ફોસ્ફેટ બફર સોલ્યુશન. ફોસ્ફેટ બફર સોલ્યુશનની તૈયારી. કેટલાક રીએજન્ટ્સની તૈયારી
હેમેટોલોજીકલ અભ્યાસ માટે જૈવિક સામગ્રીના સંગ્રહ અને તૈયારી માટેની આવશ્યકતાઓ.
હેમેટોલોજીકલ અભ્યાસ માટે જૈવિક સામગ્રીના પરિવહન અને સંગ્રહ માટેની આવશ્યકતાઓ.
હિમોસ્ટેસિસ સિસ્ટમના અભ્યાસ માટે દિશાનું યોગ્ય ભરણ:
દર્દીનું પૂરું નામ, ઉંમર, લિંગ
સંશોધન માટે લોહીના નમૂના લેવાનો સમય
ક્લિનિકલ નિદાન (સંક્ષિપ્તમાં)
હિમેટોક્રિટ
હેમોરહેજિક સિન્ડ્રોમ (અનુનાસિક, ગર્ભાશય રક્તસ્રાવ, વગેરે), થ્રોમ્બોસિસ (સ્થાનિકીકરણ સૂચવે છે), આંચકો, બહુવિધ અંગ નિષ્ફળતા, ઇજા, લાંબા સમય સુધી કમ્પ્રેશન સિન્ડ્રોમ, બળે, વગેરે.
લેવામાં આવેલી દવાઓ સૂચવો જે હેમોસ્ટેસિસના પરિમાણોને અસર કરે છે, છેલ્લા વહીવટની માત્રા, પદ્ધતિ અને તારીખ સૂચવે છે.
નમૂના (રક્ત), આહાર અને વ્યાયામ પ્રતિબંધો માટે સમય અંતરાલ અવલોકન કરવામાં આવે છે:
સુનિશ્ચિત રક્ત નમૂના સવારે 7 થી 9 વાગ્યા સુધી હાથ ધરવામાં આવે છે, દર્દી આડા પડ્યા હોય અથવા બેઠા હોય. ગતિશીલતામાં હિમોસ્ટેસિસનો અભ્યાસ કરતી વખતે, શરીરની સમાન સ્થિતિમાં અગાઉના એક તરીકે લોહી લેવાનું ઇચ્છનીય છે.
છેલ્લા ભોજનના 12-14 કલાક પછી, ખાલી પેટ પર લોહી લેવામાં આવે છે.
લોહી લેતા પહેલા, દર્દીને 15 મિનિટ માટે આરામ કરવો તે ઇચ્છનીય છે.
અપવાદો:સિટો દ્વારા હિમોસ્ટેસિસનો અભ્યાસ, એપીટીટીનું મૂલ્યાંકન.
આયોજિત અભ્યાસની પૂર્વસંધ્યાએ (24 કલાકની અંદર), દર્દી નોંધપાત્ર શારીરિક શ્રમ, દારૂના સેવનથી દૂર રહે છે. તે ઇચ્છનીય છે કે દર્દી લોહીના નમૂના લેવાની પૂર્વસંધ્યાએ ચરબીયુક્ત ખોરાક ન ખાય.
સર્જિકલ હસ્તક્ષેપ કેટલાક દિવસોથી કેટલાક અઠવાડિયાના સમયગાળા માટે હિમોસ્ટેસિસમાં ફેરફાર તરફ દોરી જાય છે.
હિમોસ્ટેસિસને અસર કરતા પરિબળોમાં ઇન્જેક્શન, ઇન્ફ્યુઝન, ટ્રાન્સફ્યુઝન, પંચર, બાયોપ્સી, મસાજ, ડાયાલિસિસ, રેડિયોપેક એજન્ટોનો પરિચય, ઇમ્યુનોસિન્ટિઓગ્રાફી, આયનાઇઝિંગ રેડિયેશન, એન્ડોસ્કોપિક પરીક્ષા, વિશેષ આહારનો સમાવેશ થાય છે.
બ્લડ સેમ્પલિંગ માટેના નિયમો
લોહી પેરિફેરલ નસ (સામાન્ય રીતે ક્યુબિટલ) માંથી લેવામાં આવે છે.
વપરાયેલ એન્ટિકોએગ્યુલન્ટના આધારે વિશિષ્ટ રંગ માર્કિંગ સાથે ટેસ્ટ ટ્યુબમાં વેક્યૂમ સેમ્પલિંગ સિસ્ટમનો ઉપયોગ કરીને લોહીના નમૂના લેવામાં આવે છે ( સોડિયમ સાઇટ્રેટ 3.2%)ગુણોત્તરમાં: સોડિયમ સાઇટ્રેટનું 1 વોલ્યુમ અને લોહીના 9 વોલ્યુમ.
સંશોધન માટે પ્લેટલેટ સ્તરોટેસ્ટ ટ્યુબમાં લોહી લેવું EDTA સાથે(લીલાક કલર કોડિંગ). પ્લેટલેટ્સના સ્તરનો અભ્યાસ ક્લિનિકલ રક્ત પરીક્ષણની ગેરહાજરીમાં અથવા જ્યારે ક્લિનિકલ રક્ત પરીક્ષણમાં પ્લેટલેટ સ્તરના પેથોલોજીકલ મૂલ્યો મેળવવામાં આવે ત્યારે સૂચવવામાં આવે છે.
ટૂંકા ટૂર્નીકેટની મંજૂરી છે, 60 સેકંડથી વધુ નહીં. સોય નસમાં પ્રવેશ્યા પછી તરત જ ટૉર્નિકેટને દૂર કરો. કોગ્યુલેશન સિસ્ટમના અભ્યાસ માટે લોહીના નમૂના લેવા માટે, તે મહત્વનું છે કે તમે નસોને મસાજ કરી શકતા નથી, તેમના પર કઠણ કરી શકો છો.
0.7-1 મીમી (કદ 19-22) ના આંતરિક વ્યાસ સાથે રક્ત સંગ્રહની સોયનો ઉપયોગ કરો.
લોહીની તોફાની હિલચાલ અને તેના હવા (ફોમિંગ) સાથે મિશ્રણ દ્વારા પ્લેટલેટ્સ અને લોહી ગંઠાઈ જવાના પરિબળોના સક્રિયકરણને કારણે સિરીંજનો ઉપયોગ અસ્વીકાર્ય છે. વેક્યૂમ કન્ટેનરનો ઉપયોગ કરતી વખતે તેને બાકાત રાખવામાં આવે છે.
નસમાં સોય દાખલ કર્યા પછી, વેક્યૂમ કન્ટેનર જોડો, ગુરુત્વાકર્ષણ દ્વારા રક્ત કન્ટેનરમાં વહેવાનું શરૂ થશે.
કોગ્યુલોજિકલ પરીક્ષા માટે લોહી લો બીજુંટેસ્ટ ટ્યુબ, અન્ય અભ્યાસ માટે પ્રથમ ઉપયોગ, ઉદાહરણ તરીકે, બાયોકેમિકલ. જો કોગ્યુલેશન ટેસ્ટ ટ્યુબ પ્રથમ દોરવાની હોય, તો પ્રથમ 5 મિલી લોહીને ખાલી નળીમાં દોરો અને તેને કાઢી નાખો. ટીશ્યુ થ્રોમ્બોપ્લાસ્ટિનને નમૂનામાં પ્રવેશતા અટકાવે છે.
ભેગું કર્યા પછી તરત જ લોહીને એન્ટિકોએગ્યુલન્ટ સાથે ફીણ કર્યા વિના ધીમેધીમે મિક્સ કરો (ટ્યુબને 3-4 વખત ઊંધી કરો).
જૈવિક સામગ્રીના નમૂના લીધા પછી, લોહીના નમૂનાની તપાસ કરો. લોહીના નમૂનાઓની સચોટ ચકાસણી નીચેની ભૂલોને ટાળે છે: લોહી/સાઇટ્રેટ વોલ્યુમનો ખોટો ગુણોત્તર; આંશિક રીતે ગંઠાઈ ગયેલું લોહી.
