ข้อกำหนดสำหรับการรวบรวมและการเตรียมวัสดุชีวภาพเพื่อการศึกษาทางโลหิตวิทยา

ข้อกำหนดสำหรับการขนส่งและการเก็บรักษาวัสดุชีวภาพสำหรับการศึกษาทางโลหิตวิทยา

การกรอกทิศทางที่ถูกต้องสำหรับการศึกษาระบบห้ามเลือด:

ชื่อ-นามสกุล อายุ เพศ ของผู้ป่วย

เวลาเก็บตัวอย่างเลือดเพื่อการวิจัย

การวินิจฉัยทางคลินิก (โดยสังเขป)

ฮีมาโตคริต

กลุ่มอาการตกเลือด (ทางจมูก เลือดออกในโพรงมดลูก ฯลฯ) ลิ่มเลือดอุดตัน (ระบุการแปลเป็นภาษาท้องถิ่น) ช็อก อวัยวะหลายส่วนล้มเหลว การบาดเจ็บ การกดทับเป็นเวลานาน แผลไฟไหม้ เป็นต้น)

ระบุยาที่มีผลต่อพารามิเตอร์ของการห้ามเลือดโดยระบุปริมาณวิธีการและวันที่ของการบริหารครั้งสุดท้าย

ช่วงเวลาสำหรับการสุ่มตัวอย่าง (เลือด) ข้อ จำกัด ด้านอาหารและการออกกำลังกาย:

การเก็บตัวอย่างเลือดตามกำหนดการจะดำเนินการตั้งแต่ 7 ถึง 9 ชั่วโมงของเช้ากับผู้ป่วยนอนหรือนั่ง เมื่อศึกษาการแข็งตัวของเลือดในพลวัต เป็นที่พึงปรารถนาที่จะนำเลือดไปอยู่ในตำแหน่งเดียวกันกับร่างกายก่อนหน้านี้

ถ่ายเลือดในขณะท้องว่าง 12-14 ชั่วโมงหลังอาหารมื้อสุดท้าย

ก่อนรับเลือดควรให้ผู้ป่วยพักเป็นเวลา 15 นาที

ข้อยกเว้น:การศึกษาการแข็งตัวของเลือดโดย cito การประเมิน APTT

ในช่วงก่อนการศึกษาตามแผน (ภายใน 24 ชั่วโมง) ผู้ป่วยจะงดเว้นจากความสำคัญ การออกกำลังกาย, การดื่มแอลกอฮอล์ เป็นที่พึงปรารถนาที่ผู้ป่วยจะไม่กินอาหารที่มีไขมันในช่วงก่อนเก็บตัวอย่างเลือด

การแทรกแซงทางศัลยกรรมนำไปสู่การเปลี่ยนแปลงในการห้ามเลือดเป็นระยะเวลาหลายวันจนถึงหลายสัปดาห์

ปัจจัยที่มีผลต่อการแข็งตัวของเลือด ได้แก่ การฉีด การฉีด การถ่ายเลือด การเจาะ การตรวจชิ้นเนื้อ การนวด การฟอกไต การแนะนำของสารกัมมันตภาพรังสี อิมมูโนสซินติโอกราฟี รังสีไอออไนซ์ การตรวจส่องกล้อง การรับประทานอาหารพิเศษ

กฎสำหรับการสุ่มตัวอย่างเลือด

เลือดถูกนำมาจากหลอดเลือดดำส่วนปลาย (โดยปกติคือ cubital)

การสุ่มตัวอย่างเลือดดำเนินการโดยใช้ระบบเก็บตัวอย่างสุญญากาศในหลอดทดลองที่มีเครื่องหมายสีพิเศษเท่านั้น ขึ้นอยู่กับสารกันเลือดแข็งที่ใช้ ( โซเดียมซิเตรต 3.2%)ในอัตราส่วน: โซเดียมซิเตรต 1 ปริมาตรต่อเลือด 9 ปริมาตร

เพื่อการวิจัย ระดับเกล็ดเลือดเจาะเลือดในหลอดทดลอง กับ EDTA(รหัสสีม่วง) การศึกษาระดับของเกล็ดเลือดถูกกำหนดในกรณีที่ไม่มีการตรวจเลือดทางคลินิกหรือเมื่อได้รับค่าทางพยาธิวิทยาของระดับเกล็ดเลือดในการตรวจเลือดทางคลินิก

อนุญาตให้ใช้สายรัดสั้นได้ไม่เกิน 60 วินาที ถอดสายรัดออกทันทีหลังจากที่เข็มเข้าไปในเส้นเลือด สำหรับการสุ่มตัวอย่างเลือดเพื่อศึกษาระบบการแข็งตัวของเลือดเป็นสิ่งสำคัญที่คุณไม่สามารถนวดเส้นเลือดได้

ใช้เข็มเจาะเลือดที่มีเส้นผ่านศูนย์กลางภายใน 0.7-1 มม. (ขนาด 19-22)

การใช้กระบอกฉีดยาเป็นสิ่งที่ยอมรับไม่ได้เนื่องจากการกระตุ้นของเกล็ดเลือดและปัจจัยการแข็งตัวของเลือดโดยการเคลื่อนไหวของเลือดที่ปั่นป่วนและการผสมกับอากาศ (การเกิดฟอง) ไม่รวมเมื่อใช้ภาชนะสูญญากาศ

หลังจากสอดเข็มเข้าไปในหลอดเลือดดำแล้ว ให้แนบภาชนะสูญญากาศ เลือดจะเริ่มไหลเข้าสู่ภาชนะด้วยแรงโน้มถ่วง

ตรวจเลือดเพื่อตรวจการแข็งตัวของเลือด ที่สองหลอดทดลอง ใช้ครั้งแรกในการศึกษาอื่น เช่น ชีวเคมี ถ้าจะดึงหลอดทดสอบการแข็งตัวของเลือดก่อน ให้เจาะเลือด 5 มิลลิลิตรแรกเข้าไปในหลอดเปล่าแล้วทิ้งไป ป้องกันไม่ให้เนื้อเยื่อ thromboplastin เข้าสู่ตัวอย่าง

ค่อยๆ ผสมเลือดทันทีหลังจากเก็บ โดยไม่ทำให้เกิดฟองด้วยสารกันเลือดแข็ง (พลิกหลอด 3-4 ครั้ง)

หลังจากการสุ่มตัวอย่างสารชีวภาพ ให้ตรวจตัวอย่างเลือด การตรวจตัวอย่างเลือดอย่างแม่นยำจะช่วยหลีกเลี่ยงข้อผิดพลาดดังต่อไปนี้: อัตราส่วนที่ไม่ถูกต้องของปริมาณเลือด/ซิเตรต; เลือดแข็งตัวบางส่วน

เลือดจะถูกส่งไปยังห้องปฏิบัติการภายใน 45 นาทีหลังจากการเก็บ ในระหว่างการขนส่งต้องไม่เขย่าเลือด ไม่ควรขนส่งตัวอย่างเลือดที่อุณหภูมิต่ำกว่า 4°C และสูงกว่า 30°C

ผู้ช่วยแพทย์-ห้องปฏิบัติการ (นักเทคโนโลยีการแพทย์) ดำเนินการ:

การควบคุมการป้อนเลือดที่นำส่ง ได้แก่ 1) ตรวจสอบความถูกต้องของการกรอกแบบฟอร์มอ้างอิง 2)ตรวจสอบความเพียงพอของปริมาณเลือดที่จัดส่งตามฉลากบนหลอด 3) ตรวจสอบตัวอย่างว่าไม่มีลิ่มเลือดหรือไม่เมื่อเอียงท่ออย่างช้าๆ

การหมุนเหวี่ยงของเลือดที่นำส่งเพื่อให้ได้:

พลาสมาที่อุดมด้วยเกล็ดเลือด (พารามิเตอร์การหมุนเหวี่ยง: รอบต่อนาที = 1,000 รอบต่อนาที (ประมาณ 150-200 กรัม) เวลาในการหมุนเหวี่ยง 5-7 นาที

สำหรับการเลือก เงื่อนไขที่เหมาะสมที่สุดการหมุนเหวี่ยงถูกชี้นำโดยแรงเหวี่ยงหนีศูนย์กลาง (g) คุณสามารถใช้สูตร:

ก. = 1.118 x 0.00001r x n2,

โดยที่ r คือรัศมีของเครื่องหมุนเหวี่ยง - ระยะห่างเป็นเซนติเมตรระหว่างแกนของโรเตอร์กับศูนย์กลางของหลอดทดลองในที่นั่งของเครื่องปั่นแยก n คือจำนวนรอบต่อนาที

พลาสม่าที่มีเกล็ดเลือดต่ำพารามิเตอร์การหมุนเหวี่ยง: rpm = ~ 2500-3000 rpm (ประมาณ 1500-2000g) เวลาในการหมุนเหวี่ยง 10-20 นาที สำหรับการกำจัดเกล็ดเลือดอย่างสมบูรณ์ ให้หมุนเหวี่ยงซ้ำอีกครั้ง พารามิเตอร์การหมุนเหวี่ยงยังคงเหมือนเดิม

3. หลังจากการปั่นแยก ให้ตรวจสอบพลาสมาเพื่อดูสีและความโปร่งใส: ตัวอย่างที่แตกเป็นเลือด, พลาสมาไอเทอริกหรือไลเปมิก (chylous) จะไม่ถูกตรวจสอบ

หลังจากการปั่นแยกส่วนเหนือตะกอนจะถูกลบออก

เป็นที่น่าพอใจศึกษาพารามิเตอร์การห้ามเลือดระหว่าง 2 ชั่วโมงหลังการเก็บตัวอย่างเลือด, แต่ อนุญาต การศึกษาพารามิเตอร์การแข็งตัวของเลือดใน ภายใน 4 ชั่วโมง ถ้าพลาสมาถูกแยกออกจากตะกอนของเม็ดเลือดแดงและเม็ดเลือดขาว

ในกรณีที่จำเป็น การเก็บรักษาระยะยาวตัวอย่าง "สด" (ไม่เกิน 2 ชั่วโมงหลังการเก็บตัวอย่างเลือด) พลาสม่าที่ปราศจากเกล็ดเลือดเป็นครั้งเดียวได้ แช่แข็งและเก็บได้นานถึง 2 สัปดาห์ที่ -20 °C หรือนานถึง 6 เดือนที่ -70 °C พลาสม่าต้องละลายเร็ว น้ำอุ่น(+36°C) ผสมให้ละเอียดและตรวจสอบทันที หลังจากการแช่แข็ง อาจมีการเปลี่ยนแปลงใน APTT

วิธีการเตรียมไมโครเตรียมสำหรับการศึกษาทางโลหิตวิทยา วิธีการตรึงและการย้อมสี

วิธีการเตรียมรอยเปื้อนเลือดสำหรับการศึกษาทางโลหิตวิทยา

การเตรียมและการแปรรูปแก้ว แว่นตาสะอาดใหม่สามารถใช้หลังจากล้างไขมันในส่วนผสมของ Nikiforov (ส่วนที่เท่ากับ 96% เอทิลแอลกอฮอล์และอีเธอร์) แว่นตาที่ใช้แล้วจะถูกแช่ในสารละลายสบู่อุ่น ๆ หรือสารละลายผงซักฟอก (ผง 1 ช้อนโต๊ะต่อน้ำ 5 ลิตร) หนึ่งวันต่อมาสารละลายหมดแก้วจะถูกล้างด้วยน้ำไหล จากนั้นพวกเขาจะถูกเทอีกครั้งด้วยสารละลายสบู่อุ่น ๆ หรือสารละลายผงซักฟอกแล้วนำไปต้มต้มในสารละลายเดียวกันเป็นเวลา 5-10 นาที (ไม่มากเพื่อหลีกเลี่ยงการทำให้แก้วขุ่นมัว) หลังจากระบายความร้อนด้วยสารละลายแล้วจะมีการระบายน้ำอีกครั้งสไลด์จะถูกล้างด้วยน้ำไหลและแต่ละสไลด์จะถูกล้างด้วยแปรงใต้น้ำไหล แว่นตาที่รักษาด้วยวิธีนี้จะวางบนแผ่นทำความสะอาดให้แห้ง แว่นตาสะอาดสำหรับล้างไขมันจะใส่ในส่วนผสมของ Nikiforov หรือเอทิลแอลกอฮอล์ 96% เป็นเวลา 60 นาที จากนั้นเช็ดให้แห้งและเก็บไว้ในภาชนะที่สะอาดที่มีคอกว้าง แนะนำให้ใช้แว่นตาที่สะอาดโดยใช้แหนบหรือมือที่ขอบด้านข้าง

การเตรียมรอยเปื้อน หยดเลือดเล็กน้อยลงบนสไลด์แก้วที่เตรียมไว้แบบแห้งใกล้กับด้านสั้นด้วยแท่งแก้ว (หรือโดยตรงจากตำแหน่งทิ่มนิ้ว) วางแก้วไว้ในแนวนอนและทาเลือดบนกระจกด้วยแก้วที่แห้งและสะอาด โดยจับที่มุม 45° ด้วยขอบสั้น ๆ หลังจากรอจนกว่าเลือดทั้งหมดจะกระจายไปทั่วพวกเขาจะถูกดึงไปบนสไลด์แก้วอย่างรวดเร็ว ไม่ควรกดทับกระจกสไลด์แรงๆ เพราะอาจทำให้เซลล์เม็ดเลือดเสียหายได้ รอยเปื้อนจะถูกทำให้แห้งด้วยอากาศและทำเครื่องหมาย (ควรใช้ดินสอธรรมดา) รอยเปื้อนที่แห้งควรมีความบางสม่ำเสมอ สีเหลือง ขนาดพอเหมาะ อยู่ห่างจากขอบแก้ว 1.0-1.5 ซม. กินพื้นที่เกือบตลอดความยาวของแก้วและปิดท้ายด้วย "ช่อ" ไม่ควรใช้รอยเปื้อนแบบหนา (สีชมพูเข้ม) เนื่องจากสัณฐานวิทยาของเซลล์นั้นมองเห็นได้ยาก

สเมียร์คุณภาพมาตรฐานได้มาจากการใช้อุปกรณ์อัตโนมัติที่ออกแบบมาเพื่อเตรียมการสเมียร์และผลิตโดยบริษัทต่างๆ

การตรึงและการย้อมสีของรอยเปื้อนเลือด ก่อนการย้อมสี เมทิลแอลกอฮอล์จะแก้ไขรอยเปื้อนเลือดเป็นเวลา 5-10 นาทีเพื่อป้องกันภาวะเม็ดเลือดแดงแตก ซึ่งอาจเกิดขึ้นได้เมื่อสัมผัสกับน้ำในระหว่างกระบวนการย้อมสีด้วยสีย้อมที่ละลายน้ำได้หรือสัมผัสกับน้ำในภายหลัง เทคนิคการตรึงจะอธิบายไว้ด้านล่างพร้อมกับเทคนิคการย้อมสี คราบไรท์และเลชมันไม่จำเป็นต้องทำการตรึง เนื่องจากคราบเหล่านี้มีเมทิลแอลกอฮอล์

ผ้าเช็ดทำความสะอาดแบบแห้งสามารถเก็บไว้ได้ 2 วันในที่แห้งและอบอุ่น ในบรรยากาศที่ร้อนและชื้นโดยไม่ตรึงจะเก็บไว้น้อยกว่ามาก

เซลล์เม็ดเลือดประกอบด้วยโครงสร้างที่เป็นกรดและด่างซึ่งมีปฏิกิริยาต่างกัน (pH) นิวเคลียสเป็นเบสและคราบสีน้ำเงิน เม็ดเบโซฟิลที่มีกรดสูง (กรด) สูงก็มีสีน้ำเงินเช่นกัน เฮโมโกลบิน (เป็นพื้นฐาน) ทำให้เกิดคราบกรด เช่น สีแดง การย้อมสีด้วยสีที่เป็นกรดและสีพื้นฐานเรียกว่าการย้อมสีโรมานอฟสกีและมีการดัดแปลงต่างๆ (Pappenheim, Wright, Noht, Leishman, Giemsa, Jayner เป็นต้น) มักใช้เมทิลีนบลูเป็นสีย้อมหลัก แต่โทลูอิดีนบลูก็ใช้เช่นกัน ในฐานะที่เป็นกรดย้อมใช้ eosin, azure I และ azure II

เกณฑ์การย้อมสีที่ดี: สีชมพูของเม็ดเลือดแดง, การย้อมสีม่วงของเม็ดนิวโทรฟิลบนพื้นหลังสีชมพู, เม็ดอะซูโรฟิลิกที่อ่อนโยนของโมโนไซต์

หากต้องการเจือจางสี ควรใช้น้ำกลั่นที่เป็นกลาง น้ำกลั่นที่ค้างอยู่จะกลายเป็นกรดเนื่องจากการดักจับคาร์บอนไดออกไซด์จากชั้นบรรยากาศ ถ้าน้ำกลั่นเป็นด่าง เซลล์เม็ดเลือดแดงจะเปลี่ยนเป็นสีเขียวอมน้ำเงินสกปรก ส่วนหนึ่งของเม็ดเลือดขาวที่ควรย้อมสีฟ้าจะกลายเป็นสีม่วง เม็ด eosinophil จะกลายเป็นสีน้ำเงินและสีเขียวแทนที่จะเป็นสีชมพู และเม็ดนิวโทรฟิลจะคงอยู่ ในน้ำที่เป็นกรด เม็ดเลือดแดงจะเปลี่ยนเป็นสีส้มสดใส และนิวเคลียสของเม็ดเลือดขาวจะซีดมาก อุดมคติคือน้ำกลั่นที่มีค่า pH 7.0 ซึ่งถูกบัฟเฟอร์ไว้เพื่อถนอมน้ำไว้ คุณสามารถใช้ยาเม็ดบัฟเฟอร์พร้อมใช้ที่ละลายในน้ำกลั่นได้

