Biologinės medžiagos hematologiniams tyrimams rinkimo ir paruošimo reikalavimai.

Biologinės medžiagos hematologiniams tyrimams transportavimo ir laikymo reikalavimai.

Teisingas hemostazės sistemos tyrimo krypties užpildymas:

Pilnas paciento vardas, pavardė, amžius, lytis

Kraujo mėginių ėmimo tyrimams laikas

Klinikinė diagnozė (trumpai)

Hematokritas

Hemoraginis sindromas (kraujavimas iš nosies, gimdos ir kt.), trombozė (nurodyti lokalizaciją), šokas, dauginis organų nepakankamumas, trauma, užsitęsusio suspaudimo sindromas, nudegimai ir kt.

Nurodykite vartojamus vaistus, turinčius įtakos hemostazės parametrams, nurodydami dozę, paskutinio vartojimo būdą ir datą

Laikomasi laiko intervalo paimti (kraujo) mėginius, dietos ir mankštos apribojimus:

Planinis kraujo mėginių ėmimas atliekamas nuo 7 iki 9 valandos ryto, pacientui gulint arba sėdint. Tiriant hemostazę dinamikoje, pageidautina paimti kraują toje pačioje kūno padėtyje kaip ir ankstesnė.

Kraujas imamas tuščiu skrandžiu, praėjus 12-14 valandų po paskutinio valgio.

Prieš paimant kraują, pacientas pageidautina pailsėti 15 minučių.

Išimtys: hemostazės tyrimai cito, APTT įvertinimas.

Planinio tyrimo išvakarėse (per 24 valandas) pacientas susilaiko nuo didelio fizinio krūvio, alkoholio vartojimo. Pageidautina, kad kraujo mėginių ėmimo išvakarėse pacientas nevalgytų riebaus maisto.

Chirurginė intervencija sukelia hemostazės pokyčius nuo kelių dienų iki kelių savaičių.

Veiksniai, turintys įtakos hemostazei, yra injekcijos, infuzijos, perpylimai, punkcijos, biopsijos, masažas, dializė, radioaktyvių medžiagų įvedimas, imunoscintiografija, jonizuojanti spinduliuotė, endoskopinis tyrimas, specialios dietos.

KRAUJO MĖGINIŲ ĖMIMO TAISYKLĖS

Kraujas imamas iš periferinės venos (dažniausiai kubitalinės).

Kraujo mėginiai imami tik naudojant vakuuminę mėginių ėmimo sistemą mėgintuvėliuose su specialiu spalviniu žymėjimu, priklausomai nuo naudojamo antikoagulianto ( natrio citratas 3,2 proc. santykiu: 1 tūris natrio citrato ir 9 tūriai kraujo.

Tyrimams trombocitų lygis paimant kraują mėgintuvėlyje su EDTA(alyvinės spalvos kodavimas). Trombocitų kiekio tyrimas skiriamas nesant klinikinio kraujo tyrimo arba kai klinikinio kraujo tyrimo metu nustatomos patologinės trombocitų kiekio vertės.

Leidžiamas trumpas turniketas, ne ilgiau kaip 60 sekundžių. Adatai patekus į veną iš karto nuimkite žnyplę. Norint paimti kraujo mėginius krešėjimo sistemai tirti, svarbu, kad negalėtumėte masažuoti venų, trankyti į jas.

Naudokite 0,7-1 mm vidinio skersmens kraujo paėmimo adatą (19-22 dydis).

Švirkšto naudojimas yra nepriimtinas dėl trombocitų ir kraujo krešėjimo faktorių aktyvavimo turbulenciniu kraujo judėjimu ir jo maišymusi su oru (putojimu). Tai neįtraukiama naudojant vakuumines talpyklas.

Įvedę adatą į veną, pritvirtinkite vakuuminį indą, kraujas pradės tekėti į konteinerį gravitacijos būdu.

Paimkite kraują koagulologiniam tyrimui antra mėgintuvėlis, pirmą kartą naudojamas kitiems tyrimams, pavyzdžiui, biocheminiams. Jei pirmiausia reikia paimti krešėjimo mėgintuvėlį, pirmuosius 5 ml kraujo ištraukite į tuščią mėgintuvėlį ir išmeskite į užkirsti kelią audinių tromboplastino patekimui į mėginį.

Iš karto po paėmimo kraują švelniai sumaišykite su antikoaguliantu be putų (vamzdelį apverskite 3–4 kartus).

Paėmę biologinės medžiagos mėginį, patikrinkite kraujo mėginį. Tikslus kraujo mėginių patikrinimas leidžia išvengti šių klaidų: neteisingas kraujo / citrato tūrių santykis; iš dalies krešėjęs kraujas.

Kraujas į laboratoriją pristatomas per 45 minutes po jo paėmimo. Transportavimo metu kraujas neturi būti purtomas. Kraujo mėginių negalima vežti žemesnėje nei 4°C ir aukštesnėje kaip 30°C temperatūroje.

Paramedikas-laborantas (medicinos technologas) atlieka:

tiekiamo kraujo įvesties kontrolė, įskaitant: 1) siuntimo formos užpildymo teisingumo tikrinimas. 2) tiekiamo kraujo tūrio pakankamumo patikrinimas pagal etiketę ant mėgintuvėlio, 3) mėginio patikrinimas, ar nėra krešulių, kai mėgintuvėlis lėtai pakreipiamas.

tiekiamo kraujo centrifugavimas, siekiant gauti:

trombocitais turtinga plazma ( centrifugavimo parametrai: rpm = 1000 rpm (apie 150-200g), centrifugavimo laikas 5-7 min.

Norint parinkti optimalias centrifugavimo sąlygas, jos vadovaujasi išcentrine jėga (g). Galite naudoti formulę:

g = 1,118 x 0,00001r x n2,

čia r yra centrifugos spindulys – atstumas centimetrais tarp rotoriaus ašies ir mėgintuvėlio centro centrifugos lizde; n yra apsisukimų skaičius per minutę.

plazma, kurioje trūksta trombocitų centrifugavimo parametrai: rpm = ~2500-3000 aps./min (apie 1500-2000g), centrifugavimo laikas 10-20 min. Norint visiškai pašalinti trombocitus, atliekama pakartotinė centrifuga, centrifugavimo parametrai išlieka tie patys.

3. Po centrifugavimo patikrinkite plazmos spalvą ir skaidrumą: hemolizinis mėginys, icterinė arba lipeminė (chilotinė) plazma nėra tiriama.

Po centrifugavimo supernatantas pašalinamas.

Pageidautina metu tirti hemostazės parametrus 2 valandas po kraujo paėmimo, bet leidžiama koagulologinių parametrų tyrimas in per 4 valandas jeigu plazma buvo atskirta nuo eritrocitų ir leukocitų nuosėdų.

Jei būtina ilgalaikis saugojimas"švieži" mėginiai (ne vėliau kaip per 2 valandas po kraujo paėmimo) plazma be trombocitų gali būti vieną kartą užšaldyti ir laikyti iki 2 savaičių -20°C temperatūroje arba iki 6 mėnesių -70°C temperatūroje. Plazmą reikia greitai atšildyti šiltame vandenyje (+36°C), gerai išmaišyti ir nedelsiant ištirti. Po užšalimo galimas APTT pasikeitimas.

Mikropreparatų hematologiniams tyrimams ruošimo būdas, fiksavimo ir dažymo būdai.

Kraujo tepinėlių ruošimo hematologiniams tyrimams metodas.

Stiklų paruošimas ir apdirbimas. Naujus švarius stiklus galima naudoti nuriebalinus Nikiforovo mišinyje (lygios dalys 96 % etilo alkoholio ir eterio). Panaudoti akiniai parą mirkomi šiltame muiluotame tirpale arba skalbimo miltelių tirpale (1 valgomasis šaukštas miltelių 5 litrams vandens). Po dienos tirpalas nupilamas, stiklas nuplaunamas tekančiu vandeniu. Tada jie vėl užpilami šiltu muiluotu tirpalu arba skalbimo miltelių tirpalu ir užvirinami, verdami tame pačiame tirpale 5-10 minučių (ne daugiau, kad nesudrumstų stiklai). Atvėsus tirpalui, jis vėl nusausinamas, stikleliai nuplaunami tekančiu vandeniu, o kiekvienas stiklelis nuplaunamas šepetėliu po tekančiu vandeniu. Taip apdoroti stiklai išdėliojami ant švaraus lapo, kad išdžiūtų. Švarūs akiniai, skirti nuriebalinti, dedami į Nikiforovo arba 96% etilo alkoholio mišinį 60 minučių, po to sausai nušluostomi ir laikomi švariame inde plačiu kaklu. Švarius akinius rekomenduojama imti pincetu arba rankomis už šoninių kraštų.

Tepinėlių ruošimas. Nedidelis kraujo lašas užlašinamas ant sauso paruošto stiklinio stiklelio arčiau trumposios pusės stikline lazdele (arba tiesiai iš piršto dūrio vietos). Palikite stiklinę horizontalioje padėtyje ir ištepkite stiklą krauju sausu, švariu, šlifuotu stiklu, laikydami jį 45° kampu. Su trumpu kraštu, palaukus, kol visas kraujas pasklis, greitai nupiešiamas ant stiklinės. Stiprus spaudimas ant stiklelio neturėtų būti, nes tai gali pažeisti kraujo ląsteles. Tepinėliai džiovinami ore ir pažymimi (geriausia paprastu pieštuku). Išdžiūvęs tepinėlis turi būti tolygiai plonas, gelsvos spalvos, pakankamo dydžio, išsidėstęs 1,0-1,5 cm atstumu nuo stiklinės kraštų, užimti beveik visą stiklinės ilgį ir baigtis „panikeliu“. Storų (giliai rožinių) tepinėlių naudoti negalima, nes juose sunku įžvelgti ląstelių morfologiją.

Standartinės kokybės tepinėliai gaunami naudojant automatinius prietaisus, skirtus tepinėlių ruošimui ir gaminamus įvairių įmonių.

Kraujo tepinėlių fiksavimas ir dažymas. Prieš dažymą kraujo tepinėlis paprastai fiksuojamas 5–10 minučių metilo alkoholyje, kad būtų išvengta hemolizės, kuri gali įvykti susilietus su vandeniu dažymo metu vandenyje tirpiais dažais arba vėliau susilietus su vandeniu. Fiksavimo metodai aprašyti toliau kartu su dažymo būdais. Wright ir Leishman dėmes fiksuoti nereikia, nes šiose dėmėse yra metilo alkoholio.

Sausus tamponus galima laikyti 2 dienas sausoje, šiltoje vietoje, karštoje, drėgnoje atmosferoje be fiksacijos – daug mažiau.

Kraujo ląstelėse yra bazofilinių ir acidofilinių struktūrų, kurios skiriasi reakcija (pH). Branduoliai yra bazofiliniai ir nusidažo mėlynai. Labai bazofilinės (rūgštinės) bazofilų granulės taip pat yra mėlynos. Hemoglobinas (būdamas bazinis) nusidažo acidofiliškai, t.y. raudonai. Dažymas rūgštinių ir bazinių dažų deriniu vadinamas Romanovskio dažymu ir turi įvairių modifikacijų (Pappenheim, Wright, Noht, Leishman, Giemsa, Jayner ir kt.). Paprastai kaip pagrindinis dažiklis naudojamas metileno mėlynasis, tačiau naudojamas ir toluidino mėlynasis. Kaip rūgštinis dažiklis naudojamas eozinas, azure I ir azure II.

Gero dažymo kriterijai: rausva eritrocitų spalva, purpurinis neutrofilų granuliuotumas rožiniame fone, švelnus azurofilinis monocitų granuliuotumas.

Dažams praskiesti geriausia naudoti neutralų šviežią distiliuotą vandenį. Pasenęs distiliuotas vanduo tampa rūgštus dėl anglies dioksido surinkimo iš atmosferos. Jei distiliuotas vanduo yra šarminis, raudonieji kraujo kūneliai įgauna purviną melsvai žalią spalvą; kad dalis leukocitų, kuriuos reikėtų nudažyti mėlyna spalva, pasidaro purpurinė, eozinofilų granulės tampa melsvos ir žalsvos, o ne rausvos, o neutrofilų granulės sulaikomos. Rūgščiame vandenyje eritrocitai nusidažo ryškiai oranžine spalva, o leukocitų branduoliai būna labai blyškūs. Idealus yra distiliuotas vanduo, kurio pH 7,0, kuris yra buferinis, kad jį išsaugotų. Galite naudoti paruoštas naudoti buferines tabletes, kurios yra ištirpintos distiliuotame vandenyje.

