël) të renditur diagonalisht. Merren parasysh eritrocitet që ndodhen brenda katrorit të vogël, si dhe në muret e majta dhe të sipërme të tij. Qelizat e vendosura në vijën e djathtë dhe të poshtme të sheshit nuk llogariten. Llogaritja: Numri i llogaritur i qelizave në 80 katrorë të vegjël shumëzohet me 20,000 në një hollim gjaku 1: 400, me 25,000 në një hollim 1: 500, ose me 30,000 në një hollim 1: 600 dhe rezulton rezultati përfundimtar. në miliona për 1 μl. Në këtë rast, supozohet se vëllimi i një katrori të vogël është 1/4000 μl. Për të numëruar qelizat në 1 litër, numri i qelizave të kuqe të gjakut në 1 µl gjithashtu shumëzohet me 1 000 000. Shënim. Nuk lejohet studimi i gjakut me mpiksje; numërimi i qelizave menjëherë pas mbushjes së dhomës (pa pritur 1 min); përdorimi i pipetave dhe provëzave të lara dhe të thara keq, reagentë me cilësi të dobët që shkaktojnë hemolizë. Në varësi të të gjitha rregullave të llogaritjes, gabimi do të jetë mesatarisht ± 2,5%.

Rregullat e dezinfektimit Pas përdorimit, kamera Goryaev duhet të dezinfektohet tretësirë ​​3%. peroksid hidrogjeni, shpëlajeni me ujë të distiluar dhe thajeni me një leckë të butë. Mbajeni kamerën në një vend të thatë.

Metoda e punës në analizuesit hematologjikë.

Analizator-hematologjik- një pajisje (një grup pajisjesh) e krijuar për kërkime sasiore qelizat gjaku në laboratorët e diagnostikimit klinik. Mund të jetë automatik ose gjysmë automatik. Një analizues hematologjik gjysmë automatik ndryshon nga ai automatik në atë që procesi i hollimit të një kampioni gjaku kryhet nga një pajisje e veçantë - një hollues. Pas përgatitjes së hollimit të gjakut të plotë, operatori duhet ta transferojë kampionin e holluar në modulin e matjes. Aktualisht, analizuesit gjysmë automatikë praktikisht nuk prodhohen.

Analizuesi Automatik Hematologjik është një instrument plotësisht i automatizuar në të cilin i gjithë procesi analitik kryhet automatikisht.

Analizuesit automatikë modernë janë në gjendje të përpunojnë dhjetëra mostra (nga 60 në 120) në orë, me saktësi dhe riprodhueshmëri sipas specifikimeve, si dhe të ruajnë rezultatet e testit në memorien e integruar dhe, nëse është e nevojshme, t'i printojnë ato në pajisjen e integruar. printer termik ose një printer i jashtëm.

Analizuesit modernë hematologjikë klasifikohen sipas nomenklaturës së treguesve të përcaktuar të qelizave të gjakut.

Analizues hematologjik me tetë parametra përcaktoni parametrat e mëposhtëm: përqendrimi eritrocitet(RBC) leukocitet(WBC) trombocitet(plt) hemoglobina(Hb), si dhe parametrat e mëposhtëm të eritrociteve: vëllimi mesatar i eritrociteve (MCV), përmbajtja mesatare e hemoglobinës së eritrociteve (MCH), përqendrimi mesatar i hemoglobinës së eritrociteve (MCHC), hematokriti(Hct).

Analizuesit hematologjikë me tetë parametra praktikisht nuk prodhohen aktualisht.

Analizuesit hematologjikë të klasës 3-dif. Analizuesit hematologjikë të klasës 3-dif, në varësi të modelit të prodhuar, ju lejojnë të përcaktoni nga 16 deri në 22 tregues të qelizave të gjakut. Analizuesit e kësaj klase, përveç atyre parametrave që përcaktojnë analizuesit me tetë parametra, përcaktojnë tre nënpopullata të leukociteve: përqendrimin e limfociteve (Lm), granulociteve (Gr) dhe të ashtuquajturit leukocit mesatar (Mid), si dhe përqindja e tyre Lm%, Gr% dhe Mid%. Prandaj emri i klasës 3-diff. Përveç kësaj, analizuesit hematologjikë të kësaj klase përcaktojnë koeficientin e variacionit të vëllimit të eritrociteve (RDW) dhe një numër treguesish që karakterizojnë trombocitet: vëllimi mesatar i trombociteve (MPV), proporcioni i vëllimit të trombociteve (Tct) (analog me hematokritin), koeficienti i variacionit të vëllimit të trombociteve (PDW).

Informacione të rëndësishme diagnostike, të cilat mund të merren nga analizuesit hematologjikë të kësaj klase, janë funksionet e shpërndarjes sipas vëllimit të eritrociteve, leukociteve dhe trombociteve - histogramet.

Analizatorët hematologjikë të klasës 5-dif. Dallimi kryesor midis analizuesve të hematologjisë 5-dif dhe analizuesve 3-dif është aftësia e tyre për të zbuluar të 5 nënpopullatat e leukociteve: limfocitet (Lym), monocitet (Mon), neutrofilet (Neu), bazofilet (Bas) dhe eozinofilet (Eos). si dhe përmbajtjen e tyre në përqindje të Lym%, Mon%, Neu%, Bas% dhe Eos%. Metoda e numërimit të rezistencës, e njohur edhe si banak Coulter, i përdorur në analizuesit 3-dif, nuk është në gjendje të bëjë dallimin midis neutrofileve, bazofileve dhe eozinofileve, prandaj, një metodë e ndryshme e diferencimit të qelizave përdoret në analizuesit 5-dif. Ajo bazohet në parimin difraksioni rrezatimi lazer në qelizat e leukociteve dhe analiza e mëtejshme e rrezatimit të shpërndarë. Leukocitet "mesatare" nuk ndryshojnë në madhësi të mjaftueshme për t'u dalluar me metodën e impedancës, por ato kanë një strukturë të brendshme të ndryshme dhe ndërveprojnë ndryshe me ngjyrat. Dhe metoda e zbulimit të një modeli difraksioni rezulton të jetë e ndjeshme ndaj strukturës së brendshme të qelizave. Kështu, eritrocitet dhe trombocitet numërohen nga një numërues Coulter, dhe leukocitet nga një njësi e veçantë lazer.

Puna 8. Përcaktimi sasior i proteinave në serumin e gjakut

4. Përbërja dhe vetitë e proteinave komplekse

Puna 9. Natyra kimike e hemproteinave

Puna 10. Identifikimi i përbërësit karbohidrate të glikoproteinave

Puna 11. Reaksionet cilësore ndaj fosfoproteinave

Puna 12. Përcaktimi sasior i përmbajtjes së acideve sialike në serumin e gjakut me metodën Hess.

Puna 13. Natyra kimike e nukleoproteinave

Acidet nukleike

1. Studimi i natyrës kimike të acideve nukleike

Puna 14. Reaksionet cilësore ndaj përbërësve të acidit nukleik

Metodat sasiore për përcaktimin e acideve nukleike

Puna 15. Metoda spektrofotometrike për përcaktimin sasior të acideve nukleike sipas A.S. Spirina

Puna 16. Metoda fotokolorimetrike për përcaktimin sasior të acideve nukleike

Puna 17. Studimi i fosfolipideve

Puna 18. Reagimet cilësore ndaj steroideve

Enzimat

Veprimi krahasues i enzimave dhe katalizatorëve jobiologjikë

Puna 19. Krahasimi i veprimit të α-amilazës së pështymës dhe acidit klorhidrik në reaksionin e hidrolizës së niseshtës.