สำหรับการย้อมรอยเปื้อนของไขกระดูก ค่า pH 7.4-7.5 เหมาะอย่างยิ่ง

วิธีการย้อมสีตาม Noht และ Pappenheim ได้รับการยอมรับให้เป็นหนึ่งเดียว

รีเอเจนต์สำหรับการตรึง: 1) เมทิลแอลกอฮอล์หรือ 2) May-Grunwald eosin-methylene blue solution

รีเอเจนต์สำหรับการย้อมสีตาม Nokht: 1) สารละลายพื้นฐานของ azure I: สี ​​1 กรัมละลายในน้ำกลั่น 1 ลิตรทิ้งไว้ในจานแก้วสีเข้มเป็นเวลา 12-14 วันที่อุณหภูมิห้องหลังจากนั้นใช้ 2) สารละลายพื้นฐานของโพแทสเซียมอีโอซิน: สี 1 กรัมละลายในน้ำกลั่น 1 ลิตรทิ้งไว้ในภาชนะแก้วสีเข้มเป็นเวลา 12-14 วันที่อุณหภูมิห้องหลังจากนั้นใช้ 3) บัฟเฟอร์ฟอสเฟต (ส่วนผสม Weise) pH 7.4-7.5: ผสมโพแทสเซียมไดไฮโดรเจนฟอสเฟต 0.49 กรัม (KH2PO4) และโซเดียมไฮโดรเจนฟอสเฟต 0.909 กรัม (Na2HPO4) แล้วละลายในน้ำกลั่น 1 ลิตร 4) วิธีแก้ปัญหาการทำงานของ azure-eosin: ก่อนใช้งานให้ผสมสารละลายสต็อกของ azure II 25 มล., สารละลายโพแทสเซียมอีโอซิน 20 มล. และสารละลายบัฟเฟอร์ 55 มล. (สัดส่วนของสีย้อมอาจแตกต่างกันไป สังเกตได้เมื่อเตรียมสารละลายสต็อคสดเป็นชุด)

รีเอเจนต์สำหรับการย้อมสีรอยเปื้อนตาม Pappenheim: 1) สารละลายอีโอซิน-เมทิลีนบลูตาม May-Grunwald ในกรณีที่ไม่มีสีย้อมสำเร็จรูปจะเตรียมโดยการละลายสีแห้ง 1 กรัมในเมทิลแอลกอฮอล์ 1 ลิตร 2) แนวทางการทำงานของ azure-eosin ตามมาตรฐาน Nokht.

การตรึงรอยเปื้อน น้ำยาตรึงจะถูกเทลงในคิวเวตต์หรือในจานปากกว้างที่มีจุกปิดพื้น วางรอยเปื้อนในภาชนะซึ่งแช่ในคิวเวตต์หรือวางทีละชิ้นในจานเป็นเวลา 5-10 นาที นำภาชนะที่มีแว่นตาออกจากสารละลายยึด (หรือนำแว่นตาออกด้วยแหนบแล้ววางไว้บนขาตั้ง) แล้วปล่อยทิ้งไว้ในอากาศจนแห้งสนิท

การย้อมสีตาม Nocht รอยเปื้อนที่แห้งแล้วโดยไม่ต้องถอดออกจากภาชนะ จะถูกวางในคิวเวตต์ด้วยสารละลายสีที่ใช้งานได้ตามเวลาที่กำหนดอย่างเคร่งครัด (20-45 นาที) ซึ่งคัดเลือกโดยสังเกตจากการทดลองสำหรับสีแต่ละชุด ในกรณีที่ไม่มีคิวเวตต์ที่มีภาชนะ แก้วจะถูกวางในแนวนอนบนแท่งแก้วสองอัน ("ราง") ที่วางขนานกับจังหวะขึ้นและเทสารละลายสีสำหรับใช้งาน 3-4 มล. ลงบนแก้ว ภาชนะที่มีแก้วจะถูกนำออกจากคิวเวตต์ด้วยสีย้อมและวางในคิวเวตต์ที่มีน้ำประปา (ในกรณีที่ไม่มีภาชนะ สีจากแก้วจะถูกชะล้างออกด้วยน้ำโดยไม่ต้องถอดออกจากแท่งแก้ว) รอยเปื้อนจะถูกทำให้แห้งด้วยอากาศ

ระบายสีพัพเพนไฮม์ รอยเปื้อนเลือดที่ไม่ตายตัวแบบแห้งจะถูกใส่ในภาชนะและหย่อนลงในคิวเวตต์ด้วยสารละลาย May-Grunwald เป็นเวลา 3-5 นาที (หรือสีย้อม 3-4 มล. จะถูกเทลงบนสเมียร์ที่ไม่ยึดติดด้วยปิเปต) ล้างภาชนะที่มีรอยเปื้อนใน cuvette ด้วยน้ำกลั่น แล้ววางใน cuvette ที่มีคราบ azure-eosin ตาม Nokht เป็นเวลา 8-15 นาที น้ำกลั่นจะถูกเติมลงในสไลด์ที่วางบน "ราง" โดยไม่ต้องระบายสีย้อมเป็นเวลา 1 นาทีจากนั้นสีจะถูกเทลงบนสเมียร์เป็นเวลา 8–15 นาทีจากนั้นสีจะถูกชะล้างออกด้วยน้ำ รอยเปื้อนจะถูกทำให้แห้งด้วยอากาศ

ระบายสีตาม Romanovsky-Giemsa ผลิตในลักษณะเดียวกับที่นขท. ในฐานะที่เป็นสีย้อมจะใช้สารละลาย Romanovsky-Giemsa สำเร็จรูปซึ่งเจือจางก่อนใช้ในอัตรา 1 หยดของสีย้อมต่อน้ำกลั่น 1 มล. เวลาการระบายสีถูกกำหนดโดยสังเกตสำหรับสีย้อมแต่ละชุด (25–40 นาที)

ไรท์ระบายสี. รีเอเจนต์ รอยเปื้อนของไรท์ 0.2 กรัม (ผงแห้ง BDH/E. เมอร์ค) ละลายในเมทานอล 100 มล. และปล่อยให้อยู่ได้หลายวัน หากเม็ดเลือดแดงไม่ชัดเจนเพียงพอ ให้เตรียมสารละลาย 0.25% หรือ 0.3%

ความคืบหน้าของการระบายสี หยดสีเล็กน้อย (ประมาณ 8) ลงบนรอยเปื้อนทิ้งไว้ 2-3 นาที (ตรวจสอบให้แน่ใจว่าสีไม่แห้ง) จากนั้นเทน้ำบัฟเฟอร์ในปริมาณที่เท่ากันลงบนสเมียร์ หากสีสุกแล้ว โฟมหรือฟิล์มที่มีความมันวาวของโลหะจะปรากฏบนพื้นผิวของสีที่เจือจาง สีที่เจือจางจะถูกทิ้งไว้บนป้ายประมาณ 2-3 นาที แล้วล้างออกด้วยสารละลายบัฟเฟอร์หรือน้ำ ไม่อนุญาตให้ทาสีบนพื้นผิวของสเมียร์ หากเกิดเหตุการณ์นี้ สเมียร์จะเต็มไปด้วยสีที่ไม่เจือปนเป็นเวลา 15-20 วินาที แล้วตามด้วยสารละลายบัฟเฟอร์หรือน้ำอีกครั้ง

การเตรียมบัฟเฟอร์ฟอสเฟต

สารละลาย A (0.2 M KH2PO4): ละลายเกลือ 27.2 กรัมในน้ำกลั่น 1 ลิตร

สารละลาย B (0.2 M Na2HPO4): ละลาย Na2HPO4 × 2H20 35.6 กรัม ในน้ำกลั่น 1 ลิตร

เพื่อให้ได้สารละลายบัฟเฟอร์ 100 มล. ที่มีค่า pH ที่ต้องการ สารละลาย A และ B ควรระบายออกในปริมาณที่ระบุในตาราง ค่า pH จะถูกตรวจสอบด้วยเครื่องวัดค่า pH

การเตรียมสารละลายบัฟเฟอร์ฟอสเฟต

สารละลาย ml	ค่า pH

Leishman ระบายสี. รีเอเจนต์ สีแห้งของ Leishman 0.15 กรัมละลายในแอลกอฮอล์เมทิลแอลกอฮอล์ 133 มล. สีควรละลายอย่างสมบูรณ์ แนะนำให้บดคริสตัลสีในครกก่อน เก็บสีในขวดที่มีจุกแก้ว ห้ามกรอง

ความคืบหน้าของการระบายสี ดำเนินการในลักษณะเดียวกันกับคราบไรท์ แต่ด้วยการเจือจางสารละลายบัฟเฟอร์สองเท่า เทสีสองสามหยด (ประมาณ 8) ลงบนสเมียร์เก็บไว้ 2 นาที เติมสารละลายบัฟเฟอร์ 2 เท่า (16 หยด) คนให้เข้ากัน เขย่าให้เข้ากัน ทิ้งไว้ 7-10 นาที สีจะถูกชะล้างออกด้วยน้ำกลั่นใน 2-3 วินาที เมื่อซักนาน สีจะเสื่อมลง รอยเปื้อนจะถูกทำให้แห้งในชั้นวางในอากาศ

เตรียมเลือดหยดหนา. เลือดสามหยดที่หยดลงบนสไลด์แก้วที่ระยะห่างจากกันจะถูกขยายด้วยมุมของสไลด์แก้วที่สะอาดจนมีขนาดเส้นผ่านศูนย์กลางประมาณ 1 ซม. ทำเครื่องหมายด้วยดินสอแล้วตากในอากาศเป็นเวลา 1-2 ชั่วโมง

ระบายสีเลือดหยดหนา. เลือดหยดหนาไม่คงที่ วางสไลด์แก้วที่มีหยดหนาแห้งอย่างดีไว้บน "ราง" ที่ระยะห่างจากกันและเทสารละลายการทำงานของ azure-eosin ตาม Nokht เป็นเวลา 8-10 นาที มี "การชะล้าง" ของเม็ดเลือดแดง จากนั้นสีจะถูกระบายออกและส่วนใหม่ของสารละลายการทำงานของ azure-eosin ตาม Nokht จะถูกเทลงบนการเตรียมการเป็นเวลา 30-35 นาที จากนั้นล้างสไลด์ด้วยน้ำกลั่นและทำให้แห้ง

การย้อมสีรอยเปื้อนอัตโนมัติ

เนื่องจากหนึ่งในหน้าที่ที่ได้รับการร้องขอมากที่สุดในห้องปฏิบัติการโลหิตวิทยาคือการเตรียมและการย้อมสีของรอยเปื้อนเลือด การพยายามทำให้เป็นอัตโนมัติจึงเป็นเรื่องธรรมชาติ

ระบบเตรียมการสเมียร์อัตโนมัติระบบแรกได้รับการพัฒนาโดย Sysmex (ประเทศญี่ปุ่น) ในปี 1990 และปัจจุบันมีการติดตั้งระบบมากกว่า 1,600 ระบบทั่วโลก ประสบการณ์มากมายที่ได้รับในช่วงเวลานี้ถูกใช้ในการพัฒนาระบบรุ่นใหม่ นั่นคือ SP-1000i smear แบบอัตโนมัติเต็มรูปแบบและสถานีย้อมสีที่มีความจุสูงถึง 120 smears ต่อชั่วโมง SP-1000i ตระหนักถึงมาตรฐานระดับสูงและคุณภาพในการเตรียมสเมียร์โดยใช้วิธีลิ่มอัจฉริยะ ซึ่งช่วยให้ผู้ใช้สามารถปรับปริมาณตัวอย่างเลือดที่ใช้ มุมของใบมีดสำหรับทารอยเปื้อน ความเร็วในการใช้งาน และเวลารอ ขึ้นอยู่กับ บนค่าฮีมาโตคริตของตัวอย่างทดสอบ โดยใช้ระดับการควบคุมที่แตกต่างกันตั้งแต่ 8 ถึง 16 ระดับ การเก็บตัวอย่างเลือดสามารถทำได้ด้วยตนเองหรือโดยอัตโนมัติจากหลอดเปิดหรือปิด Sysmex สถานีเตรียมและย้อมสีอัตโนมัติ Sysmex SP-1000i (ประเทศญี่ปุ่น)

ระบบใช้โปรโตคอลการย้อมสีที่ปรับแต่งได้อย่างยืดหยุ่นสูงสุดเจ็ดแบบ ซึ่งช่วยให้คุณกำหนดมาตรฐานคุณภาพของการย้อมแบบสเมียร์และตรงตามข้อกำหนดสูงสุด โปรโตคอลต่อไปนี้สำหรับการย้อมสีแบบคู่และแบบเดี่ยวสามารถใช้ได้: May-Grunwald-Giemsa, Romanovsky และ Romanovsky-Giemsa เลอะเปื้อนเลือดในระบบตลับเทปเฉพาะซึ่งมีเพียงหนึ่งสไลด์ต่อตลับ ด้วยวิธีนี้ รับประกันความสัมพันธ์ที่ดีระหว่างรอยเปื้อนเลือดกับรีเอเจนต์การย้อมสี และไม่มีการระเหยของเมทานอลจากรีเอเจนต์ไปในอากาศ เพื่อให้แน่ใจว่าการตรึงเลือดที่ดีก่อนการย้อมสี ขั้นตอนแยกต่างหากสำหรับการตรึงเมทานอลล่วงหน้าจะถูกรวมเข้ากับกระบวนการย้อมสี

เนื่องจากความยืดหยุ่นของโปรโตคอลการย้อมสี จึงสามารถใช้โปรโตคอลเฉพาะสำหรับการย้อมสีไขกระดูกได้