Kaulų čiulpų tepinėlių dažymui idealiai tinka 7,4–7,5 pH dėmės.

Dažymo metodai pagal Noht ir Pappenheim yra priimti kaip vieningi.

Reagentai fiksavimui: 1) metilo alkoholis arba 2) May-Grunwald eozino-metileno mėlynojo tirpalas.

Reagentai tepinėlių dažymui pagal Nokht: 1) bazinis žydros I tirpalas: 1 g dažų ištirpinama 1 litre distiliuoto vandens, paliekama tamsaus stiklo inde 12-14 dienų kambario temperatūroje, po to panaudojama; 2) bazinis kalio eozino tirpalas: 1 g dažų ištirpinama 1 litre distiliuoto vandens, paliekama tamsaus stiklo inde 12-14 dienų kambario temperatūroje, po to panaudojama; 3) fosfatinis buferis (Weise mišinys), pH 7,4-7,5: sumaišyti 0,49 g kalio-divandenilio fosfato (KH2PO4) ir 0,909 g natrio vandenilio fosfato (Na2HPO4) ir ištirpinti 1 litre distiliuoto vandens; 4) darbinis žydros eozino tirpalas: prieš naudojimą sumaišykite 25 ml žydros II pradinio tirpalo, 20 ml kalio eozino pradinio tirpalo ir 55 ml buferinio tirpalo (dažiklių proporcijos gali skirtis, jos nustatomos empiriškai ruošiant naujas pradinių tirpalų partijas).

Reagentai tepinėlių dažymui pagal Pappenheim: 1) eozino-metileno mėlynojo tirpalas pagal May-Grunwald. Jei nėra paruošto dažų tirpalo, jis paruošiamas ištirpinant 1 g sausų dažų 1 litre metilo alkoholio; 2) darbinis žydros eozino tirpalas pagal Nokht.

Tepinėlių fiksavimas. Tvirtinimo tirpalas pilamas į kiuvetę arba į plataus burnos indą su šlifavimo kamščiu. Tepinėliai dedami į indą, kuris panardinamas į kiuvetę arba po vieną dedamas į indą 5–10 minučių. Talpykla su akiniais išimama iš fiksuojamojo tirpalo (arba stiklinės išimamos pincetu ir dedamos į stovą) ir paliekamos ore, kol visiškai išdžius.

Dažymas pagal Nocht. Išdžiovinti fiksuoti tepinėliai, neišimant iš talpyklos, dedami į kiuvetę su darbiniu dažų tirpalu griežtai apibrėžtam laikui (20-45 min.), kuris empiriškai parenkamas kiekvienai dažų partijai. Nesant kiuvetės su indu, stiklas horizontaliai dedamas ant dviejų lygiagrečiai brūkšniu į viršų išdėstytų stiklinių strypų („bėgelių“) ir ant jų užpilama 3–4 ml darbinio dažų tirpalo. Indas su stiklinėmis išimamas iš kiuvetės su dažais ir dedamas į kiuvetę su vandeniu iš čiaupo (nesant indų, dažai nuo stiklinių nuplaunami vandeniu, nenuimant nuo stiklo strypų). Tepinėliai džiovinami oru.

Pappenheimo dažymas. Sausi nefiksuoti kraujo tepinėliai dedami į indą ir 3-5 minutėms nuleidžiami į kiuvetę su May-Grunwald tirpalu (arba pipete ant nefiksuoto tepinėlio užpilama 3-4 ml dažų). Talpykla su tepinėliais išplaunama kiuvetėje distiliuotu vandeniu, o po to 8-15 minučių įdedama į kiuvetę su žydros-eozino dažais pagal Nokht. Ant „bėgelių“ pastatytų stiklelių, nenuleidžiant dažų, 1 minutę pilamas distiliuotas vanduo, po to 8–15 minučių ant tepinėlio pilami dažai, po to dažai nuplaunami vandeniu. Tepinėliai džiovinami oru.

Dažymas pagal Romanovsky-Giemsa. Pagaminta taip pat, kaip pagal Nokht. Kaip dažiklis naudojamas paruoštas Romanovsky-Giemsa tirpalas, kuris prieš naudojimą praskiedžiamas 1 lašeliu dažų 1 ml distiliuoto vandens. Dažymo laikas nustatomas empiriškai kiekvienai dažų partijai (25–40 min.).

Wright dažymas. Reagentai. 0,2 g Wright's beicas (sausieji milteliai, BDH/E. Merck) ištirpinama 100 ml metanolio ir paliekama keletą dienų nusistovėti. Jei eritrocitai nepasidažę pakankamai aiškiai, paruoškite 0,25 % arba 0,3 % tirpalą.

Dažymo progresas. Ant tepinėlio užlašinami keli (apie 8) lašai dažų, paliekama 2-3 minutes nusistovėti (įsitikinkite, kad dažai neišdžiūtų), po to ant tepinėlio užpilamas toks pat kiekis buferinio vandens. Jei dažai subrendo, ant praskiestų dažų paviršiaus atsiras putos arba metalo blizgesio plėvelė. Atskiesti dažai paliekami ant tepinėlio 2-3 minutes, o po to nuplaunami buferiniu tirpalu arba vandeniu. Negalima leisti, kad dažai nusėstų ant tepinėlio paviršiaus. Jei taip atsitiks, tepinėlis 15-20 sekundžių užpildomas neskiestais dažais, o po to dar kartą buferiniu tirpalu arba vandeniu.

Fosfatinio buferio paruošimas.

A tirpalas (0,2 M KH2PO4): 1 litre distiliuoto vandens ištirpinkite 27,2 g druskos.

B tirpalas (0,2 M Na2HPO4): 35,6 g Na2HPO4 × 2H20 ištirpinkite 1 litre distiliuoto vandens.

Norint gauti 100 ml norimo pH buferinio tirpalo, tirpalus A ir B reikia nusausinti lentelėje nurodytais kiekiais. PH vertė tikrinama pH matuokliu.

Fosfatinio buferinio tirpalo ruošimas

Tirpalas, ml	pH vertė

Leišų dažymas. Reagentai. 0,15 g Leishman sausų dažų ištirpinama 133 ml absoliutaus metilo alkoholio. Dažai turi visiškai ištirpti, dažų kristalus prieš tai patartina susmulkinti skiedinyje. Dažus laikykite butelyje su stikliniu kamščiu, nefiltruokite.

Dažymo progresas. Atliekama panašiai kaip Wright dėmės, bet dvigubai praskiedus buferinį tirpalą. Keli lašai dažų (apie 8) užpilami ant tepinėlio, palaikomi 2 min. Įpilkite dvigubą buferinio tirpalo kiekį (16 lašų), sumaišykite ir palikite 7-10 minučių. Dažai nuplaunami distiliuotu vandeniu per 2-3 sekundes. Ilgiau plaunant, spalva pablogėja. Tepinėliai džiovinami stove ore.

Paruošiamas tirštas kraujo lašas. Trys kraujo lašai, užlašinti ant stiklelio tam tikru atstumu vienas nuo kito, išplečiami švaraus stiklelio kampu iki maždaug 1 cm skersmens, pažymimi pieštuku, po to džiovinami ore 1–2 valandas.

Nuspalvina tirštą kraujo lašą. Tiršti kraujo lašai nefiksuojami. Stikliniai stikleliai su gerai išdžiovintais storais lašeliais dedami ant „bėgių“ tam tikru atstumu vienas nuo kito, o ant jų 8–10 minučių pilamas darbinis žydros eozino tirpalas pagal Nokht. Vyksta eritrocitų „išplovimas“. Tada dažai nusausinami ir ant preparatų 30-35 minutes užpilama nauja žydros eozino darbinio tirpalo dalis pagal Nokht. Tada stikleliai kruopščiai nuplaunami distiliuotu vandeniu ir išdžiovinami.

Automatinis tepinėlių dažymas

Kadangi viena paklausiausių funkcijų hematologijos laboratorijoje yra kraujo tepinėlių ruošimas ir dažymas, bandymai juos automatizuoti yra natūralūs.

Pirmąją automatinio tepinėlio paruošimo sistemą Sysmex (Japonija) sukūrė dar 1990 m., o šiuo metu visame pasaulyje įdiegta daugiau nei 1600 sistemų. Per šį laikotarpį sukaupta didžiulė patirtis buvo panaudota kuriant naujos kartos sistemą – visiškai automatizuotą SP-1000i tepinėlių paruošimo ir dažymo stotelę, kurios našumas siekia iki 120 tepinėlių per valandą. SP-1000i užtikrina aukštą standartizacijos ir kokybės tepinėlio paruošimą naudojant intelektualųjį pleišto metodą, kuris leidžia vartotojui reguliuoti užpilamo kraujo mėginio kiekį, tepimo ašmenų kampą, tepimo greitį ir laukimo laiką. pagal tiriamojo mėginio hematokritą, naudojant nuo 8 iki 16 skirtingų reguliavimo lygių. Kraujo mėginiai gali būti imami rankiniu būdu arba automatiškai iš atvirų arba uždarų mėgintuvėlių. Sysmex automatizuota tepinėlių paruošimo ir dažymo stotis SP-1000i (Japonija)

Sistema naudoja iki septynių lanksčiai pritaikomų dažymo protokolų, leidžiančių standartizuoti tepinėlio dažymo kokybę ir atitikti aukščiausius reikalavimus. Galima naudoti šiuos dvigubo ir vienkartinio dažymo protokolus: pagal May-Grunwald-Giemsa, pagal Romanovsky ir pagal Romanovsky-Giemsa. Kraujo tepinėlis nudažomas tam skirtoje kasečių sistemoje, kurioje yra tik vienas stiklelis kiekvienoje kasetėje. Taikant šį metodą, užtikrinamas geras kraujo tepinėlio ir dažymo reagentų santykis, be to, iš reagento į orą neišgaruoja metanolis. Siekiant užtikrinti gerą kraujo fiksaciją prieš dažymą, į dažymo procesą integruotas atskiras išankstinio metanolio fiksavimo etapas.

Dėl dažymo protokolo lankstumo galima naudoti specialų kaulų čiulpų dažymo protokolą.

Kaulų čiulpų tepinėlių paruošimo hematologiniams tyrimams metodas.