2. Identifikimi i enzimave që u përkasin klasave të ndryshme

Puna 20. Zbulimi i oksidoreduktazave në materialin biologjik

Puna 21. Zbulimi i kolinesterazës

Në serumin e gjakut me metodën ekspres të Herzfeld dhe Stumpf

Puna 22. Përcaktimi i aktivitetit të fruktoza-1,6-bisfosfat aldolazës në serumin e gjakut sipas metodës V.I. Tovarnitsky dhe E.N. Voluyskaya

Ndërtimi i një grafiku kalibrues

Puna 23. Përcaktimi i izomerazës së glukozfosfat

Në serumin e gjakut

3. Studimi i vetive kinetike të enzimave

Puna 24. Kinetika e reaksioneve enzimatike në shembullin e α-amilazës së pështymës

4. Specifikimi i veprimit të enzimës

Puna 25. Demonstrimi i specifikës absolute të substratit

5. Modifikuesit e aktivitetit të enzimës

Puna 27. Aktivizuesit dhe inhibitorët e α-amilazës së pështymës

ind muskulor

Puna 29. Frenimi jo konkurrues i katalazës së gjakut

6. Kuantifikimi i aktivitetit të enzimës

Puna 30. Studim sasior i aktivitetit të barit laktat dehidrogjenazë sipas Kornberg.

Puna 31. Metoda fotokolorimetrike për studimin e aktivitetit të laktat dehidrogjenazës në serumin e gjakut sipas Sevel dhe Tovarek.

Puna 32. Përcaktimi i aktivitetit të fosfatazës alkaline në serumin e gjakut sipas Bodansky

7. Studimi i izoenzimave

Puna 33. Ndarja e izoenzimave të laktat dehidrogjenazës së serumit të gjakut me elektroforezë në xhel poliakrilamid sipas Dietz dhe Lubrano

Puna 34. Përcaktimi i aktivitetit të γ-glutamiltransferazës në serumin e gjakut

Biokimia e tretjes

Puna 35. Studimi i përbërësve acidikë të lëngut gastrik

Puna 36. Përcaktimi i aciditetit të lëngut gastrik me çantën diagnostikuese "Acidotest"

Puna 37. Hidroliza e proteinave nga enzimat e aparatit tretës

Puna 38. Studimi i dinamikes se hidrolizes se triacilgliceroleve nen veprimin e lipazes pankreatike

Shkëmbimi i energjisë (bioenergjia)

1. Studimi i proceseve biologjike të oksidimit në indet shtazore Puna 39. Zbulimi i oksidazës citokrom në indet e muskujve

Puna 40. Demonstrimi i procesit të fosforilimit oksidativ dhe i veprimit të shkyçësve mbi të.

Puna 41. Zbulimi i glikolizës në indin muskulor

Puna 42. Analiza e nukleotideve të adeninës me anë të kromatografisë së shtresës së hollë me shkëmbim jonesh

Puna 43. Përcaktimi i aktivitetit të kreatinfosfokinazës në serumin e gjakut sipas Ennor dhe Rosenberg

Analiza e pigmenteve dhe proceseve oksiduese të organizmave fotosintetikë

Puna 44. Reagimet cilësore ndaj pigmenteve të bimëve

Puna 45. Përcaktimi i aktivitetit të peroksidazës në materialin bimor sipas metodës së A.N.Boyarkin

Metabolizmi i karbohidrateve

Puna 46. Përcaktimi i glukozës në gjak

Puna 47. Përcaktimi sasior i glukozës në gjak me metodën e oksidazës së glukozës

Puna 48. Përcaktimi i përmbajtjes së acidit laktik në gjak sipas Barker dhe Summerson

Puna 49. Përcaktimi i përmbajtjes së acidit piruvik në gjak sipas Friedemann dhe Haugen

metabolizmin e lipideve

Puna 50

Puna 51

Puna 52. Përcaktimi i kolesterolit në serumin e gjakut sipas metodës së Ilk

Puna 53. Përcaktimi i përmbajtjes së fosfolipideve totale në serumin e gjakut

Puna 54. Ndarja e lipideve të serumit të gjakut me kromatografi me shtresë të hollë

Metabolizmi i proteinave dhe aminoacideve

Puna 55. Përcaktimi i përmbajtjes së fraksioneve proteinike të serumit të gjakut me metodën turbidimetrike

Puna 56. Përcaktimi i aktivitetit të katepsinave në serumin e gjakut sipas A.A. Pokrovsky, A.I. Archakov dhe O.N.

Katepsina

Puna 57. Përcaktimi i aktivitetit të aspartatit dhe aminotransferazës së alaninës në serumin e gjakut sipas Reitman dhe Frenkel.

Puna 58. Përcaktimi i aktivitetit të histidazës në serumin e gjakut sipas Tabor dhe Mehler, modifikuar nga V.A.

Puna 59. Përcaktimi i përmbajtjes së hidroksiprolinës së lirë në urinë sipas Neumann dhe Logan, modifikuar nga f.

Metabolizmi i substancave joproteinike që përmbajnë azot

1. Studimi i produkteve të zakonshme të metabolizmit të azotit

Puna 60. Përcaktimi sasior i azotit të mbetur në gjak me metodën fotokolorimetrike

Puna 61. Përcaktimi sasior i uresë në serumin e gjakut dhe në urinë

Puna 62. Përcaktimi sasior i kreatinës dhe kreatininës me metodën e Brown.

2. Studimi i shkëmbimit të acideve nukleike dhe nukleotideve

Puna 63. Përcaktimi i aktivitetit të dezoksiribonukleazës acide (dnCase) në serumin e gjakut sipas A.A.

Puna 64. Përcaktimi i përmbajtjes së acidit urik në serumin e gjakut sipas metodës së Muller dhe Seifert.

3. Studimi i metabolizmit të porfirinës (pigmentit).

Puna 65. Përcaktimi i bilirubinës dhe fraksioneve të saj në serumin e gjakut sipas Yendrashik, Cleghorn dhe Grof

Patologji molekulare

1. Diagnostifikim i shprehur i patologjisë së metabolizmit të aminoacideve Puna 66. Zbulimi i hiperaminoacidurisë

Puna 67. Metoda të shprehura për diagnostikimin e fenilketonurisë

Puna 68. Diagnoza e tirozinozës Testi Millon për tirozinë

Puna 69. Zbulimi i alkaptonurisë me anë të një testi për acid homogjentizik

Puna 70

2. Diagnostifikim ekspres i patologjive te metabolizmit te karbohidrateve Puna 71. Zbulimi i pentosurisë me testin Bial

Puna 72. Zbulimi i fruktosurisë me testin e Selivanov

Puna 73. Zbulimi i mukopolisakaridozave me anë të një testi me toluidinë blu për mukopolisakaridet

Puna 74. Përcaktimi i përmbajtjes së porfobilinogjenit në urinë

Puna 75. Përcaktimi sasior i përmbajtjes së acidit delta-aminolevulinik në urinë

Puna 76

Rregullatorët metabolikë

1. Studimi i vitaminave Puna 77. Reagimet cilësore ndaj vitaminave

Puna 78. Përcaktimi i përmbajtjes së tiaminës dhe riboflavinës me metodën fluorimetrike në preparatet multivitamine

Puna 79. Përcaktimi sasior i acidit askorbik në bimët mjekësore

2. Studime të hormoneve, ndërmjetësve dhe metabolitëve të tyre

Puna 80. Reaksionet cilësore ndaj hormoneve proteino-peptide.