วิธีการเตรียมรอยเปื้อนจากไขกระดูกเพื่อการศึกษาทางโลหิตวิทยา

การตรวจไขกระดูก - Myelogram คำถามแรกที่การตรวจไขกระดูกต้องตอบคือลักษณะเชิงปริมาณของเซลล์ เป็นที่ทราบกันดีว่าในความสัมพันธ์กับเลือดส่วนปลายสามารถกำหนดค่าตัวเลขจำนวนหนึ่งสำหรับจำนวนและเปอร์เซ็นต์ของเซลล์ประเภทต่างๆได้เนื่องจากอยู่ในสถานะอิสระและกระจายค่อนข้างสม่ำเสมอในการระงับเลือดในหลอดเลือด ไขกระดูกสามารถพูดได้สิ่งที่แตกต่างไปจากเดิมอย่างสิ้นเชิง: องค์ประกอบของเนื้อเยื่อเม็ดเลือดนั้นต่างกันมากและการกระจายของเซลล์ไขกระดูกไม่เหมือนกัน ดังนั้นการนับโดยตรงของ myelokaryocytes ในห้องจึงผันผวนในช่วงกว้างมากทั้งในสภาวะปกติและภายในกรอบของโรคเดียวกัน ค่าที่เราพบในปัจเจกบุคคลจะอยู่ในช่วงตั้งแต่ 27,000 ถึง 112,000 ธาตุนิวเคลียร์ต่อ mm3 (Ursya) ข้อมูลวรรณกรรมผันผวนในวงกว้างยิ่งขึ้น โดยจำกัดไว้ที่ 12,000 และ 300,000 ต่อ mm3 (Cartwright, Page) หลังจากการปั่นเหวี่ยงจะพบ 4 ชั้นต่อไปนี้ในหลอดฮีมาโตคริต: 1) ชั้นไขมันสีเหลืองบน; 2) พลาสม่า; 3) ชั้นสีเทาขาวที่เกิดจากเซลล์นิวเคลียร์ 4) ชั้นสีแดงประกอบด้วยเม็ดเลือดแดง การวัดชั้นเซลล์นิวเคลียร์สีเทาขาว (ไมอีโลคริต) มีค่าจำกัดหรืออาจทำให้เข้าใจผิดได้ เนื่องจากค่าที่พบในบุคคลปกติยังแสดงความผันผวนอย่างมีนัยสำคัญ นอกจากนี้ เซลล์นิวเคลียสไม่เพียงพบในชั้นนี้เท่านั้น แต่ยังพบในชั้นไขมันและเม็ดเลือดแดงด้วย แต่คราบไขกระดูกเข้มข้นสามารถเตรียมได้จากชั้นสีเทา-ขาวหลังการกำจัดพลาสมาเหนือตะกอน สิ่งเหล่านี้ได้พิสูจน์แล้วว่ามีประโยชน์ในกระบวนการวินิจฉัยในกรณีที่เซลล์มีคราบสกปรกโดยตรง เนื่องจากจำนวนช่องมัยอีโลคารีโอไซต์และการตรวจวัดมัยอีโลคริตเป็นเพียงผลลัพธ์โดยประมาณที่มีการทำซ้ำที่จำกัด วิธีการหาปริมาณเหล่านี้ไม่เป็นที่น่าพอใจ วัสดุที่สกัดระหว่างการเจาะดูดคือตัวอย่างไขกระดูกผสมกับเลือดในสัดส่วนต่างๆ ระดับการเจือจางของไขกระดูกด้วยเลือดขึ้นอยู่กับปัจจัยหลายประการ การติดฉลาก 32P พิสูจน์ว่าการเจือจางของไขกระดูกที่สำลักด้วยเลือดอยู่ในช่วง 40% ถึง 100% อย่างไรก็ตามควรสังเกตว่าการศึกษาไขกระดูกเพื่อทำการวินิจฉัยนั้นขึ้นอยู่กับการศึกษาเชิงคุณภาพของเนื้อหาในเซลล์เป็นหลักและรองจากค่าเชิงปริมาณของเนื้อหานี้เท่านั้น นั่นคือเหตุผลที่วิธีการเชิงปริมาณในการพิจารณาเซลล์ไขกระดูกประกอบด้วยการประเมินองค์ประกอบเซลล์ของไขกระดูกแบบกึ่งปริมาณ เมื่อเทียบกับตัวอย่างปกติ บน: ก) รอยเปื้อนด้วยก้อนที่บดแล้ว; b) ส่วนทางเนื้อเยื่อวิทยา การศึกษารอยเปื้อนจะดำเนินการส่วนใหญ่ด้วยเลนส์แห้งในหลาย ๆ รอยเปื้อนโดยมีเป้าหมายดังต่อไปนี้: ก) การประเมินกึ่งเชิงปริมาณของมวลเซลล์ไขกระดูก; b) การกำหนดสถานะและความหนาแน่นของ megakaryocytes; ค) การตรวจหาเซลล์ยักษ์หรือรังเซลล์ผิดปกติ d) การระบุพื้นที่ที่เหมาะสมที่สุดสำหรับการวิจัยโดยการแช่ สำหรับรอยเปื้อนที่ได้จากการบดอนุภาคของไขกระดูก โซนศูนย์กลางสามโซนต่อไปนี้มีความโดดเด่น: ก) ส่วนกลาง; ข) ภายนอก; ค) ระดับกลาง โซนกลางประกอบด้วยแวคิวโอลไขมัน เซลล์สโตรมอล แกรนูโลไซต์ และเซลล์ที่ถูกทำลายจำนวนมาก โซนด้านนอกมีเลือดจำนวนมาก ซึ่งทำให้เซลล์ไขกระดูกเจือจาง เช่นเดียวกับรอยเปื้อนบาง ๆ มันมีส่วนช่วยในการศึกษารายละเอียดทางสัณฐานวิทยาของเซลล์ไมอีลอยด์และเม็ดเลือดแดงเท่านั้น มวลเซลล์ที่มีความหนาแน่นมากที่สุดจะอยู่ในโซนกลาง ซึ่งช่วยให้มีการศึกษาที่เหมาะสมที่สุดซึ่งสามารถชี้แจงคำถามทั้งหมดที่ร่างไว้ได้ ที่นี่เซลล์ไขกระดูกได้รับการเก็บรักษาไว้อย่างดีและจัดเรียงเป็นเกาะเล็กเกาะน้อยหรือทำรัง เช่นเดียวกับที่พบในไขกระดูก ในขณะที่ยังคงสภาพภูมิประเทศของไขกระดูก ผลการศึกษาโซนนี้มีความสอดคล้องกันมากกว่าและสอดคล้องกับสถานะที่แท้จริงของไขกระดูก ซึ่งได้รับการยืนยันโดยการเปรียบเทียบกับภาพทางเนื้อเยื่อวิทยา การกำหนดความหนาแน่นของเซลล์แบบกึ่งปริมาณจะแสดงเป็น: ก) ปกติ ข) เข้มข้น หรือค) ยันเมื่อเทียบกับไขกระดูกปกติ การระบุมวลเซลล์ปกติหรือจำนวนมากเป็นการค้นพบที่มีค่า ในขณะที่ไขกระดูกที่ไม่เพียงพอควรพิจารณาด้วยความระมัดระวัง เพื่อพิสูจน์ว่ามี hypoplasia ที่เกิดขึ้นจริง ควรทำการตรวจแผ่นเปลือกโลกหลายแผ่น เจาะบริเวณกระดูกหลายจุด และ/หรือตรวจชิ้นเนื้อกระดูก ข้อมูลที่แม่นยำที่สุดเกี่ยวกับมวลเซลล์ไขกระดูกได้มาจากการตรวจสอบส่วนเนื้อเยื่อวิทยา ในผู้ใหญ่อัตราส่วนของพื้นที่ว่างที่ครอบครองโดยเนื้อเยื่อเซลล์ไขมันและเซลล์ที่ใช้งานปกติคือ 1:1 หรือ 2:1 ผู้เขียนบางคนคิดว่าไขกระดูกเป็นเซลล์ที่มีเซลล์ต่ำเมื่อเซลล์เม็ดเลือดครอบครองน้อยกว่าหนึ่งในสี่ของก้อนไขกระดูก การตรวจไขกระดูกเชิงคุณภาพเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการวินิจฉัย มันดำเนินการโดยการแช่ทั้งบนรอยเปื้อนบาง ๆ และโดยเฉพาะอย่างยิ่งบนรอยเปื้อนที่มีก้อนบดจากโซนกลาง ขอแนะนำให้เลือกรอยเปื้อนที่ยืดและย้อมสีอย่างเหมาะสมที่สุดโดยมีเซลล์ที่กำหนดไว้อย่างชัดเจนและได้รับการเก็บรักษาไว้อย่างดีทางสัณฐานวิทยา การศึกษานี้สรุป: ก) การระบุเซลล์มัยอีลอยด์ประเภทต่างๆ b) การกำหนดระดับการเจริญเติบโตของแต่ละแถวเซลล์ c) ชี้แจงความสัมพันธ์ระหว่าง granulocytes และ erythroblasts (G/E); d) การระบุเซลล์ในระยะไมโทซิส; จ) คำอธิบายของเซลล์ที่ผิดปกติที่พบ หลังจากตรวจสอบรอยเปื้อนหลายครั้งแล้ว จะมีการรวบรวม "myelogram" เชิงพรรณนาโดยละเอียด (ประกอบด้วยข้อสรุปที่เกิดขึ้นหลังจากการถอดรหัสรอยเปื้อน) หรือ myelogram เปอร์เซ็นต์ที่สร้างโดยองค์ประกอบอย่างน้อย 300-500 มีสองวิธีในการรวบรวมเปอร์เซ็นต์ myelogram: 1) กำหนดแถวเซลล์ที่เหลือให้กับ 100 granulocytes; 2) เปอร์เซ็นต์การแสดงเซลล์แต่ละประเภทจากจำนวนเซลล์ไขกระดูกทั้งหมด จากมุมมองทางสถิติ วิธีหลังดูเหมือนจะถูกต้องมากกว่าและเห็นได้ชัดว่าสะท้อนภาพที่แท้จริงขององค์ประกอบเซลล์ของไขกระดูก สูตรที่กำหนดโดยผู้เขียนแต่ละคนแตกต่างกันอย่างมากเนื่องจากเป็นการยากที่จะกำหนดค่าเฉลี่ยที่แท้จริงในเนื้อเยื่อที่ต่างกันเช่นไขกระดูก ตารางแสดงตาม Wintrobe ผลการศึกษาตัวอย่างไขกระดูกที่เลือกจากบุคคลปกติ 12 คน myelogram ปกติ

พารามิเตอร์ Myelogram ค่าเฉลี่ย (%) ช่วงของความผันผวน (%)

เซลล์ตาข่าย 0.9 0.1-1.6 การระเบิดที่ไม่แตกต่างกัน 0.6 0.1-1.1 Myeloblasts 1.0 0.2-1.7

โพรไมอีโลไซต์ 2.5 1.0-4.1

Myelocytes neutrophils 9.6 7.0-12.2 Metamyelocytes neutrophils 11.5 8.0-15.0 Stab neutrophils 18.2 12.8-23.7 นิวโทรฟิลแบบแบ่งส่วน 18.6 13.1-24.1 เซลล์นิวโทรฟิลทั้งหมด 60.8 52.7-68.9ไมอีโลไซต์อีโอซิโนฟิลิก 0.1 0.0-0.2 อีโอซิโนฟิลิกเมตาไมอีโลไซต์ 0.2 0.1-0.4 อีโอซิโนฟิล 2.8 0.4-5.2

เซลล์ทั้งหมดของอนุกรมอีโอซิโนฟิลิก 3.2 0.5-5.8ไมอีโลไซต์ชนิด Basophilic 0.1 0-0.3

บาโซฟิล 0.1 0-0.3

เซลล์ทั้งหมดของชุดเบสโซฟิลิก 0.2 0-0.5ลิมโฟบลาสต์ 0.1 0-0.2

โปรลิมโฟไซต์ 0.1 0-0.2

ลิมโฟไซต์ 8.8 4.3-13.3

เซลล์น้ำเหลืองทั้งหมด 9.0 4.3-13.7โมโนบลาสต์ 0.1 0-0.2

โมโนไซต์ 1.9 0.7-3.1

พลาสมาบลาสต์ 0.1 0-0.2

โพรพลาสโมไซต์ 0.1 0.1-0.2

พลาสมาเซลล์ 0.9 0.1-1.8

Erythroblasts 0.6 0.2-1.1

Basophilic normoblasts 3.6 1.4-5.8 โพลิโครมาโทฟิลิกนอร์โมบลาสต์ 12.9 8.9-16.9 Oxyphilic normoblasts 3.2 0.8-5.6

เซลล์เม็ดเลือดแดงทั้งหมด 20.5 14.5-26.5เมกะคารีโอไซต์ 0.4 0.2-0.6

จากการศึกษาของเราเกี่ยวกับคนที่มีสุขภาพดี ผลลัพธ์มีดังนี้:

จำนวนแกรนูโลไซต์ 56-70%

ชุดเม็ดเลือดแดง 23-30%, ชุดต่อมน้ำเหลือง 5-10%, ชุด monocyto-macrophage 1-2% และชุด megakaryocyte 0.1-0.8% (Ursya) การเปลี่ยนแปลงในสัดส่วนของแถวไมอีลอยด์ปกติหรือการแทนที่ด้วยเซลล์ที่ผิดปกติมักบ่งบอกถึงชนิดของโรค เซลล์ไขว้กันเหมือนแหปรากฏขึ้นไม่บ่อยนักและยิ่งมีจำนวนน้อย โดยบังเอิญ รอยเปื้อน (หรือรอยประทับของไขกระดูก) แสดงให้เห็นเซลล์สร้างกระดูกและ/หรือเซลล์สร้างกระดูก ซึ่งไม่ควรถูกเข้าใจผิดว่าเป็นเซลล์เนื้องอก การปรากฏตัวของพวกเขามักจะถูกบันทึกไว้ในเด็ก, บ่อยครั้งในผู้ใหญ่ที่มี myelofibrosis หลักหรือรอง, หลังจากการแพร่กระจายของมะเร็ง, กับมะเร็งเม็ดเลือดขาวเฉียบพลัน, โรคกระดูกพรุน ฯลฯ อัตราส่วน G/E ได้มาจากการแบ่งแกรนูโลไซต์ด้วยจำนวนของเม็ดเลือดแดง ในผู้ใหญ่ปกติ อัตราส่วนนี้เฉลี่ย 3/1 หรือ 4/1 โดยมีขีดจำกัดประมาณ 2/1 (เมื่อรวมเฉพาะแกรนูโลไซต์ที่ยังไม่บรรลุนิติภาวะ) และ 5/1 (เมื่อเกี่ยวข้องกับแกรนูโลไซต์ทั้งหมด - สุกและยังไม่บรรลุนิติภาวะ) อัตราส่วน H/E ผันผวนตามอายุ: เมื่อแรกเกิดมีขนาดเล็ก (1.8/1) เมื่ออายุ 2 สัปดาห์เพิ่มขึ้นเป็น 11/1 จากนั้นค่อยๆลดลงและในเด็กอายุ 1 ขวบถึงค่า ของผู้ใหญ่ อัตราส่วน H/E เป็นเรื่องปกติในกรณีของภาวะ hypo- หรือ hyperplasia ของไขกระดูกทั่วโลก เช่นเดียวกับในการเพิ่มจำนวนของเซลล์แต่ละเซลล์ที่ไม่รวมอยู่ในการคำนวณอัตราส่วนนี้ ตัวอย่างเช่น ในพลาสมาไซโทมา ในมะเร็งเม็ดเลือดขาว ปฏิกิริยาคล้ายมะเร็งเม็ดเลือดขาวและเม็ดเลือดแดง อัตราส่วนจะสูง ในขณะที่โรคโลหิตจางที่มีภาวะเม็ดเลือดแดงมากเกินจะต่ำหรือย้อนกลับ (megaloblastic, hemolytic anemia) ก่อนการออกข้อมูล myelogram ที่ได้รับหลังจากการศึกษารอยเปื้อนจำเป็นต้องชี้แจง: a) บริเวณที่เจาะ; b) ความหนาแน่นของกระดูก c) เงื่อนไขภายใต้การดูด; d) ลักษณะมหภาคของวัสดุที่เลือก การตรวจไขกระดูกเป็นกระบวนการที่ซับซ้อนโดยอาศัยการรวมข้อมูลจำนวนมากและหลากหลาย ผลลัพธ์ควรสะท้อนถึงข้อสรุปทั่วไป โดยอิงจากการอนุมานมากกว่าการลงทะเบียนทางกลของตัวเลขแต่ละรายการ ซึ่งยิ่งผันผวน ข้อสรุปของ myelogram ควรชี้แจงการวินิจฉัยหรือข้อบ่งชี้สำหรับการศึกษาเพิ่มเติมที่เกิดจากการศึกษาไขกระดูก ในโรคเลือด การเจาะดูดช่วยชี้แจงการวินิจฉัยด้วยความช่วยเหลือของรอยเปื้อนและส่วนที่เป็นก้อนใน 80% ของกรณี ในกรณีอื่น ๆ จะมีการระบุชิ้นเนื้อกระดูกและการตรวจเนื้อเยื่อของไขกระดูก การคัดเลือกทางชีวภาพและการตรวจเนื้อเยื่อดูเหมือนจำเป็นสำหรับ: ก) myelofibrosis หลักหรือรอง; b) aplasia ไขกระดูกหรือ hypoplasia; c) โรคที่เกิดขึ้นกับรอยโรคชนิดเม็ด (เช่น , โรค Godgkin, Sarcoidosis, วัณโรค, ฯลฯ ); d) การแพร่กระจายของมะเร็ง; จ) ในทุกกรณีที่วัสดุที่เลือกโดยการเจาะไม่เป็นที่น่าพอใจหรือลักษณะของไขกระดูกไม่น่าไว้วางใจ หลังจากการสุ่มตัวอย่างทางชีวภาพ ความประทับใจจะถูกเตรียมสำหรับการตรวจเซลล์ เนื่องจากส่วนเนื้อเยื่อวิทยาให้ข้อมูลเพียงเล็กน้อยเกี่ยวกับรายละเอียดโครงสร้างของเซลล์เม็ดเลือดที่อยู่ในรูปแบบที่หนาแน่น ไม่กระจัดกระจาย และไม่ได้มาตรฐาน นอกจากนี้ การตรึงตรึงทำให้เกิดการหดตัวของเซลล์และการย้อมสีทางเนื้อเยื่อวิทยายังเลือกได้น้อยกว่าการย้อมสีเซลล์ นั่นคือเหตุผลที่การตรวจสอบไขกระดูกทั้งหมดเกี่ยวข้องกับทั้งทางเซลล์วิทยา - บนรอยเปื้อนหรือรอยประทับ และเนื้อเยื่อ - ในส่วนของการศึกษา ต้องจำไว้ว่าวิธีการตรวจทางเซลล์วิทยาและเนื้อเยื่อวิทยาของการตรวจไขกระดูกไม่ได้รับการยกเว้น แต่ในทางกลับกันเป็นการเสริม: การตรวจชิ้นเนื้อเป็นวิธีเชิงปริมาณและสถาปัตยกรรมในขณะที่ myelogram เป็นวิธีเชิงคุณภาพและเซลล์วิทยา