Kaulų čiulpų tyrimas – mielograma Pirmas klausimas, į kurį turi atsakyti kaulų čiulpų tyrimas, yra kiekybinis ląstelių aspektas. Gerai žinoma, kad periferinio kraujo atžvilgiu galima nustatyti daugybę skirtingų tipų ląstelių skaičiaus ir procentinės dalies skaitinių verčių, nes jos yra laisvos ir santykinai tolygiai pasiskirsto kraujagyslių kraujo suspensijoje. . Apie kaulų čiulpus galima pasakyti visai ką kita: hematopoetinio audinio sudėtis labai nevienalytė, o kaulų čiulpų ląstelių pasiskirstymas nevienodas. Taigi tiesioginis mielokariocitų skaičius kameroje svyruoja labai plačiame diapazone tiek normalioje būsenoje, tiek tos pačios ligos atveju. Mūsų atskleistos vertės žmonėms paprastai svyravo nuo 27 000 iki 112 000 branduolinių elementų mm3 (Ursya). Literatūros duomenys svyruoja dar plačiau – ribos yra 12 000 ir 300 000 mm3 (Cartwright, Page). Po centrifugavimo hematokrito mėgintuvėlyje randami šie 4 sluoksniai: 1) viršutinis riebalinis geltonasis sluoksnis; 2) plazma; 3) iš branduolinių ląstelių susidaręs pilkai balkšvas sluoksnis; 4) raudonas sluoksnis, sudarytas iš eritrocitų. Pilkai balkšvo branduolių ląstelių sluoksnio (mielokrito) matavimas yra ribotas arba net klaidinantis, nes normalių asmenų reikšmės taip pat rodo reikšmingus svyravimus. Be to, branduolinės ląstelės randamos ne tik šiame sluoksnyje, bet ir riebaliniame bei eritrocitų sluoksniuose. Tačiau kaulų čiulpų koncentrato tepinėlius galima paruošti iš pilkai balkšvo sluoksnio, pašalinus plazmos supernatantą. Jie pasirodė naudingi diagnostikos procese tais atvejais, kai tiesioginiuose tepinėliuose ląstelėse yra mažai. Atsižvelgiant į tai, kad mielokariocitų kamerų skaičius ir mielokrito nustatymas suteikia tik apytikslius rezultatus ir ribotą atkuriamumą, šie kiekybinio nustatymo metodai nėra patenkinami. Siurbimo punkcijos metu išgaunama medžiaga yra kaulų čiulpų mėginys, sumaišytas su krauju įvairiomis proporcijomis. Kaulų čiulpų praskiedimo krauju laipsnis priklauso nuo daugelio veiksnių. 32P ženklinimas parodė, kad aspiruotų kaulų čiulpų praskiedimas krauju svyruoja nuo 40% iki 100%. Tačiau reikia pažymėti, kad kaulų čiulpų tyrimas, siekiant nustatyti diagnozę, visų pirma grindžiamas kokybiniu ląstelių turinio tyrimu ir tik antra vertus, kiekybinėmis šio turinio vertėmis. Štai kodėl kiekybiniai kaulų čiulpų ląstelių nustatymo metodai susideda iš pusiau kiekybinio kaulų čiulpų ląstelinės sudėties įvertinimo, lyginant su įprastais mėginiais: a) tepinėliuose su susmulkintais gabalėliais; b) histologiniai pjūviai. Tepinėlio tyrimas daugiausia atliekamas su sausu lęšiu, ant kelių tepinėlių, siekiant šių tikslų: a) pusiau kiekybinis kaulų čiulpų ląstelių masės įvertinimas; b) megakariocitų buvimo ir tankio nustatymas; c) milžiniškų ląstelių arba nenormalių ląstelių lizdų aptikimas; d) tinkamiausių sričių nustatymas tyrimams panardinant. Ant tepinėlių, gautų smulkinant kaulų čiulpų daleles, išskiriamos trys koncentrinės zonos: a) centrinė; b) išorinis; c) tarpinis. Centrinę zoną sudaro riebalų vakuolės, stromos ląstelės, granulocitai ir daugybė sunaikintų ląstelių. Išorinėje zonoje yra daug kraujo, kuris atskiedžia kaulų čiulpų ląsteles. Kaip ir ploni tepinėliai, jis tik prisideda prie mieloidinių ląstelių ir eritrocitų morfologinių detalių tyrimo. Tankiausia ląstelių masė yra tarpinėje zonoje, o tai leidžia atlikti optimalų tyrimą, kuris gali išsiaiškinti visus išdėstytus klausimus. Čia kaulų čiulpų ląstelės yra gerai išsilaikiusios ir išsidėsčiusios salelėse arba lizduose, kaip matyti čiulpuose. Išlaikant kaulų čiulpų topografiją, šios zonos tyrimo rezultatai yra homogeniškesni ir atitinka tikrąją kaulų čiulpų būklę, tai patvirtina palyginus su jo histologiniais vaizdais. Pusiau kiekybinis ląstelių tankio nustatymas išreiškiamas: a) normaliais, b) turtingais arba c) liesais, palyginti su normaliais kaulų čiulpais. Normalios arba gausios ląstelių masės nustatymas yra vertingas atradimas, o kaulų čiulpų trūkumas turėtų būti vertinamas atsargiai. Norint įrodyti tikrosios hipoplazijos buvimą, reikia ištirti kelias plokšteles, atlikti kelių kaulų sričių punkciją ir (arba) atlikti kaulo biopsiją. Tiksliausia informacija apie kaulų čiulpų ląstelių masę gaunama tiriant histologinius pjūvius. Suaugusiam žmogui riebalų ir aktyvios ląstelės parenchimos užimamos erdvės santykis paprastai yra 1:1 arba 2:1. Kai kurie autoriai mano, kad kaulų čiulpai yra hipoląsteliniai, kai kraujodaros ląstelės užima mažiau nei ketvirtadalį kaulų čiulpų gabalėlių. Diagnozei nustatyti būtinas kokybinis kaulų čiulpų tyrimas. Jis atliekamas panardinant tiek ant plonų tepinėlių, tiek ypač ant tepinėlių su susmulkintais gabalėliais iš tarpinės zonos. Rekomenduojama pasirinkti geriausiai ištemptus ir nudažytus tepinėlius su aiškiai apibrėžtomis ir morfologiškai gerai išsilaikiusiomis ląstelėmis. Šiame tyrime aprašoma: a) skirtingų mieloidinių ląstelių tipų identifikavimas; b) kiekvienos ląstelių eilės brendimo laipsnio nustatymas; c) granulocitų ir eritroblastų santykio išaiškinimas (G/E) d) ląstelių identifikavimas mitozės fazėje; e) aptiktų netipinių ląstelių aprašymas. Ištyrus kelis tepinėlius, sudaroma arba išsami aprašomoji „mielograma“ (kurioje pateikiamos iššifravus tepinėlius padarytos išvados), arba mielograma procentine išraiška, nustatyta ne mažiau kaip 300–500 elementų. Procentinę mielogramą galima sudaryti dviem būdais: 1) likusių ląstelių eilių priskyrimas 100 granulocitų; 2) kiekvieno tipo ląstelių procentinė išraiška nuo bendro kaulų čiulpų ląstelių skaičiaus. Statistiniu požiūriu pastarasis metodas atrodo teisingesnis ir, matyt, atspindi tikrąjį kaulų čiulpų ląstelių sudėties vaizdą. Atskirų autorių nustatytos formulės labai skiriasi, nes tokiame nevienalyčiame audinyje kaip kaulų čiulpai sunku nustatyti tikrąsias vidutines vertes. Lentelėje, pasak Wintrobe, pateikti atrinktų kaulų čiulpų mėginių iš 12 normalių asmenų tyrimo rezultatai. Normali mielograma

Mielogramos parametrai Vidutinė reikšmė (%) Svyravimų diapazonas (%)

Tinklinės ląstelės 0,9 0,1-1,6 Nediferencijuoti blastai 0,6 0,1-1,1 Mieloblastai 1,0 0,2-1,7

Promielocitai 2,5 1,0-4,1

Mielocitai neutrofilai 9,6 7,0-12,2 Metamielocitai neutrofilai 11,5 8,0-15,0 Stab neutrofilai 18,2 12,8-23,7 Segmentuoti neutrofilai 18,6 13,1-24,1 Iš viso neutrofilų ląstelių 60,8 52,7-68,9 Eozinofiliniai mielocitai 0,1 0,0-0,2 Eozinofiliniai metamielocitai 0,2 0,1-0,4 Eozinofilai 2,8 0,4-5,2

Bendras eozinofilinės serijos ląstelių skaičius 3,2 0,5-5,8 Bazofiliniai mielocitai 0,1 0-0,3

Bazofilai 0,1 0-0,3

Iš viso bazofilinės serijos ląstelių 0,2 0-0,5 Limfoblastai 0,1 0-0,2

Prolimfocitai 0,1 0-0,2

Limfocitai 8,8 4,3-13,3

Iš viso limfoidinių ląstelių 9,0 4,3-13,7 Monoblastai 0,1 0-0,2

Monocitai 1,9 0,7-3,1

Plazmablastai 0,1 0-0,2

Proplazmocitai 0,1 0,1-0,2

Plazmos ląstelės 0,9 0,1-1,8

Eritroblastai 0,6 0,2-1,1

Bazofiliniai normoblastai 3,6 1,4-5,8 Polichromatofiliniai normoblastai 12,9 8,9-16,9 Oksifiliniai normoblastai 3,2 0,8-5,6

Iš viso eritroidinių ląstelių 20,5 14,5-26,5 Megakariocitai 0,4 0,2-0,6

Remiantis mūsų tyrimais su sveikais žmonėmis, rezultatai yra tokie:

granulocitų skaičius 56-70 proc.

eritroblastinė serija 23-30%, limfoplazmacitinė serija 5-10%, monocito-makrofagų serija 1-2% ir megakariocitų serija 0,1-0,8% (Ursya). Normalių mieloidinių eilučių dalies pasikeitimas arba jų pakeitimas nenormaliomis ląstelėmis dažnai rodo ligos tipą. Tinklinės ląstelės atsiranda rečiau ir, be to, nedaug. Visai atsitiktinai tepinėliuose (arba kaulų čiulpų atspauduose) matomi osteoblastai ir (arba) osteoklastai, kurių nereikėtų painioti su neoplastinėmis ląstelėmis. Jų buvimas dažniau stebimas vaikams, rečiau suaugusiems, sergantiems pirmine mielofibroze arba antrine, po karcinomatinių metastazių, sergant ūmine leukemija, osteoporoze ir kt. G/E santykis gaunamas dalijant granulocitus iš eritroblastų skaičiaus. Normaliam suaugusiam žmogui šis santykis yra vidutiniškai 3/1 arba 4/1, o ribos yra 2/1 (kai įtraukiami tik nesubrendę granulocitai) ir 5/1 (kai tai susiję su visais granulocitais – brandžiais ir nesubrendusiais). H/E santykis svyruoja su amžiumi: gimus mažas (1,8/1), 2 savaičių amžiaus pakyla iki 11/1, vėliau palaipsniui mažėja, o vienerių metų vaikams pasiekia reikšmes. suaugusio žmogaus. H/E santykis yra normalus visuotinės kaulų čiulpų hipo- ar hiperplazijos atvejais, taip pat kai proliferuojasi atskiros ląstelės, kurios neįtrauktos į šio santykio apskaičiavimą, pavyzdžiui, sergant plazmocitoma. Sergant leukemijomis, į leukomą panašiomis reakcijomis ir eritroblastopenijomis šis santykis yra didelis, o sergant anemija su eritroblastine hiperplazija – mažas arba atvirkštinis (megaloblastinė, hemolizinė anemija). Prieš išduodant mielogramos duomenis, gautus po tepinėlių tyrimo, būtina išsiaiškinti: a) punkcijos vietą; b) kaulų tankis; c) sąlygas, kuriomis buvo siurbiama; d) pasirinktos medžiagos makroskopinis aspektas. Kaulų čiulpų tyrimas yra sudėtingas procesas, pagrįstas daugelio ir įvairių duomenų integravimu. Jo rezultatas turėtų atspindėti bendras išvadas, labiau pagrįstas išvadomis, o ne mechaniniu atskirų figūrų registravimu, kuris, be to, svyruoja. Bet kurios mielogramos išvadoje turėtų būti paaiškinta arba diagnozė, arba papildomų tyrimų, susijusių su kaulų čiulpų tyrimu, indikacijos. Sergant kraujo ligomis, 80% atvejų siurbimo punkcija padeda patikslinti diagnozę tepinėlių ir pjūvių su gabalėliais pagalba. Kitais atvejais nurodoma kaulo biopsija ir histologinis kaulų čiulpų tyrimas. Biooptinė atranka ir histologinis tyrimas atrodo būtini: a) pirminei ar antrinei mielofibrozei; b) kaulų čiulpų aplazija arba hipoplazija; c) ligos, atsirandančios su granulomatinio tipo pažeidimais (pvz. , Godžkino liga, sarkoidozė, tuberkuliozė ir kt.); d) karcinomatinės metastazės; e) visais atvejais, kai punkcijos būdu parinkta medžiaga nepatenkinama arba neįtikina kaulų čiulpų aspektas. Po biooptinio mėginio paėmimo atspaudai ruošiami citologiniam tyrimui, nes histologiniai pjūviai suteikia mažai informacijos apie susikaupusių, neišsklaidytų ir nestandartuotų hematopoetinių ląstelių struktūrines detales. Be to, fiksacija sukelia ląstelių atsitraukimą, o histologinis dažymas yra mažiau selektyvus nei citologinis dažymas. Štai kodėl pilnas kaulų čiulpų tyrimas apima tiek citologinį - tepinėlių ar atspaudų, tiek histologinį - tyrimo skyrių. Reikia atsiminti, kad citologiniai ir histologiniai kaulų čiulpų tyrimo metodai nėra atmesti, o, priešingai, papildo vienas kitą: biopsija yra kiekybinis ir architektūrinis metodas, o mielograma – kokybinis ir citologinis.

Kraujo ląstelių skaičiavimo Gorjajevo kameroje metodas.