રક્ત તેના સંગ્રહ પછી 45 મિનિટની અંદર પ્રયોગશાળામાં પહોંચાડવામાં આવે છે. પરિવહન દરમિયાન, લોહીને હલાવવું જોઈએ નહીં. 4°C થી નીચેના તાપમાને અને 30°C થી ઉપરના તાપમાને લોહીના નમૂનાઓ લઇ જવા જોઇએ નહીં.
પેરામેડિક-લેબોરેટરી આસિસ્ટન્ટ (મેડિકલ ટેક્નોલોજિસ્ટ) કરે છે:
વિતરિત રક્તનું ઇનપુટ નિયંત્રણ, જેમાં નીચેનાનો સમાવેશ થાય છે: 1) રેફરલ ફોર્મ ભરવાની સાચીતા તપાસવી. 2)ટ્યુબ પરના લેબલ અનુસાર વિતરિત રક્તના જથ્થાની પર્યાપ્તતા તપાસવી, 3) જ્યારે ટ્યુબ ધીમે ધીમે નમેલી હોય ત્યારે ગંઠાવાની ગેરહાજરી માટે નમૂનાની તપાસ કરવી.
પ્રાપ્ત કરવા માટે વિતરિત રક્તનું સેન્ટ્રીફ્યુગેશન:
પ્લેટલેટ સમૃદ્ધ પ્લાઝ્મા (સેન્ટ્રીફ્યુગેશન પરિમાણો: rpm = 1000 rpm (આશરે 150-200g), સેન્ટ્રીફ્યુગેશન સમય 5-7 મિનિટ.
શ્રેષ્ઠ કેન્દ્રત્યાગી સ્થિતિ પસંદ કરવા માટે, તેઓ કેન્દ્રત્યાગી બળ (જી) દ્વારા માર્ગદર્શન આપે છે. તમે સૂત્રનો ઉપયોગ કરી શકો છો:
g = 1.118 x 0.00001r x n2,
જ્યાં r એ સેન્ટ્રીફ્યુજની ત્રિજ્યા છે - સેન્ટ્રીફ્યુજ સીટમાં રોટરની ધરી અને ટેસ્ટ ટ્યુબના કેન્દ્ર વચ્ચેનું સેન્ટિમીટરનું અંતર; n એ પ્રતિ મિનિટ ક્રાંતિની સંખ્યા છે.
પ્લેટલેટ-નબળું પ્લાઝ્માસેન્ટ્રીફ્યુગેશન પેરામીટર્સ: rpm = ~2500-3000 rpm (લગભગ 1500-2000g), સેન્ટ્રીફ્યુગેશન સમય 10-20 મિનિટ. પ્લેટલેટના સંપૂર્ણ નિરાકરણ માટે, પુનરાવર્તિત સેન્ટ્રીફ્યુગેશન કરવામાં આવે છે, સેન્ટ્રીફ્યુગેશન પરિમાણો સમાન રહે છે.
3. સેન્ટ્રીફ્યુગેશન પછી, રંગ અને પારદર્શિતા માટે પ્લાઝ્મા તપાસે છે: હેમોલાઇઝ્ડ સેમ્પલ, આઇક્ટેરિક અથવા લિપેમિક (કાઇલસ) પ્લાઝ્મા પરીક્ષાને પાત્ર નથી.
સેન્ટ્રીફ્યુગેશન પછી, સુપરનેટન્ટ દૂર કરવામાં આવે છે.
ઇચ્છનીયદરમિયાન hemostasis પરિમાણો અભ્યાસ લોહીના નમૂના લેવાના 2 કલાક પછી, પરંતુ મંજૂરી માં કોગ્યુલોજિકલ પરિમાણોનો અભ્યાસ 4 કલાકની અંદર જો પ્લાઝ્મા એરિથ્રોસાઇટ્સ અને લ્યુકોસાઇટ્સના કાંપથી અલગ કરવામાં આવ્યું હોય.
જો જરૂરી હોય તો લાંબા ગાળાના સંગ્રહ"તાજા" નમૂનાઓ (રક્ત નમૂના લીધા પછી 2 કલાક પછી નહીં) પ્લેટલેટ મુક્ત પ્લાઝ્માએકવાર હોઈ શકે છે થીજી જવુંઅને -20°C પર 2 અઠવાડિયા સુધી અથવા -70°C પર 6 મહિના સુધી સ્ટોર કરો. પ્લાઝમાને ગરમ પાણી (+36°C) માં ઝડપથી ઓગળવું જોઈએ, સારી રીતે મિશ્રિત કરવું જોઈએ અને તરત જ તપાસવું જોઈએ. ઠંડું કર્યા પછી, APTT માં ફેરફાર શક્ય છે.
હેમેટોલોજિકલ અભ્યાસ માટે માઇક્રોપ્રિપેરેશન્સની તૈયારીની પદ્ધતિ, ફિક્સેશન અને સ્ટેનિંગની પદ્ધતિઓ.
હેમેટોલોજિકલ અભ્યાસ માટે લોહીના સ્મીયર્સ તૈયાર કરવાની પદ્ધતિ.
ચશ્માની તૈયારી અને પ્રક્રિયા. નિકિફોરોવ (96% ઇથિલ આલ્કોહોલ અને ઇથરના સમાન ભાગો) ના મિશ્રણમાં ડીગ્રેઝિંગ પછી નવા સ્વચ્છ ચશ્માનો ઉપયોગ કરી શકાય છે. વપરાયેલ ચશ્મા ગરમ સાબુના દ્રાવણમાં અથવા વોશિંગ પાવડર (5 લિટર પાણી દીઠ 1 ચમચી પાવડર) ના દ્રાવણમાં એક દિવસ માટે પલાળી રાખવામાં આવે છે. એક દિવસ પછી, સોલ્યુશન ડ્રેઇન કરવામાં આવે છે, ગ્લાસ વહેતા પાણીથી ધોવાઇ જાય છે. પછી તેને ફરીથી ગરમ સાબુવાળા સોલ્યુશન અથવા વોશિંગ પાવડરના સોલ્યુશન સાથે રેડવામાં આવે છે અને બોઇલમાં લાવવામાં આવે છે, તે જ દ્રાવણમાં 5-10 મિનિટ માટે ઉકાળવામાં આવે છે (ચશ્માને વાદળછાયું ટાળવા માટે વધુ નહીં). સોલ્યુશનને ઠંડુ કર્યા પછી, તે ફરીથી ડ્રેઇન કરવામાં આવે છે, સ્લાઇડ્સ વહેતા પાણીથી ધોવાઇ જાય છે, અને દરેક સ્લાઇડને વહેતા પાણી હેઠળ બ્રશથી ધોવાઇ જાય છે. આ રીતે સારવાર કરાયેલા ચશ્મા સૂકવવા માટે સ્વચ્છ શીટ પર નાખવામાં આવે છે. ડીગ્રેઝિંગ માટેના સ્વચ્છ ચશ્મા નિકિફોરોવ અથવા 96% ઇથિલ આલ્કોહોલના મિશ્રણમાં 60 મિનિટ માટે મૂકવામાં આવે છે, પછી તેને સૂકવીને લૂછીને પહોળા ગરદન સાથે સ્વચ્છ કન્ટેનરમાં સંગ્રહિત કરવામાં આવે છે. સ્વચ્છ ચશ્મા કાં તો ટ્વીઝર વડે અથવા બાજુની કિનારીઓ દ્વારા હાથ વડે લેવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે.