วิธีการนับเม็ดเลือดในห้อง Goryaev

ห้องของ Goryaev - อุปกรณ์ที่ออกแบบมาเพื่อนับจำนวนเซลล์ในปริมาตรที่กำหนดของของเหลว มักใช้เพื่อกำหนดจำนวนองค์ประกอบที่เกิดขึ้นในตัวอย่างเลือด ห้องประกอบด้วยสไลด์แก้วหนาพร้อมช่องตามขวางซึ่งสร้างพื้นที่ราบเรียบเรียงตามขวางสามส่วน แท่นกลางถูกแบ่งโดยช่องตามยาวออกเป็นสองช่อง โดยแต่ละช่องมีตะแกรงสลักอยู่ ทั้งสองด้านของแท่นกลางในห้อง Goryaev มีอีกสองตัวที่สูงกว่าแท่นตรงกลาง 0.1 มม. (ในห้อง Fuchs-Rosenthal 0.2 มม.) ระนาบของไซต์เหล่านี้ใช้เพื่อบดใบปะหน้าจนกระทั่งวงแหวนที่เรียกว่านิวตันปรากฏขึ้น หลังจากบดกระจกฝาครอบแล้ว ห้องจะถูกสร้างขึ้นโดยปิดทั้งสองด้าน และอีกสองช่องจะมีช่องว่าง (ช่องว่างของเส้นเลือดฝอย) ซึ่งห้องจะเต็มไป หลักการของกริดก็เหมือนกัน พวกมันถูกแบ่งออกเป็นสี่เหลี่ยมจำนวนหนึ่งหรือหลายช่องโดยจัดกลุ่มในรูปแบบต่างๆ ค่าคงที่ในตารางทั้งหมดคือสิ่งที่เรียกว่า "สี่เหลี่ยมเล็ก" ซึ่งด้านข้างคือ 1/20 มม. ดังนั้น พื้นที่ของมันคือ 1/400 mm2 การใช้กล้อง Goryaev ทำให้สามารถกำหนดกำลังขยายของกล้องจุลทรรศน์ได้ด้วย ภายนอกเป็นแบบขนานโปร่งใส (สไลด์แก้ว) โดยมีร่องและกริดด้วยกล้องจุลทรรศน์ ขนาดของส่วนขนาดเล็กของเซลล์กริดคือ 0.05 มม. และส่วนขนาดใหญ่คือ 0.2 มม. ในกรณีนี้ กริดจะถูกนำไปใช้กับแท่น (ส่วนของกระจก) ซึ่งอยู่ต่ำกว่าแท่นสองแท่นที่อยู่ติดกัน 0.1 มม. พื้นที่เหล่านี้ใช้สำหรับปิดใบปะหน้า เป็นผลให้ปริมาตรของของเหลวเหนือสี่เหลี่ยมที่เกิดขึ้นจากส่วนขนาดใหญ่ของกริด Goryaev คือ 0.004 ไมโครลิตร โดยการนับจำนวนเซลล์ในสี่เหลี่ยมจัตุรัสขนาดใหญ่ คุณสามารถคำนวณความหนาแน่นของชนิดเซลล์ที่กำหนดในการระงับได้โดยใช้สูตร: จำนวนเซลล์/มล. = จำนวนเซลล์เหนือสี่เหลี่ยมขนาดใหญ่ * 2.5 10^5 การใช้กล้อง Goryaev เป็นมาตรฐาน คุณสามารถกำหนดกำลังขยายของกล้องจุลทรรศน์โดยใช้สูตร: กิโลกรัม=(m2-m1)/(a*N) ที่ไหน กิโลกรัมคือกำลังขยายของกล้องจุลทรรศน์ ม 1 - ตำแหน่งของเส้นขอบด้านซ้ายของเซลล์ของห้อง Goryaev; ม 2 - ตำแหน่งของเส้นขอบด้านขวาของเซลล์หรือกลุ่มเซลล์ นู๋- จำนวนเซลล์ระหว่างขอบเขตที่วัดได้ เอ- ขนาดเซลล์ของห้อง Goryaev (เท่ากับ 0.05 มม.) ห้อง Goryaev ยังใช้เพื่อนับจำนวนเซลล์ในวัฒนธรรม สูตรการนับเม็ดเลือดในห้อง Goryaev คือ - x = (a 400 c) / b, โดยที่ x คือจำนวนองค์ประกอบที่มีรูปร่างที่ต้องการใน 1 mm3 a - ผลรวมขององค์ประกอบที่มีรูปร่างที่นับในปริมาตรที่แน่นอนของห้อง b - จำนวนสี่เหลี่ยมเล็ก ๆ ที่นับ; c - การเจือจางเลือด

วิธีการนับโอโอซิสต์ในห้อง Goryaev วิธีนี้มักใช้เมื่อทดลองทำให้สัตว์ติดเชื้อด้วยปริมาณโอโอซิสต์ที่กำหนดอย่างแม่นยำ (ฉีดสารแขวนลอยในปริมาณที่เหมาะสมลงในสัตว์) สารแขวนลอยที่มีโอโอซิสต์ 1 มล. วางอยู่ในห้อง Goryaev เนื่องจากปริมาตรของห้อง Goryaev คือ 0.9 m3 จำนวนโอโอซิสต์ที่นับจึงคูณด้วย 1111 จำนวนที่ได้นั้นเพียงพอกับจำนวนของโอโอซิสต์ในสารละลาย 1 ซม. 3 สำหรับการกำหนดที่แม่นยำยิ่งขึ้น ควรทำการคำนวณอย่างน้อยสามครั้ง จากนั้นจึงหาค่าเฉลี่ยเลขคณิต จำนวนโอโอซิสต์ที่จำเป็นสำหรับการติดเชื้อวัดโดยใช้ปิเปตที่สำเร็จการศึกษา เพื่อการกระจายตัวของโอโอซิสต์ในสื่อการฟักไข่ที่สม่ำเสมอยิ่งขึ้น เนื้อหาของหลอดทดลองจะต้องถูกเขย่าซ้ำๆ

จำนวนเม็ดเลือดแดงในห้อง Goryaev หลักการ. ปริมาณเลือดที่แน่นอนจะผสมกันอย่างเท่าเทียมกันในของเหลวจำนวนหนึ่งและวางไว้ในห้องที่มีปริมาตรที่ทราบซึ่งมีการกระจายตัวแขวนเลือดในชั้นเดียว ด้านล่างของห้องมีกราฟซึ่งทำให้สามารถนับเม็ดเลือดแดงได้อย่างแม่นยำ รีเอเจนต์: สารละลายโซเดียมคลอไรด์ 0.9% อุปกรณ์พิเศษ: กล้องจุลทรรศน์ กล้องของ Goryaev หลอดทดลองในห้องปฏิบัติการ หรือเส้นเลือดฝอยจากเฮโมมิเตอร์ของ Saly ความคืบหน้าของคำจำกัดความ เติมสารละลายโซเดียมคลอไรด์ 0.9% 8 มล. และเลือด 0.02 มล. ลงในหลอดทดลองที่สะอาดและแห้ง ปลายปิเปตถูกเช็ดในเบื้องต้น เลือดจะถูกเป่าไปที่ก้นหลอด และปิเปตจะถูกล้างอย่างทั่วถึงด้วยชั้นบนของของเหลว ผสมเนื้อหาของหลอดให้เข้ากัน ได้รับการเจือจางเลือด 1:400 นั่นคือเลือดเจือจาง 400 ครั้ง เมื่อเลือดข้นขึ้นแนะนำให้เจือจาง 500, 600, 700, 800 ครั้ง ห้องเพาะเลี้ยงและใบปะหน้าควรล้างและเช็ดให้แห้ง แผ่นปิดถูกถูกับห้องเพื่อให้วงแหวนสีรุ้งปรากฏขึ้น หยดเลือดเจือจางจากหลอดทดลองหนึ่งหยดแล้วเติมลงในช่องโดยใช้มันไปที่ขอบของฝาครอบ เซลล์เม็ดเลือดแดงจะถูกนับ 1 นาทีหลังจากเติมห้องด้วยกล้องจุลทรรศน์กำลังขยายต่ำ (วัตถุประสงค์ x8, เลนส์ใกล้ตา x10 หรือ x15) ด้วย ไดอะแฟรมที่มีฝาปิดหรือคอนเดนเซอร์ต่ำ (ในมุมมองที่มืด) เซลล์เม็ดเลือดแดงจะถูกนับในห้าสี่เหลี่ยมขนาดใหญ่ (หรือ 80 เล็ก) เรียงตามแนวทแยงมุม พิจารณาเม็ดเลือดแดงที่อยู่ในสี่เหลี่ยมเล็ก ๆ เช่นเดียวกับผนังด้านซ้ายและด้านบน เซลล์ที่อยู่ทางด้านขวาและบรรทัดล่างสุดของสี่เหลี่ยมจะไม่ถูกนับ การคำนวณ: จำนวนเซลล์ที่คำนวณได้ใน 80 สี่เหลี่ยมเล็ก ๆ คูณด้วย 20,000 ที่การเจือจางเลือด 1: 400, 25,000 ที่การเจือจาง 1: 500 หรือ 30,000 ที่การเจือจาง 1: 600 และได้ผลลัพธ์สุดท้าย หน่วยเป็นล้านต่อ 1 ไมโครลิตร ในกรณีนี้ สมมติว่าปริมาตรของสี่เหลี่ยมจัตุรัสเล็กๆ หนึ่งอันคือ 1/4000 ไมโครลิตร ในการนับเซลล์ใน 1 ลิตร จำนวนเซลล์เม็ดเลือดแดงใน 1 ไมโครลิตรก็คูณด้วย 1,000,000 ด้วย บันทึก. ไม่อนุญาตให้ศึกษาเลือดที่มีลิ่มเลือด นับเซลล์ทันทีหลังจากเติมห้อง (โดยไม่ต้องรอ 1 นาที) การใช้ปิเปตและหลอดทดลองที่ล้างและแห้งไม่ดี รีเอเจนต์คุณภาพต่ำที่ทำให้เกิดภาวะเม็ดเลือดแดงแตก ตามกฎการคำนวณทั้งหมด ข้อผิดพลาดจะเฉลี่ย ± 2.5%

กฎการฆ่าเชื้อ หลังการใช้งานกล้อง Goryaev จะต้องผ่านการฆ่าเชื้อ สารละลาย 3%ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ ล้างออกด้วยน้ำกลั่นแล้วเช็ดให้แห้งด้วยผ้านุ่ม เก็บกล้องไว้ในที่แห้ง

วิธีการทำงานของเครื่องวิเคราะห์โลหิตวิทยา

เครื่องวิเคราะห์-โลหิตวิทยา- อุปกรณ์ (ชุดอุปกรณ์) ที่ออกแบบมาสำหรับการวิจัยเชิงปริมาณ เซลล์ เลือดในห้องปฏิบัติการวินิจฉัยทางคลินิก เป็นแบบอัตโนมัติหรือกึ่งอัตโนมัติก็ได้ เครื่องวิเคราะห์โลหิตวิทยากึ่งอัตโนมัติแตกต่างจากเครื่องอัตโนมัติที่กระบวนการเจือจางตัวอย่างเลือดดำเนินการโดยอุปกรณ์แยกต่างหาก - เครื่องเจือจาง หลังจากเตรียมการเจือจางของเลือดครบส่วนแล้ว ผู้ปฏิบัติงานต้องย้ายตัวอย่างที่เจือจางไปยังโมดูลการวัด ปัจจุบันแทบไม่มีการผลิตเครื่องวิเคราะห์กึ่งอัตโนมัติ

เครื่องวิเคราะห์โลหิตวิทยาอัตโนมัติเป็นเครื่องมืออัตโนมัติเต็มรูปแบบ ซึ่งกระบวนการวิเคราะห์ทั้งหมดจะดำเนินการโดยอัตโนมัติ

เครื่องวิเคราะห์อัตโนมัติสมัยใหม่สามารถประมวลผลตัวอย่างได้หลายสิบตัวอย่าง (จาก 60 ถึง 120) ต่อชั่วโมง ด้วยความแม่นยำและความสามารถในการทำซ้ำตามข้อกำหนด ตลอดจนจัดเก็บผลการทดสอบไว้ในหน่วยความจำในตัว และหากจำเป็น ให้พิมพ์ลงบนตัวเครื่อง เครื่องพิมพ์ความร้อนหรือเครื่องพิมพ์ภายนอก

เครื่องวิเคราะห์ทางโลหิตวิทยาสมัยใหม่จำแนกตามระบบการตั้งชื่อของตัวบ่งชี้ที่กำหนดของเซลล์เม็ดเลือด

เครื่องวิเคราะห์โลหิตวิทยาแปดพารามิเตอร์กำหนดพารามิเตอร์ต่อไปนี้: ความเข้มข้น เม็ดเลือดแดง(อาร์บีซี) เม็ดเลือดขาว(WBC) เกล็ดเลือด(plt) เฮโมโกลบิน(Hb) เช่นเดียวกับพารามิเตอร์ของเม็ดเลือดแดงต่อไปนี้: ปริมาณเม็ดเลือดแดงเฉลี่ย (MCV), ปริมาณฮีโมโกลบินเฉลี่ยของเม็ดเลือดแดง (MCH), ความเข้มข้นของเม็ดเลือดแดงเฉลี่ย (MCHC), hematocrit(ฮกท.).

เครื่องวิเคราะห์ทางโลหิตวิทยาแปดพารามิเตอร์แทบไม่มีการผลิตในปัจจุบัน

เครื่องวิเคราะห์โลหิตวิทยาคลาส 3-diff. เครื่องวิเคราะห์ทางโลหิตวิทยาของคลาส 3-dif ขึ้นอยู่กับรุ่นที่ผลิต ช่วยให้คุณกำหนดตัวบ่งชี้ของเซลล์เม็ดเลือดได้ตั้งแต่ 16 ถึง 22 ตัว เครื่องวิเคราะห์ของคลาสนี้ นอกเหนือจากพารามิเตอร์ที่กำหนดเครื่องวิเคราะห์แปดพารามิเตอร์แล้ว ยังกำหนดประชากรย่อยสามกลุ่มของเม็ดเลือดขาว: ความเข้มข้นของลิมโฟไซต์ (Lm), แกรนูโลไซต์ (Gr) และเม็ดเลือดขาวเฉลี่ย (Mid) ที่เรียกว่า เปอร์เซ็นต์ Lm%, Gr% และ Mid% ดังนั้นชื่อของคลาส 3-diff นอกจากนี้ เครื่องวิเคราะห์ทางโลหิตวิทยาของคลาสนี้ยังกำหนดค่าสัมประสิทธิ์การแปรผันของปริมาตรเม็ดเลือดแดง (RDW) และตัวบ่งชี้จำนวนหนึ่งที่บ่งชี้ลักษณะของเกล็ดเลือด: ปริมาตรของเกล็ดเลือดเฉลี่ย (MPV) สัดส่วนของปริมาตรของเกล็ดเลือด (Tct) (คล้ายคลึงกับฮีมาโตคริต) ค่าสัมประสิทธิ์การแปรผันของปริมาตรของเกล็ดเลือด (PDW)

ข้อมูลการวินิจฉัยที่สำคัญซึ่งสามารถหาได้จากเครื่องวิเคราะห์ทางโลหิตวิทยาของคลาสนี้คือฟังก์ชันการกระจายตามปริมาตรของเม็ดเลือดแดง เม็ดเลือดขาวและเกล็ดเลือด - ฮิสโตแกรม

เครื่องวิเคราะห์โลหิตวิทยา class 5-difความแตกต่างที่สำคัญระหว่างเครื่องวิเคราะห์โลหิตวิทยา 5-diff และเครื่องวิเคราะห์ 3-dif คือความสามารถในการตรวจจับประชากรย่อยทั้ง 5 ของเม็ดเลือดขาว: ลิมโฟไซต์ (Lym), โมโนไซต์ (มอญ), นิวโทรฟิล (Neu), บาโซฟิล (Bas) และอีโอซิโนฟิล (Eos) เช่นเดียวกับเนื้อหาเปอร์เซ็นต์ของ Lym%, Mon%, Neu%, Bas% และ Eos% วิธีการนับอิมพีแดนซ์หรือที่เรียกว่า เคาน์เตอร์โคลเตอร์ที่ใช้ในเครื่องวิเคราะห์ 3-dif ไม่สามารถแยกแยะระหว่างนิวโทรฟิล เบสฟิล และอีโอซิโนฟิล ดังนั้นจึงใช้วิธีการที่แตกต่างกันของการแยกเซลล์ในเครื่องวิเคราะห์ 5-dif เป็นไปตามหลักการ การเลี้ยวเบนรังสีเลเซอร์บนเซลล์เม็ดเลือดขาวและการวิเคราะห์เพิ่มเติมของรังสีกระจัดกระจาย เม็ดเลือดขาว "เฉลี่ย" ไม่ได้มีขนาดแตกต่างกันมากพอที่จะแยกแยะได้โดยวิธีอิมพีแดนซ์ แต่มีโครงสร้างภายในที่แตกต่างกันและมีปฏิกิริยากับสีย้อมต่างกัน และวิธีการตรวจจับรูปแบบการเลี้ยวเบนกลับกลายเป็นว่าไวต่อโครงสร้างภายในของเซลล์ ดังนั้นเซลล์เม็ดเลือดแดงและเกล็ดเลือดจะถูกนับโดยเคาน์เตอร์โคลเตอร์และเม็ดเลือดขาวด้วยหน่วยเลเซอร์แยกต่างหาก