Goriajevo kambarys - prietaisas, skirtas skaičiuoti ląstelių skaičių tam tikrame skysčio tūryje. Paprastai jis naudojamas nustatyti susidariusių elementų skaičių kraujo mėginyje. Kameros susideda iš storo stiklo skaidrės su skersiniais įpjovimais, sudarančiomis tris skersai išdėstytas plokščias sritis. Vidurinė platforma yra padalinta išilgine plyšiu į dvi dalis, kurių kiekvienoje yra išgraviruotas tinklelis. Abiejose vidurinės platformos pusėse Gorjajevo kameroje yra dvi kitos 0,1 mm aukštesnės (Fukso-Rozentalio kameroje 0,2 mm) aukščiau už vidurinę. Šių vietų plokštumos šlifuoja dangtelį, kol atsiranda vadinamieji Niutono žiedai. Įtrynus dengiamąjį stiklą susidaro kamera, uždaroma iš dviejų pusių, o kitose dviejose yra tarpai (kapiliariniai tarpai), per kuriuos užpildoma kamera. Tinklo principas yra tas pats. Jie skirstomi į vienokį ar kitokį skaičių kvadratų, sugrupuoti įvairiai. Pastovi reikšmė visuose tinklelyje yra vadinamasis „mažasis kvadratas“, kurio kraštinė yra 1/20 mm, todėl jo plotas yra 1/400 mm2. Naudojant Goryaev kamerą, taip pat galima nustatyti mikroskopo padidinimą. Išoriškai tai yra skaidrus gretasienis (stiklinis stiklelis), su grioveliais ir mikroskopine tinkleliu. Tinklelio langelio mažųjų padalų matmenys yra 0,05 mm, o didelių - 0,2 mm. Šiuo atveju tinklelis uždedamas ant platformos (stiklo dalies), esančios 0,1 mm žemiau nei dvi gretimos platformos. Šios sritys naudojamos dengiamajam stikleliui užklijuoti. Dėl to skysčio tūris virš kvadrato, sudaryto iš didelių Gorjajevo tinklelio padalų, yra 0,004 mikrolitro. Suskaičiavę ląstelių skaičių dideliame kvadrate, galite apskaičiuoti tam tikro tipo ląstelių tankį suspensijoje naudodami formulę: Ląstelių skaičius/ml = ląstelių skaičius virš didelio kvadrato * 2,5 10^5 Naudodami Goryajevo kamerą kaip savotišką standartą, mikroskopo padidinimą galite nustatyti pagal formulę: Kg=(m2-m1)/(a*N) kur kilogramas yra mikroskopo padidinimas; m 1 - Goriajevo kameros kameros kairiojo krašto padėtis; m 2 - langelio ar ląstelių grupės dešiniosios kraštinės padėtis; N- langelių skaičius tarp išmatuotų ribų; a- Gorjajevo kameros ląstelių dydis (lygus 0,05 mm). Gorjajevo kamera taip pat naudojama kultūroje esančių ląstelių skaičiui skaičiuoti. Kraujo ląstelių skaičiavimo Gorjajevo kameroje formulė yra tokia: x = (a 400 c) / b, čia x yra norimas formos elementų skaičius 1 mm3; a - tam tikrame kameros tūryje skaičiuojamų forminių elementų suma; b - suskaičiuotų mažų kvadratėlių skaičius; c - kraujo skiedimas.

Goriajevo kameroje esančių oocistų skaičiavimo metodas. Šis metodas dažniausiai taikomas, kai eksperimentiškai gyvūnai užkrečiami tiksliai nustatytu oocistų kiekiu (gyvūnui suleidžiamas atitinkamas mililitrų suspensijos kiekis). 1 ml suspensijos, kurioje yra oocistų, dedama į Gorjajevo kamerą. Kadangi Gorjajevo kameros tūris yra 0,9 m3, suskaičiuotų oocistų skaičius padauginamas iš 1111. Gautas skaičius atitinka oocistų skaičių 1 cm3 tirpalo. Tikslesniam nustatymui skaičiavimai turi būti atliekami bent tris kartus, o po to turi būti išvestas aritmetinis vidurkis. Infekcijai reikalingas oocistų skaičius matuojamas graduota pipete. Kad oocistos inkubacinėje terpėje pasiskirstytų tolygiau, mėgintuvėlio turinį reikia pakartotinai sukratyti.

Eritrocitų skaičius Gorjajevo kameroje Principas. Tikslus kraujo kiekis tolygiai sumaišomas tam tikrame skysčio kiekyje ir dedamas į žinomo tūrio kamerą, kurioje kraujo suspensija pasiskirsto vienu sluoksniu. Kameros dugnas pavaizduotas grafiškai, todėl galima tiksliai suskaičiuoti eritrocitus. Reagentai: 0,9% natrio chlorido tirpalas. Speciali įranga: mikroskopas, Gorjajevo kamera, laboratoriniai mėgintuvėliai arba kapiliaras iš Saly hemometro. Apibrėžimo pažanga. Į sausą, švarų mėgintuvėlį įpilkite 8 ml 0,9% natrio chlorido tirpalo ir 0,02 ml kraujo. Pipetės galiukas iš anksto nušluostomas, kraujas pučiamas į vamzdelio dugną, o pipetė kruopščiai nuplaunama viršutiniu skysčio sluoksniu. Gerai išmaišykite tūbelės turinį. Gaunamas kraujo praskiedimas 1:400, t.y. kraujas praskiedžiamas 400 kartų. Tirštėjant kraujui, patartina jį skiesti 500, 600, 700, 800 kartų. Kamerą ir dengiamąjį stiklelį reikia nuplauti ir sausai nušluostyti. Dengiamasis stiklas įtrinamas į kamerą taip, kad atsirastų vaivorykštės žiedai. Iš mėgintuvėlio paimkite atskiesto kraujo lašą ir užpildykite juo kamerą, užtepdami ant dengiamojo stiklelio krašto. Eritrocitai skaičiuojami praėjus 1 min. po kameros užpildymo mažo didinimo mikroskopu (x8 objektyvas, x10 arba x15 okuliaras) uždengta diafragma arba nuleistas kondensatorius (tamsiame matymo lauke) . Eritrocitai skaičiuojami penkiuose dideliuose (arba 80 mažų) kvadratuose, išdėstytuose įstrižai. Atsižvelgiama į eritrocitus, esančius mažo kvadrato viduje, taip pat ant kairiosios ir viršutinės jo sienelių. Ląstelės, esančios dešinėje ir apatinėje kvadrato eilutėse, neskaičiuojamos. Skaičiavimas: apskaičiuotas ląstelių skaičius 80 mažų kvadratėlių padauginamas iš 20 000, kai kraujas praskiedžiamas santykiu 1:400, iš 25 000, kai kraujas praskiedžiamas santykiu 1:500, arba iš 30 000, kai kraujas praskiedžiamas santykiu 1:600 ​​ir gaunamas galutinis rezultatas. milijonais už 1 μl. Šiuo atveju daroma prielaida, kad vieno mažo kvadrato tūris yra 1/4000 μl. Norint suskaičiuoti ląsteles 1 litre, raudonųjų kraujo kūnelių skaičius 1 µl taip pat padauginamas iš 1 000 000. Pastaba. Neleidžiama tirti kraujo su krešuliais; ląstelių skaičius iš karto po kameros užpildymo (nelaukiant 1 min.); prastai išplautų ir išdžiovintų pipečių ir mėgintuvėlių naudojimas, prastos kokybės reagentai, sukeliantys hemolizę. Atsižvelgiant į visas skaičiavimo taisykles, paklaida bus vidutiniškai ± 2,5%.

Dezinfekcijos taisyklės Po naudojimo Goryaev fotoaparatą reikia dezinfekuoti 3% tirpalas vandenilio peroksidu, nuplaukite distiliuotu vandeniu ir nusausinkite minkštu skudurėliu. Fotoaparatą laikykite sausoje vietoje.

Darbo su hematologiniais analizatoriais metodas.

Analizatorius-hematologinis- prietaisas (įrangos komplektas), skirtas kiekybiniams tyrimams atlikti ląstelės kraujo klinikinės diagnostikos laboratorijose. Gali būti automatinis arba pusiau automatinis. Pusiau automatinis hematologinis analizatorius nuo automatinio skiriasi tuo, kad kraujo mėginio skiedimo procesas vyksta atskiru prietaisu – skiedikliu. Paruošęs viso kraujo praskiedimą, operatorius turi perkelti praskiestą mėginį į matavimo modulį. Šiuo metu pusiau automatiniai analizatoriai praktiškai nėra gaminami.

Automatinis hematologijos analizatorius yra visiškai automatizuotas prietaisas, kuriame visas analizės procesas atliekamas automatiškai.

Šiuolaikiniai automatiniai analizatoriai gali apdoroti dešimtis mėginių (nuo 60 iki 120) per valandą, tiksliai ir atkuriamumu pagal specifikaciją, taip pat saugoti tyrimų rezultatus vidinėje atmintyje ir, jei reikia, atspausdinti juos įmontuotoje. terminis spausdintuvas arba išorinis spausdintuvas.

Šiuolaikiniai hematologiniai analizatoriai klasifikuojami pagal nustatytų kraujo ląstelių rodiklių nomenklatūrą.

Aštuonių parametrų hematologiniai analizatoriai nustatyti šiuos parametrus: koncentracija eritrocitai(RBC) leukocitų(WBC) trombocitų(plt) hemoglobino(Hb), taip pat šie eritrocitų parametrai: vidutinis eritrocitų tūris (MCV), vidutinis eritrocitų hemoglobino kiekis (MCH), vidutinė eritrocitų hemoglobino koncentracija (MCHC), hematokritas(Hct).

Aštuonių parametrų hematologiniai analizatoriai šiuo metu praktiškai negaminami.

Hematologinių analizatorių klasė 3-diff. 3-dif klasės hematologiniai analizatoriai, priklausomai nuo pagaminto modelio, leidžia nustatyti nuo 16 iki 22 kraujo ląstelių rodiklių. Šios klasės analizatoriai, be tų parametrų, kurie nustato aštuonių parametrų analizatorius, nustato tris leukocitų subpopuliacijas: limfocitų (Lm), granulocitų (Gr) ir vadinamųjų vidutinių leukocitų (Mid) koncentraciją, taip pat. jų procentas Lm%, Gr% ir Vid. Taigi klasės pavadinimas 3-dif. Be to, šios klasės hematologiniai analizatoriai nustato eritrocitų tūrio kitimo koeficientą (RDW) ir daugybę trombocitus apibūdinančių rodiklių: vidutinį trombocitų tūrį (MPV), trombocitų tūrio dalį (Tct) (analogiškai hematokritui), trombocitų tūrio variacijos koeficientas (PDW).

Svarbi diagnostinė informacija, kurią gali gauti šios klasės hematologiniai analizatoriai, yra eritrocitų, leukocitų ir trombocitų pasiskirstymo funkcijos pagal tūrį – histogramos.

Hematologiniai analizatoriai 5-dif. Pagrindinis skirtumas tarp 5-dif hematologijos analizatorių ir 3-dif analizatorių yra jų gebėjimas aptikti visas 5 leukocitų subpopuliacijas: limfocitus (Lym), monocitus (Mon), neutrofilus (Neu), bazofilus (Bas) ir eozinofilus (Eos). taip pat jų procentinis Lym%, Mon%, Neu%, Bas% ir Eos kiekis. Impedanso skaičiavimo metodas, taip pat žinomas kaip Noragėlių skaitiklis, naudojamas 3-dif analizatoriuose, nesugeba atskirti neutrofilų, bazofilų ir eozinofilų, todėl 5-dif analizatoriuose naudojamas kitoks ląstelių diferenciacijos metodas. Jis pagrįstas principu difrakcija leukocitų ląstelių apšvitinimas lazeriu ir tolesnė išsklaidytos spinduliuotės analizė. „Vidutiniai“ leukocitai nesiskiria tiek dydžiu, kad juos būtų galima atskirti impedanso metodu, tačiau jie turi skirtingą vidinę struktūrą ir skirtingai sąveikauja su dažikliais. Ir difrakcijos modelio aptikimo metodas pasirodo esąs jautrus vidinei ląstelių struktūrai. Taigi, eritrocitai ir trombocitai skaičiuojami Coulter skaitikliu, o leukocitai – atskiru lazeriniu bloku.

8 darbas. Baltymų kiekybinis nustatymas kraujo serume

4. Kompleksinių baltymų sudėtis ir savybės

Darbas 9. Cheminė hemproteinų prigimtis

10 darbas. Glikoproteinų angliavandenių komponento nustatymas

Darbas 11. Kokybinės reakcijos į fosfoproteinus

12 darbas. Sialo rūgščių kiekio kraujo serume kiekybinis nustatymas Hess metodu

13 darbas. Nukleoproteinų cheminė prigimtis

Nukleino rūgštys

1. Nukleino rūgščių cheminės prigimties tyrimas

14 darbas. Kokybinės reakcijos į nukleorūgščių komponentus

Kiekybiniai nukleorūgščių nustatymo metodai

15 darbas. Spektrofotometrinis nukleorūgščių kiekybinio nustatymo metodas pagal A.S.Spirin.