સ્મીયર્સ ની તૈયારી. લોહીનું એક નાનું ટીપું કાચની સળિયા (અથવા સીધી આંગળીના પ્રિક સાઇટ પરથી) વડે ટૂંકી બાજુની નજીક સૂકી તૈયાર કાચની સ્લાઇડ પર લાગુ કરવામાં આવે છે. ગ્લાસને આડી સ્થિતિમાં છોડી દો અને તેને 45°ના ખૂણા પર પકડીને સૂકા, સ્વચ્છ, ગ્રાઉન્ડ ગ્લાસ વડે ગ્લાસ પર લોહીને સ્મીયર કરો. ટૂંકી ધાર સાથે, બધા લોહી તેના પર ફેલાય ત્યાં સુધી રાહ જોયા પછી, તેઓ ઝડપથી કાચની સ્લાઇડ પર દોરવામાં આવે છે. ગ્લાસ સ્લાઇડ પર મજબૂત દબાણ ન હોવું જોઈએ, કારણ કે આ રક્ત કોશિકાઓને નુકસાન પહોંચાડી શકે છે. સ્મીયર્સ હવામાં સૂકવવામાં આવે છે અને ચિહ્નિત થાય છે (પ્રાધાન્ય એક સરળ પેન્સિલથી). સૂકવેલા સમીયર સમાનરૂપે પાતળું, પીળાશ રંગનું, પર્યાપ્ત કદનું, કાચની કિનારીઓથી 1.0-1.5 સે.મી.ના અંતરે સ્થિત હોવું જોઈએ, કાચની લગભગ સમગ્ર લંબાઈ પર કબજો કરે છે અને "પેનિકલ" સાથે સમાપ્ત થાય છે. જાડા (ઊંડા ગુલાબી) સ્મીયર્સનો ઉપયોગ થવો જોઈએ નહીં, કારણ કે તેમાં કોષની આકારવિજ્ઞાન પારખવી મુશ્કેલ છે.
સ્મીયર્સ તૈયાર કરવા માટે રચાયેલ અને વિવિધ કંપનીઓ દ્વારા ઉત્પાદિત સ્વચાલિત ઉપકરણોનો ઉપયોગ કરીને પ્રમાણભૂત ગુણવત્તાવાળા સ્મીયર્સ મેળવવામાં આવે છે.
લોહીના સ્મીયર્સનું ફિક્સેશન અને સ્ટેનિંગ. સ્ટેનિંગ પહેલાં, હેમોલિસિસને રોકવા માટે સામાન્ય રીતે લોહીના સ્મીયરને મિથાઈલ આલ્કોહોલમાં 5-10 મિનિટ માટે નિશ્ચિત કરવામાં આવે છે, જે પાણીમાં દ્રાવ્ય રંગ સાથે સ્ટેનિંગ પ્રક્રિયા દરમિયાન અથવા પાણીના અનુગામી સંપર્ક પર થઈ શકે છે. ફિક્સેશન તકનીકો સ્ટેનિંગ તકનીકો સાથે નીચે વર્ણવેલ છે. રાઈટ અને લીશમેન સ્ટેન માટે ફિક્સેશન જરૂરી નથી, કારણ કે આ સ્ટેનમાં મિથાઈલ આલ્કોહોલ હોય છે.
સૂકા સ્વેબને સૂકી, ગરમ જગ્યાએ 2 દિવસ સુધી સંગ્રહિત કરી શકાય છે; ફિક્સેશન વિના ગરમ, ભેજવાળા વાતાવરણમાં, તે ખૂબ ઓછા સંગ્રહિત થાય છે.
રક્ત કોશિકાઓ બેસોફિલિક અને એસિડોફિલિક રચનાઓ ધરાવે છે જે પ્રતિક્રિયા (pH) માં ભિન્ન હોય છે. ન્યુક્લી બેસોફિલિક અને ડાઘ વાદળી છે. ઉચ્ચ બેસોફિલિક (એસિડિક) બેસોફિલ ગ્રાન્યુલ્સ પણ વાદળી છે. હિમોગ્લોબિન (મૂળભૂત હોવાને કારણે) એસિડોફિલીલી રીતે ડાઘા પડે છે, એટલે કે લાલ. એસિડિક અને મૂળભૂત રંગોના મિશ્રણ સાથે સ્ટેનિંગને રોમનવોસ્કી સ્ટેનિંગ કહેવામાં આવે છે અને તેમાં વિવિધ ફેરફારો (પેપેનહાઇમ, રાઈટ, નોહટ, લીશમેન, ગિમ્સા, જેનર, વગેરે) છે. સામાન્ય રીતે મેથીલીન વાદળીનો ઉપયોગ મુખ્ય રંગ તરીકે થાય છે, પરંતુ ટોલુઇડિન વાદળીનો પણ ઉપયોગ થાય છે. એસિડ ડાઇ તરીકે, ઇઓસિન, એઝ્યુર I અને એઝ્યુર II નો ઉપયોગ થાય છે.
સારા સ્ટેનિંગ માટેના માપદંડ: એરિથ્રોસાઇટ્સનો ગુલાબી રંગ, ગુલાબી પૃષ્ઠભૂમિ પર ન્યુટ્રોફિલ્સના ગ્રેન્યુલારિટીના જાંબલી સ્ટેનિંગ, મોનોસાઇટ્સની હળવા એઝરોફિલિક ગ્રેન્યુલારિટી.
પેઇન્ટને પાતળું કરવા માટે, તટસ્થ તાજા નિસ્યંદિત પાણીનો ઉપયોગ કરવો શ્રેષ્ઠ છે. વાસી નિસ્યંદિત પાણી વાતાવરણમાંથી કાર્બન ડાયોક્સાઇડને પકડવાને કારણે એસિડિક બને છે. જો નિસ્યંદિત પાણી આલ્કલાઇન હોય, તો લાલ રક્ત કોશિકાઓ ગંદા વાદળી-લીલા રંગમાં ફેરવાય છે; લ્યુકોસાઈટ્સનો જે ભાગ વાદળી રંગનો હોવો જોઈએ તે જાંબુડિયા બની જાય છે, ઈઓસિનોફિલ ગ્રાન્યુલ્સ ગુલાબીને બદલે વાદળી અને લીલાશ પડતાં થઈ જાય છે, અને ન્યુટ્રોફિલ ગ્રાન્યુલ્સ જળવાઈ રહે છે. એસિડિક પાણીમાં, એરિથ્રોસાઇટ્સ તેજસ્વી નારંગી રંગના થાય છે, અને લ્યુકોસાઇટ ન્યુક્લી ખૂબ નિસ્તેજ હોય છે. આદર્શ 7.0 પીએચ સાથે નિસ્યંદિત પાણી છે, જે તેને સાચવવા માટે બફર કરવામાં આવે છે. તમે ઉપયોગ માટે તૈયાર બફર ગોળીઓનો ઉપયોગ કરી શકો છો જે નિસ્યંદિત પાણીમાં ઓગળવામાં આવે છે.
અસ્થિ મજ્જાના ડાઘ માટે, pH 7.4-7.5 સ્ટેન આદર્શ છે.
નોહટ અને પેપેનહેમ અનુસાર સ્ટેનિંગ પદ્ધતિઓ એકીકૃત તરીકે સ્વીકારવામાં આવે છે.
ફિક્સેશન માટે રીએજન્ટ્સ: 1) મિથાઈલ આલ્કોહોલ અથવા 2) મે-ગ્રુનવાલ્ડ ઇઓસિન-મેથીલીન બ્લુ સોલ્યુશન.