งาน 8. การหาปริมาณโปรตีนในเลือดซีรั่ม

4. องค์ประกอบและคุณสมบัติของโปรตีนที่ซับซ้อน

งาน 9. ลักษณะทางเคมีของเฮมโปรตีน

งาน 10. การระบุองค์ประกอบคาร์โบไฮเดรตของไกลโคโปรตีน

งาน 11. ปฏิกิริยาเชิงคุณภาพต่อฟอสโฟโปรตีน

งาน 12. การกำหนดปริมาณของปริมาณกรดเซียลิกในซีรัมในเลือดโดยวิธีเฮสส์

งาน 13. ลักษณะทางเคมีของนิวคลีโอโปรตีน

กรดนิวคลีอิก

1. การศึกษาลักษณะทางเคมีของกรดนิวคลีอิก

งาน 14. ปฏิกิริยาเชิงคุณภาพต่อส่วนประกอบกรดนิวคลีอิก

วิธีการเชิงปริมาณสำหรับการกำหนดกรดนิวคลีอิก

งาน 15. วิธีสเปกโตรโฟโตเมตริกสำหรับการกำหนดปริมาณของกรดนิวคลีอิกตาม A.S. Spirin

งาน 16. วิธีการโฟโตคัลเลอร์เมตริกสำหรับการกำหนดปริมาณของกรดนิวคลีอิก

งาน 17. การศึกษาฟอสโฟลิปิด

งาน 18. ปฏิกิริยาเชิงคุณภาพต่อสเตียรอยด์

เอนไซม์

การเปรียบเทียบการกระทำของเอนไซม์และตัวเร่งปฏิกิริยาที่ไม่ใช่ชีวภาพ

งาน 19. การเปรียบเทียบการกระทำของα-amylase ของน้ำลายและกรดไฮโดรคลอริกต่อปฏิกิริยาการย่อยแป้ง

2. การระบุเอนไซม์ที่อยู่ในคลาสต่างๆ

งาน 20. การตรวจหา oxidoreductases ในวัสดุชีวภาพ

งาน 21. การตรวจหา cholinesterase

ในซีรัมในเลือดโดยวิธีด่วนของ Herzfeld และ Stumpf

งาน 22. การกำหนดกิจกรรมของฟรุกโตส -1,6-bisphosphate aldolase ในซีรัมในเลือดตามวิธีการของ V.I. Tovarnitsky และ E.N. Voluyskaya

การสร้างกราฟสอบเทียบ

งาน 23. การหากลูโคสฟอสเฟตไอโซเมอเรส

ในเลือดซีรั่ม

3. ศึกษาคุณสมบัติทางจลนศาสตร์ของเอนไซม์

งาน 24. จลนพลศาสตร์ของปฏิกิริยาของเอนไซม์ในตัวอย่างน้ำลายα-amylase

4. ความจำเพาะของการกระทำของเอนไซม์

งาน 25. การสาธิตความจำเพาะของพื้นผิวที่แน่นอน

5. ตัวดัดแปลงกิจกรรมของเอนไซม์

งาน 27. ตัวกระตุ้นและตัวยับยั้งของน้ำลายα-amylase

เนื้อเยื่อกล้ามเนื้อ

งาน 29. การยับยั้ง catalase ในเลือดที่ไม่สามารถแข่งขันได้

6. การหาปริมาณกิจกรรมของเอนไซม์

งาน 30. การศึกษาเชิงปริมาณของกิจกรรมของยา lactate dehydrogenase ตาม Kornberg

งานที่ 31. วิธีโฟโตคัลเลอร์เมตริกเพื่อศึกษากิจกรรมของแลคเตทดีไฮโดรจีเนสในเลือดซีรั่มตาม Sevel และ Tovarek

งาน 32. การกำหนดกิจกรรมอัลคาไลน์ฟอสฟาเตสในเลือดซีรัมตาม Bodansky

7. การศึกษาไอโซไซม์

งาน 33. การแยกไอโซไซม์แลคเตทดีไฮโดรจีเนสของซีรั่มในเลือดโดยอิเล็กโตรโฟรีซิสในเจลโพลีอะคริลาไมด์ตาม Dietz และ Lubrano

งาน 34. การกำหนดกิจกรรมของγ-glutamyltransferase ในซีรัมในเลือด

ชีวเคมีของการย่อยอาหาร

งาน 35. การศึกษาองค์ประกอบที่เป็นกรดของน้ำย่อย

งาน 36. การหาความเป็นกรดของน้ำย่อยด้วยชุดตรวจวินิจฉัย "Acidotest"

งาน 37. โปรตีนไฮโดรไลซิสโดยเอนไซม์ของระบบทางเดินอาหาร

งาน 38. การศึกษาพลวัตของการไฮโดรไลซิสของไตรเอซิลกลีเซอรอลภายใต้การกระทำของไลเปสตับอ่อน

การแลกเปลี่ยนพลังงาน (พลังงานชีวภาพ)

1. การศึกษากระบวนการออกซิเดชันทางชีวภาพในเนื้อเยื่อของสัตว์ งานที่ 39. การตรวจหาไซโตโครมออกซิเดสในเนื้อเยื่อของกล้ามเนื้อ

งาน 40. การสาธิตกระบวนการออกซิเดชั่นฟอสโฟรีเลชั่นและการกระทำของตัวถอดแยกออก

งาน 41. การตรวจหาไกลโคไลซิสในเนื้อเยื่อของกล้ามเนื้อ

งาน 42. การวิเคราะห์อะดีนีนนิวคลีโอไทด์โดยการแลกเปลี่ยนไอออนโครมาโตกราฟีแบบชั้นบาง

งาน 43. การหาค่ากิจกรรม creatine phosphokinase ในเลือดซีรัมตาม Ennor และ Rosenberg

การวิเคราะห์เม็ดสีและกระบวนการออกซิเดชันของสิ่งมีชีวิตสังเคราะห์แสง

งาน 44. ปฏิกิริยาเชิงคุณภาพต่อเม็ดสีพืช

งาน 45. การหาค่ากิจกรรมเปอร์ออกซิเดสในวัสดุจากพืชตามวิธีการของ A.N. Boyarkin

เมแทบอลิซึมของคาร์โบไฮเดรต

งาน 46. การหาระดับกลูโคสในเลือด

งาน 47. การหาปริมาณกลูโคสในเลือดโดยวิธีกลูโคสออกซิเดส

งาน 48. การหาปริมาณกรดแลคติกในเลือดตาม Barker และ Summerson

งาน 49. การหาปริมาณกรดไพรูวิกในเลือดตาม Friedemann และ Haugen

เมแทบอลิซึมของไขมัน

งาน 50

งาน 51

งาน 52. การหาระดับคอเลสเตอรอลในเลือดตามวิธี Ilk

งาน 53. การหาปริมาณฟอสโฟลิปิดทั้งหมดในซีรัมในเลือด

งาน 54. การแยกไขมันในเลือดในซีรัมโดยโครมาโตกราฟีแบบชั้นบาง

เมแทบอลิซึมของโปรตีนและกรดอะมิโน

งาน 55. การหาปริมาณโปรตีนเศษส่วนในซีรัมในเลือดโดยวิธีวัดความขุ่น

งาน 56. การกำหนดกิจกรรมของ cathepsins ในซีรัมในเลือดตาม A.A. Pokrovsky, A.I. Archakov และ O.N.

แคทเธอปซิน

งาน 57. การกำหนดกิจกรรมของ aspartate และ alanine aminotransferase ในซีรัมในเลือดตาม Reitman และ Frenkel

งาน 58. การกำหนดกิจกรรมฮิสทิเดสในเลือดซีรัมตาม Tabor และ Mehler แก้ไขโดย V.A.

งาน 59. การหาปริมาณไฮดรอกซีโพรลีนอิสระในปัสสาวะตาม Neumann และ Logan แก้ไขโดย p.

เมแทบอลิซึมของสารที่ไม่ใช่โปรตีนที่มีไนโตรเจน

1. การศึกษาผลิตภัณฑ์ทั่วไปของการเผาผลาญไนโตรเจน

งาน 60. การหาปริมาณไนโตรเจนตกค้างในเลือดโดยวิธีโฟโตคัลเลอร์ริเมทริก

งาน 61. การหาปริมาณยูเรียในเลือดและปัสสาวะ

งาน 62. การหาปริมาณครีเอทีนและครีเอตินีนโดยวิธีบราวน์

2. การศึกษาการแลกเปลี่ยนกรดนิวคลีอิกและนิวคลีโอไทด์

งาน 63. การกำหนดกิจกรรมของกรดดีออกซีไรโบนิวคลีเอส (dnCase) ในซีรัมในเลือดตาม A.A.

งาน 64. การหาปริมาณกรดยูริกในเลือดซีรั่มตามวิธีมุลเลอร์และไซเฟิร์ต

3. ศึกษาการเผาผลาญพอร์ไฟริน (รงควัตถุ)

งาน 65. การหาปริมาณบิลิรูบินและเศษส่วนในซีรัมในเลือดตาม Yendrashik, Cleghorn และ Grof

พยาธิวิทยาระดับโมเลกุล

1. การวินิจฉัยด่วนของพยาธิสภาพของการเผาผลาญกรดอะมิโน 66. การตรวจหา hyperaminoaciduria

งาน 67. วิธีด่วนในการวินิจฉัยฟีนิลคีโตนูเรีย

งาน 68. การวินิจฉัยไทโรซิโนซิส การทดสอบมิลลอนสำหรับไทโรซีน

งาน 69. การตรวจหา alkaptonuria โดยการทดสอบกรด homogentisic

งาน70

2. การวินิจฉัยด่วนของพยาธิสภาพของการเผาผลาญคาร์โบไฮเดรต งาน 71. การตรวจหาเพนโทซูเรียโดยการทดสอบ Bial

งาน 72. การตรวจหา fructosuria โดยการทดสอบของ Selivanov

งาน 73. การตรวจหา mucopolysaccharidoses โดยการทดสอบกับ toluidine blue สำหรับ mucopolysaccharides

งาน 74. การกำหนดเนื้อหาของ porphobilinogen ในปัสสาวะ

งาน 75. การกำหนดปริมาณของเนื้อหาของกรด delta-aminolevulinic ในปัสสาวะ

งาน 76

สารควบคุมการเผาผลาญ

1. งานศึกษาวิตามิน 77. ปฏิกิริยาเชิงคุณภาพต่อวิตามิน

งาน 78. การหาปริมาณไทอามีนและไรโบฟลาวินโดยวิธีฟลูออไรเมตริกในการเตรียมวิตามินรวม

งาน 79. การหาปริมาณกรดแอสคอร์บิกในพืชสมุนไพร

2. การศึกษาฮอร์โมน ผู้ไกล่เกลี่ยและสารเมตาโบไลต์ของพวกมัน

งาน 80. ปฏิกิริยาเชิงคุณภาพต่อฮอร์โมนโปรตีนเปปไทด์

งาน 81. ปฏิกิริยาเชิงคุณภาพต่อฮอร์โมน - อนุพันธ์ของกรดอะมิโน

งาน 82. ปฏิกิริยาเชิงคุณภาพต่อฮอร์โมนสเตียรอยด์และสารเมตาบอลิซึม

งาน 83. การควบคุมระดับอินซูลินและอะดรีนาลีนของกลูโคสในเลือดของสัตว์

งาน 84. การหาปริมาณฮีสตามีนในเลือดด้วย diazotized n-nitroaniline ตาม N.V. Klimkina และ S.I. Plitman

การศึกษาของเหลวชีวภาพ

1. การตรวจเลือดทางชีวเคมี งาน 85. การหาปริมาณฮีโมโกลบินในเลือดโดยการดูดกลืนแสง

งาน 86. การหาปริมาณเฮโมโกลบินของทารกในครรภ์ในเม็ดเลือดแดงของมนุษย์

งาน 87. การหาปริมาณเฮโมโกลบินไกลโคซิเลตในเม็ดเลือดแดงโดยวิธีโฟโตคัลเลอร์ริเมทริก

งาน 88. การหาความเข้มข้นของแฮปโตโกลบินในเลือดซีรั่มโดยวิธีโฟโตคัลเลอร์ริเมทริก

งาน 89

งาน 90. ​​การหาค่ากิจกรรมα-amylase ในซีรัมในเลือดโดยวิธี amyloclastic

งาน 91. การหาปริมาณแคลเซียมในเลือดซีรั่มโดยวิธี murexide

งาน 92. การทดสอบไทมอลตาม Huergo และ Popper

งาน 93. ปฏิกิริยาระเหิด - ตะกอน

งาน 94. การหาปริมาณธาตุเหล็กในเลือดซีรั่ม

2. การศึกษาทางชีวเคมีของปัสสาวะ

งาน 95. การศึกษาคุณสมบัติทางเคมีกายภาพของปัสสาวะ

งาน 96. การหาปริมาณคีโตนและกลูโคสในปัสสาวะ

งาน 97. การหาโปรตีนในปัสสาวะโดยวิธี Brandenberg-Roberts-Stolnikov

งาน 98. การกำหนดคุณภาพของตัวบ่งชี้ในปัสสาวะ

งาน 99. การตรวจหาสารสีบางชนิดในปัสสาวะ

เมแทบอลิซึมของซีโนไบโอติกส์

ศึกษากระบวนการออกซิเดชันและคอนจูเกตของซีโนไบโอติกส์ เวิร์ค 100 เปิดเผยกิจกรรมการหายใจของไมโครโซม

งาน 101. การศึกษาออกซิเดชัน n-demethylation ในไมโครโซมตับตาม Our

งาน 102. การกำหนดกิจกรรมไฮดรอกซีเลสของไมโครโซมตับตาม Kato และ Gilet

งาน 103

งาน 104. การกำหนดกิจกรรมของแอลกอฮอล์ดีไฮโดรจีเนสในเลือดซีรั่มตาม Shkursky et al.

งาน105

งาน 106. การตรวจหา acetylation (การปิดใช้งาน) ของ isonicotinic acid hydrazide (gink) ในร่างกาย

การศึกษาลิพิดเปอร์ออกซิเดชันของเยื่อหุ้มชีวภาพ

งาน 107. การกำหนดความไวของเม็ดเลือดแดงต่อการแตกของเม็ดเลือดแดงเปอร์ออกไซด์

งาน 108. การกำหนดอัตราของลิปิดเปอร์ออกซิเดชันในไบโอเมมเบรน

แอปพลิเคชัน

2.ตัวชี้วัดทางชีวเคมีของเลือดในเลือด

1. บรรทัดฐานทางคลินิกทั่วไป

2. การตรวจปัสสาวะพิเศษ

น้ำย่อยในกระเพาะอาหาร

2. บัฟเฟอร์ฟอสเฟต (0.1 ม., pH 5.8-8.0)

3. ทริสบัฟเฟอร์ (0.1 ม., pH 7.1-9.2)

4. อะซิเตทบัฟเฟอร์ (0.2 ม., pH 3.6-5.8)

5. บัฟเฟอร์ไกลซีน (0.05 ม., pH 8.6-10.6)

3. การเตรียมน้ำยาบางชนิด

สารบัญ

2. บัฟเฟอร์ฟอสเฟต (0.1 ม., pH 5.8-8.0)

นา 2 HPO 4 0.2 M, ml	นา 2 H 2 PO 4 0.2 M, ml

3. ทริสบัฟเฟอร์ (0.1 ม., pH 7.1-9.2)

ทริส-(ไฮดรอกซีเมทิล)อะมิโนมีเทน 24.2 กรัมละลายในขวดปริมาตร 1 ลิตร (ใน H 2 O 500 มล.) เพื่อให้ได้ค่า pH ที่ต้องการ จะมีการเติมปริมาตร 1 M HCl ที่ระบุในตาราง และปรับปริมาตรเป็น 1000 มล. ด้วยน้ำกลั่น

4. อะซิเตทบัฟเฟอร์ (0.2 ม., pH 3.6-5.8)

โซเดียมอะซิเตท 0.2 M, ml	กรดอะซิติก 0.2 M, ml		โซเดียมอะซิเตท 0.2 M, ml	กรดอะซิติก 0.2 M, ml

5. บัฟเฟอร์ไกลซีน (0.05 ม., pH 8.6-10.6)

ปริมาตรที่ระบุของไกลซีนและโซเดียมไฮดรอกไซด์จะถูกผสมและปรับปริมาตรด้วยน้ำกลั่นเป็น 200 มล.

	ไกลซีน 0.2 M, ml	NaOH 0.2 M, ml		ไกลซีน 0.2 M, ml	NaOH 0.2 M, ml

3. การเตรียมน้ำยาบางชนิด

โซลูชันการเปิดใช้งาน. กลูตาไธโอนลดลง 155 มก. และอัลบูมินผลึก 400 มก. วางในขวดปริมาตร 100 มล. ละลายในน้ำกลั่น 50 มล. และปรับ pH เป็น 8.2 โดยใช้สารละลาย NaOH 1 โมลาร์ จากนั้นเติมน้ำลงไปที่เครื่องหมาย

สารละลายแอมโมเนียของซิลเวอร์ไนเตรต. สารละลายแอมโมเนียเข้มข้นจะถูกเติมลงในสารละลายเงิน 2-3% จนกว่าตะกอนจะละลาย

อะซิเตทบัฟเฟอร์ pH 3.6. เตรียมโดยผสมสารละลาย A 463 มล. และสารละลาย B 37 มล. เจือจางด้วยน้ำในขวดปริมาตร 1 ลิตร สารละลาย A: เจือจางกรดอะซิติกน้ำแข็ง 11.55 มล. กับน้ำในขวดปริมาตร 1 ลิตร สารละลาย B: ละลายโซเดียมอะซิเตท 27.2 กรัมในน้ำในขวดขนาด 1 ลิตร

รีเอเจนต์บิวเรต (รีเอเจนต์ของเบเนดิกต์). โซเดียมซิเตรต 173 กรัมและโซเดียมคาร์บอเนต 100 กรัมละลายในน้ำกลั่น 300 มล. ในอ่างน้ำ คอปเปอร์ซัลเฟต 17.3 กรัมละลายในน้ำ 300 มล. สารละลายทั้งสองถูกระบายออกและปริมาตรทั้งหมดถูกนำไปที่ 1 ลิตร

สารละลายบัฟเฟอร์. Veronal 2.76 กรัมและ Medinal 2.06 กรัมละลายในน้ำกลั่น 1 ลิตร เก็บในตู้เย็น หากมีตะกอนปรากฏขึ้น สารละลายไม่เหมาะสำหรับการใช้งาน

การระงับถ่านหิน. ถ่านกัมมันต์ 0.25 กรัมใส่ในขวดปริมาตร 100 มล. และเจือจางด้วยบัฟเฟอร์อะซิเตท pH 3.6 เขย่าก่อนใช้.