16 darbas. Fotokolorimetriniai nukleorūgščių kiekybinio nustatymo metodai

17 darbas. Fosfolipidų tyrimas

Darbas 18. Kokybinės reakcijos į steroidus

Fermentai

Lyginamasis fermentų ir nebiologinių katalizatorių veikimas

19 darbas. Seilių α-amilazės ir druskos rūgšties poveikio krakmolo hidrolizės reakcijai palyginimas

2. Fermentų, priklausančių skirtingoms klasėms, identifikavimas

20 darbas. Oksidoreduktazių nustatymas biologinėje medžiagoje

21 darbas. Cholinesterazės nustatymas

Kraujo serume greituoju Herzfeldo ir Stumpfo metodu

22 darbas. Fruktozės-1,6-bisfosfato aldolazės aktyvumo kraujo serume nustatymas V.I.Tovarnickio ir E.N.Voluskajos metodu.

Kalibravimo grafiko konstravimas

23 darbas. Gliukozės fosfato izomerazės nustatymas

Kraujo serume

3. Fermentų kinetinių savybių tyrimas

24 darbas. Fermentinių reakcijų kinetika seilių α-amilazės pavyzdžiu

4. Fermento veikimo specifiškumas

Darbas 25. Absoliutaus substrato specifiškumo demonstravimas

5. Fermentų aktyvumo modifikatoriai

Darbas 27. Seilių α-amilazės aktyvatoriai ir inhibitoriai

raumenų audinys

Darbas 29. Nekonkurencinis kraujo katalazės slopinimas

6. Fermentų aktyvumo kiekybinis įvertinimas

30 darbas. Vaisto laktatdehidrogenazės aktyvumo kiekybinis tyrimas pagal Kornbergą

31 darbas. Fotokolorimetrinis laktatdehidrogenazės aktyvumo kraujo serume tyrimo metodas pagal Sevel ir Tovarek.

32 darbas. Šarminės fosfatazės aktyvumo nustatymas kraujo serume pagal Bodanskį

7. Izofermentų tyrimas

33 darbas. Kraujo serumo laktatdehidrogenazės izofermentų atskyrimas elektroforezės būdu poliakrilamido gelyje pagal Dietz ir Lubrano

34 darbas. γ-glutamiltransferazės aktyvumo kraujo serume nustatymas

Virškinimo biochemija

35 darbas. Skrandžio sulčių rūgščių komponentų tyrimas

Darbas 36. Skrandžio sulčių rūgštingumo nustatymas diagnostikos rinkiniu "Acidotest"

Darbas 37. Baltymų hidrolizė virškinamojo trakto fermentais

38 darbas. Triacilglicerolių hidrolizės, veikiant kasos lipazei, dinamikos tyrimas.

Energijos mainai (bioenergija)

1. Biologinių oksidacijos procesų gyvūnų audiniuose tyrimas Darbas 39. Citochromo oksidazės nustatymas raumenų audinyje

Darbas 40. Oksidacinio fosforilinimo proceso ir atjungiklių veikimo į jį demonstravimas

Darbas 41. Glikolizės nustatymas raumeniniame audinyje

42 darbas. Adenino nukleotidų analizė jonų mainų plonasluoksne chromatografija

43 darbas. Kreatinfosfokinazės aktyvumo kraujo serume nustatymas pagal Ennor ir Rosenberg

Fotosintetinių organizmų pigmentų ir oksidacinių procesų analizė

Darbas 44. Kokybinės reakcijos į augalinius pigmentus

45 darbas. Peroksidazės aktyvumo nustatymas augalinėje medžiagoje pagal A.N.Bojarkino metodą

Angliavandenių apykaita

46 darbas. Gliukozės kiekio kraujyje nustatymas

Darbas 47. Kiekybinis gliukozės kiekio kraujyje nustatymas gliukozės oksidazės metodu

48 darbas. Pieno rūgšties kiekio kraujyje nustatymas pagal Barkerį ir Summersoną

49 darbas. Piruvo rūgšties kiekio kraujyje nustatymas pagal Friedemann ir Haugen.

lipidų metabolizmas

Darbas 50

Darbas 51

52 darbas. Cholesterolio nustatymas kraujo serume Ilk metodu

Darbas 53. Bendrųjų fosfolipidų kiekio kraujo serume nustatymas

54 darbas. Kraujo serumo lipidų atskyrimas plonasluoksne chromatografija

Baltymų ir aminorūgščių metabolizmas

55 darbas. Kraujo serumo baltymų frakcijų kiekio nustatymas turbidimetriniu metodu

56 darbas. Katepsinų aktyvumo kraujo serume nustatymas pagal A.A.Pokrovskį, A.I.Archakovą ir O.N.

Katepsinai

57 darbas. Aspartato ir alanino aminotransferazės aktyvumo nustatymas kraujo serume pagal Reitmaną ir Frenkelį

58 darbas. Histidazės aktyvumo nustatymas kraujo serume pagal Tabor ir Mehler, modifikuotas V.A.

Darbas 59. Laisvo hidroksiprolino kiekio šlapime nustatymas pagal Neumanną ir Loganą, modifikuotą p.

Azoto turinčių nebaltyminių medžiagų metabolizmas

1. Įprastų azoto apykaitos produktų tyrimas

Darbas 60. Kiekybinis likutinio azoto nustatymas kraujyje fotokolorimetriniu metodu

Darbas 61. Kiekybinis karbamido nustatymas kraujo serume ir šlapime

Darbas 62. Kiekybinis kreatino ir kreatinino nustatymas Brown metodu

2. Nukleino rūgščių ir nukleotidų mainų tyrimas

63 darbas. Rūgštinės dezoksiribonukleazės (dnCase) aktyvumo kraujo serume nustatymas pagal A.A.

64 darbas. Šlapimo rūgšties kiekio kraujo serume nustatymas pagal Muller ir Seifert metodą.

3. Porfirino (pigmento) apykaitos tyrimas

65 darbas. Bilirubino ir jo frakcijų nustatymas kraujo serume pagal Yendrashik, Cleghorn ir Grof

Molekulinė patologija

1. Ekspresinė aminorūgščių apykaitos patologijos diagnostika Darbas 66. Hiperaminoacidurijos nustatymas

Darbas 67. Ekspresiniai fenilketonurijos diagnostikos metodai

Darbas 68. Tirozinozės diagnozė Millon testas tirozinui

Darbas 69. Alkaptonurijos nustatymas homogentizo rūgšties tyrimu

Darbas 70

2. Angliavandenių apykaitos patologijų ekspresinė diagnostika Darbas 71. Pentosurijos nustatymas Bial testu

72 darbas. Fruktozurijos nustatymas Selivanovo testu

73 darbas. Mukopolisacharidozių nustatymas mukopolisacharidų tyrimu su toluidino mėlynuoju

Darbas 74. Porfobilinogeno kiekio šlapime nustatymas

Darbas 75. Kiekybinis delta-aminolevulino rūgšties kiekio nustatymas šlapime

Darbas 76

Metabolizmo reguliatoriai

1. Vitaminų tyrimas Darbas 77. Kokybinės reakcijos į vitaminus

78 darbas. Tiamino ir riboflavino kiekio nustatymas fluorimetriniu metodu multivitamininiuose preparatuose

Darbas 79. Kiekybinis askorbo rūgšties nustatymas vaistiniuose augaluose

2. Hormonų, mediatorių ir jų metabolitų tyrimai

Darbas 80. Kokybinės reakcijos į baltyminius-peptidinius hormonus.

Darbas 81. Kokybinės reakcijos į hormonus – aminorūgščių darinius

Darbas 82. Kokybinės reakcijos į steroidinius hormonus ir jų metabolitus

Darbas 83. Gliukozės insulino ir adrenalino kiekio reguliavimas gyvūnų kraujyje

84 darbas. Kiekybinis histamino nustatymas kraujyje su diazotuotu n-nitroanilinu pagal N.V.Klimkiną ir S.I.Plitmaną

Biologinių skysčių tyrimas

1. Biocheminiai kraujo tyrimai Darbas 85. Hemoglobino kiekio kraujyje nustatymas pagal šviesos sugertį

Darbas 86. Vaisiaus hemoglobino kiekio žmogaus eritrocituose nustatymas

Darbas 87. Glikozilinto hemoglobino kiekio nustatymas eritrocituose fotokolorimetriniu metodu

Darbas 88. Haptoglobinų koncentracijos kraujo serume nustatymas fotokolorimetriniu metodu

Darbas 89

90 darbas. α-amilazės aktyvumo nustatymas kraujo serume amilolastiniu metodu

Darbas 91. Kalcio kiekio kraujo serume nustatymas mureksido metodu

Darbas 92. Timolio testas pagal Huergo ir Popper

Darbas 93. Sublimacinė-nuosėdinė reakcija

Darbas 94. Kiekybinis geležies kiekio kraujo serume nustatymas

2. Biocheminis šlapimo tyrimas

95 darbas. Šlapimo fizikinių-cheminių savybių tyrimas

Darbas 96. Ketoninių kūnų ir gliukozės nustatymas šlapime

Darbas 97. Baltymų nustatymas šlapime Brandenberg-Roberts-Stolnikov metodu

Darbas 98. Kokybinis indikano nustatymas šlapime

Darbas 99. Kai kurių pigmentų nustatymas šlapime.

Ksenobiotikų metabolizmas

Ksenobiotikų oksidacijos ir konjugacijos procesų tyrimas 100 darbas. Mikrosomų kvėpavimo aktyvumo atskleidimas

Darbas 101. Oksidacinio n-demetilinimo kepenų mikrosomose tyrimas pagal Mūsų

Darbas 102. Kepenų mikrosomų hidroksilazės aktyvumo nustatymas pagal Kato ir Gilet.

103 darbas

104 darbas. Alkoholio dehidrogenazės aktyvumo kraujo serume nustatymas pagal Shkursky ir kt.

Darbas 105

Darbas 106. Izonikotino rūgšties hidrazido (ginko) acetilinimo (inaktyvavimo) nustatymas organizme

Biologinių membranų lipidų peroksidacijos tyrimas

107 darbas. Eritrocitų jautrumo peroksido hemolizei nustatymas

Darbas 108. Lipidų peroksidacijos greičio nustatymas biomembranose

Taikymas

2.Biocheminiai kraujo plazmos rodikliai

1. Bendrosios klinikinės normos

2. Specialus šlapimo tyrimas

Skrandžio sultys

2. Fosfatinis buferis (0,1 m, pH 5,8-8,0)

3. Tris buferis (0,1 m, pH 7,1–9,2)

4. Acetatinis buferis (0,2 m, pH 3,6-5,8)

5. Glicino buferis (0,05 m, pH 8,6-10,6)

3. Kai kurių reagentų paruošimas

Turinys

2. Fosfatinis buferis (0,1 m, pH 5,8-8,0)

Na 2 HPO 4 0,2 M, ml	Na 2 H 2 PO 4 0,2 M, ml

3. Tris buferis (0,1 m, pH 7,1–9,2)

1 l matavimo kolboje (500 ml H 2 O) ištirpinama 24,2 g tris-(hidroksimetil)aminometano. Norint gauti reikiamą pH vertę, pridedamas lentelėje nurodytas 1 M HCl tūris ir distiliuotu vandeniu nustatomas iki 1000 ml.

4. Acetatinis buferis (0,2 m, pH 3,6-5,8)

Natrio acetatas 0,2 M, ml	Acto rūgštis 0,2 M, ml		Natrio acetatas 0,2 M, ml	Acto rūgštis 0,2 M, ml

5. Glicino buferis (0,05 m, pH 8,6-10,6)

Nurodyti glicino ir natrio hidroksido kiekiai sumaišomi ir tūris reguliuojamas distiliuotu vandeniu iki 200 ml.

	Glicinas 0,2 M, ml	NaOH 0,2 M, ml		Glicinas 0,2 M, ml	NaOH 0,2 M, ml

3. Kai kurių reagentų paruošimas

Aktyvinimo sprendimas. 155 mg redukuoto glutationo ir 400 mg kristalinio albumino dedama į 100 ml talpos matavimo kolbą, jie ištirpinami 50 ml distiliuoto vandens ir 1 M NaOH tirpalu nustatomas pH iki 8,2. Tada įpilkite vandens iki žymės.

Sidabro nitrato amoniako tirpalas. Koncentruotas amoniako tirpalas pilamas į 2-3% sidabro tirpalą, kol nuosėdos ištirps.

Acetatinis buferis pH 3,6. Paruoškite sumaišydami 463 ml tirpalo A ir 37 ml tirpalo B, iki žymės praskieskite vandeniu matavimo kolboje iki 1 litro. A tirpalas: 1 litro matavimo kolboje atskieskite 11,55 ml ledinės acto rūgšties vandeniu. B tirpalas: 27,2 g natrio acetato ištirpinkite vandenyje 1 litro kolboje.