નોખ્ત અનુસાર સ્ટેનિંગ સ્મીયર્સ માટે રીએજન્ટ્સ: 1) એઝ્યુર Iનું મૂળભૂત સોલ્યુશન: 1 ગ્રામ પેઇન્ટ 1 લિટર નિસ્યંદિત પાણીમાં ઓગળવામાં આવે છે, ઓરડાના તાપમાને 12-14 દિવસ માટે ડાર્ક ગ્લાસ ડીશમાં છોડી દેવામાં આવે છે, ત્યારબાદ તેનો ઉપયોગ કરવામાં આવે છે; 2) પોટેશિયમ ઇઓસીનનું મૂળભૂત સોલ્યુશન: 1 ગ્રામ પેઇન્ટ 1 લિટર નિસ્યંદિત પાણીમાં ઓગળવામાં આવે છે, ઓરડાના તાપમાને 12-14 દિવસ માટે ડાર્ક ગ્લાસ કન્ટેનરમાં છોડી દેવામાં આવે છે, ત્યારબાદ તેનો ઉપયોગ થાય છે; 3) ફોસ્ફેટ બફર (વેઇઝ મિશ્રણ), pH 7.4-7.5: 0.49 ગ્રામ પોટેશિયમ ડાયહાઇડ્રોજન ફોસ્ફેટ (KH2PO4) અને 0.909 ગ્રામ સોડિયમ હાઇડ્રોજન ફોસ્ફેટ (Na2HPO4) મિક્સ કરો અને 1 લિટર પાણીમાં ઓગાળી લો; 4) એઝ્યુર-ઇઓસિનનું કાર્યકારી સોલ્યુશન: ઉપયોગ કરતા પહેલા, એઝ્યુર II ના સ્ટોક સોલ્યુશનના 25 મિલી, પોટેશિયમ ઇઓસિનના સ્ટોક સોલ્યુશનના 20 મિલી અને બફર સોલ્યુશનના 55 મિલી (રંગોનું પ્રમાણ અલગ અલગ હોઈ શકે છે, તે સ્થાપિત થાય છે) મિક્સ કરો. સ્ટોક સોલ્યુશનના તાજા બેચ તૈયાર કરતી વખતે અનુભવપૂર્વક).
પેપેનહેમ અનુસાર સ્ટેનિંગ સ્મીયર્સ માટે રીએજન્ટ્સ: 1) મે-ગ્રુનવાલ્ડ અનુસાર ઇઓસિન-મેથિલિન બ્લુનું સોલ્યુશન. તૈયાર ડાય સોલ્યુશનની ગેરહાજરીમાં, તે મિથાઈલ આલ્કોહોલના 1 લિટરમાં 1 ગ્રામ ડ્રાય પેઇન્ટ ઓગાળીને તૈયાર કરવામાં આવે છે; 2) નોખ્ત મુજબ એઝ્યુર-ઇઓસીનનું કાર્યકારી સોલ્યુશન.
સ્મીયર્સનું ફિક્સેશન. ફિક્સિંગ સોલ્યુશન ક્યુવેટમાં અથવા ગ્રાઉન્ડ સ્ટોપર સાથે પહોળા મુખવાળી વાનગીમાં રેડવામાં આવે છે. સ્મીયર્સ કન્ટેનરમાં મૂકવામાં આવે છે, જે ક્યુવેટમાં ડૂબી જાય છે અથવા 5-10 મિનિટ માટે વાનગીમાં એક પછી એક મૂકવામાં આવે છે. ચશ્મા સાથેના કન્ટેનરને ફિક્સિંગ સોલ્યુશનમાંથી દૂર કરવામાં આવે છે (અથવા ચશ્માને ટ્વીઝર વડે બહાર કાઢવામાં આવે છે અને સ્ટેન્ડમાં મૂકવામાં આવે છે) અને સંપૂર્ણપણે સૂકાય ત્યાં સુધી હવામાં છોડી દેવામાં આવે છે.
Nocht અનુસાર સ્ટેનિંગ. સુકા નિશ્ચિત સ્મીયર્સ, કન્ટેનરમાંથી દૂર કર્યા વિના, સખત રીતે નિર્ધારિત સમય (20-45 મિનિટ) માટે વર્કિંગ પેઇન્ટ સોલ્યુશન સાથે ક્યુવેટમાં મૂકવામાં આવે છે, જે પેઇન્ટના દરેક બેચ માટે પ્રયોગાત્મક રીતે પસંદ કરવામાં આવે છે. કન્ટેનર સાથે ક્યુવેટની ગેરહાજરીમાં, કાચને બે કાચની સળિયા ("રેલ") પર આડી રીતે સ્ટ્રોક સાથે ઉપરની તરફ મૂકવામાં આવે છે અને તેના પર 3-4 મિલી વર્કિંગ પેઇન્ટ સોલ્યુશન રેડવામાં આવે છે. ચશ્માવાળા કન્ટેનરને ડાઇ સાથે ક્યુવેટમાંથી બહાર કાઢવામાં આવે છે અને નળના પાણી સાથે ક્યુવેટમાં મૂકવામાં આવે છે (કંટેનરની ગેરહાજરીમાં, પેઇન્ટને કાચની સળિયામાંથી દૂર કર્યા વિના ચશ્માને પાણીથી ધોઈ નાખવામાં આવે છે). સ્મીયર્સ હવામાં સૂકવવામાં આવે છે.
પેપનહેમ કલરિંગ. ડ્રાય નોન-ફિક્સ્ડ બ્લડ સ્મીયર્સ કન્ટેનરમાં મૂકવામાં આવે છે અને મે-ગ્રુનવાલ્ડ સોલ્યુશન સાથે ક્યુવેટમાં 3-5 મિનિટ માટે નીચે કરવામાં આવે છે (અથવા 3-4 મિલી ડાઇને પીપેટ વડે બિન-નિશ્ચિત સ્મીયર પર રેડવામાં આવે છે). સ્મીયર્સ સાથેના કન્ટેનરને નિસ્યંદિત પાણીથી ક્યુવેટમાં ધોઈ નાખવામાં આવે છે, અને પછી 8-15 મિનિટ માટે નોખ્ત અનુસાર એઝ્યુર-ઇઓસિન પેઇન્ટ સાથે ક્યુવેટમાં મૂકવામાં આવે છે. "રેલ" પર મૂકેલી સ્લાઇડ્સમાં નિસ્યંદિત પાણી 1 મિનિટ માટે, રંગને ડ્રેઇન કર્યા વિના ઉમેરવામાં આવે છે, અને પછી પેઇન્ટને 8-15 મિનિટ માટે સ્મીયર પર રેડવામાં આવે છે, પછી પેઇન્ટ પાણીથી ધોવાઇ જાય છે. સ્મીયર્સ હવામાં સૂકવવામાં આવે છે.
રોમનવોસ્કી-ગિમ્સા અનુસાર રંગ. નોખ્ત મુજબ તે જ રીતે ઉત્પાદિત. રંગ તરીકે, તૈયાર રોમનવોસ્કી-ગિમ્સા સોલ્યુશનનો ઉપયોગ થાય છે, જે નિસ્યંદિત પાણીના 1 મિલી દીઠ રંગના 1 ટીપાંના દરે ઉપયોગ કરતા પહેલા પાતળું થાય છે. રંગના દરેક બેચ (25-40 મિનિટ) માટે રંગનો સમય પ્રયોગાત્મક રીતે સેટ કરવામાં આવે છે.
રાઈટ રંગ. રીએજન્ટ્સ. 0.2 ગ્રામ રાઈટના ડાઘ (સૂકા પાવડર, BDH/E. મર્ક) 100 મિલી મિથેનોલમાં ઓગળવામાં આવે છે અને કેટલાક દિવસો સુધી ઊભા રહેવા દે છે. જો એરિથ્રોસાઇટ્સ પર પૂરતા પ્રમાણમાં ડાઘ ન હોય, તો 0.25% અથવા 0.3% સોલ્યુશન તૈયાર કરો.
રંગ પ્રગતિ. સ્મીયર પર પેઇન્ટના થોડા (આશરે 8) ટીપાં નાખવામાં આવે છે, તેને 2-3 મિનિટ સુધી રહેવા દેવામાં આવે છે (ખાતરી કરો કે પેઇન્ટ સુકાઈ ન જાય), પછી સમીયર પર સમાન પ્રમાણમાં બફર કરેલ પાણી રેડવામાં આવે છે. જો પેઇન્ટ પરિપક્વ થઈ ગયો હોય, તો પાતળા પેઇન્ટની સપાટી પર મેટાલિક ચમક સાથે ફીણ અથવા ફિલ્મ દેખાશે. પાતળું પેઇન્ટ 2-3 મિનિટ માટે સમીયર પર છોડી દેવામાં આવે છે, અને પછી બફર સોલ્યુશન અથવા પાણીથી ધોવાઇ જાય છે. પેઇન્ટને સમીયરની સપાટી પર સ્થિર થવાની મંજૂરી આપવી જોઈએ નહીં. જો આવું થાય, તો સમીયરને 15-20 સેકન્ડ માટે અનડિલુટેડ પેઇન્ટથી અને પછી ફરીથી બફર સોલ્યુશન અથવા પાણીથી ભરવામાં આવે છે.