Puna 81. Reaksionet cilësore ndaj hormoneve – derivateve të aminoacideve

Puna 82. Reaksionet cilësore ndaj hormoneve steroide dhe metabolitëve të tyre

Puna 83. Rregullimi i nivelit të insulinës dhe adrenalinës së glukozës në gjakun e kafshëve

Puna 84. Përcaktimi sasior i histaminës në gjak me n-nitroaniline të diazotizuar sipas N.V.Klimkina dhe S.I.Plitman

Studimi i lëngjeve biologjike

1. Analizat biokimike të gjakut Puna 85. Përcaktimi i përmbajtjes së hemoglobinës në gjak me anë të përthithjes së saj të dritës

Puna 86. Përcaktimi i përmbajtjes së hemoglobinës fetale në eritrocitet e njeriut

Puna 87. Përcaktimi i përmbajtjes së hemoglobinës së glikoziluar në eritrocite me metodën fotokolorimetrike.

Puna 88. Përcaktimi i përqendrimit të haptoglobinave në serumin e gjakut me metodën fotokolorimetrike

Puna 89

Puna 90. Përcaktimi i aktivitetit të α-amilazës në serumin e gjakut me metodën amiloklastike

Puna 91. Përcaktimi i përmbajtjes së kalciumit në serumin e gjakut me metodën murexide

Puna 92. Testi i timolit sipas Huergo dhe Popper

Puna 93. Reaksion sublimate-sedimentar

Puna 94. Përcaktimi sasior i përmbajtjes së hekurit në serumin e gjakut

2. Studimi biokimik i urinës

Puna 95. Studimi i vetive fiziko-kimike të urinës

Puna 96. Përcaktimi i trupave ketonikë dhe i glukozës në urinë

Puna 97. Përcaktimi i proteinave në urinë me metodën Brandenberg-Roberts-Stolnikov

Puna 98. Përcaktimi cilësor i indican në urinë

Puna 99. Zbulimi i disa pigmenteve në urinë.

Metabolizmi i ksenobiotikëve

Studimi i proceseve të oksidimit dhe konjugimit të ksenobiotikëve Puna 100. Zbulimi i aktivitetit respirator të mikrozomeve

Puna 101. Studimi i n-demetilimit oksidativ në mikrozomet e mëlçisë sipas Our

Puna 102. Përcaktimi i aktivitetit hidroksilazë të mikrosomeve të mëlçisë sipas Kato dhe Gilet

Puna 103

Puna 104. Përcaktimi i aktivitetit të dehidrogjenazës së alkoolit në serumin e gjakut sipas Shkursky et al.

Puna 105

Puna 106. Zbulimi i acetilimit (inaktivizimit) të hidrazidit të acidit izonikotinik (xhinkut) në trup

Studimi i peroksidimit të lipideve të membranave biologjike

Puna 107. Përcaktimi i ndjeshmërisë së eritrociteve ndaj hemolizës së peroksidit

Puna 108. Përcaktimi i shkallës së peroksidimit të lipideve në biomembrana

Aplikacion

2.Treguesit biokimikë të plazmës së gjakut

1. Normat e përgjithshme klinike

2. Ekzaminimi i veçantë i urinës

Lëngu gastrik

2. Tampon fosfati (0,1 m, pH 5,8-8,0)

3. Tris buffer (0,1 m, pH 7,1-9,2)

4. Bufer acetati (0,2 m, pH 3,6-5,8)

5. Bufer glicine (0,05 m, pH 8,6-10,6)

3. Përgatitja e disa reagentëve

Tabela e përmbajtjes

2. Tampon fosfati (0,1 m, pH 5,8-8,0)

Na 2 HPO 4 0,2 M, ml	Na 2 H 2 PO 4 0,2 M, ml

3. Tris buffer (0,1 m, pH 7,1-9,2)

24,2 g tris-(hidroksimetil)aminometan treten në një balonë vëllimore 1 l (në 500 ml H 2 O). Për të marrë vlerën e kërkuar të pH, shtohet vëllimi prej 1 M HCl i treguar në tabelë dhe vëllimi rregullohet në 1000 ml me ujë të distiluar.

4. Bufer acetati (0,2 m, pH 3,6-5,8)

Acetat natriumi 0,2 M, ml	Acidi acetik 0,2 M, ml		Acetat natriumi 0,2 M, ml	Acidi acetik 0,2 M, ml

5. Bufer glicine (0,05 m, pH 8,6-10,6)

Vëllimet e treguara të glicinës dhe hidroksidit të natriumit përzihen dhe vëllimi rregullohet me ujë të distiluar në 200 ml.

	Glicinë 0,2 M, ml	NaOH 0,2 M, ml		Glicinë 0,2 M, ml	NaOH 0,2 M, ml

3. Përgatitja e disa reagentëve

Zgjidhje aktivizuese. 155 mg glutation të reduktuar dhe 400 mg albuminë kristaline vendosen në një balonë vëllimore 100 ml, treten në 50 ml ujë të distiluar dhe pH rregullohet në 8,2 duke përdorur tretësirë ​​1 M NaOH. Pastaj shtoni ujë në shenjë.

Zgjidhja e amoniakut të nitratit të argjendit. Një zgjidhje e përqendruar e amoniakut i shtohet një zgjidhje 2-3% të argjendit derisa precipitati të shpërndahet.

Tampon acetati pH 3.6. Përgatiteni duke përzier 463 ml tretësirë ​​A dhe 37 ml tretësirë ​​B, holloni deri në pikën me ujë në një balonë vëllimore deri në 1 litër. Tretësira A: Holloni 11,55 ml acid acetik glacial me ujë në një balonë vëllimore 1 litër. Tretësira B: Shpërndani 27,2 g acetat natriumi në ujë në një balonë 1 litër.

Reagenti Biuret (reagjenti i Benediktit). 173 g citrat natriumi dhe 100 g karbonat natriumi treten në 300 ml ujë të distiluar në një banjë uji. Më vete, 17,3 g sulfat bakri shpërndahen në 300 ml ujë. Të dy tretësirat kullohen dhe vëllimi i përgjithshëm sillet në 1 litër.

tretësirë ​​tampon. 2,76 g Veronal dhe 2,06 g Medinal treten në 1 litër ujë të distiluar. Ruani në frigorifer; nëse shfaqet një precipitat, tretësira nuk është e përshtatshme për përdorim.

pezullimi i qymyrit. 0,25 g qymyr aktiv vendoset në një balonë vëllimore 100 ml dhe hollohet me tampon acetat pH 3,6. Shkundni mirë para përdorimit.

Reagent reduktues. Tretësirë ​​1% e acidit askorbik të përgatitur me tretësirë ​​0,016% të sulfatit të bakrit.

Hemoglobinë, tretësirë ​​4% në tampon acetati (pH 4.0). Së pari, një tretësirë ​​hemoglobine 8% përgatitet në një tretësirë ​​ure 8 mol/l, mbahet për 2 orë në një termostat në 60°C dhe hollohet 2 herë me tampon acetati përpara përdorimit.

Glicil-glicina. 0,55 mmol/l, pH 8,3. 3,63 g glicil-glicinë vendosen në një balonë vëllimore 50 ml, të mbushura me ujë deri në shenjë (tretësirë ​​tampon).

Zgjidhje denatyruese

Diazo reagent për përcaktimin e bilirubinës. Përgatitni dy zgjidhje. Tretësira e parë: 3 g acid sulfanilik tretet në 500 ml ujë të distiluar, shtohet 15 ml acid klorhidrik i koncentruar (në një banjë të nxehtë), vëllimi rregullohet në 1 litër me ujë. Tretësira e dytë: 0.5% tretësirë ​​ujore e nitritit të natriumit. Para përdorimit, përzieni 5 ml tretësirë ​​të parë dhe 0,25 ml të dytë.