Biureto reagentas (Benedikto reagentas). 300 ml distiliuoto vandens vandens vonelėje ištirpinama 173 g natrio citrato ir 100 g natrio karbonato. Atskirai 17,3 g vario sulfato ištirpinama 300 ml vandens. Abu tirpalai nupilami ir bendras tūris padidinamas iki 1 litro.

buferinis tirpalas. 2,76 g Veronal ir 2,06 g Medinal ištirpinama 1 litre distiliuoto vandens. Laikyti šaldytuve; jei atsiranda nuosėdų, tirpalas netinkamas vartoti.

anglies suspensija. 0,25 g aktyvintos anglies supilama į 100 ml matavimo kolbą ir praskiedžiama acetatiniu buferiu, pH 3,6. Prieš naudojimą gerai suplakti.

Redukuojantis reagentas. 1% askorbo rūgšties tirpalas, paruoštas su 0,016% vario sulfato tirpalu.

Hemoglobinas, 4% tirpalas acetatiniame buferyje (pH 4,0). Pirmiausia 8 mol/l karbamido tirpale paruošiamas 8 % hemoglobino tirpalas, 2 valandas palaikomas termostate 60°C temperatūroje ir prieš naudojimą 2 kartus praskiedžiamas acetatiniu buferiu.

Glicil-glicinas. 0,55 mmol/l, pH 8,3. 3,63 g glicilglicino supilama į 50 ml matavimo kolbą, įpilama vandens iki žymės (buferinis tirpalas).

Denatūruojantis tirpalas

Diazo reagentas bilirubinui nustatyti. Paruoškite du sprendimus. Pirmas tirpalas: 3 g sulfanilo rūgšties ištirpinama 500 ml distiliuoto vandens, įpilama 15 ml koncentruotos druskos rūgšties (karštoje vonioje), tūris sureguliuojamas iki 1 litro vandeniu. Antrasis tirpalas: 0,5% vandeninis natrio nitrito tirpalas. Prieš naudojimą sumaišykite 5 ml pirmojo tirpalo ir 0,25 ml antrojo.

Diacetilas, darbinis tirpalas. 1 ml diacetilo skiedžiamas distiliuotu vandeniu 100 ml matavimo kolboje (tirpalas laikomas šaldytuve). Darbinis diacetilo tirpalas paruošiamas prieš naudojimą, į 1 ml pradinio diacetilo tirpalo įpilant 24 ml distiliuoto vandens.

Difenilamino reagentas. 1 g difenilamino ištirpinama 100 ml ledinės acto rūgšties. Į tirpalą įpilama 2,75 ml koncentruotos sieros rūgšties.

Kalibravimo tirpalas. Bazinis – 0,75 mmol/l ALA (100 µg/ml) pagal bazę: 0,00635 g ALA hidrochlorido ištirpinama acetatiniame buferyje pH 3,6 50 ml matavimo kolboje. Laikyti šaldytuve ne ilgiau kaip mėnesį. Iš pagrindinio tirpalo, 1 μg / ml, paruošiamas darbinis kalibravimo tirpalas. Paruoškite prieš naudojimą pradinį tirpalą praskiedžiant acetatiniu buferiu 100 kartų.

Kalibravimo tirpalas. 22,5 mg dihidroksiacetono kaitinant ištirpinama 25 ml vandens. 1 ml šio tirpalo yra 10 μmolių dihidroksiacetono. Dihidroksiacetono kalibravimo tirpalas pilamas į keletą mėgintuvėlių (žr. darbą), pripildomas iki reikiamo tūrio, tada reakcija vykdoma taip pat, kaip ir nustatant fermento aktyvumą.

Kalibravimo (standartinis) geležies tirpalas (30 µmol/l).

Pirmiausia paruošiamos moros druskos.

kofeino reagentas. 1 g gryno kofeino, 7,5 g natrio benzoato, 12,5 g natrio acetato ištirpinama 90 ml distiliuoto vandens, pašildoma iki 50-60°C, išmaišoma, atšaldoma ir distiliuotu vandeniu pripilama iki 100 ml.

Amonio molibdatas azoto rūgštyje. 7,5 g amonio molibdato ištirpinama 100 ml vandens ir įpilama 100 ml 32 % azoto rūgšties.

Šlapimas dėl alkaptonurijos. Nesant patologinio, į normalų šlapimą pridedama hidrochinono 20 g/l.

Šlapimas su hiperaminoacidurija. Nesant patologinio glicino, į normalų šlapimą pridedama 1,0 g/l.

Šlapimas su mukopolisacharidoze. Jei nėra patologinių, į normalų šlapimą pridedama 0,05–0,1 g / l chonsurido arba heparino.

Šlapimas su pentosurija. Nesant patologinių, į šlapimą pridedama ksiluliozės arba ribozės 1,0 g/l greičiu.

Šlapimas su tirozinoze. Nesant patologinio, į normalų šlapimą pridedama tirozino 0,4–0,5 g / l.

Šlapimas su fruktozurija. Jei nėra patologinių, į normalų šlapimą pridedama fruktozės 0,3–0,4 g / l.

Šlapimas dėl cistinurijos. Jei nėra patologinio cistino, į normalų šlapimą pridedama 0,4–0,5 g / l.

Natrio acetatas 3-vandeninis, sotus tirpalas. 375 g natrio acetato 3 vandeninio (arba 226 g bevandenės druskos) ištirpinama 250 ml šilto vandens, atšaldoma iki kambario temperatūros. Laikyti kambario temperatūroje. Tirpalas turi būti bespalvis ir skaidrus.

Dipakeistas natrio fosfatas 0,25 mol/l. Paruoškite ištirpindami 9,7 g Na 2 HPO 4 ∙12H 2 O arba 18 g Na 2 HPO 4 ∙12H 2 O vandenyje 200 ml kolboje. Įpilant 2 ml šio tirpalo į 1 ml trichloracto rūgšties tirpalo, pH turi būti 5,0–6,0 intervale.

Kreatinino bazinis kalibravimo tirpalas, 10 mmol/l. 113,1 mg kreatinino sureguliuojama iki 100 ml 0,1 mol/l druskos rūgšties tirpalu. Konstruojant kalibravimo grafiką, darbinis tirpalas ruošiamas iš pradinio tirpalo, pradinį tirpalą praskiedus vandeniu 100 kartų, 1 ml tirpalo yra 0,1 mmol kreatinino. Remiantis tuo, gaunama nemažai mėgintuvėlių su atitinkama kreatino koncentracija.

Oksiduojantis mišinys tiaminui nustatyti. Į 8 ml 1% kalio heksacianoferato (III) įpilama 20 ml 30% NaOH tirpalo, gerai išmaišykite. Paruoškite prieš naudojimą.

Orcino reagentas. Į 1 g orcino įpilkite 500 ml 30% druskos rūgšties (tankis 1,15 g / cm 3). Maišykite, kol ištirps, ir įpilkite 4-5 ml 10% geležies chlorido tirpalo (III) FeCl 3. Reagentas laikomas sandariai užkimštame tamsiame buteliuke.

p-nitroanilino bazinis kalibravimo tirpalas. 0,0829 g p-nitroanilino supilama į 100 ml matavimo kolbą, praskiedžiama vandeniu iki žymės ir ištirpinama.

Nusodinimo tirpalas. 561 g amonio sulfato ištirpinkite 1 litre distiliuoto vandens ir po 24 valandų filtruokite.

Bazinis fosfatinis buferinis tirpalas ir jo darbiniai tirpalai Nr. 1-4. 33,5 g NaOH ištirpinama 400 ml vandens 500 ml talpos matavimo kolboje ir įpilama 226,8 g KH 2 PO 4, kratoma, kol visiškai ištirps, atvėsinama ir įpilama vandens iki žymės. Bazinio fosfatinio buferio darbiniams tirpalams ruošti į 100 ml talpos matavimo kolbas išmatuojami šie bazinio fosfatinio buferio tūriai (ml): Nr. 1 - 92,51; Nr.2 - 74,91; Nr.3 - 59.18 ir Nr.4 - 48.68, po to jų turinys vandeniu atnešamas iki žymos.

Pikrino rūgštis, prisotintas tirpalas. Prekinėje pikrino rūgštyje yra 15-20% drėgmės, rūgšties nedžiovinkite. Sprogus! 2 g pikrino rūgšties ištirpinama 100 ml vandens, kaitinant karštoje vonioje. Po to tirpalas paliekamas pastovėti 24 valandas, retkarčiais pamaišant. Tada tirpalas filtruojamas. Tirpalas yra stabilus ir laikomas tamsaus stiklo inde.

Pirofosfatinis buferis 0,05 M pH 8,2. Į 200 ml matavimo kolbą supilkite 4,46 g natrio pirofosfato, ištirpinkite maždaug 100 ml vandens, sureguliuokite pH 0,1 M HCl tirpalu iki 8,2 ir įpilkite distiliuoto vandens iki žymės.

Pirofosfatinis buferis 0,1 M pH 8,5. Į 100 ml talpos matavimo kolbą supilkite 4,46 g natrio pirofosfato, ištirpinkite 50 ml vandens, sureguliuokite pH 0,1 M HCl tirpalu iki 8,5 ir įpilkite distiliuoto vandens iki žymės.

Darbinis reagentas. Paruoškite nustatymo dieną sumaišydami 30 dalių 0,3 N natrio hidroksido. 2 dalys 0,5% fenolftaleino tirpalo ir 1 dalis 0,12% vario sulfato tirpalo.

Acetono cianohidrino tirpalas. 1 litre distiliuoto vandens ištirpinkite 1 ampulę acetono cianohidrino (0,5 ml – 0,47 g iš rinkinio hemoglobino kiekiui kraujyje nustatyti).

Feriacetono cianohidrino tirpalas. 1 litre distiliuoto vandens ištirpinkite 200 mg kalio fericianido ir 1 ampulę (0,5 ml - 0,47 g) acetono cianohidrino: galima naudoti iš reagentų rinkinio transformuojančiam tirpalui kraujo hemoglobinui nustatyti. Stabilus keletą mėnesių, laikant tamsaus stiklo inde kambario temperatūroje.

Gliuoksidazės tirpalas. Yra apie 300 vienetų. 1 mg. Paruoškite atitinkamą kiekį sauso preparato ištirpinus 10 ml vandens.

Sulfoninto bato-fenantrolino tirpalas. Mėgintuvėlyje į 100 mg batofenantrolino įpilama 0,5 ml chlorosulfonrūgšties, kaitinama verdančio vandens vonelėje 30 s, atvėsinama ir lėtai įpilama 10 ml bidistiliuoto vandens, vėl kaitinama vandens vonioje 5 minutes. Mišinys supilamas į 200 ml kolbą, įpilama 100 ml vandens, tirpalo pH nustatomas iki 4-5 N NaOH ir įpilama vandens iki 200 ml tūrio.

Jodo tirpalas kalio jodide (Lugolio tirpalas). 100 ml distiliuoto vandens ištirpinkite 20 g kalio jodido ir 10 g jodo. Prieš naudojimą tirpalas praskiedžiamas 5 kartus.

p-nitrozodimetilanilino (NDMA) tirpalas. Prekyboje parduodamas NDMA preparatas perkristalizuojamas iš etilo eterio. Alkoholio dehidrogenazei išmatuoti 1 mg NDMA ištirpinama 100 ml 0,1 M pirofosfato buferio (pH 8,5). Gautas tirpalas filtruojamas per popierinį filtrą ir filtratas 2 kartus praskiedžiamas tuo pačiu buferiu. Laikyti 4°C temperatūroje du mėnesius.

Ilkos reagentas. Į 5 dalis (pagal tūrį) acto anhidrido įpilkite 1 dalį ledinės acto rūgšties, tada palaipsniui supilkite 1 dalį koncentruotos sieros rūgšties. Laikykite reagentą šaltai!

Millon reagentas. (Paruošta esant slėgiui! ) 40 g gyvsidabrio ištirpinama 57 ml koncentruotos azoto rūgšties, pirmiausia šaltai, o po to kaitinama vandens vonioje. Gautas tirpalas praskiedžiamas 2 tūriais vandens, leidžiama nusistovėti ir nupilamas nuo nuosėdų. Laikyti tamsaus stiklo butelyje.

Amonio molibdato reagentas. 2,5 g amonio molibdato ištirpinama 60 ml distiliuoto vandens, filtruojama. Tirpalas supilamas į 100 ml kolbą. Kitoje kolboje į 25 ml distiliuoto vandens įpilama 7,5 ml koncentruotos sieros rūgšties. Antrasis tirpalas įpilamas į pirmąjį, atvėsinamas ir praskiedžiamas distiliuotu vandeniu iki žymės. Tirpalas tinka mėnesiui.