ลดรีเอเจนต์. สารละลาย 1% ของกรดแอสคอร์บิกที่เตรียมด้วยสารละลายคอปเปอร์ซัลเฟต 0.016%

เฮโมโกลบิน, สารละลาย 4% ในบัฟเฟอร์อะซิเตท (pH 4.0). ขั้นแรก เตรียมสารละลายเฮโมโกลบิน 8% ในสารละลายยูเรีย 8 โมล/ลิตร เก็บไว้เป็นเวลา 2 ชั่วโมงในเทอร์โมสตัทที่ 60°C และเจือจาง 2 ครั้งด้วยบัฟเฟอร์อะซิเตตก่อนใช้งาน

Glycyl-glycine. 0.55 มิลลิโมล/ลิตร pH 8.3 ไกลซิล-ไกลซีน 3.63 กรัมใส่ในขวดปริมาตร 50 มล. เติมน้ำจนสุด (สารละลายบัฟเฟอร์)

น้ำยาปรับสภาพผิว

ไดอาโซรีเอเจนต์สำหรับการตรวจวัดบิลิรูบิน. เตรียมสองวิธีแก้ปัญหา วิธีแก้ปัญหาแรก: กรดซัลฟานิลิก 3 กรัมละลายในน้ำกลั่น 500 มล. เติมกรดไฮโดรคลอริกเข้มข้น 15 มล. (ในอ่างน้ำร้อน) ปริมาตรจะถูกปรับเป็น 1 ลิตรด้วยน้ำ สารละลายที่สอง: สารละลายโซเดียมไนไตรต์ในน้ำ 0.5% ก่อนใช้ ให้ผสมสารละลายแรก 5 มล. กับสารละลายที่สอง 0.25 มล.

ไดอะเซทิล น้ำยาทำงาน. ไดอะซิติล 1 มล. เจือจางด้วยน้ำกลั่นในขวดปริมาตร 100 มล. (สารละลายจะถูกเก็บไว้ในตู้เย็น) สารละลายในการทำงานของไดอะซิทิลเตรียมก่อนใช้งานโดยเติมน้ำกลั่น 24 มล. ลงในสารละลายสต็อกของไดอะซิทิล 1 มล.

รีเอเจนต์ไดฟีนิลลามีน. ไดฟีนิลลามีน 1 กรัมละลายในกรดอะซิติกน้ำแข็ง 100 มล. เติมกรดซัลฟิวริกเข้มข้น 2.75 มล. ลงในสารละลาย

โซลูชันการสอบเทียบ. พื้นฐาน - 0.75 มิลลิโมล/ลิตร ALA (100 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) ในแง่ของเบส: 0.00635 กรัมของ ALA ไฮโดรคลอไรด์ละลายในบัฟเฟอร์อะซิเตท pH 3.6 ในขวดปริมาตร 50 มล. เก็บในตู้เย็นได้ไม่เกินหนึ่งเดือน สารละลายสำหรับการสอบเทียบที่ใช้งานได้เตรียมจากสารละลายหลักคือ 1 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร เตรียมก่อนใช้โดยเจือจางสารละลายสต็อกด้วยบัฟเฟอร์อะซิเตท 100 ครั้ง

โซลูชันการสอบเทียบ. ไดไฮดรอกซีอะซีโตน 22.5 มก. ละลายในน้ำ 25 มล. พร้อมความร้อน 1 มล. ของสารละลายนี้ประกอบด้วยไดไฮดรอกซีอะซีโตน 10 ไมโครโมล สารละลายสอบเทียบของไดไฮดรอกซีอะซิโตนถูกเทลงในหลอดทดลองจำนวนหนึ่ง (ดูงาน) เติมจนครบปริมาตรที่ต้องการ จากนั้นปฏิกิริยาจะดำเนินการในลักษณะเดียวกับการพิจารณากิจกรรมของเอนไซม์

สารละลายสอบเทียบ (มาตรฐาน) ของเหล็ก (30 µmol/l).

เกลือโมราเตรียมไว้ก่อน

สารคาเฟอีน. คาเฟอีนบริสุทธิ์ 1 กรัม, โซเดียมเบนโซเอต 7.5 กรัม, โซเดียมอะซิเตท 12.5 กรัมละลายในน้ำกลั่น 90 มล., ให้ความร้อนถึง 50-60 องศาเซลเซียส, คนให้เข้ากัน, ทำให้เย็นลงและผสมน้ำกลั่นได้ถึง 100 มล.

แอมโมเนียมโมลิบเดตในกรดไนตริก. แอมโมเนียมโมลิบเดต 7.5 กรัมละลายในน้ำ 100 มล. และเติมกรดไนตริก 32% 100 มล.

ปัสสาวะสำหรับ alkaptonuria. ในกรณีที่ไม่มีพยาธิสภาพ ไฮโดรควิโนนจะถูกเติมในปัสสาวะปกติในอัตรา 20 กรัม/ลิตร

ปัสสาวะที่มี hyperaminoaciduria. ในกรณีที่ไม่มีไกลซีนทางพยาธิวิทยาจะถูกเติมในปัสสาวะปกติในอัตรา 1.0 กรัม/ลิตร

ปัสสาวะที่มีภาวะเยื่อบุโพรงมดลูกเจริญผิดที่. ในกรณีที่ไม่มีพยาธิสภาพ chonsuride หรือ heparin จะถูกเพิ่มในปัสสาวะปกติในอัตรา 0.05-0.1 g / l

ปัสสาวะกับเพนโทซูเรีย. ในกรณีที่ไม่มีพยาธิสภาพ ไซลูโลสหรือไรโบสจะถูกเติมลงในปัสสาวะในอัตรา 1.0 กรัม/ลิตร

ปัสสาวะที่มีไทโรซิโนซิส. ในกรณีที่ไม่มีพยาธิสภาพไทโรซีนจะถูกเติมในปัสสาวะปกติในอัตรา 0.4-0.5 g / l

ปัสสาวะกับฟรุกโตซูเรีย. ในกรณีที่ไม่มีพยาธิสภาพฟรุกโตสจะถูกเติมในปัสสาวะปกติในอัตรา 0.3-0.4 g / l

ปัสสาวะสำหรับ cystinuria. ในกรณีที่ไม่มี cystine ทางพยาธิวิทยาจะถูกเพิ่มในปัสสาวะปกติในอัตรา 0.4-0.5 g / l

โซเดียมอะซิเตต 3- สารละลายอิ่มตัวในน้ำ. โซเดียมอะซิเตท 3 น้ำ 375 กรัม (หรือเกลือปราศจากน้ำ 226 กรัม) ละลายในน้ำอุ่น 250 มล. ระบายความร้อนด้วยอุณหภูมิห้อง เก็บที่อุณหภูมิห้อง สารละลายควรไม่มีสีและโปร่งใส

โซเดียม ฟอสเฟต ถูกแทนที่ 0.25 โมล/ลิตร เตรียมโดยการละลาย 9.7 g Na 2 HPO 4 ∙12H 2 O หรือ 18 g Na 2 HPO 4 ∙12H 2 O ในน้ำในขวดขนาด 200 มล. เมื่อเติมสารละลายนี้ 2 มล. ลงในสารละลายกรดไตรคลอโรอะซิติก 1 มล. ค่า pH ควรอยู่ในช่วง 5.0-6.0

สารละลายสอบเทียบพื้นฐานของ Creatinine, 10 mmol/l. ครีเอตินิน 113.1 มก. ถูกปรับเป็น 100 มล. ด้วยสารละลายกรดไฮโดรคลอริก 0.1 โมล/ลิตร เมื่อสร้างกราฟการสอบเทียบ สารละลายที่ใช้งานได้จะถูกเตรียมจากสารละลายสต็อคโดยการเจือจางสารละลายสต็อคในน้ำ 100 ครั้ง สารละลาย 1 มล. มีครีเอตินีน 0.1 มิลลิโมล จากสิ่งนี้จะได้หลอดทดลองจำนวนหนึ่งที่มีความเข้มข้นของครีเอทีนที่สอดคล้องกัน

ส่วนผสมออกซิไดซ์สำหรับการหาไทอามีน. เติมโพแทสเซียม hexacyanoferrate (III) 1% โพแทสเซียม 1% (III) 8 มล. ของสารละลาย NaOH 30% 20 มล. ผสมให้เข้ากัน เตรียมความพร้อมก่อนใช้งาน

Orcine รีเอเจนต์. ออร์ซิน 1 กรัมเติมกรดไฮโดรคลอริก 30% 500 มล. (ความหนาแน่น 1.15 ก. / ซม. 3) คนจนละลายและเติมสารละลายเหล็กคลอไรด์ 10% (III) 10% 4-5 มล. FeCl 3 รีเอเจนต์ถูกเก็บไว้ในขวดสีเข้มที่ปิดสนิท

สารละลายสอบเทียบพื้นฐาน p-nitroaniline. p-nitroaniline 0.0829 กรัมวางในขวดปริมาตร 100 มล. เติมน้ำตามเครื่องหมายและละลาย

สารละลายตกตะกอน. ละลายแอมโมเนียมซัลเฟต 561 กรัมในน้ำกลั่น 1 ลิตรและกรองหลังจาก 24 ชั่วโมง

สารละลายบัฟเฟอร์ฟอสเฟตพื้นฐานและวิธีแก้ปัญหาหมายเลข 1-4. ละลาย NaOH 33.5 กรัมในน้ำ 400 มล. ในขวดปริมาตรที่มีความจุ 500 มล. และเติม KH 2 PO 4 226.8 กรัม เขย่าจนละลายหมด เทน้ำให้เย็นและเติมน้ำลงไป ในการเตรียมสารละลายในการทำงานของบัฟเฟอร์ฟอสเฟตพื้นฐาน ปริมาตรต่อไปนี้ของบัฟเฟอร์ฟอสเฟตพื้นฐาน (เป็นมล.) จะถูกวัดเป็นขวดปริมาตรที่มีความจุ 100 มล.: หมายเลข 1 - 92.51; หมายเลข 2 - 74.91; หมายเลข 3 - 59.18 และหมายเลข 4 - 48.68 หลังจากนั้นให้นำเนื้อหาไปทำเครื่องหมายด้วยน้ำ

กรดพิคริก สารละลายอิ่มตัว. กรดพิคริกสินค้าโภคภัณฑ์มีความชื้น 15-20% อย่าให้กรดแห้ง ระเบิด! ละลายกรดพิคริก 2 กรัมในน้ำ 100 มล. โดยให้ความร้อนในอ่างน้ำร้อน หลังจากนั้นให้ทิ้งสารละลายไว้ 24 ชั่วโมง กวนเป็นครั้งคราว จากนั้นจึงกรองสารละลาย สารละลายมีความเสถียรและเก็บไว้ในภาชนะแก้วสีเข้ม

บัฟเฟอร์ไพโรฟอสเฟต 0.05 โมลาร์ pH 8.2. ถ่ายโซเดียมไพโรฟอสเฟต 4.46 กรัมลงในขวดปริมาตร 200 มล. ละลายในน้ำประมาณ 100 มล. ปรับ pH ด้วยสารละลาย 0.1 M HCl เป็น 8.2 แล้วเติมน้ำกลั่นลงไป

บัฟเฟอร์ไพโรฟอสเฟต 0.1 โมลาร์ pH 8.5. ถ่ายโซเดียมไพโรฟอสเฟต 4.46 กรัมลงในขวดปริมาตรที่มีความจุ 100 มล. ละลายในน้ำ 50 มล. ปรับ pH ด้วยสารละลาย HCl 0.1 M เป็น 8.5 แล้วเติมน้ำกลั่นลงไป

น้ำยาทำงาน. เตรียมในวันที่กำหนดโดยผสมโซเดียมไฮดรอกไซด์ 0.3 N 30 ส่วน สารละลายฟีนอฟทาลีน 0.5% 2 ส่วน และสารละลายคอปเปอร์ซัลเฟต 0.12% 1 ส่วน

สารละลายอะซิโตน ไซยาโนไฮดริน. ละลายอะซิโตน ไซยาโนไฮดริน 1 หลอด (0.5 มล. - 0.47 กรัม จากชุดอุปกรณ์สำหรับการตรวจวัดฮีโมโกลบินในเลือด) ในน้ำกลั่น 1 ลิตร

สารละลายเฟอริอะซิโตน ไซยาโนไฮดริน. ละลายโพแทสเซียมเฟอริไซยาไนด์ 200 มก. และอะซิโตนไซยาโนไฮดริน 1 หลอด (0.5 มล. - 0.47 กรัม) ในน้ำกลั่น 1 ลิตร: สามารถใช้จากชุดรีเอเจนต์เพื่อเตรียมสารละลายเปลี่ยนรูปเพื่อตรวจหาฮีโมโกลบินในเลือด มีความเสถียรเป็นเวลาหลายเดือนเมื่อเก็บไว้ในภาชนะแก้วสีเข้มที่อุณหภูมิห้อง

สารละลายกลูออกซิเดส. มีประมาณ 300 หน่วย ใน 1 มก. เตรียมโดยละลายการเตรียมแห้งในปริมาณที่เหมาะสมในน้ำ 10 มล.

สารละลายซัลโฟเนต bato-phenanthroline. ในหลอดทดลอง เติมกรดคลอโรซัลโฟนิก 0.5 มล. ลงในบาโธฟีแนนโทรลีน 100 มก. ให้ความร้อนในอ่างน้ำเดือดเป็นเวลา 30 วินาที ระบายความร้อนด้วยน้ำและเติมน้ำที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้ว 10 มล. ให้ความร้อนอีกครั้งในอ่างน้ำเป็นเวลา 5 นาที ส่วนผสมถูกถ่ายโอนไปยังขวดขนาด 200 มล. เติมน้ำ 100 มล. ค่า pH ของสารละลายจะถูกปรับเป็น 4-5 N NaOH และเติมน้ำในปริมาตร 200 มล.

สารละลายไอโอดีนในโพแทสเซียมไอโอไดด์ (สารละลายของ Lugol). ละลายโพแทสเซียมไอโอไดด์ 20 กรัมและไอโอดีน 10 กรัมในน้ำกลั่น 100 มล. ก่อนใช้สารละลายจะเจือจาง 5 ครั้ง

สารละลายของ p-nitrosodimethylaniline (NDMA). การเตรียม NDMA ที่มีจำหน่ายในท้องตลาดจะตกผลึกใหม่จากเอทิลอีเทอร์ ในการวัดแอลกอฮอล์ดีไฮโดรจีเนส NDMA 1 มก. จะละลายในบัฟเฟอร์ไพโรฟอสเฟต 0.1 โมลาร์ 100 มล. (pH 8.5) สารละลายที่ได้จะถูกกรองผ่านกระดาษกรอง และสารกรองจะถูกเจือจาง 2 ครั้งด้วยบัฟเฟอร์เดียวกัน เก็บที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลาสองเดือน

รีเอเจนต์ของ Ilka. สำหรับอะซิติกแอนไฮไดรด์ 5 ส่วน (โดยปริมาตร) ให้เติมกรดอะซิติกน้ำแข็ง 1 ส่วน จากนั้นค่อยๆ เทกรดซัลฟิวริกเข้มข้น 1 ส่วนลงไป เก็บน้ำยาไว้ในที่เย็น!

รีเอเจนต์ Millon. (พร้อมกดดัน! ) ปรอท 40 กรัมละลายในกรดไนตริกเข้มข้น 57 มล. อันดับแรกในน้ำเย็น จากนั้นให้ความร้อนในอ่างน้ำ สารละลายที่ได้จะเจือจางด้วยน้ำ 2 ปริมาตร ปล่อยให้ตะกอนและระบายออกจากตะกอน เก็บในขวดแก้วสีเข้ม

แอมโมเนียมโมลิบเดตรีเอเจนต์. แอมโมเนียมโมลิบเดต 2.5 กรัมละลายในน้ำกลั่น 60 มล. กรองแล้ว เติมสารละลายลงในขวดขนาด 100 มล. ในขวดอีกใบหนึ่ง กรดซัลฟิวริกเข้มข้น 7.5 มล. จะถูกเติมลงในน้ำกลั่น 25 มล. สารละลายที่สองถูกเติมลงในสารละลายแรก ระบายความร้อนและเจือจางด้วยน้ำกลั่นที่เครื่องหมาย วิธีแก้ปัญหานี้เหมาะสำหรับหนึ่งเดือน

รีเอเจนต์ "NADI". สารละลาย 1% ของไดเมทิล-พี-ฟีนิลีนไดเอมีนผสมกับสารละลายแอลฟา-แนฟทอล 1% ในแอลกอฮอล์และสารละลายโซเดียมคาร์บอเนต 1.5% สารละลายมีสีน้ำตาลเข้มและไม่ควรมีโทนสีชมพู เตรียมตัวก่อนเรียน 1 ชม.