Diacetil, tretësirë ​​pune. 1 ml diacetil hollohet me ujë të distiluar në një balonë vëllimore 100 ml (tretësira ruhet në frigorifer). Tretësira e punës e diacetilit përgatitet para përdorimit duke shtuar 24 ml ujë të distiluar në 1 ml tretësirë ​​stok të diacetilit.

Reagenti difenilamine. 1 g difenilaminë shpërndahet në 100 ml acid acetik glacial. Tretësirës i shtohen 2,75 ml acid sulfurik të koncentruar.

Zgjidhja e kalibrimit. Bazë - 0,75 mmol/l ALA (100 µg/ml) për sa i përket bazës: 0,00635 g hidroklorur ALA shpërndahet në tampon acetat pH 3,6 në një balonë vëllimore 50 ml. Ruani në frigorifer jo më shumë se një muaj. Nga solucioni kryesor përgatitet një solucion kalibrues pune, 1 μg/ml. Përgatiteni para përdorimit duke e holluar tretësirën stok me tampon acetat 100 herë.

Zgjidhja e kalibrimit. 22,5 mg dihidroksiaceton shpërndahen në 25 ml ujë me ngrohje. 1 ml nga kjo tretësirë ​​përmban 10 μmole dihidroksiaceton. Një solucion kalibrues i dihidroksiacetonit derdhet në një numër epruvetash (shihni punën), duke u mbushur deri në vëllimin e kërkuar dhe më pas reaksioni kryhet në të njëjtën mënyrë si në përcaktimin e aktivitetit të enzimës.

Zgjidhje kalibruese (standarde) e hekurit (30 µmol/l).

Fillimisht përgatiten kripërat e Morës.

reagent i kafeinës. 1 g kafeinë të pastër, 7,5 g benzoat natriumi, 12,5 g acetat natriumi treten në 90 ml ujë të distiluar, nxehen në 50-60°C, përzihen, ftohen dhe mbushen deri në 100 ml me ujë të distiluar.

Molibdati i amonit në acidin nitrik. Në 100 ml ujë treten 7,5 g molibdat amoni dhe shtohen 100 ml acid nitrik 32%.

Urina për alkaptonurinë. Në mungesë të patologjisë, hidrokinoni i shtohet urinës normale në masën 20 g/l.

Urina me hiperaminoaciduri. Në mungesë të glicinës patologjike i shtohet urinës normale në masën 1.0 g/l.

Urina me mukopolisakaridozë. Në mungesë të patologjisë, konsuridi ose heparina shtohet në urinën normale në masën 0,05-0,1 g / l.

Urina me pentosuria. Në mungesë të patologjisë, ksiluloza ose riboza shtohet në urinë në masën 1.0 g/l.

Urina me tirozinozë. Në mungesë të patologjisë, tirozina shtohet në urinën normale në masën 0,4-0,5 g / l.

Urina me fruktouri. Në mungesë të patologjisë, fruktoza shtohet në urinën normale në masën 0,3-0,4 g / l.

Urina për cistinuri. Në mungesë të cistinës patologjike i shtohet urinës normale në masën 0,4-0,5 g / l.

Acetat natriumi 3-tretësirë ​​ujore, e ngopur. 375 g acetat natriumi 3-ujor (ose 226 g kripë anhidër) treten në 250 ml ujë të ngrohtë, ftohet në temperaturën e dhomës. Ruajeni në temperaturën e dhomës. Zgjidhja duhet të jetë e pangjyrë dhe transparente.

Fosfat natriumi i dyzëvendësuar 0.25 mol/l. Përgatitet duke tretur 9,7 g Na 2 HPO 4 ∙12H 2 O ose 18 g Na 2 HPO 4 ∙12H 2 O në ujë në një balonë 200 ml. Kur shtoni 2 ml të kësaj zgjidhjeje në 1 ml tretësirë ​​të acidit trikloroacetik, pH duhet të jetë në intervalin 5,0-6,0.

Tretësirë ​​bazë e kalibrimit të kreatininës, 10 mmol/l. 113,1 mg kreatininë rregullohet në 100 ml me tretësirë ​​të acidit klorhidrik 0,1 mol/l. Gjatë ndërtimit të grafikut të kalibrimit, nga solucioni stoku përgatitet një tretësirë ​​pune duke e holluar tretësirën stoku 100 herë me ujë, 1 ml tretësirë ​​përmban 0,1 mmol kreatininë. Bazuar në këtë, fitohen një numër epruvetash me përqendrimin përkatës të kreatinës.

Përzierje oksiduese për përcaktimin e tiaminës. Në 8 ml hekzacianoferrat kaliumi 1% (III) shtohen 20 ml tretësirë ​​NaOH 30%, përziejeni mirë. Përgatiteni para përdorimit.

Reagenti Orcine. Në 1 g orcinë shtoni 500 ml acid klorhidrik 30% (densiteti 1,15 g / cm 3). Përzieni derisa të treten dhe shtoni 4-5 ml tretësirë ​​10% të klorurit të hekurit (III) FeCl 3 . Reagenti ruhet në një shishe të errët të mbyllur fort.

Zgjidhja bazë e kalibrimit p-nitroaniline. 0,0829 g p-nitroaniline vendoset në një balonë vëllimore 100 ml, plotësohet me ujë deri në pikën dhe tretet.

Zgjidhje precipituese. Në 1 litër ujë të distiluar shpërndahet 561 g sulfat amoni dhe filtrohet pas 24 orësh.

Tretësira bazë tampon fosfati dhe tretësirat e punës së saj Nr. 1-4. Në një enë vëllimore me kapacitet 500 ml shpërndahet 33,5 g NaOH në 400 ml ujë dhe shtohet 226,8 g KH 2 PO 4 , tundet derisa të tretet plotësisht, ftohet dhe shtohet ujë në shenjë. Për përgatitjen e tretësirave të punës të buferit bazik të fosfatit, vëllimet e mëposhtme të tamponit fosfat bazë (në ml) maten në balona vëllimore me kapacitet 100 ml: Nr. 1 - 92,51; Nr 2 - 74,91; Nr. 3 - 59.18 dhe Nr. 4 - 48.68, pas së cilës përmbajtja e tyre sillet në shenjë me ujë.

Acidi pikrik, tretësirë ​​e ngopur. Acidi pikrik i produktit përmban 15-20% lagështi, mos e thani acidin. Shpërthyes! Shpërndani 2 g acid pikrik në 100 ml ujë duke e ngrohur në një banjë të nxehtë. Pas kësaj tretësira lihet të qëndrojë për 24 orë duke e përzier herë pas here. Zgjidhja më pas filtrohet. Tretësira është e qëndrueshme dhe ruhet në një enë qelqi të errët.

Bufer pirofosfat 0,05 M pH 8,2. Transferoni 4,46 g pirofosfat natriumi në një balonë vëllimore 200 ml, shpërndajeni në afërsisht 100 ml ujë, rregulloni pH me tretësirë ​​0,1 M HCl në 8,2 dhe shtoni ujë të distiluar në shenjë.

Bufer pirofosfat 0,1 M pH 8,5. Transferoni 4,46 g pirofosfat natriumi në një balonë vëllimore me kapacitet 100 ml, shpërndajeni në 50 ml ujë, rregulloni pH me tretësirë ​​HCl 0,1 M në 8,5 dhe shtoni ujë të distiluar në shenjë.