ફોસ્ફેટ બફરની તૈયારી.
ઉકેલ A (0.2 M KH2PO4): 1 લિટર નિસ્યંદિત પાણીમાં 27.2 ગ્રામ મીઠું ઓગાળો.
ઉકેલ B (0.2 M Na2HPO4): 1 લિટર નિસ્યંદિત પાણીમાં 35.6 ગ્રામ Na2HPO4 × 2H20 ઓગાળો.
ઇચ્છિત pH સાથે 100 મિલી બફર સોલ્યુશન મેળવવા માટે, દ્રાવણ A અને B કોષ્ટકમાં દર્શાવેલ માત્રામાં નાખવા જોઈએ. pH મૂલ્ય pH મીટર વડે તપાસવામાં આવે છે.
ફોસ્ફેટ બફર સોલ્યુશનની તૈયારી
|
ઉકેલ, મિલી |
pH મૂલ્ય |
||||||
લીશમેન રંગ. રીએજન્ટ્સ. લીશમેનનો 0.15 ગ્રામ ડ્રાય પેઇન્ટ 133 મિલી સંપૂર્ણ મિથાઈલ આલ્કોહોલમાં ઓગળી જાય છે. પેઇન્ટ સંપૂર્ણપણે ઓગળી જવું જોઈએ, પેઇન્ટ ક્રિસ્ટલ્સને મોર્ટારમાં અગાઉથી ગ્રાઇન્ડ કરવાની સલાહ આપવામાં આવે છે. પેઇન્ટને ગ્લાસ સ્ટોપર સાથે બોટલમાં સ્ટોર કરો, ફિલ્ટર કરશો નહીં.
રંગ પ્રગતિ. રાઈટ ડાઘની જેમ જ હાથ ધરવામાં આવે છે, પરંતુ બફર સોલ્યુશનના ડબલ મંદન સાથે. પેઇન્ટના થોડા ટીપાં (આશરે 8) સ્મીયર પર રેડવામાં આવે છે, 2 મિનિટ માટે રાખવામાં આવે છે. બફર સોલ્યુશનની બમણી માત્રા (16 ટીપાં) ઉમેરો, હલાવો અને 7-10 મિનિટ માટે છોડી દો. પેઇન્ટ 2-3 સેકન્ડમાં નિસ્યંદિત પાણીથી ધોવાઇ જાય છે. લાંબા સમય સુધી ધોવાથી, રંગ બગડે છે. સ્મીયર્સ હવામાં રેકમાં સૂકવવામાં આવે છે.
લોહીના જાડા ટીપાની તૈયારી. એક બીજાથી અમુક અંતરે ગ્લાસ સ્લાઇડ પર લગાવવામાં આવેલા લોહીના ત્રણ ટીપાંને સ્વચ્છ કાચની સ્લાઇડના ખૂણાથી લગભગ 1 સે.મી.ના વ્યાસ સુધી વિસ્તૃત કરવામાં આવે છે, જેને પેંસિલથી ચિહ્નિત કરવામાં આવે છે, પછી 1-2 કલાક માટે હવામાં સૂકવવામાં આવે છે.
લોહીના જાડા ટીપાને રંગ આપવો. લોહીના જાડા ટીપાં નિશ્ચિત નથી. સારી રીતે સૂકાયેલા જાડા ટીપાંવાળી કાચની સ્લાઇડ્સ એકબીજાથી અમુક અંતરે "રેલ" પર મૂકવામાં આવે છે, અને નોખ્ત અનુસાર એઝ્યુર-ઇઓસિનનું કાર્યકારી સોલ્યુશન તેમના પર 8-10 મિનિટ માટે રેડવામાં આવે છે. એરિથ્રોસાઇટ્સનું "લીચિંગ" છે. પછી પેઇન્ટ ડ્રેઇન કરવામાં આવે છે અને નોખ્ત અનુસાર એઝ્યુર-ઇઓસિનના કાર્યકારી દ્રાવણનો એક નવો ભાગ 30-35 મિનિટ માટે તૈયારીઓ પર રેડવામાં આવે છે. પછી સ્લાઇડ્સને નિસ્યંદિત પાણીથી કાળજીપૂર્વક ધોઈને સૂકવવામાં આવે છે.
સ્મીયર્સનું સ્વચાલિત સ્ટેનિંગ
હેમેટોલોજી લેબોરેટરીમાં સૌથી વધુ વિનંતી કરાયેલ કાર્યોમાંનું એક લોહીના સ્મીયર્સની તૈયારી અને સ્ટેનિંગ છે, તેથી તેને સ્વચાલિત કરવાના પ્રયાસો સ્વાભાવિક છે.
1990માં સિસ્મેક્સ (જાપાન) દ્વારા સૌપ્રથમ સ્વચાલિત સ્મીયર તૈયારી પ્રણાલી વિકસાવવામાં આવી હતી અને હાલમાં વિશ્વભરમાં 1600 થી વધુ સિસ્ટમો સ્થાપિત છે. આ સમયગાળા દરમિયાન સંચિત થયેલા વિશાળ અનુભવનો ઉપયોગ નવી પેઢીની સિસ્ટમના વિકાસમાં કરવામાં આવ્યો હતો - એક સંપૂર્ણ સ્વચાલિત SP-1000i સ્મીયર તૈયારી અને સ્ટેનિંગ સ્ટેશન જેની ક્ષમતા પ્રતિ કલાક 120 સ્મીયર છે. SP-1000i બુદ્ધિશાળી વેજ પદ્ધતિનો ઉપયોગ કરીને સ્મીયરની તૈયારીમાં ઉચ્ચ સ્તરના માનકીકરણ અને ગુણવત્તાની અનુભૂતિ કરે છે, જે વપરાશકર્તાને લાગુ કરાયેલા લોહીના નમૂનાની માત્રા, સ્મીયરિંગ બ્લેડનો કોણ, એપ્લિકેશનની ઝડપ અને રાહ જોવાનો સમય વ્યવસ્થિત કરવાની મંજૂરી આપે છે. પરીક્ષણ નમૂનાના હિમેટોક્રિટ પર, 8 થી 16 વિવિધ નિયમન સ્તરોનો ઉપયોગ કરીને. ખુલ્લી અથવા બંધ નળીઓમાંથી લોહીના નમૂના જાતે અથવા આપમેળે કરી શકાય છે. સિસ્મેક્સ ઓટોમેટેડ સ્મીયર તૈયારી અને સ્ટેનિંગ સ્ટેશન SP-1000i (જાપાન)
સિસ્ટમ સાત જેટલા લવચીક રીતે કસ્ટમાઇઝ કરી શકાય તેવા સ્ટેનિંગ પ્રોટોકોલનો ઉપયોગ કરે છે જે તમને સ્મીયર સ્ટેનિંગની ગુણવત્તાને પ્રમાણિત કરવા અને ઉચ્ચતમ આવશ્યકતાઓને પૂર્ણ કરવાની મંજૂરી આપે છે. ડબલ અને સિંગલ સ્ટેનિંગ માટે નીચેના પ્રોટોકોલનો ઉપયોગ કરી શકાય છે: મે-ગ્રુનવાલ્ડ-ગિમ્સા અનુસાર, રોમનવોસ્કી અનુસાર અને રોમનવોસ્કી-ગિમ્સા અનુસાર. સમર્પિત કેસેટ સિસ્ટમમાં બ્લડ સ્મીયર્સ ડાઘવાળા હોય છે જેમાં કેસેટ દીઠ માત્ર એક સ્લાઇડ હોય છે. આ પદ્ધતિ સાથે, બ્લડ સ્મીયર અને સ્ટેનિંગ રીએજન્ટ્સ વચ્ચે સારા સંબંધની ખાતરી આપવામાં આવે છે અને રીએજન્ટમાંથી હવામાં મિથેનોલનું બાષ્પીભવન થતું નથી. સ્ટેનિંગ પહેલાં સારા રક્ત ફિક્સેશનની ખાતરી કરવા માટે, મિથેનોલને સ્ટેનિંગ પ્રક્રિયામાં પ્રી-ફિક્સિંગ માટે એક અલગ પગલું એકીકૃત કરવામાં આવે છે.