Reagentas "NADI". 1 % dimetil-p-fenilendiamino tirpalas sumaišomas su lygiu tūriu 1 % α-naftolio tirpalu alkoholyje ir 1,5 % natrio karbonato tirpalu. Tirpalas yra tamsiai rudos spalvos ir neturėtų turėti rausvo atspalvio. Paruošta 1 valanda prieš pamoką.

Reagentas Nasha. Į 100 ml talpos kolbą supilama 15,4 g amonio acetato, 0,3 g ledinės acto rūgšties ir 0,2 g acetilacetono, ištirpinama distiliuotame vandenyje ir tūris sureguliuojamas iki žymės.

Nesslerio reagentas. 500 ml talpos matavimo kolboje sumaišoma 150 g kalio jodido, 110 g jodo, 100 ml distiliuoto vandens ir apie 140-150 g metalinio gyvsidabrio ir stipriai purtoma 15 minučių. Tokiu atveju tirpalas savaime įšyla, o spalva dėl ištirpusio jodo palaipsniui tampa blyški. Tada mišinys atšaldomas po tekančiu vandeniu, kol išlieka ryški raudona spalva, o po to turinys purtomas, kol raudona spalva pasikeičia į žalsvą. Po dekantavimo gyvsidabrio nuosėdos kruopščiai nuplaunamos vandeniu. Sumaišykite tirpalą ir plovimus, praskieskite vandeniu iki 2 litrų. Supilkite 75 ml gauto tirpalo į 0,5 l matavimo kolbą, kurioje yra 75 ml vandens ir 350 ml 10% natrio hidroksido tirpalo, ir praskieskite vandeniu iki žymės.

Fehlingo reagentas. Du tirpalai ruošiami atskirai. 1 tirpalas: 1 l matavimo kolboje ištirpinkite 200 g Rošelio druskos ir 150 g NaOH ir iki žymės praskieskite vandeniu. 2 tirpalas: 1 l talpos matavimo kolboje ištirpinkite 40 g vario (II) sulfato vandenyje ir praskieskite vandeniu iki žymės. Prieš naudojimą sumaišykite vienodus šių tirpalų kiekius.

Folino reagentas. 1 litro kolboje 750 ml vandens ištirpinkite 1 g natrio volframo ir 20 g fosfomolibdo rūgšties. Uždarykite kolbą kamščiu su grįžtamuoju kondensatoriumi ir, įjungę vandens tekėjimą į šaldytuvą, turinys virinamas 10 valandų; tada jis atšaldomas, supilamas į matavimo kolbą ir reagento vandeninis tūris nustatomas iki 1 litro.

Erlicho reagentas. 0,7 g p-dimetilaminobenzaldehido ištirpinama 150 ml koncentruotos druskos rūgšties, įpilama 100 ml vandens ir išmaišoma. Tirpalas turi būti bespalvis arba šiek tiek gelsvas. Laikyti tamsaus stiklo inde. Reagentas yra stabilus.

Erlicho reagentas. 1 g p-dimetilaminobenzaldehido ištirpinama 50 ml matavimo kolboje 35 ml ledinės acto rūgšties, įpilama 8 ml 57 % perchloro rūgšties ir iki žymės skiedžiama ledine acto rūgštimi. Laikyti tamsaus stiklo inde šaldytuve iki savaitės.

Timolio alkoholio tirpalas (10%). 10 g išgryninto timolio ištirpinama 100 ml 96˚ etilo alkoholio. Išgrynintas timolis gaunamas taip. 100 g timolio ištirpinama 100 ml 96˚ etilo alkoholio, filtruojama. Į filtratą įpilkite 1 litrą šalto distiliuoto vandens, stipriai suplakite ir palikite pastovėti 20 minučių. Filtras filtruojamas, o ant filtro likę kristalai du kartus plaunami šaltu distiliuotu vandeniu. Iš pradžių džiovinama ant filtravimo popieriaus, po to 2–3 dienas eksikatoriuje virš bevandenio kalcio chlorido iki pastovios masės.

Standartinis sprendimas. Standartinis tirpalas ruošiamas sumaišant du tirpalus: 1) 0,0962 n bario chlorido tirpalas: 1,175 g kristalinio BaCl 2 ∙2H 2 O matavimo kolboje ištirpinama 100 ml vandens. 2) 0,2 N sieros rūgšties tirpalas. Tada gaunama bario sulfato suspensija: 3 ml 0,0962 N bario chlorido tirpalo supilama į 100 ml matavimo kolbą ir tūris reguliuojamas 0,2 N sieros rūgšties tirpalu + 10 ° C temperatūroje ( Esant tokiai temperatūrai, nusodinto bario sulfato dalelių dydžiai duoda gana stabilų rezultatą).

Substrato buferinis tirpalas: į mėgintuvėlį įpilkite 10 ml vandens ir įpilkite 0,028 g L-glutamil-p-nitroanilino ir 0,082 g natrio chlorido ir nenustodami maišyti mėgintuvėlio turinį 60 sekundžių ištirpinkite verdančio vandens vonelėje. . Tada tirpalas atšaldomas iki 37 °C ir įpilama 2,5 ml buferinio tirpalo. Paruoštas substrato tirpalas eksploatacijos metu laikomas 37°C vandens vonioje. Nepanaudotą substrato tirpalą galima laikyti šaldytuve iki savaitės. Substratas blogai tirpsta ir nusėda kambario temperatūroje. Todėl prieš naudojimą susikristalizavęs substratas ištirpinamas kaitinant verdančio vandens vonelėje. Pagrindo kaitinimas ir tirpinimas gali būti kartojamas ne daugiau kaip du kartus.

Substrato tirpalas ALT nustatymui (tirpalas Nr. 1). 29,2 mg α-ketoglutaro rūgšties ir 1,78 g alanino (0,89 g α-alanino) mėginiai pasveriami ant analitinių svarstyklių ir tirpinami 1 M natrio hidroksido tirpale, kol nuosėdos visiškai ištirps (pH 7,4). Tirpalas supilamas į 100 ml kolbą ir tūris sureguliuojamas iki žymės 0,1 M fosfatiniu buferiu (pH 7,4). Įlašinkite 1 lašą chloroformo. Tirpalas laikomas užšaldytas šaldytuve.

Substrato tirpalas AsAT nustatymui (sprendimas Nr. 2). 29,2 mg α-ketoglutaro rūgšties ir 2,66 g α-asparto rūgšties (1,33 g α-asparto rūgšties) mėginiai pasveriami ant analitinių svarstyklių. Toliau tirpalas ruošiamas taip pat, kaip ir tirpalas Nr.

Substrato tirpalas, skirtas gliukozės fosfato izomerazei nustatyti. Paruošiamas medinalinio acetato buferinis tirpalas pH 7,4 (9,714 g natrio acetato ir 14,714 g medinalo ištirpinama vandenyje ir tūris reguliuojamas iki 500 ml). Sumaišykite 8,33 ml 0,03 M gliukozės-6-fosfato dinatrio druskos tirpalo su 25 ml medialinio acetato buferio; į mišinį įpilama 25 ml 0,1 M druskos rūgšties tirpalo ir praskiedžiama vandeniu iki 100 ml. Laikyti šaltai.

Substrato tirpalas laktatdehidrogenazei nustatyti. Sumaišykite 1 ml 1 M natrio laktato tirpalo, 9 M NaCl tirpalo, 0,05 M Cl 2, 10 g/L NAD tirpalo. Į turinį įpilama 2,5 ml 0,5 M fosfatinio buferinio tirpalo (pH 7,4) ir 1 g/l nitrotetrazolio mėlynojo tirpalo. Prieš naudojimą į mišinį įpilama 0,25 ml fenanzino metasulfato tirpalo, kurio koncentracija yra 1 g / l.

Substrato tirpalas fruktozės bisfosfato aldolazei nustatyti. 270 mg fruktozės bisfosfato bario druskos ištirpinama 3,5 ml 1 M druskos rūgšties. Įpilama 1 ml 14 % natrio sulfato tirpalo ir susidariusios nuosėdos pašalinamos centrifuguojant. Į supernatantą įlašinkite 1 lašą natrio sulfato. Drumstumo atsiradimas rodo nepakankamai pilną bario jonų nusėdimą. Šiuo atveju įpilama daugiau natrio sulfato ir vėl centrifuguojama. Centrifugatas sureguliuojamas 3 % natrio hidroksido tirpalu iki pH 7,4-7,6, perpilamas į 25 ml kolbą ir tūris sureguliuojamas iki žymės. Gautas tirpalas sumaišomas su 25 ml 0,56 M hidrazino chlorido tirpalo, 25 ml 0,002 M monojodacto rūgšties tirpalo, 100 ml 0,5 % natrio karbonato tirpalo ir 25 ml distiliuoto vandens. Laikyti šaldytuve.

Timolio-verono buferis. 100 ml matavimo kolboje sumaišykite 80 ml buferinio tirpalo ir 1 ml 10 % timolio alkoholio tirpalo, suplakite ir įpilkite buferinio tirpalo iki žymės. PH vertė turi būti 7,55.

o-toluidino reagentas. 0,15 g tiokarbamido ištirpinama 94 ml ledinės acto rūgšties ir sumaišoma su 6 ml distiliuoto O-toluidino. Laikyti tamsiame buteliuke.

Vandeniu prisotintas fenolis. Į 100 g distiliuoto fenolio įpilama 35 ml vandens ir maišoma šiek tiek kaitinant, kad paspartėtų fenolio tirpimas.

Fenolftalenas, darbinis tirpalas. Paruoškite 75 mg medžiagos ištirpinus 15 ml 0,1 N natrio hidroksido tirpalo, tirpalas turi būti bespalvis arba švelniai rausvas, spalvoti tirpalai darbui netinka. Siekiant padidinti reagento atsparumą, į jį pridedama 3 mg trilono, kuris, surišdamas sunkiųjų metalų druskas, neleidžia fenolftaleinui autoksiduotis atmosferos deguonimi.

Fibrinas. Galvijų kraujo fibrinas kelias dienas plaunamas nuo kraujo pigmentų tekančiu vandeniu, kol susidaro baltas krešulys. Vanduo išspaudžiamas, o fibrinas, užpildytas glicerinu, laikomas sandariai uždarytame indelyje. Prieš naudojimą fibrinas nuplaunamas iš glicerino.

Fosforo-vanilino reagentas. 4 dalys (pagal tūrį) koncentruotos fosforo rūgšties sumaišomos su 1 dalimi 0,6% vanilino vandeninio tirpalo. Reagentas laikomas tamsaus stiklo inde kambario temperatūroje.

Fruktozė 1,6-bisfosfatas, natrio druska. 2,0 ml 10 % fruktozės-1,6-bisfosfato natrio druskos tirpalo 25 ml kolboje praskiedžiama vandeniu iki žymės. Stabilus laikant šaldytuve.

Spalvinis reagentas karbamidui. Tabletė iš rinkinio, skirta karbamido, turinčio diacetilmonooksimo ir tiosemikarbazido, nustatymui, ištirpinama kaitinant 50 ml kolboje. Tirpalas išlieka stabilus tris savaites. Prieš naudojimą sumaišykite vienodus kiekius paruošto tirpalo ir 9,6% sieros rūgšties tirpalo.

Šarminis β-glicerofosfato tirpalas. Į 100 ml talpos matavimo kolbą įpilama 1 g natrio β-glicerofosfato ir 0,85 g medinalo, įpilama apie 30 ml distiliuoto vandens, ištirpinama ir iki žymės praskiedžiama vandeniu. Į kitą 100 ml talpos matavimo kolbą įpilama 50 ml paruošto β-glicerofosfato tirpalo, 2,8 ml 0,1 M natrio hidroksido tirpalo ir įpilama iki žymės distiliuotu vandeniu (tirpalo pH 8,6). Ant skysčio uždėkite apie 3 ml tolueno. Laikykite tirpalą šaldytuve ne ilgiau kaip 10 dienų.

Kraujo paėmimas, „plono tepinėlio“ ir „storo lašo“ paruošimas

bakterijų judėjimas. Žvynelinės struktūra, storis, ilgis, cheminė sudėtis. Fiksuotų preparatų ir mikroorganizmų gyvų ląstelių preparatų ruošimas.

Buferiniams tirpalams ruošti naudojami chemiškai gryni reagentai. ir analitinis laipsnis, specialiai paruoštas. Reagentai ruošiami taip.

Kalio fosfatas, monopakeistas, KH 2 PO 4 , molekulinė masė 136,09. 100 g vaisto ištirpsta kaitinant iki virimo 150 ml vandens. Tirpalas filtruojamas karštas. Nuolat maišant filtratas atšaldomas iki 10 ºС. Tada įpilkite 150 ml etilo alkoholio. Nuolat maišant filtratą atskirti kristalai filtruojami per įsiurbimo piltuvą ir vėl perkristalinami tokiomis pačiomis sąlygomis; kristalai džiovinami iki pastovios masės 105...110 ºС temperatūroje. Esant preparatui, kurio pagrindinės medžiagos kiekis yra 99,9–100,0%, preliminarus medžiagos paruošimas neatliekamas.