น้ำยานาชา. แอมโมเนียมอะซิเตท 15.4 กรัม, กรดอะซิติกน้ำแข็ง 0.3 กรัมและอะซิติลาซีโตน 0.2 กรัมลงในขวดที่มีความจุ 100 มล. ละลายในน้ำกลั่นและปรับปริมาตรให้เข้ากับเครื่องหมาย

น้ำยาของเนสเลอร์. ในขวดปริมาตรที่มีความจุ 500 มล. โพแทสเซียมไอโอไดด์ 150 กรัม ไอโอดีน 110 กรัม น้ำกลั่น 100 มล. และปรอทโลหะประมาณ 140-150 กรัม ผสมและเขย่าอย่างแรงเป็นเวลา 15 นาที ในกรณีนี้ สารละลายจะอุ่นขึ้นเองตามธรรมชาติ และสีที่เกิดจากไอโอดีนที่ละลายจะค่อยๆ เปลี่ยนเป็นสีซีด ส่วนผสมจะถูกทำให้เย็นลงใต้น้ำไหลจนกว่าจะมีสีแดงที่ชัดเจน หลังจากนั้นเนื้อหาจะถูกเขย่าจนสีแดงเปลี่ยนเป็นสีเขียว หลังจากการตกตะกอนของปรอทจะถูกล้างด้วยน้ำอย่างทั่วถึง รวมสารละลายและล้างแล้วเจือจางด้วยน้ำถึง 2 ลิตร นำสารละลายที่ได้ 75 มล. ลงในขวดปริมาตร 0.5 ลิตร บรรจุน้ำ 75 มล. และสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ 10% 350 มล. แล้วเจือจางด้วยน้ำจนเป็นรอย

รีเอเจนต์ของ Fehling. มีการเตรียมสารละลายสองแบบแยกกัน โซลูชันที่ 1: ละลายเกลือของ Rochelle 200 กรัมและ NaOH 150 กรัมในขวดปริมาตร 1 ลิตรแล้วเจือจางด้วยน้ำ โซลูชันที่ 2: ในขวดปริมาตรที่มีความจุ 1 ลิตร ละลายคอปเปอร์ (II) ซัลเฟต 40 กรัมในน้ำแล้วเจือจางด้วยน้ำจนสุด ผสมสารละลายเหล่านี้ในปริมาณที่เท่ากันก่อนใช้งาน

รีเอเจนต์ของโฟลิน. ในขวดขนาด 1 ลิตร ละลายโซเดียม tungstate 1 กรัมและกรดฟอสโฟโมลิบดิก 20 กรัมในน้ำ 750 มิลลิลิตร ปิดขวดด้วยจุกที่มีคอนเดนเซอร์ไหลย้อนและเปิดการไหลของน้ำในตู้เย็นเนื้อหาจะถูกต้มเป็นเวลา 10 ชั่วโมง จากนั้นนำไปแช่เย็น เทลงในขวดปริมาตร และปรับปริมาตรน้ำของตัวทำปฏิกิริยาเป็น 1 ลิตร

รีเอเจนต์ของ Erlich. p-dimethylaminobenzaldehyde 0.7 กรัมละลายในกรดไฮโดรคลอริกเข้มข้น 150 มล. เติมน้ำ 100 มล. แล้วผสม สารละลายควรไม่มีสีหรือสีเหลืองเล็กน้อย เก็บในภาชนะแก้วสีเข้ม รีเอเจนต์มีความเสถียร

รีเอเจนต์ของ Erlich. ละลาย p-dimethylaminobenzaldehyde 1 กรัมในขวดปริมาตร 50 มล. ในกรดอะซิติกน้ำแข็ง 35 มล. เติมกรดเปอร์คลอริก 57% 8 มล. และเติมกรดอะซิติกน้ำแข็ง เก็บในภาชนะแก้วสีเข้มในตู้เย็นนานถึงหนึ่งสัปดาห์

สารละลายไทมอลแอลกอฮอล์ (10%). ไทมอลบริสุทธิ์ 10 กรัม ละลายในเอทิลแอลกอฮอล์ 96˚ 100 มล. การรับไทมอลบริสุทธิ์จะดำเนินการดังนี้ ไทมอล 100 กรัมละลายในเอทิลแอลกอฮอล์ 96˚ 100 มล. กรองแล้ว เติมน้ำกลั่นเย็น 1 ลิตรลงในตัวกรอง เขย่าแรงๆ แล้วปล่อยทิ้งไว้ 20 นาที ตัวกรองถูกกรองและคริสตัลที่เหลืออยู่บนตัวกรองจะถูกล้างสองครั้งด้วยน้ำกลั่นเย็น เช็ดให้แห้งบนกระดาษกรองก่อน จากนั้นในเดซิกเคเตอร์เหนือแคลเซียมคลอไรด์ที่ปราศจากน้ำเป็นเวลา 2-3 วัน เพื่อให้ได้น้ำหนักคงที่

โซลูชันมาตรฐาน. การเตรียมสารละลายมาตรฐานดำเนินการโดยผสมสองสารละลาย: 1) 0.0962 n สารละลายแบเรียมคลอไรด์: 1.175 กรัมของผลึก BaCl 2 ∙2H 2 O ละลายในน้ำ 100 มล. ในขวดปริมาตร 2) สารละลายกรดซัลฟิวริก 0.2 N ถัดไปจะได้รับสารแขวนลอยของแบเรียมซัลเฟต: แบเรียมคลอไรด์ 0.0962 นิวตัน 3 มล. เทลงในขวดปริมาตร 100 มล. และปรับปริมาตรเป็น 0.2 นิวตันด้วยสารละลายกรดซัลฟิวริกที่อุณหภูมิ + 10 ° C (ที่อุณหภูมินี้ ขนาดอนุภาคของแบเรียมซัลเฟตตกตะกอนให้ผลลัพธ์ที่ค่อนข้างคงที่)

สารละลายบัฟเฟอร์พื้นผิว: เทน้ำ 10 มล. ลงในหลอดทดลอง เติม L-glutamyl-p-nitroaniline 0.028 g และโซเดียมคลอไรด์ 0.082 g และละลายเนื้อหาของหลอดทดลองในอ่างน้ำเดือดเป็นเวลา 60 วินาทีโดยไม่หยุดคน . จากนั้น สารละลายจะถูกทำให้เย็นลงถึง 37°C และเติมสารละลายบัฟเฟอร์ 2.5 มล. สารละลายซับสเตรตที่เตรียมไว้จะถูกเก็บไว้ในอ่างน้ำที่อุณหภูมิ 37°C ระหว่างการทำงาน สารละลายพื้นผิวที่ไม่ได้ใช้สามารถเก็บไว้ในตู้เย็นได้นานถึงหนึ่งสัปดาห์ สารตั้งต้นละลายได้ไม่ดีและตกตะกอนที่อุณหภูมิห้อง ดังนั้นก่อนใช้งานสารตั้งต้นที่ตกผลึกจะถูกละลายโดยให้ความร้อนในอ่างน้ำเดือด การทำความร้อนและการละลายของพื้นผิวสามารถทำซ้ำได้ไม่เกินสองครั้ง

สารละลายพื้นผิวสำหรับการกำหนด ALT (สารละลายที่ 1). ตัวอย่างกรด α-ketoglutaric 29.2 มก. และอะลานีน 1.78 กรัม (0.89 กรัมของ α-alanine) จะถูกชั่งน้ำหนักบนเครื่องชั่งเชิงวิเคราะห์และละลายในสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ 1 โมลาร์จนกว่าตะกอนจะละลายหมด (pH 7.4) สารละลายถูกเทลงในขวดขนาด 100 มล. และปรับปริมาตรให้เป็นเครื่องหมายด้วยบัฟเฟอร์ฟอสเฟต 0.1 โมลาร์ (pH 7.4) เติมคลอโรฟอร์ม 1 หยด สารละลายถูกเก็บไว้ในตู้เย็น

สารละลายพื้นผิวสำหรับการกำหนด AsAT (โซลูชันหมายเลข 2). ตัวอย่างกรด α-ketoglutaric 29.2 มก. และกรด α-aspartic 2.66 กรัม (1.33 กรัมของกรด α-aspartic) จะถูกชั่งน้ำหนักบนเครื่องชั่งเชิงวิเคราะห์ ถัดไป เตรียมสารละลายในลักษณะเดียวกับสารละลายหมายเลข 1

สารละลายของสารตั้งต้นสำหรับกำหนดกลูโคส ฟอสเฟต ไอโซเมอเรส. เตรียมสารละลายบัฟเฟอร์เมดินัลอะซิเตต pH 7.4 (โซเดียมอะซิเตท 9.714 กรัมและยาผสม 14.714 กรัมละลายในน้ำและปรับปริมาตรเป็น 500 มล.) ผสมสารละลายไดโซเดียม 0.03 M ของกลูโคส-6-ฟอสเฟต 8.33 มล. กับบัฟเฟอร์อะซิเตทตรงกลาง 25 มล. เพิ่มลงในส่วนผสม 25 มล. ของสารละลายกรดไฮโดรคลอริก 0.1 M และเจือจางด้วยน้ำ 100 มล. เก็บความเย็นไว้

สารละลายของสารตั้งต้นสำหรับการหาแลคเตท ดีไฮโดรจีเนส. ผสม 1 มิลลิลิตรของสารละลายโซเดียมแลคเตท 1 M, สารละลาย 9 M NaCl, 0.05 M Cl 2 , 10 ก./ลิตร สารละลาย NAD สารละลายบัฟเฟอร์บัฟเฟอร์ 0.5 โมลาร์ 2.5 มล. (pH 7.4) และสารละลายไนโตรเตตราโซเลียมสีน้ำเงิน 1 กรัม/ลิตร ถูกเติมเข้าไปในเนื้อหา ก่อนใช้งานให้เติมสารละลายฟีแนนซีนเมทาซัลเฟต 0.25 มล. ที่มีความเข้มข้น 1 กรัมต่อลิตรลงในส่วนผสม

สารละลายของสารตั้งต้นสำหรับการหาฟรุกโตส บิสฟอสเฟต อัลโดเลส. เกลือแบเรียม 270 มก. ของฟรุกโตสบิสฟอสเฟตละลายในกรดไฮโดรคลอริก 1 M 3.5 มล. เติมสารละลายโซเดียมซัลเฟต 14% 1 มล. และตะกอนที่เกิดขึ้นจะถูกลบออกโดยการหมุนเหวี่ยง เติมโซเดียมซัลเฟต 1 หยดลงในส่วนลอยเหนือตะกอน การปรากฏตัวของความขุ่นบ่งชี้ว่ามีการสะสมของแบเรียมไอออนไม่เพียงพอ ในกรณีนี้ จะมีการเติมโซเดียมซัลเฟตมากขึ้นและหมุนเหวี่ยงอีกครั้ง เครื่องหมุนเหวี่ยงถูกปรับด้วยสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ 3% เป็น pH 7.4-7.6 ถ่ายโอนไปยังขวดขนาด 25 มล. และปรับปริมาตรให้เข้ากับเครื่องหมาย สารละลายที่ได้จะผสมกับสารละลายไฮดราซีนคลอไรด์ 0.56 โมลาร์ 25 มล. กรดโมโนไอโอโดอะซิติก 25 มล. 25 มล. สารละลายโซเดียมคาร์บอเนต 0.5% และน้ำกลั่น 25 มล. เก็บไว้ในตู้เย็น

ไทมอล-เวโรนัลบัฟเฟอร์. ในขวดปริมาตร 100 มล. ผสมสารละลายบัฟเฟอร์ 80 มล. กับสารละลายไทมอล 10% แอลกอฮอล์ 10% 1 มล. เขย่าและเพิ่มสารละลายบัฟเฟอร์ไปที่เครื่องหมาย ค่า pH ควรเท่ากับ 7.55

น้ำยาโอ-โทลูอิดีน. ไธโอยูเรีย 0.15 กรัมละลายในกรดอะซิติกน้ำแข็ง 94 มล. และผสมกับโอโทลูอิดีนกลั่น 6 มล. เก็บไว้ในขวดสีเข้ม

ฟีนอลอิ่มตัวด้วยน้ำ. เติมน้ำ 35 มล. ลงในฟีนอลกลั่น 100 กรัมแล้วคนให้เข้ากัน ให้ความร้อนเล็กน้อยกับส่วนผสมเพื่อเร่งการละลายของฟีนอล

ฟีนอฟทาลีน โซลูชั่นการทำงาน. เตรียมโดยการละลายสาร 75 มก. ในสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ 0.1 นิวตัน 15 มล. สารละลายควรไม่มีสีหรือชมพูเล็กน้อย สารละลายสีไม่เหมาะสำหรับการทำงาน เพื่อเพิ่มความต้านทานของรีเอเจนต์นั้นจะมีการเติมไตรลอน 3 มก. ซึ่งโดยการจับเกลือของโลหะหนักจะป้องกันไม่ให้เกิดปฏิกิริยา autoxidation ของฟีนอฟทาลีนด้วยออกซิเจนในบรรยากาศ

ไฟบริน. ไฟบรินในเลือดจากวัวถูกล้างจากเม็ดสีเลือดในน้ำไหลเป็นเวลาหลายวันจนกว่าจะได้ก้อนสีขาว น้ำถูกบีบออกและไฟบรินซึ่งเต็มไปด้วยกลีเซอรีนถูกเก็บไว้ในขวดที่ปิดสนิท ก่อนใช้ไฟบรินจะถูกล้างจากกลีเซอรีน

รีเอเจนต์ฟอสฟอรัส-วานิลลิน. กรดฟอสฟอริกเข้มข้น 4 ส่วน (โดยปริมาตร) ผสมกับวานิลลิน 0.6% ในน้ำ 1 ส่วน รีเอเจนต์ถูกเก็บไว้ในภาชนะแก้วสีเข้มที่อุณหภูมิห้อง

ฟรุกโตส 1,6-bisphosphate, เกลือโซเดียม. 2.0 มล. ของสารละลายโซเดียม 10% ของฟรุกโตส-1,6-บิสฟอสเฟตเจือจางในขวดขนาด 25 มล. ด้วยน้ำเพื่อทำเครื่องหมาย มีความเสถียรเมื่อเก็บไว้ในตู้เย็น

รีเอเจนต์สีสำหรับยูเรีย. แท็บเล็ตจากชุดทดสอบสำหรับกำหนดยูเรียที่มีไดอะซิติลโมโนออกซิมและไธโอเซมิคาร์บาไซด์ถูกละลายโดยการให้ความร้อนในขวดขนาด 50 มล. สารละลายมีความเสถียรเป็นเวลาสามสัปดาห์ ก่อนใช้งาน ให้ผสมสารละลายที่เตรียมไว้ในปริมาตรเท่ากันกับสารละลายกรดซัลฟิวริก 9.6%

สารละลายอัลคาไลน์ของβ-กลีเซอโรฟอสเฟต. ในขวดปริมาตรที่มีความจุ 100 มล. เพิ่มโซเดียมกลีเซอโรฟอสเฟต 1 กรัมและเมดินัล 0.85 กรัมเติมน้ำกลั่นประมาณ 30 มล. ละลายและนำปริมาตรไปทำเครื่องหมายด้วยน้ำ ในขวดปริมาตรอีกอันที่มีความจุ 100 มล. เติมสารละลายβ-glycerophosphate 50 มล. สารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ 0.1 M ที่เตรียมไว้ 2.8 มล. และนำไปทำเครื่องหมายด้วยน้ำกลั่น (สารละลาย pH 8.6) วางโทลูอีนลงบนของเหลวประมาณ 3 มล. เก็บสารละลายในตู้เย็นไม่เกิน 10 วัน

เจาะเลือดเตรียม "สเมียร์" และ "หยดหนา"

การเคลื่อนไหวของแบคทีเรีย โครงสร้างของแฟลเจลลัม ความหนา ความยาว องค์ประกอบทางเคมี การเตรียมการเตรียมแบบตายตัวและการเตรียมเซลล์ที่มีชีวิตของจุลินทรีย์

รีเอเจนต์บริสุทธิ์ทางเคมีใช้เพื่อเตรียมสารละลายบัฟเฟอร์ และเกรดวิเคราะห์ที่จัดทำขึ้นเป็นพิเศษ รีเอเจนต์เตรียมดังนี้

โพแทสเซียม ฟอสเฟต monosubstituted, KH 2 PO 4 , น้ำหนักโมเลกุล 136.09. ละลายยา 100 กรัมเมื่อถูกความร้อนให้เดือดในน้ำ 150 มล. สารละลายถูกกรองด้วยความร้อน ด้วยการกวนอย่างต่อเนื่อง ตัวกรองจะถูกทำให้เย็นลงถึง 10 ºС จากนั้นเติมเอทิลแอลกอฮอล์ 150 มล. ผลึกที่แยกจากกันด้วยการกวนอย่างต่อเนื่องของตัวกรองจะถูกกรองบนกรวยดูดและตกผลึกอีกครั้งภายใต้สภาวะเดียวกัน คริสตัลจะถูกทำให้แห้งให้มีน้ำหนักคงที่ที่ 105...110 ºС ในที่ที่มีสารเตรียมที่มีเนื้อหาของสารหลักอยู่ในช่วง 99.9 ... 100.0% จะไม่มีการเตรียมสารเบื้องต้น