સ્ટેનિંગ પ્રોટોકોલની લવચીકતાને લીધે, અસ્થિ મજ્જાના સ્ટેનિંગ માટે ચોક્કસ પ્રોટોકોલનો ઉપયોગ કરી શકાય છે.
હિમેટોલોજિકલ અભ્યાસ માટે અસ્થિ મજ્જા સ્મીયર્સ તૈયાર કરવાની પદ્ધતિ.
અસ્થિ મજ્જા પરીક્ષા - માયલોગ્રામ એ પ્રથમ પ્રશ્ન કે જેનો જવાબ અસ્થિ મજ્જાની પરીક્ષાએ આપવો જોઈએ તે કોષોનું માત્રાત્મક પાસું છે. તે જાણીતું છે કે પેરિફેરલ રક્તના સંબંધમાં, વિવિધ પ્રકારના કોષોની સંખ્યા અને ટકાવારી માટે સંખ્યાબંધ સંખ્યાત્મક મૂલ્યો નક્કી કરી શકાય છે, કારણ કે તે મુક્ત સ્થિતિમાં છે અને વેસ્ક્યુલર રક્તના સસ્પેન્શનમાં પ્રમાણમાં સમાનરૂપે વિતરિત થાય છે. . અસ્થિ મજ્જા વિશે એક સંપૂર્ણપણે અલગ વસ્તુ કહી શકાય: હિમેટોપોએટીક પેશીઓની રચના ખૂબ જ વિજાતીય છે અને અસ્થિ મજ્જાના કોષોનું વિતરણ સમાન નથી. આમ, સામાન્ય સ્થિતિમાં અને સમાન રોગના માળખામાં બંને રીતે, ચેમ્બરમાં માયલોકાર્યોસાઇટ્સની સીધી ગણતરી ખૂબ જ વિશાળ શ્રેણીમાં વધઘટ થાય છે. અમે વ્યક્તિઓમાં જે મૂલ્યો શોધીએ છીએ તે સામાન્ય રીતે 27,000 થી 112,000 પરમાણુ તત્વો પ્રતિ mm3 (Ursya) સુધીના હોય છે. 12,000 અને 300,000 પ્રતિ mm3 (કાર્ટરાઈટ, પેજ)ની મર્યાદા સાથે સાહિત્યના ડેટામાં વધુ વ્યાપકપણે વધઘટ થાય છે. સેન્ટ્રીફ્યુગેશન પછી, હેમેટોક્રિટ ટ્યુબમાં નીચેના 4 સ્તરો જોવા મળે છે: 1) ઉપલા ફેટી પીળા સ્તર; 2) પ્લાઝ્મા; 3) પરમાણુ કોષોમાંથી રચાયેલ ગ્રે-સફેદ સ્તર; 4) એરિથ્રોસાઇટ્સનું બનેલું લાલ પડ. ન્યુક્લિએટેડ કોષો (માયલોક્રિટ) ના ગ્રે-સફેદ સ્તરનું માપ મર્યાદિત મૂલ્યનું છે અથવા તો ભ્રામક પણ છે, કારણ કે સામાન્ય વ્યક્તિઓમાં જોવા મળતા મૂલ્યો પણ નોંધપાત્ર વધઘટ દર્શાવે છે. વધુમાં, પરમાણુ કોશિકાઓ માત્ર આ સ્તરમાં જ નહીં, પણ ચરબી અને એરિથ્રોસાઇટ સ્તરોમાં પણ જોવા મળે છે. પરંતુ સુપરનેટન્ટ પ્લાઝ્મા દૂર કર્યા પછી ગ્રે-વ્હાઇટીશ લેયરમાંથી બોન મેરો કોન્સન્ટ્રેટના સ્મીયર્સ તૈયાર કરી શકાય છે. તેઓ ડાયગ્નોસ્ટિક પ્રક્રિયામાં ઉપયોગી સાબિત થયા છે જ્યાં ડાયરેક્ટ સ્મીયર્સ કોષોમાં નબળા હોય છે. આપેલ છે કે માયલોકાર્યોસાઇટ ચેમ્બર ગણતરીઓ અને માયલોક્રિટ નિર્ધારણ મર્યાદિત પ્રજનનક્ષમતા સાથે માત્ર અંદાજિત પરિણામો પ્રદાન કરે છે, આ પરિમાણ પદ્ધતિઓ સંતોષકારક નથી. સક્શન પંચર દરમિયાન કાઢવામાં આવેલી સામગ્રી વિવિધ પ્રમાણમાં રક્ત સાથે મિશ્રિત અસ્થિ મજ્જાનો નમૂનો છે. રક્ત સાથે અસ્થિમજ્જાને મંદ કરવાની ડિગ્રી ઘણા પરિબળો પર આધારિત છે. 32P લેબલિંગ એ સાબિત કર્યું કે રક્ત સાથે એસ્પિરેટેડ બોન મેરોનું મંદન 40% થી 100% સુધીની છે. જો કે, એ નોંધવું જોઈએ કે નિદાન કરવા માટે અસ્થિમજ્જાનો અભ્યાસ મુખ્યત્વે સેલ્યુલર સામગ્રીના ગુણાત્મક અભ્યાસ પર આધારિત છે, અને માત્ર આ સામગ્રીના માત્રાત્મક મૂલ્યો પર. તેથી જ અસ્થિ મજ્જાના કોષોને નિર્ધારિત કરવા માટેની જથ્થાત્મક પદ્ધતિઓમાં સામાન્ય નમૂનાઓની તુલનામાં અસ્થિ મજ્જાની સેલ્યુલર રચનાના અર્ધ-માત્રાત્મક મૂલ્યાંકનનો સમાવેશ થાય છે, આના પર: a) કચડી ગઠ્ઠો સાથે સ્મીયર્સ; b) હિસ્ટોલોજીકલ વિભાગો. સમીયરનો અભ્યાસ મુખ્યત્વે શુષ્ક લેન્સ વડે, કેટલાક સ્મીયર્સ પર, નીચેના ધ્યેયો સાથે હાથ ધરવામાં આવે છે: a) અસ્થિ મજ્જાના કોષ સમૂહનું અર્ધ-માત્રાત્મક મૂલ્યાંકન; b) મેગાકાર્યોસાઇટ્સની હાજરી અને ઘનતાનું નિર્ધારણ; c) વિશાળ કોષો અથવા અસામાન્ય કોષોના માળખાઓની શોધ; ડી) નિમજ્જન દ્વારા સંશોધન માટે સૌથી યોગ્ય વિસ્તારોની ઓળખ. અસ્થિમજ્જાના કણોને કચડીને મેળવેલા સ્મીયર્સ પર, નીચેના ત્રણ કેન્દ્રિત ઝોનને અલગ પાડવામાં આવે છે: a) કેન્દ્રિય; b) બાહ્ય; c) મધ્યવર્તી. મધ્ય ઝોન ચરબી શૂન્યાવકાશ, સ્ટ્રોમલ કોષો, ગ્રાન્યુલોસાઇટ્સ અને અસંખ્ય નાશ પામેલા કોષો દ્વારા રચાય છે. બાહ્ય ઝોનમાં મોટી માત્રામાં લોહી હોય છે, જે અસ્થિ મજ્જાના કોષોને પાતળું કરે છે. પાતળા સ્મીયર્સની જેમ, તે માત્ર માયલોઇડ કોશિકાઓ અને એરિથ્રોસાઇટ્સની મોર્ફોલોજિકલ વિગતોના અભ્યાસમાં ફાળો આપે છે. સૌથી ગાઢ કોષ સમૂહ મધ્યવર્તી ઝોનમાં સ્થિત છે, જે શ્રેષ્ઠ અભ્યાસ માટે પરવાનગી આપે છે જે દર્શાવેલ તમામ પ્રશ્નોને સ્પષ્ટ કરી શકે છે. અહીં