Reagent pune. Përgatiteni në ditën e përcaktimit duke përzier 30 pjesë të hidroksidit të natriumit 0,3 N. 2 pjesë tretësirë ​​0,5% fenolftaleinë dhe 1 pjesë 0,12% tretësirë ​​e sulfatit të bakrit.

Tretësirë ​​e cianohidrinës së acetonit. Në 1 litër ujë të distiluar shpërndahet 1 ampulë aceton cianohidrinë (0,5 ml - 0,47 g nga kompleti për përcaktimin e hemoglobinës në gjak).

Tretësirë ​​e cianohidrinës së ferriacetonit. Shpërndani 200 mg ferricianid kaliumi dhe 1 ampulë (0,5 ml - 0,47 g) aceton cianohidrinë në 1 litër ujë të distiluar: është e mundur të përdoret nga një grup reagentësh për përgatitjen e një solucioni transformues për përcaktimin e hemoglobinës në gjak. E qëndrueshme për disa muaj kur ruhet në një enë qelqi të errët në temperaturën e dhomës.

Zgjidhja e gluoksidazës. Përmban rreth 300 njësi. në 1 mg. Përgatiteni duke tretur sasinë e duhur të preparatit të thatë në 10 ml ujë.

Një zgjidhje e bato-fenantrolinës së sulfonuar. Në një epruvetë, 0,5 ml acid klorosulfonik shtohet në 100 mg bathophenanthroline, nxehet në një banjë me ujë të vluar për 30 s, ftohet dhe 10 ml ujë bidistiluar hidhet ngadalë, nxehet përsëri në një banjë uji për 5 minuta. Përzierja transferohet në një balonë 200 ml, shtohet 100 ml ujë, pH e tretësirës rregullohet në 4-5 N NaOH dhe uji shtohet në një vëllim prej 200 ml.

Tretësirë ​​e jodit në jodur kaliumi (tretësirë ​​e Lugolit). Në 100 ml ujë të distiluar shpërndahen 20 g jodur kaliumi dhe 10 g jod. Para përdorimit, tretësira hollohet 5 herë.

Tretësirë ​​e p-nitrosodimetilaniline (NDMA). Një preparat NDMA i disponueshëm në treg është rikristalizuar nga eteri etilik. Për të matur alkool dehidrogjenazën, 1 mg NDMA shpërndahet në 100 ml tampon pirofosfat 0,1 M (pH 8,5). Zgjidhja që rezulton filtrohet përmes një filtri letre dhe filtrati hollohet 2 herë me të njëjtin tampon. Ruani në 4°C për dy muaj.

Reagent i Ilkës. Në 5 pjesë (në vëllim) të anhidrit acetik, shtoni 1 pjesë të acidit acetik akullnajor, pastaj hidhni gradualisht 1 pjesë të acidit sulfurik të koncentruar. Ruajeni reagentin në të ftohtë!

Reagent Millon. (Gati nën presion! ) 40 g merkur treten në 57 ml acid nitrik të koncentruar, fillimisht në të ftohtë dhe më pas nxehen në një banjë uji. Zgjidhja që rezulton hollohet me 2 vëllime ujë, lihet të vendoset dhe kullohet nga sedimenti. Ruani në një shishe qelqi të errët.

Reagenti i molibdatit të amonit. 2,5 g molibdat amonit treten në 60 ml ujë të distiluar, filtrohet. Tretësira shtohet në një enë 100 ml. Në një balonë tjetër, 25 ml ujë të distiluar i shtohen 7,5 ml acid sulfurik të koncentruar. Zgjidhja e dytë shtohet në të parën, ftohet dhe hollohet me ujë të distiluar deri në shenjë. Zgjidhja është e përshtatshme për një muaj.

Reagent "NADI". Një tretësirë ​​1% e dimetil-p-fenilendiaminës përzihet me një vëllim të barabartë të një tretësire 1% të α-naftolit në alkool dhe një zgjidhje 1.5% karbonat natriumi. Zgjidhja ka ngjyrë kafe të errët dhe nuk duhet të ketë një nuancë rozë. Përgatitur 1 orë para mësimit.

Reagent Nasha. 15,4 g acetat amoniumi, 0,3 g acid acetik glacial dhe 0,2 g acetilaceton shtohen në një balonë me kapacitet 100 ml, treten në ujë të distiluar dhe vëllimi rregullohet në shenjë.

Reagenti i Neslerit. Në një balonë vëllimore me kapacitet 500 ml, përzihen 150 g jodur kaliumi, 110 g jod, 100 ml ujë të distiluar dhe rreth 140-150 g merkur metalik dhe tunden fort për 15 minuta. Në këtë rast, tretësira ngrohet spontanisht, dhe ngjyra për shkak të jodit të tretur gradualisht zbehet. Përzierja më pas ftohet nën ujë të rrjedhshëm derisa të ruhet një ngjyrë e kuqe e dallueshme, pas së cilës përmbajtja tundet derisa ngjyra e kuqe të ndryshojë në jeshile. Pas dekantimit, precipitati i merkurit lahet tërësisht me ujë. Kombinoni tretësirën dhe larjet, holloni me ujë deri në 2 litra. Merrni 75 ml të tretësirës që rezulton në një balonë vëllimore 0,5 l që përmban 75 ml ujë dhe 350 ml tretësirë ​​10% hidroksid natriumi dhe holloni me ujë deri në shenjë.

Reagenti i Fehling. Dy solucione përgatiten veçmas. Zgjidhja 1: Shpërndani 200 g kripë Rochelle dhe 150 g NaOH në një balonë vëllimore 1 L dhe holloni deri në pikën me ujë. Zgjidhja 2: në një balonë vëllimore me një kapacitet 1 l, shpërndani 40 g sulfat bakri (II) në ujë dhe holloni me ujë deri në shenjë. Përzieni vëllime të barabarta të këtyre solucioneve përpara përdorimit.

Reagenti i Folinit. Në një balonë 1 litër, shpërndani 1 g tungstat natriumi dhe 20 g acid fosfomolibdik në 750 ml ujë. Mbylleni balonën me një tapë me një kondensator refluks dhe, duke ndezur rrjedhën e ujit në frigorifer, përmbajtja zihet për 10 orë; pastaj ftohet, hidhet në një balonë vëllimore dhe vëllimi ujor i reagentit rregullohet në 1 litër.

Reagenti i Erlich-it. 0,7 g p-dimetilaminobenzaldehid tretet në 150 ml acid klorhidrik të koncentruar, shtohet në 100 ml ujë dhe përzihet. Zgjidhja duhet të jetë e pangjyrë ose pak e verdhë. Ruani në një enë qelqi të errët. Reagenti është i qëndrueshëm.

Reagenti i Erlich-it. Shkrihet 1 g p-dimetilaminobenzaldehid në një balonë vëllimore 50 ml në 35 ml acid acetik glacial, shtoni 8 ml acid perklorik 57% dhe plotësoni deri në pikën me acid acetik glacial. Ruani në një enë qelqi të errët në frigorifer deri në një javë.

tretësirë ​​e alkoolit timol (10%). 10 g timol të pastruar treten në 100 ml alkool etilik 96˚. Marrja e timolit të pastruar kryhet si më poshtë. 100 g timol treten në 100 ml alkool etilik 96˚, filtrohet. Shtoni 1 litër ujë të ftohtë të distiluar në filtra, tundeni fuqishëm dhe lëreni të qëndrojë për 20 minuta. Filtri filtrohet dhe kristalet e mbetura në filtër lahen dy herë me ujë të ftohtë të distiluar. Thajeni fillimisht në letër filtri, pastaj për 2-3 ditë në një tharëse mbi klorur kalciumi anhidrik deri në peshë konstante.