โซเดียมฟอสเฟตที่ถูกแทนที่, Na 2 HPO 4 12H 2 O, น้ำหนักโมเลกุล 358.12 มีสองวิธีในการเตรียมยา

ก) ยา 150 กรัมละลายในน้ำ 150 มล. เมื่อถูกความร้อนถึง 100 0 C สารละลายถูกกรองด้วยความร้อนและหลังจากการทำความเย็นผลึกที่ตกตะกอนจะถูกกรองออก การตกผลึกซ้ำโดยให้ความร้อนถึง 100 ºС การเตรียมการตกผลึกใหม่จะถูกให้ความร้อนในถ้วยพอร์ซเลนในอ่างน้ำด้วยการกวนอย่างต่อเนื่องจนกว่าการเตรียมจะแห้งสนิท เกลือที่ได้จะถูกทำให้แห้งในเดซิกเคเตอร์เหนือแคลเซียมคลอไรด์ที่หลอมรวมในระหว่างวัน ในการเตรียมการตกผลึกใหม่ (Na 2 HPO 4 ·2H 2 O) เนื้อหาของสารหลักจะถูกตรวจสอบ ในการทำเช่นนี้ยาประมาณ 0.5000 กรัมละลายในน้ำ 50 มล. เติมสารละลายโซเดียมคลอไรด์อิ่มตัว 2 ... 3 มล. และไตเตรทด้วยสารละลายกรดไฮโดรคลอริก 0.1 นิวตันต่อหน้าตัวบ่งชี้เมทิลเรด . หากจำเป็น ให้ปรับขนาดของตัวอย่าง 1 มล. ของกรดไฮโดรคลอริก 0.1 N ตรงกับ 0.0178 g ของ Na 2 HPO 4 2H 2 O

b) ยา 75 กรัมละลายในน้ำ 250 มล. ให้ความร้อนถึง 60 ºС สารละลายถูกกรองด้วยความร้อน ตัวกรองจะถูกทำให้เย็นลงด้วยการกวนอย่างต่อเนื่องถึง 10 ºС ผลึกที่ตกตะกอนจะถูกกรองบนกรวยดูดและตกผลึกอีกครั้งภายใต้สภาวะเดียวกัน เกลือที่ได้จะถูกทำให้แห้งครั้งแรกที่อุณหภูมิไม่เกิน 30 ºС เป็นเวลา 24 ชั่วโมง จากนั้นจึงทำให้แห้งในเตาอบที่ 50 ºС เป็นเวลา 3-4 ชั่วโมง และสุดท้ายที่อุณหภูมิ 120±5 ºС จนถึงน้ำหนักคงที่ ป้องกันไม่ให้เกลือ ละลาย หลังจากการอบแห้งเกลือมีองค์ประกอบ Na 2 HPO 4 .

หลังจากเตรียมรีเอเจนต์แล้ว สารละลายสต็อคของโพแทสเซียมฟอสเฟตโมโนแทนและโซเดียมฟอสเฟตที่ถูกแทนที่จะถูกเตรียม

ส่วนหนึ่งของโพแทสเซียมฟอสเฟตโมโนแทนที่ KH 2 PO 4 ที่ปราศจากน้ำที่มีน้ำหนัก 9.078 กรัมละลายในน้ำและปริมาตรของสารละลายจะถูกปรับเป็น 1 ลิตร เพื่อให้สารละลายมีความเสถียรให้เติมโทลูอีน 3-4 หยด

ส่วนหนึ่งของโซเดียมฟอสเฟตที่ถูกแทนที่ Na 2 HPO 4 12H 2 O ซึ่งมีน้ำหนัก 11.876 กรัมละลายในน้ำและปริมาตรของสารละลายจะถูกปรับเป็น 1 ลิตร เพื่อให้สารละลายมีความเสถียรให้เติมโทลูอีน 3-4 หยด

จากสารละลายตั้งต้นให้เตรียมสารละลายบัฟเฟอร์ฟอสเฟตที่มีค่า pH 4.94 ถึง 9.18 ตามตารางที่ก.2

ตารางที่ก.2 - สารละลายบัฟเฟอร์ฟอสเฟตที่มีค่า pH 4.94 ... 9.18

pH	สารละลาย Na 2 HPO 4 12H 2 O, ml	สารละลาย KH 2 PO 4, ml
4,94	1,0	99,0
5,29	2,5	97,5
5,59	5,0	95,0
5,91	10,0	90,0
6,24	20,0	80,0
6,47	30,0	70,0
6,64	40,0	60,0
6,81	50,0	50,0
6,98	60,0	40,0
7,17	70,0	30,0
7,38	80,0	20,0
7,73	90,0	10,0
8,04	95,0	5,0
8,34	97,5	2,5
8,67	99,0	1,0
9,18	100,0	0,0

วันที่เพิ่ม: 2015-08-06 | รับชม: 4058 |

ค่า pH ของสารละลายบัฟเฟอร์คำนวณตามสมการ Henderson-Hasselbach:

– สำหรับบัฟเฟอร์กรด สมการมีรูปแบบ

– สำหรับบัฟเฟอร์หลัก

สมการแสดงให้เห็นว่า pH ของสารละลายบัฟเฟอร์ขององค์ประกอบที่กำหนดถูกกำหนดโดยอัตราส่วนของความเข้มข้นของกรดและเกลือหรือเบสกับเกลือ ดังนั้นจึงไม่ขึ้นอยู่กับการเจือจาง เมื่อปริมาตรของสารละลายเปลี่ยนไป ความเข้มข้นของแต่ละองค์ประกอบจะเปลี่ยนตามจำนวนครั้งเท่ากัน

ความจุบัฟเฟอร์

ความสามารถของสารละลายบัฟเฟอร์ในการรักษาค่า pH ให้คงที่นั้นมีจำกัด เหล่านั้น. การเติมกรดหรือด่างโดยไม่ทำให้ pH ของสารละลายบัฟเฟอร์เปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสำคัญสามารถทำได้ในปริมาณที่จำกัดเท่านั้น

ค่าที่แสดงคุณลักษณะความสามารถของสารละลายบัฟเฟอร์ในการต่อต้านการเปลี่ยนแปลงในปฏิกิริยาของตัวกลางเมื่อเติมกรดและด่างเรียกว่าความจุบัฟเฟอร์ของสารละลาย (B)

ความจุบัฟเฟอร์วัดจากจำนวนโมลที่เทียบเท่ากันของกรดหรือเบสแก่ ซึ่งการเติมสารละลายบัฟเฟอร์ 1 ลิตรจะเปลี่ยน pH ไปหนึ่งค่า

ทางคณิตศาสตร์ ความจุบัฟเฟอร์ถูกกำหนดดังนี้:

B โดยกรด (mol/l หรือ mmol/l):

,

โดยที่ n(1/z HA) คือจำนวนโมลที่เทียบเท่ากับกรด pH 0 และ pH คือ pH ของสารละลายบัฟเฟอร์ก่อนและหลังการเติมกรด V B คือปริมาตรของสารละลายบัฟเฟอร์

ในด่าง (mol / l หรือ mmol / l):

,

โดยที่ n (1/z VOH) คือจำนวนโมลที่เทียบเท่ากับอัลคาไล การกำหนดส่วนที่เหลือจะเท่ากัน

ความจุบัฟเฟอร์ขึ้นอยู่กับปัจจัยหลายประการ:

1. จากธรรมชาติของสารเติมแต่งและส่วนประกอบของสารละลายบัฟเฟอร์ เพราะ สารบางชนิดสามารถก่อตัวเป็นสารประกอบหรือสารเชิงซ้อนที่ไม่ละลายน้ำ หรือให้ปฏิกิริยาที่ไม่พึงประสงค์อื่นๆ กับส่วนประกอบของระบบบัฟเฟอร์ จากนั้นแนวคิดของความจุบัฟเฟอร์ก็จะสูญเสียความหมายไป

2. จากความเข้มข้นเริ่มต้นของส่วนประกอบของระบบบัฟเฟอร์

ยิ่งจำนวนของส่วนประกอบของคู่กรด-เบสในสารละลายมากเท่าใด ความจุบัฟเฟอร์ของสารละลายนี้ก็จะยิ่งมากขึ้น

ขีด จำกัด ของอัตราส่วนความเข้มข้นของส่วนประกอบของสารละลายบัฟเฟอร์ซึ่งระบบยังคงคุณสมบัติไว้ ช่วง pH = pK ± 1 เรียกว่าโซนการทำงานของบัฟเฟอร์ของระบบ ซึ่งสอดคล้องกับช่วงของอัตราส่วนกับเกลือ /C ถึงคุณตั้งแต่ 1/10 ถึง 10/1

B ถึง (เลือด) \u003d 0.05 mol / l; B ถึง (พลาสมา) \u003d 0.03 mol / l; B ถึง (เลือดในซีรัม) = 0.025 mol / l

ระบบบัฟเฟอร์เลือด

โดยเฉพาะ สำคัญมากระบบบัฟเฟอร์อยู่ในการรักษาสมดุลของกรดเบสของสิ่งมีชีวิต ค่า pH ของของเหลวภายในเซลล์ส่วนใหญ่อยู่ในช่วง 6.8 ถึง 7.8

กรด - ความสมดุลพื้นฐานในเลือดมนุษย์นั้นมาจากระบบไฮโดรคาร์บอเนต ฟอสเฟต โปรตีน และระบบบัฟเฟอร์ของเฮโมโกลบิน ค่า pH ปกติของเลือดในพลาสมาคือ 7.40 ± 0.05

ระบบบัฟเฟอร์เฮโมโกลบินให้ความจุบัฟเฟอร์ 35% ของเลือด: . Oxyhemoglobin เป็นกรดที่แรงกว่าฮีโมโกลบินที่ลดลง Oxyhemoglobin มักจะอยู่ในรูปของเกลือโพแทสเซียม

ระบบบัฟเฟอร์คาร์บอเนต : อันดับแรกในแง่ของอำนาจ เป็นตัวแทน กรดคาร์บอนิก(H 2 CO 3) และโซเดียมหรือโพแทสเซียมไบคาร์บอเนต (NaHCO 3, KHCO 3) ในอัตราส่วน 1/20 บัฟเฟอร์ไบคาร์บอเนตใช้กันอย่างแพร่หลายในการแก้ไขการรบกวนของกรดเบสในร่างกาย

ระบบบัฟเฟอร์ฟอสเฟต . ไดไฮโดรฟอสเฟตมีคุณสมบัติ กรดอ่อนและโต้ตอบกับผลิตภัณฑ์ที่เป็นด่างที่เข้าสู่กระแสเลือด ไฮโดรฟอสเฟตมีคุณสมบัติเป็นด่างอ่อนและทำปฏิกิริยากับกรดที่แรงกว่า

ระบบบัฟเฟอร์โปรตีนมีบทบาทในการทำให้กรดเป็นกลางและด่างเนื่องจากคุณสมบัติของแอมโฟเทอริก: ในสภาพแวดล้อมที่เป็นกรด โปรตีนในพลาสมาจะมีพฤติกรรมเหมือนเบส ในสภาพแวดล้อมพื้นฐานที่พวกมันทำตัวเหมือนกรด:

ระบบบัฟเฟอร์ยังมีอยู่ในเนื้อเยื่อซึ่งช่วยรักษาค่า pH ของเนื้อเยื่อให้อยู่ในระดับที่ค่อนข้างคงที่ บัฟเฟอร์เนื้อเยื่อหลักคือโปรตีนและฟอสเฟต การรักษาค่า pH จะดำเนินการด้วยความช่วยเหลือของปอดและไต คาร์บอนไดออกไซด์ส่วนเกินจะถูกลบออกทางปอด ไตที่เป็นกรดจะหลั่งโซเดียมฟอสเฟต monobasic ที่เป็นกรดมากขึ้นและด้วย alkalosis - เกลือที่เป็นด่างมากขึ้น: โซเดียมฟอสเฟต dibasic และโซเดียมไบคาร์บอเนต

ตัวอย่างการแก้ปัญหา

วิธีการแก้:

เราคำนวณค่า pH ของสารละลายบัฟเฟอร์กรดโดยใช้สูตร จากนั้น

ตอบ: 5,76

วิธีการแก้:

เราคำนวณความจุบัฟเฟอร์โดยใช้สูตร:

ตอบ: 0.021 โมล/ลิตร

ตัวอย่างที่ 3

สารละลายบัฟเฟอร์ประกอบด้วย 100 มล. 0.1 โมล/ลิตร กรดอะซิติก และ 200 มล. 0.2 โมล/ลิตร โซเดียม อะซิเตต ค่า pH ของสารละลายนี้จะเปลี่ยนแปลงอย่างไรหากเติมสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ 0.2 โมลต่อลิตร 30 มล.

วิธีการแก้:

เราคำนวณค่า pH ของสารละลายบัฟเฟอร์โดยใช้สูตร:

เมื่อเติม NaOH ลงในสารละลายบัฟเฟอร์ ปริมาณเกลือจะเพิ่มขึ้นและปริมาณกรดในสารละลายบัฟเฟอร์ลดลง:

0,006 0,006 0,006

CH 3 COOH + NaOH \u003d CH 3 COONa + H 2 O

เราคำนวณ n (NaOH) \u003d 0.03 l 0.2 mol / l \u003d 0.006 mol ดังนั้นในสารละลายบัฟเฟอร์ปริมาณกรดจะลดลง 0.006 mol และปริมาณเกลือเพิ่มขึ้น 0.006 mol

เราคำนวณค่า pH ของสารละลายโดยใช้สูตร:

ดังนั้น: pH 2 - pH 1 = 5.82 - 5.3 = 0.52

ตอบ:การเปลี่ยนแปลง pH บัฟเฟอร์ = 0.52

งานสำหรับ การตัดสินใจที่เป็นอิสระ

4. ในการไตเตรทเลือด 2 มล. เพื่อเปลี่ยน pH จากค่าเริ่มต้น (7.36) เป็นค่าสุดท้าย (7.0) จำเป็นต้องเติมสารละลาย HCl 0.01 M 1.6 มล. คำนวณความจุบัฟเฟอร์กรด

5. ต้องเติมโซเดียมอะซิเตทกี่โมลในกรดอะซิติก 300 มล. เพื่อลดความเข้มข้นของไฮโดรเจนไอออน 300 เท่า (K dis (CH 3 coon) = 1.85.10 -5)

6. ในการศึกษาทางชีวเคมี ใช้บัฟเฟอร์ฟอสเฟตที่มีค่า pH = 7.4 ในอัตราส่วนใดควรผสมสารละลายโซเดียมไฮโดรเจนฟอสเฟตและโซเดียมไดไฮโดรเจนฟอสเฟตที่มีความเข้มข้น 0.1 โมลต่อลิตรเพื่อให้ได้สารละลายบัฟเฟอร์ดังกล่าว (pK (H 2 PO 4 -) \u003d 7.4)

7. การละเมิด CBS ใดที่มีตัวบ่งชี้ต่อไปนี้: ค่า pH ของเลือด = 7.20, Pco 2 = 38 mm Hg Art., BO = 30 mmol / l, SBO = -4 mmol / l. จะกำจัดการละเมิด KOS นี้ได้อย่างไร?

งานทดสอบ

บัฟเฟอร์ล้างฟอสเฟต Tween-20 สำหรับอิมมูโนฮิสโตเคมีเป็นเข้มข้น (20x) ซึ่งหลังจากการเจือจางแล้ว จะใช้ล้างสไลด์ของรีเอเจนต์และการจัดเก็บตัวอย่างอิมมูโนฮิสโตเคมีในระยะสั้นระหว่างขั้นตอนต่างๆ หลังจากการเจือจาง สารละลายพร้อมใช้ 0.01 M จะมี pH 7.4±0.1 การใช้น้ำเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟตนี้ไม่เพียงแต่ให้การล้างที่มีคุณภาพสูงเท่านั้น แต่ยังช่วยรักษาลักษณะทางสัณฐานวิทยาของแอนติบอดีที่ใช้และเอพิโทปของพวกมัน ซึ่งเอื้อต่อการจับจำเพาะที่จำเป็นสำหรับปฏิกิริยาอิมมูโนฮิสโตเคมี การเพิ่ม Tween-20 ลงใน PBS ช่วยส่งเสริมการซักที่มีประสิทธิภาพยิ่งขึ้นและป้องกันการย้อมสีที่ไม่เฉพาะเจาะจง

ข้อดีของเรา:

ขณะนี้เรากำลังร่วมมือกับผู้ผลิตสารเคมีในห้องปฏิบัติการชั้นนำจากต่างประเทศ ลูกค้าของเราเป็นทั้งสถาบันที่ไม่ใช่ของรัฐและของรัฐ รวมถึงองค์กรทางการแพทย์ในมอสโกและเมืองอื่นๆ ของรัสเซีย สำหรับลูกค้าประจำมีระบบส่วนลด