મજ્જાના કોષો સારી રીતે સચવાયેલા છે અને ટાપુઓ અથવા માળાઓમાં ગોઠવાયેલા છે, જેમ કે મજ્જામાં જોવા મળે છે. અસ્થિ મજ્જાની ટોપોગ્રાફી જાળવતી વખતે, આ ઝોનના અભ્યાસના પરિણામો વધુ એકરૂપ છે અને અસ્થિ મજ્જાની વાસ્તવિક સ્થિતિને અનુરૂપ છે, જે તેની હિસ્ટોલોજીકલ છબીઓ સાથે સરખામણી દ્વારા પુષ્ટિ મળે છે. કોષની ઘનતાના અર્ધ-માત્રાત્મક નિર્ધારણને આ રીતે દર્શાવવામાં આવે છે: a) સામાન્ય, b) સમૃદ્ધ અથવા c) સામાન્ય અસ્થિ મજ્જાની તુલનામાં દુર્બળ. સામાન્ય અથવા પુષ્કળ કોષ સમૂહની ઓળખ એ મૂલ્યવાન શોધ છે, જ્યારે અલ્પ અસ્થિમજ્જાને સાવધાની સાથે ધ્યાનમાં લેવું જોઈએ. વાસ્તવિક હાયપોપ્લાસિયાની હાજરી સાબિત કરવા માટે, ઘણી પ્લેટોની તપાસ કરવી જોઈએ, કેટલાક હાડકાના વિસ્તારોમાં પંચર અને / અથવા હાડકાની બાયોપ્સી કરવી જોઈએ. અસ્થિ મજ્જાના કોષ સમૂહ વિશેની સૌથી સચોટ માહિતી હિસ્ટોલોજીકલ વિભાગોની તપાસ કરીને મેળવવામાં આવે છે. પુખ્ત વયના લોકોમાં, ચરબી અને સક્રિય કોષ પેરેન્ચાઇમા દ્વારા કબજે કરેલી જગ્યાનો ગુણોત્તર સામાન્ય રીતે 1:1 અથવા 2:1 હોય છે. કેટલાક લેખકો અસ્થિ મજ્જાને હાઈપોસેલ્યુલર માને છે જ્યારે હિમેટોપોએટીક કોષો અસ્થિમજ્જાના ગઠ્ઠોના એક ક્વાર્ટર કરતા ઓછા ભાગ પર કબજો કરે છે. નિદાન કરવા માટે ગુણાત્મક અસ્થિ મજ્જાની પરીક્ષા જરૂરી છે. તે નિમજ્જન દ્વારા હાથ ધરવામાં આવે છે, બંને પાતળા સ્મીયર્સ પર અને, ખાસ કરીને, મધ્યવર્તી ઝોનમાંથી કચડી ગઠ્ઠો સાથે સ્મીયર્સ પર. સ્પષ્ટ રીતે વ્યાખ્યાયિત અને મોર્ફોલોજિકલ રીતે સારી રીતે સચવાયેલા કોષો સાથે શ્રેષ્ઠ યોગ્ય રીતે ખેંચાયેલા અને ડાઘવાળા સ્મીયર્સની પસંદગીની ભલામણ કરવામાં આવે છે. આ અભ્યાસ રૂપરેખા આપે છે: a) વિવિધ પ્રકારના માયલોઇડ કોષોની ઓળખ; b) દરેક કોષ પંક્તિની પરિપક્વતાની ડિગ્રીનું નિર્ધારણ; c) ગ્રાન્યુલોસાઇટ્સ અને એરિથ્રોબ્લાસ્ટ્સ (G/E) વચ્ચેના સંબંધની સ્પષ્ટતા; ડી) મિટોસિસ તબક્કામાં કોષોની ઓળખ; e) અસાધારણ કોષોનું વર્ણન. કેટલાક સ્મીયર્સની તપાસ કર્યા પછી, ક્યાં તો વિગતવાર વર્ણનાત્મક "માયલોગ્રામ" સંકલિત કરવામાં આવે છે (સ્મીયર્સને ડિસિફર કર્યા પછી કરવામાં આવેલા તારણો સમાવે છે), અથવા ઓછામાં ઓછા 300-500 તત્વો દ્વારા સ્થાપિત ટકાવારીની દ્રષ્ટિએ માયલોગ્રામ. ટકાવારી માયલોગ્રામને કમ્પાઇલ કરવાની બે રીતો છે: 1) 100 ગ્રાન્યુલોસાઇટ્સને બાકીની સેલ પંક્તિઓ સોંપવી; 2) અસ્થિ મજ્જાના કોષોની કુલ સંખ્યામાંથી દરેક પ્રકારના કોષોનું ટકાવારી પ્રદર્શન. આંકડાકીય દૃષ્ટિકોણથી, પછીની પદ્ધતિ વધુ સાચી લાગે છે અને દેખીતી રીતે અસ્થિમજ્જાની સેલ્યુલર રચનાનું વાસ્તવિક ચિત્ર પ્રતિબિંબિત કરે છે. વ્યક્તિગત લેખકો દ્વારા સ્થાપિત સૂત્રો નોંધપાત્ર રીતે અલગ પડે છે, કારણ કે અસ્થિ મજ્જા જેવા વિજાતીય પેશીઓમાં વાસ્તવિક સરેરાશ મૂલ્યો નક્કી કરવાનું મુશ્કેલ છે. ટેબલ બતાવે છે, વિન્ટ્રોબ અનુસાર, 12 સામાન્ય વ્યક્તિઓમાંથી પસંદ કરેલ અસ્થિ મજ્જાના નમૂનાઓના અભ્યાસના પરિણામો. સામાન્ય માયલોગ્રામ
માયલોગ્રામ પરિમાણો સરેરાશ મૂલ્ય (%) વધઘટની શ્રેણી (%)
જાળીદાર કોષો 0.9 0.1-1.6 અભેદ વિસ્ફોટો 0.6 0.1-1.1 માયલોબ્લાસ્ટ 1.0 0.2-1.7
પ્રોમીલોસાઇટ્સ 2.5 1.0-4.1
માયલોસાઇટ્સ ન્યુટ્રોફિલ્સ 9.6 7.0-12.2 મેટામીલોસાઇટ્સ ન્યુટ્રોફિલ્સ 11.5 8.0-15.0 સ્ટેબ ન્યુટ્રોફિલ્સ 18.2 12.8-23.7 સેગ્મેન્ટેડ ન્યુટ્રોફિલ્સ 18.6 13.1-24.1 કુલ ન્યુટ્રોફિલ કોષો 60.8 52.7-68.9ઇઓસિનોફિલિક માયલોસાઇટ્સ 0.1 0.0-0.2 ઇઓસિનોફિલિક મેટામીલોસાઇટ્સ 0.2 0.1-0.4 ઇઓસિનોફિલ્સ 2.8 0.4-5.2
ઇઓસિનોફિલિક શ્રેણીના કુલ કોષો 3.2 0.5-5.8બેસોફિલિક માયલોસાઇટ્સ 0.1 0-0.3
બેસોફિલ્સ 0.1 0-0.3
બેસોફિલિક શ્રેણીના કુલ કોષો 0.2 0-0.5લિમ્ફોબ્લાસ્ટ્સ 0.1 0-0.2
પ્રોલિમ્ફોસાયટ્સ 0.1 0-0.2
લિમ્ફોસાઇટ્સ 8.8 4.3-13.3
કુલ લિમ્ફોઇડ કોષો 9.0 4.3-13.7મોનોબ્લાસ્ટ્સ 0.1 0-0.2
મોનોસાઇટ્સ 1.9 0.7-3.1
પ્લાઝમાબ્લાસ્ટ્સ 0.1 0-0.2
પ્રોપ્લાસ્મોસાયટ્સ 0.1 0.1-0.2
પ્લાઝ્મા કોષો 0.9 0.1-1.8
એરિથ્રોબ્લાસ્ટ્સ 0.6 0.2-1.1
બેસોફિલિક નોર્મોબ્લાસ્ટ્સ 3.6 1.4-5.8 પોલીક્રોમેટોફિલિક નોર્મોબ્લાસ્ટ્સ 12.9 8.9-16.9 ઓક્સિફિલિક નોર્મોબ્લાસ્ટ્સ 3.2 0.8-5.6