Dipakeistas natrio fosfatas, Na 2 HPO 4 12H 2 O, molekulinė masė 358,12. Yra du būdai paruošti vaistą.

a) 150 g vaisto ištirpinama 150 ml vandens pakaitinus iki 100 0 C. Tirpalas karštas filtruojamas ir atvėsus nufiltruojami nusėdę kristalai. Perkristalizacija kartojama kaitinant iki 100 ºС. Perkristalizuotas preparatas kaitinamas porcelianiniame puodelyje vandens vonelėje nuolat maišant, kol preparatas visiškai išdžius. Gauta druska per dieną džiovinama eksikatoriuje virš lydyto kalcio chlorido. Perkristalizuotame preparate (Na 2 HPO 4 · 2H 2 O) tikrinamas pagrindinės medžiagos kiekis. Tam apie 0,5000 g vaisto ištirpinama 50 ml vandens, įpilama 2...3 ml prisotinto natrio chlorido tirpalo ir titruojama 0,1 N druskos rūgšties tirpalu, esant metilraudonojo indikatoriui. . Jei reikia, pakoreguokite mėginio dydį. 1 ml tiksliai 0,1 N druskos rūgšties atitinka 0,0178 g Na 2 HPO 4 2H 2 O.

b) 75 g vaisto ištirpinama 250 ml vandens, pašildyto iki 60 ºС. Tirpalas karštas filtruojamas, filtratas nuolat maišant atšaldomas iki 10 ºС. Nusodinti kristalai nufiltruojami per įsiurbimo piltuvą ir vėl perkristalinami tomis pačiomis sąlygomis. Gauta druska pirmiausia džiovinama ne aukštesnėje kaip 30 ºС temperatūroje 24 valandas, po to toliau džiovinama 50 ºС orkaitėje 3–4 valandas, galiausiai 120 ± 5 ºС temperatūroje iki pastovaus svorio, neleidžiant druskai džiūti. tirpstantis. Po džiovinimo druskos sudėtis yra Na 2 HPO 4 .

Paruošus reagentus, paruošiami pradiniai tirpalai iš kalio fosfato, pakeisto monopakeisto ir pakeisto natrio fosfatu.

9,078 g masės bevandenio kalio fosfato monopakeisto KH 2 PO 4 dalis ištirpinama vandenyje ir tirpalo tūris nustatomas iki 1 litro. Kad tirpalas stabilizuotųsi, įlašinkite 3-4 lašus tolueno.

Dalis natrio fosfato dipakeisto Na 2 HPO 4 12H 2 O, sverianti 11,876 g, ištirpinama vandenyje ir tirpalo tūris nustatomas iki 1 litro. Kad tirpalas stabilizuotųsi, įlašinkite 3-4 lašus tolueno.

Iš pradinių tirpalų pagal A.2 lentelę paruoškite fosfatinius buferinius tirpalus, kurių pH yra nuo 4,94 iki 9,18.

A.2 lentelė. Fosfatinis buferinis tirpalas, kurio pH 4,94 ... 9,18

pH	Na 2 HPO 4 12H 2 O tirpalas, ml	KH 2 PO 4 tirpalas, ml
4,94	1,0	99,0
5,29	2,5	97,5
5,59	5,0	95,0
5,91	10,0	90,0
6,24	20,0	80,0
6,47	30,0	70,0
6,64	40,0	60,0
6,81	50,0	50,0
6,98	60,0	40,0
7,17	70,0	30,0
7,38	80,0	20,0
7,73	90,0	10,0
8,04	95,0	5,0
8,34	97,5	2,5
8,67	99,0	1,0
9,18	100,0	0,0

Įtraukimo data: 2015-08-06 | Peržiūrų: 4058 |

Buferinių tirpalų pH apskaičiuojamas pagal Hendersono-Hasselbacho lygtį:

– rūgštiniam buferiui lygtis turi tokią formą

– pagrindiniam buferiui

Lygtys rodo, kad tam tikros sudėties buferinio tirpalo pH nustatomas pagal rūgšties ir druskos arba bazės ir druskos koncentracijų santykį, todėl jis nepriklauso nuo praskiedimo. Keičiantis tirpalo tūriui, kiekvieno komponento koncentracija kinta tiek pat kartų.

Buferio talpa

Buferinių tirpalų gebėjimas palaikyti pastovų pH yra ribotas. Tie. pridėti rūgšties ar šarmo, reikšmingai nekeičiant buferinio tirpalo pH, galima tik ribotais kiekiais.

Vertė, apibūdinanti buferinio tirpalo gebėjimą neutralizuoti terpės reakcijos poslinkį, kai pridedama rūgščių ir šarmų, vadinama tirpalo buferine talpa (B).

Buferio talpa matuojama stiprios rūgšties arba bazės molinių ekvivalentų skaičiumi, kurių pridėjus į 1 litrą buferinio tirpalo pH pakeičiamas vienu.

Matematiškai buferio talpa apibrėžiama taip:

B pagal rūgštį (mol/l arba mmol/l):

,

čia n(1/z HA) – rūgšties molinių ekvivalentų skaičius, pH 0 ir pH – buferinio tirpalo pH prieš ir po rūgšties pridėjimo, V B – buferinio tirpalo tūris.

Šarmuose (mol / l arba mmol / l):

,

kur n (1/z VOH) yra šarmo molinių ekvivalentų skaičius, kiti pavadinimai yra tokie patys.

Buferio talpa priklauso nuo kelių veiksnių:

1. Atsižvelgiant į pridėtų medžiagų ir buferinio tirpalo komponentų pobūdį. Nes kai kurios medžiagos gali sudaryti netirpius junginius ar kompleksus arba sukelti kitokias nepageidaujamas reakcijas su buferinės sistemos komponentais, tuomet buferinės talpos sąvoka netenka prasmės.

2. Nuo pradinės buferinės sistemos komponentų koncentracijos.

Kuo didesnis rūgšties ir bazės poros komponentų skaičius tirpale, tuo didesnė šio tirpalo buferinė talpa.

Buferinio tirpalo komponentų koncentracijų santykio riba, kuriai esant sistema vis dar išlaiko savo savybes. PH intervalas = pK ± 1 vadinamas sistemos buferinio veikimo zona. Tai atitinka santykio su druska /C diapazoną nuo 1/10 iki 10/1.

B iki (kraujo) \u003d 0,05 mol / l; B iki (plazmos) \u003d 0,03 mol / l; B iki (kraujo serume) = 0,025 mol / l

Kraujo buferinės sistemos

Buferinės sistemos yra ypač svarbios palaikant organizmų rūgščių ir šarmų pusiausvyrą. Daugumos tarpląstelinių skysčių pH vertė yra nuo 6,8 iki 7,8.

Rūgščių – bazių balansą žmogaus kraujyje užtikrina hidrokarbonato, fosfato, baltymų ir hemoglobino buferinės sistemos. Normali kraujo plazmos pH vertė yra 7,40 ± 0,05.

Hemoglobino buferio sistema užtikrina 35% kraujo buferio talpą: . Oksihemoglobinas yra stipresnė rūgštis nei redukuotas hemoglobinas. Oksihemoglobinas paprastai būna kalio druskos pavidalu.

Karbonato buferio sistema : užima pirmąją vietą pagal galią. Jį sudaro anglies rūgštis (H 2 CO 3) ir natrio arba kalio bikarbonatas (NaHCO 3, KHCO 3) santykiu 1/20. Bikarbonatinis buferis plačiai naudojamas rūgščių ir šarmų sutrikimams organizme koreguoti.

Fosfato buferio sistema . Dihidrofosfatas turi silpnos rūgšties savybių ir sąveikauja su šarminiais produktais, kurie patenka į kraują. Hidrofosfatas turi silpno šarmo savybių ir reaguoja su stipresnėmis rūgštimis.

Baltymų buferinė sistema atlieka rūgščių ir šarmų neutralizavimo vaidmenį dėl savo amfoterinių savybių: rūgštinėje aplinkoje plazmos baltymai elgiasi kaip bazės, bazinėje - kaip rūgštys:

Buferinės sistemos taip pat yra audiniuose, kurios padeda palaikyti santykinai pastovų audinių pH. Pagrindiniai audinių buferiai yra baltymai ir fosfatai. PH palaikymas taip pat atliekamas naudojant plaučius ir inkstus. Anglies dioksido perteklius pašalinamas per plaučius. Inkstai, sergantys acidoze, išskiria daugiau rūgšties monobazinio natrio fosfato, o su alkaloze – daugiau šarminių druskų: dvibazio natrio fosfato ir natrio bikarbonato.

Problemų sprendimo pavyzdžiai

Sprendimas:

Apskaičiuojame rūgšties buferinio tirpalo pH pagal formulę , tada

Atsakymas: 5,76

Sprendimas:

Apskaičiuojame buferio talpą pagal formulę:

Atsakymas: 0,021 mol/l

3 pavyzdys

Buferinis tirpalas susideda iš 100 ml 0,1 mol/l acto rūgšties ir 200 ml 0,2 mol/l natrio acetato. Kaip pasikeis šio tirpalo pH, jei į jį bus įpilta 30 ml 0,2 mol/l natrio šarmo tirpalo.

Sprendimas:

Buferinio tirpalo pH apskaičiuojame pagal formulę:

Kai į buferinį tirpalą įdedama NaOH, druskos kiekis padidėja, o rūgšties kiekis buferiniame tirpale sumažėja:

0,006 0,006 0,006

CH 3 COOH + NaOH \u003d CH 3 COONa + H 2 O

Apskaičiuojame n (NaOH) \u003d 0,03 l 0,2 mol / l \u003d 0,006 mol, todėl buferiniame tirpale rūgšties kiekis sumažėja 0,006 mol, o druskos - 0,006 mol.

Tirpalo pH apskaičiuojame pagal formulę:

Vadinasi: pH 2 – pH 1 = 5,82 – 5,3 = 0,52

Atsakymas: buferio pH pokytis = 0,52.

Savarankiško sprendimo užduotys

4. Norint titruoti 2 ml kraujo, kad pH pakeistų nuo pradinės vertės (7,36) iki galutinės vertės (7,0), reikėjo įpilti 1,6 ml 0,01 M HCl tirpalo. Apskaičiuokite rūgšties buferio talpą.

5. Kiek molių natrio acetato reikia įpilti į 300 ml acto rūgšties, kad vandenilio jonų koncentracija sumažėtų 300 kartų (K dis (CH 3 coon) = 1,85,10 -5).

6. Biocheminiuose tyrimuose naudojamas fosfatinis buferis, kurio pH = 7,4. Kokiu santykiu reikia maišyti natrio vandenilio fosfato ir natrio-divandenilio fosfato tirpalus, kurių kiekvieno koncentracija yra 0,1 mol / l, kad būtų gautas toks buferinis tirpalas (pK (H 2 PO 4 -) \u003d 7,4).

7. Kokie CBS pažeidimai stebimi esant šiems rodikliams: kraujo pH = 7,20, Pco 2 = 38 mm Hg. Art., BO = 30 mmol / l, SBO = -4 mmol / l. Kaip pašalinti šį KOS pažeidimą?

Testo užduotys

Tween-20 fosfatinis plovimo buferis imunohistochemijai yra koncentratas (20 kartų), kuris po praskiedimo naudojamas reagentų stiklelių plovimui ir trumpam imunohistocheminių mėginių saugojimui tarp procedūrų. Po praskiedimo paruošto naudoti 0,01 M tirpalo pH yra 7,4±0,1. Šio fosfatinio buferinio fiziologinio tirpalo naudojimas leidžia ne tik užtikrinti aukštos kokybės plovimą, bet ir išsaugoti naudojamų antikūnų bei jų epitopų morfologines charakteristikas, o tai palengvina specifinį jungimąsi, reikalingą imunohistocheminei reakcijai. Tween-20 pridėjimas prie PBS skatina efektyvesnį plovimą ir apsaugo nuo nespecifinio dėmių susidarymo.

Mūsų privalumai:

Šiuo metu bendradarbiaujame su pirmaujančiais užsienio laboratorinių reagentų gamintojais. Mūsų klientai yra nevalstybinės ir valstybinės institucijos, įskaitant medicinos organizacijas Maskvoje ir kituose Rusijos miestuose. Nuolatiniams klientams taikoma nuolaidų sistema.