Zgjidhje standarde. Përgatitja e tretësirës standarde kryhet duke përzier dy tretësirë: 1) 0,0962 n tretësirë ​​të klorurit të bariumit: 1,175 g BaCl 2 ∙2H 2 O kristalore tretet në 100 ml ujë në një balonë vëllimore. 2) Tretësirë ​​e acidit sulfurik 0,2 N. Më pas, merret një pezullim i sulfatit të bariumit: 3 ml e një zgjidhje 0,0962 N të klorurit të bariumit derdhet në një balonë vëllimore 100 ml dhe vëllimi rregullohet në 0,2 N me një zgjidhje të acidit sulfurik në një temperaturë prej + 10 ° C. (në këtë temperaturë, madhësitë e grimcave të sulfatit të bariumit të precipituar japin një rezultat relativisht të qëndrueshëm).

Tretësirë ​​buferike e substratit: derdhni 10 ml ujë në një epruvetë dhe shtoni 0,028 g L-glutamyl-p-nitroaniline dhe 0,082 g klorur natriumi dhe, pa pushuar së përzieri, shpërndani përmbajtjen e epruvetës në një banjë me ujë të vluar për 60 sekonda. . Tretësira më pas ftohet në 37°C dhe shtohet 2,5 ml tretësirë ​​tampon. Tretësira e përgatitur e substratit ruhet në një banjë uji në 37°C gjatë funksionimit. Tretësira e papërdorur e substratit mund të ruhet në frigorifer deri në një javë. Substrati është pak i tretshëm dhe precipiton në temperaturën e dhomës. Prandaj, para përdorimit, nënshtresa e kristalizuar shpërndahet duke u ngrohur në një banjë me ujë të valë. Ngrohja dhe shpërbërja e substratit mund të përsëritet jo më shumë se dy herë.

Tretësirë ​​substrate për përcaktimin e ALT (tretësirë ​​nr. 1). Mostrat e 29,2 mg të acidit α-ketoglutarik dhe 1,78 g alanine (0,89 g α-alanine) peshohen në një ekuilibër analitik dhe treten në 1 M tretësirë ​​të hidroksidit të natriumit derisa precipitati të tretet plotësisht (pH 7,4). Tretësira derdhet në një balonë 100 ml dhe vëllimi rregullohet në shenjë me pufer fosfat 0,1 M (pH 7,4). Shtoni 1 pikë kloroform. Zgjidhja ruhet e ngrirë në frigorifer.

Tretësirë ​​e nënshtresës për përcaktimin e AsAT (tretësirë ​​nr. 2). Mostrat prej 29,2 mg të acidit α-ketoglutarik dhe 2,66 g të acidit α-aspartik (1,33 g të acidit α-aspartik) peshohen në një bilanc analitik. Më pas, tretësira përgatitet në të njëjtën mënyrë si tretësira nr. 1.

Tretësirë ​​e substratit për përcaktimin e izomerazës së glukozfosfat. Përgatitet tretësira tampon e acetatit Medinal pH 7.4 (9.714 g acetat natriumi dhe 14.714 g medinal treten në ujë dhe vëllimi rregullohet në 500 ml). Përzieni 8,33 ml tretësirë ​​0,03 M të kripës dinatriumi të glukoz-6-fosfatit me 25 ml tampon acetati medial; shtoni në përzierje 25 ml tretësirë ​​të acidit klorhidrik 0,1 M dhe holloni në 100 ml me ujë. Mbani të ftohtë.

Tretësirë ​​substrate për përcaktimin e laktat dehidrogjenazës. Përzieni 1 ml tretësirë ​​laktat natriumi 1 M, tretësirë ​​9 M NaCl, 0,05 M Cl 2, 10 g/L tretësirë ​​NAD. Përmbajtjes i shtohen 2,5 ml tretësirë ​​tampon fosfati 0,5 M (pH 7,4) dhe 1 g/l tretësirë ​​blu nitrotetrazoliumi. Para përdorimit, përzierjes i shtohet 0,25 ml tretësirë ​​metasulfati fenanzine me një përqendrim 1 g / l.

Tretësirë ​​substrate për përcaktimin e fruktozës bisfosfat aldolazës. 270 mg kripë bariumi të bisfosfatit të fruktozës treten në 3,5 ml acid klorhidrik 1 M. Shtohet 1 ml tretësirë ​​sulfat natriumi 14% dhe precipitati i formuar hiqet me centrifugim. Shtoni 1 pikë sulfat natriumi në supernatant. Shfaqja e turbullirës tregon një depozitim të pamjaftueshëm të plotë të joneve të bariumit. Në këtë rast, shtohet më shumë sulfat natriumi dhe centrifugohet përsëri. Centrifuga rregullohet me një zgjidhje 3% hidroksid natriumi në pH 7,4-7,6, transferohet në një balonë 25 ml dhe vëllimi rregullohet në shenjë. Tretësira që rezulton përzihet me 25 ml tretësirë ​​0,56 M të klorurit të hidrazinës, 25 ml tretësirë ​​0,002 M të acidit monojodoacetik, 100 ml tretësirë ​​karbonat natriumi 0,5% dhe 25 ml ujë të distiluar. Ruhet në frigorifer.

Tampon timol-veronal. Në një balonë vëllimore 100 ml, përzieni 80 ml tretësirë ​​tampon dhe 1 ml tretësirë ​​alkooli 10% të timolit, tundeni dhe shtoni tretësirën tampon në shenjë. Vlera e pH duhet të jetë 7.55.

Reagent o-Toluidine. 0,15 g tiourea tretet në 94 ml acid acetik glacial dhe përzihet me 6 ml O-toluidinë të distiluar. Ruhet në një shishe të errët.

Fenoli i ngopur me ujë. 35 ml ujë i shtohen 100 g fenol të distiluar dhe trazohen duke e ngrohur pak përzierjen për të përshpejtuar tretjen e fenolit.

Fenolftalinë, tretësirë ​​pune. Përgatiteni duke tretur 75 mg të substancës në 15 ml tretësirë ​​të hidroksidit të natriumit 0,1 N, tretësira duhet të jetë e pangjyrë ose pak rozë, tretësirat me ngjyrë nuk janë të përshtatshme për punë. Për të rritur rezistencën e reagentit, i shtohen 3 mg trilon, i cili, duke lidhur kripërat e metaleve të rënda, parandalon autooksidimin e fenolftaleinës nga oksigjeni atmosferik.

Fibrina. Fibrina e gjakut të gjedhit lahet nga pigmentet e gjakut në ujë të rrjedhshëm për disa ditë derisa të krijohet një mpiksje e bardhë. Uji shtrydhet dhe fibrina, e mbushur me glicerinë, ruhet në një kavanoz të mbyllur fort. Para përdorimit, fibrina lahet nga glicerina.

Reagent fosfor-vanilinë. 4 pjesë (sipas vëllimit) të acidit fosforik të përqendruar përzihen me 1 pjesë të një tretësire ujore 0,6% të vanilinës. Reagenti ruhet në një enë qelqi të errët në temperaturën e dhomës.

Fruktozë 1,6-bisfosfat, kripë natriumi. 2.0 ml një zgjidhje 10% të kripës së natriumit të fruktozës-1,6-bisfosfatit hollohet në një balonë 25 ml me ujë deri në shenjë. E qëndrueshme kur ruhet në frigorifer.

Reagent me ngjyra për ure. Tableta nga kompleti për përcaktimin e uresë që përmban diacetil monooksim dhe tiosemikarbazid shpërndahet duke u ngrohur në një balonë 50 ml. Zgjidhja është e qëndrueshme për tre javë. Para përdorimit, përzieni vëllime të barabarta të tretësirës së përgatitur dhe një tretësirë ​​të acidit sulfurik 9,6%.

Tretësirë ​​alkaline e β-glicerofosfatit. Në një balonë vëllimore me kapacitet 100 ml shtoni 1 g β-glicerofosfat natriumi dhe 0,85 g medinal, shtoni rreth 30 ml ujë të distiluar, shpërndani dhe sillni vëllimin në pikën me ujë. Në një enë tjetër vëllimore me kapacitet 100 ml, shtoni 50 ml tretësirë ​​të përgatitur të β-glicerofosfatit, 2,8 ml tretësirë ​​të hidroksidit të natriumit 0,1 M dhe vendoseni në shenjë me ujë të distiluar (pH tretësirë ​​8,6). Shtroni mbi lëng rreth 3 ml toluen. Ruajeni tretësirën në frigorifer jo më shumë se 10 ditë.

Marrja e gjakut, përgatitja e një "ngjyrosjeje të hollë" dhe "pikës së trashë"

lëvizja e baktereve. Struktura e flagjelit, trashësia, gjatësia, përbërja kimike. Përgatitja e preparateve fikse dhe preparateve të qelizave të gjalla të mikroorganizmave.

Për përgatitjen e solucioneve buferike përdoren reagentë kimikisht të pastër. dhe nota analitike, e përgatitur posaçërisht. Reagentët përgatiten si më poshtë.

Fosfat kaliumi i monozëvendësuar, KH 2 PO 4 , pesha molekulare 136.09. 100 gr medikament tretet kur nxehet deri në valë në 150 ml ujë. Zgjidhja filtrohet e nxehtë. Me nxitje të vazhdueshme, filtrati ftohet në 10 ºС. Më pas shtoni 150 ml alkool etilik. Kristalet e ndara me përzierje të vazhdueshme të filtratit filtohen në një gyp thithës dhe rikristalizohen përsëri në të njëjtat kushte; kristalet thahen në peshë konstante në 105...110 ºС. Në prani të një preparati me përmbajtjen e substancës kryesore në intervalin 99.9 ... 100.0%, përgatitja paraprake e substancës nuk kryhet.

Fosfat natriumi i zbërthyer, Na 2 HPO 4 12H 2 O, pesha molekulare 358,12. Ekzistojnë dy mënyra për të përgatitur ilaçin.

a) 150 g medikament shpërndahet në 150 ml ujë kur nxehet në 100 0 C. Tretësira filtrohet e nxehtë dhe pas ftohjes filtrohet kristalet e precipituara. Rikristalizimi përsëritet duke u ngrohur në 100 ºС. Preparati i rikristalizuar nxehet në një filxhan porcelani në një banjë uji me përzierje të vazhdueshme derisa preparati të thahet plotësisht. Kripa që rezulton thahet në një tharëse mbi klorur kalciumi të shkrirë gjatë ditës. Në preparatin e rikristalizuar (Na 2 HPO 4 ·2H 2 O) kontrollohet përmbajtja e substancës kryesore. Për ta bërë këtë, rreth 0,5000 g të ilaçit shpërndahet në 50 ml ujë, shtohen 2 ... 3 ml një zgjidhje të ngopur të klorurit të natriumit dhe titrohet me një zgjidhje të acidit klorhidrik 0,1 N në prani të një treguesi të metil të kuq. . Nëse është e nevojshme, bëni rregullime në madhësinë e kampionit. 1 ml acid klorhidrik saktësisht 0,1 N korrespondon me 0,0178 g Na 2 HPO 4 2H 2 O.

b) 75 g të barit shpërndahen në 250 ml ujë të ngrohur në 60 ºС. Tretësira filtrohet e nxehtë, filtrati ftohet me nxitje të vazhdueshme në 10 ºС. Kristalet e precipituara filtrohen në një gyp thithës dhe rikristalizohen përsëri në të njëjtat kushte. Kripa e përftuar fillimisht thahet në një temperaturë jo më të madhe se 30 ºС për 24 orë, pastaj vazhdon të thahet në furrë në 50 ºС për 3-4 orë dhe në fund në 120±5 ºС në peshë konstante, duke mos lejuar që kripa të shkrirja. Pas tharjes, kripa ka përbërjen Na 2 HPO 4 .

Pas përgatitjes së reagentëve, përgatiten tretësirat stoqe të fosfatit të kaliumit të monozëvendësuar dhe fosfatit të natriumit të dyzëvendësuar.

Një pjesë e fosfatit të kaliumit anhidrik të monozëvendësuar KH 2 PO 4 me peshë 9,078 g tretet në ujë dhe vëllimi i tretësirës rregullohet në 1 litër. Për të stabilizuar tretësirën shtoni 3-4 pika toluen.

Një pjesë e fosfatit të natriumit Na 2 HPO 4 12H 2 O, me peshë 11,876 g, treten në ujë dhe vëllimi i tretësirës rregullohet në 1 litër. Për të stabilizuar tretësirën shtoni 3-4 pika toluen.

Nga tretësirat fillestare përgatiten tretësirat buferike të fosfatit me pH nga 4,94 deri në 9,18 në përputhje me Tabelën A.2.

Tabela A.2 - Tretësirë ​​tampon fosfati me një pH prej 4,94 ... 9,18

pH	Tretësirë ​​Na 2 HPO 4 12H 2 O, ml	Tretësirë ​​KH 2 PO 4, ml
4,94	1,0	99,0
5,29	2,5	97,5
5,59	5,0	95,0
5,91	10,0	90,0
6,24	20,0	80,0
6,47	30,0	70,0
6,64	40,0	60,0
6,81	50,0	50,0
6,98	60,0	40,0
7,17	70,0	30,0
7,38	80,0	20,0
7,73	90,0	10,0
8,04	95,0	5,0
8,34	97,5	2,5
8,67	99,0	1,0
9,18	100,0	0,0

Data e shtimit: 2015-08-06 | Shikime: 4058 |

PH i tretësirave tampon llogaritet sipas ekuacionit Henderson-Hasselbach:

– për një tampon acid, ekuacioni ka formën

– për buferin kryesor

Ekuacionet tregojnë se pH e një solucioni buferik të një përbërjeje të caktuar përcaktohet nga raporti i përqendrimeve të acidit dhe kripës ose bazës dhe kripës, dhe për këtë arsye nuk varet nga hollimi. Kur vëllimi i tretësirës ndryshon, përqendrimi i secilit komponent ndryshon me të njëjtin numër herë.

Kapaciteti buferik

Aftësia e tretësirave tampon për të mbajtur një pH konstante është e kufizuar. Ato. shtimi i acidit ose alkalit pa ndryshuar ndjeshëm pH-në e tretësirës tampon është e mundur vetëm në sasi të kufizuar.

Vlera që karakterizon aftësinë e një tretësire tampon për të kundërshtuar zhvendosjen në reaksionin e mjedisit kur shtohen acide dhe alkali quhet kapaciteti buferik i tretësirës (B).

Kapaciteti tampon matet me numrin e ekuivalentëve mole të një acidi ose baze të fortë, shtimi i të cilave në 1 litër tretësirë ​​tampon ndryshon pH me një.

Matematikisht, kapaciteti i tamponit përcaktohet si më poshtë:

B nga acidi (mol/l ose mmol/l):

,

ku n(1/z HA) është numri i ekuivalentëve mole të acidit, pH 0 dhe pH janë pH e tretësirës tampon para dhe pas shtimit të acidit, V B është vëllimi i tretësirës buferike.

Në alkali (mol / l ose mmol / l):

,

ku n (1/z VOH) është numri i ekuivalentëve mole të alkalit, pjesa tjetër e emërtimeve janë të njëjta.

Kapaciteti i tamponit varet nga një numër faktorësh:

1. Nga natyra e substancave dhe përbërësve të shtuar të tretësirës buferike. Sepse disa substanca mund të formojnë komponime ose komplekse të patretshme ose të japin reaksione të tjera të padëshirueshme me përbërësit e sistemit buferik, atëherë koncepti i kapacitetit buferik humbet kuptimin e tij.

2. Nga përqendrimi fillestar i përbërësve të sistemit buferik.

Sa më i madh të jetë numri i përbërësve të çiftit acid-bazë në tretësirë, aq më i madh është kapaciteti buferik i kësaj tretësire.

Kufiri i raportit të përqendrimeve të përbërësve të tretësirës tampon, në të cilin sistemi ruan ende vetitë e tij. Intervali i pH = pK ± 1 quhet zona e veprimit buferik të sistemit. Kjo korrespondon me diapazonin e raportit Me kripë /C me ju nga 1/10 në 10/1.

B në (gjak) \u003d 0,05 mol / l; B në (plazmë) \u003d 0,03 mol / l; B deri (gjaku i serumit) = 0,025 mol / l

Sistemet tampon të gjakut

Sidomos rëndësi të madhe sistemet tampon janë në ruajtjen e ekuilibrit acido-bazik të organizmave. Vlera e pH e shumicës së lëngjeve ndërqelizore është në rangun nga 6.8 në 7.8.

Bilanci acido-bazik në gjakun e njeriut sigurohet nga sistemet buferike të hidrokarbonateve, fosfateve, proteinave dhe hemoglobinës. Vlera normale e pH e plazmës së gjakut është 7,40 ± 0,05.

Sistemi buferik i hemoglobinës siguron 35% kapacitet buferik të gjakut: . Oksihemoglobina është një acid më i fortë se hemoglobina e reduktuar. Oksihemoglobina është zakonisht në formën e një kripe kaliumi.

Sistemi buferik i karbonatit : zë vendin e parë për nga fuqia. Është e përfaqësuar acid karbonik(H 2 CO 3) dhe bikarbonat natriumi ose kaliumi (NaHCO 3, KHCO 3) në një raport 1/20. Buferi bikarbonat përdoret gjerësisht për të korrigjuar çrregullimet acido-bazike në trup.

Sistemi buferik i fosfatit . Dihidrofosfati ka veti acid i dobët dhe ndërvepron me produktet alkaline që hyjnë në gjak. Hidrofosfati ka vetitë e një alkali të dobët dhe reagon me acide më të forta.

Sistemi i tamponit të proteinave luan rolin e neutralizimit të acideve dhe alkaleve për shkak të vetive të tij amfoterike: në një mjedis acid, proteinat e plazmës sillen si baza, në një mjedis bazë ato sillen si acide:

Sistemet tampon janë gjithashtu të pranishëm në inde, gjë që kontribuon në ruajtjen e pH të indeve në një nivel relativisht konstant. Tamponët kryesorë të indeve janë proteinat dhe fosfatet. Ruajtja e pH kryhet edhe me ndihmën e mushkërive dhe veshkave. Dioksidi i tepërt i karbonit hiqet përmes mushkërive. Veshkat me acidozë sekretojnë më shumë fosfat natriumi monobazik acid, dhe me alkalozë - më shumë kripëra alkaline: fosfat natriumi dibazik dhe bikarbonat natriumi.

Shembuj të zgjidhjes së problemeve

Zgjidhja:

Ne llogarisim pH-në e tretësirës tampon acid duke përdorur formulën, më pas

Përgjigje: 5,76

Zgjidhja:

Ne llogarisim kapacitetin e tamponit duke përdorur formulën:

Përgjigje: 0,021 mol/l

Shembulli 3

Tretësira buferike përbëhet nga 100 ml 0,1 mol/l acid acetik dhe 200 ml 0,2 mol/l acetat natriumi. Si do të ndryshojë pH e kësaj tretësire nëse i shtohen 30 ml tretësirë ​​hidroksid natriumi 0,2 mol/l.

Zgjidhja:

Ne llogarisim pH-në e tretësirës tampon duke përdorur formulën:

Kur NaOH shtohet në tretësirën tampon, sasia e kripës rritet dhe sasia e acidit në tretësirën tampon zvogëlohet:

0,006 0,006 0,006

CH 3 COOH + NaOH \u003d CH 3 COONa + H 2 O

Ne llogarisim n (NaOH) \u003d 0,03 l 0,2 mol / l \u003d 0,006 mol, prandaj, në tretësirën tampon, sasia e acidit zvogëlohet me 0,006 mol, dhe sasia e kripës rritet me 0,006 mol.

Ne llogarisim pH-në e tretësirës duke përdorur formulën:

Prandaj: pH 2 - pH 1 = 5,82 - 5,3 = 0,52

Përgjigje: ndryshimi i pH të buferit = 0,52.

Detyrat për vendim i pavarur

4. Për të titruar 2 ml gjak për të ndryshuar pH nga vlera fillestare (7.36) në vlerën përfundimtare (7.0), ishte e nevojshme të shtoni 1.6 ml tretësirë ​​HCl 0.01 M. Llogaritni kapacitetin e tamponit të acidit.

5. Sa mol acetat natriumi duhet shtuar në 300 ml acid acetik që të zvogëlohet përqendrimi i joneve të hidrogjenit për 300 herë (K dis (CH 3 coon) = 1.85.10 -5).

6. Në studimet biokimike përdoret tampon fosfati me pH = 7,4. Në çfarë raporti duhet të përzihen zgjidhjet e hidrogjenfosfatit të natriumit dhe dihidrogjen fosfatit të natriumit me një përqendrim prej 0,1 mol / l secila për të marrë një zgjidhje të tillë tampon (pK (H 2 PO 4 -) \u003d 7.4).

7. Çfarë shkeljesh të CBS vërehen me treguesit e mëposhtëm: pH i gjakut = 7.20, Pco 2 = 38 mm Hg. Art., BO = 30 mmol / l, SBO = -4 mmol / l. Si të eliminohet kjo shkelje e KOS-it?

Detyrat e testimit

Buffer larës me fosfat Tween-20 për imunohistokiminë është një koncentrat (20x) që, pas hollimit, përdoret për të larë rrëshqitjet e reagentëve dhe ruajtjen afatshkurtër të mostrave të imunohistokimisë ndërmjet procedurave. Pas hollimit, një zgjidhje e gatshme për përdorim 0,01 M ka një pH prej 7,4±0,1. Përdorimi i këtij solucion të kripur të buferuar me fosfat lejon jo vetëm sigurimin e larjes me cilësi të lartë, por edhe ruajtjen e karakteristikave morfologjike të antitrupave të përdorur dhe epitopeve të tyre, gjë që lehtëson lidhjen specifike të kërkuar për reaksionin imunohistokimik. Shtimi i Tween-20 në PBS promovon larje më efikase dhe parandalon njollat ​​jo specifike.

Përparësitë tona:

Për momentin ne jemi duke bashkëpunuar me prodhuesit kryesorë të huaj të reagentëve laboratorikë. Klientët tanë janë institucione joshtetërore dhe shtetërore, përfshirë organizatat mjekësore në Moskë dhe qytete të tjera të Rusisë. Për klientët e rregullt ekziston një sistem zbritjesh.