કુલ એરિથ્રોઇડ કોષો 20.5 14.5-26.5મેગાકાર્યોસાઇટ્સ 0.4 0.2-0.6
તંદુરસ્ત લોકો પરના અમારા અભ્યાસ મુજબ, પરિણામો નીચે મુજબ છે:
સંખ્યાબંધ ગ્રાન્યુલોસાઇટ્સ 56-70%,
એરિથ્રોબ્લાસ્ટિક શ્રેણી 23-30%, લિમ્ફોપ્લાઝમાસીટીક શ્રેણી 5-10%, મોનોસાયટો-મેક્રોફેજ શ્રેણી 1-2% અને મેગાકેરીયોસાઇટ શ્રેણી 0.1-0.8% (ઉર્સ્યા). સામાન્ય માયલોઇડ પંક્તિઓના પ્રમાણમાં ફેરફાર અથવા અસામાન્ય કોષો સાથે તેમની બદલી ઘણીવાર રોગનો પ્રકાર સૂચવે છે. જાળીદાર કોષો ઓછી વાર દેખાય છે અને વધુમાં, નાની સંખ્યામાં. આકસ્મિક રીતે, સ્મીયર્સ (અથવા અસ્થિ મજ્જાની છાપ) ઓસ્ટિઓબ્લાસ્ટ્સ અને/અથવા ઓસ્ટિઓક્લાસ્ટ દર્શાવે છે, જેને નિયોપ્લાસ્ટિક કોષો માટે ભૂલથી ન સમજવી જોઈએ. બાળકોમાં તેમની હાજરી વધુ વખત જોવા મળે છે, પ્રાથમિક માયલોફિબ્રોસિસવાળા પુખ્ત વયના લોકોમાં અથવા બીજી રીતે, કાર્સિનોમેટસ મેટાસ્ટેસિસ પછી, તીવ્ર લ્યુકેમિયા, ઑસ્ટિયોપોરોસિસ વગેરે સાથે. G/E ગુણોત્તર એરિથ્રોબ્લાસ્ટ્સની સંખ્યા દ્વારા ગ્રાન્યુલોસાઇટ્સને વિભાજિત કરીને મેળવવામાં આવે છે. સામાન્ય પુખ્ત વયના લોકોમાં, આ ગુણોત્તર સરેરાશ 3/1 અથવા 4/1 છે, જેની મર્યાદા 2/1 (જ્યારે માત્ર અપરિપક્વ ગ્રાન્યુલોસાઇટ્સનો સમાવેશ થાય છે) અને 5/1 (જ્યારે તે તમામ ગ્રાન્યુલોસાઇટ્સ - પરિપક્વ અને અપરિપક્વ) ની અનુમાનિત છે. H/E ગુણોત્તર વય સાથે વધઘટ થાય છે: જન્મ સમયે તે નાનું હોય છે (1.8/1), 2 અઠવાડિયાની ઉંમરે તે 11/1 સુધી વધે છે, પછી ધીમે ધીમે ઘટે છે, અને એક વર્ષના બાળકોમાં તે મૂલ્યો સુધી પહોંચે છે. પુખ્ત વ્યક્તિનું. H/E ગુણોત્તર વૈશ્વિક અસ્થિ મજ્જાના હાયપો- અથવા હાયપરપ્લાસિયાના કિસ્સામાં સામાન્ય છે, તેમજ વ્યક્તિગત કોષોના પ્રસારમાં કે જે આ ગુણોત્તરની ગણતરીમાં શામેલ નથી, ઉદાહરણ તરીકે, પ્લાઝમાસીટોમામાં. લ્યુકેમિયા, લ્યુકોમા જેવી પ્રતિક્રિયાઓ અને એરિથ્રોબ્લાસ્ટોપેનિઆસમાં, ગુણોત્તર ઊંચું હોય છે, જ્યારે એરિથ્રોબ્લાસ્ટિક હાયપરપ્લાસિયાવાળા એનિમિયામાં, તે ઓછું અથવા વિપરીત (મેગાલોબ્લાસ્ટિક, હેમોલિટીક એનિમિયા) હોય છે. સ્મીયર્સનો અભ્યાસ કર્યા પછી મેળવેલ માયલોગ્રામ ડેટા જારી કરતા પહેલા, તે સ્પષ્ટ કરવું જરૂરી છે: a) પંચર સાઇટ; b) અસ્થિ ઘનતા; c) જે શરતો હેઠળ સક્શન થયું હતું; ડી) પસંદ કરેલ સામગ્રીનું મેક્રોસ્કોપિક પાસું. અસ્થિ મજ્જાની પરીક્ષા એ અસંખ્ય અને વૈવિધ્યસભર ડેટાના એકીકરણ પર આધારિત જટિલ પ્રક્રિયા છે. તેનું પરિણામ સામાન્ય નિષ્કર્ષને પ્રતિબિંબિત કરવું જોઈએ, જે વ્યક્તિગત આંકડાઓની યાંત્રિક નોંધણી કરતાં અનુમાન પર આધારિત છે, જે વધુમાં, વધઘટ થાય છે. કોઈપણ માયલોગ્રામના નિષ્કર્ષમાં અસ્થિમજ્જાના અભ્યાસથી ઉદ્ભવતા વધારાના અભ્યાસ માટેના નિદાન અથવા સંકેતો સ્પષ્ટ કરવા જોઈએ. લોહીના રોગોમાં, સક્શન પંચર 80% કેસોમાં ગઠ્ઠો સાથે સ્મીયર્સ અને વિભાગોની મદદથી નિદાનને સ્પષ્ટ કરવામાં મદદ કરે છે. અન્ય કિસ્સાઓમાં, અસ્થિ બાયોપ્સી અને અસ્થિ મજ્જાની હિસ્ટોલોજીકલ પરીક્ષા સૂચવવામાં આવે છે. બાયોઓપ્ટિકલ પસંદગી અને હિસ્ટોલોજીકલ પરીક્ષા આ માટે જરૂરી લાગે છે: a) પ્રાથમિક અથવા ગૌણ માયલોફિબ્રોસિસ; b) અસ્થિ મજ્જા એપ્લેસિયા અથવા હાયપોપ્લાસિયા; c) ગ્રાન્યુલોમેટસ પ્રકારના જખમ સાથે થતા રોગો (દા.ત. , ગોડકિન રોગ, સરકોઇડોસિસ, ટ્યુબરક્યુલોસિસ, વગેરે); ડી) કાર્સિનોમેટસ મેટાસ્ટેસિસ; e) બધા કિસ્સાઓમાં જ્યારે પંચર દ્વારા પસંદ કરાયેલ સામગ્રી અસંતોષકારક હોય અથવા અસ્થિ મજ્જાનું પાસું ખાતરીકારક ન હોય. બાયોઓપ્ટિકલ સેમ્પલિંગ પછી, સાયટોલોજિકલ પરીક્ષા માટે છાપ તૈયાર કરવામાં આવે છે, કારણ કે હિસ્ટોલોજિકલ વિભાગો હિમેટોપોએટીક કોશિકાઓની માળખાકીય વિગતો વિશે થોડી માહિતી પ્રદાન કરે છે જે ગીચ છે, વિખેરાયેલા નથી અને પ્રમાણિત નથી. વધુમાં, ફિક્સેશન સેલ રિટ્રેક્શનનું કારણ બને છે અને હિસ્ટોલોજીકલ સ્ટેનિંગ સાયટોલોજિકલ સ્ટેનિંગ કરતાં ઓછું પસંદગીયુક્ત છે. તેથી જ અસ્થિ મજ્જાની સંપૂર્ણ તપાસમાં અભ્યાસના વિભાગો પર સાયટોલોજિકલ - સ્મીયર્સ અથવા છાપ પર અને હિસ્ટોલોજીકલ - બંનેનો સમાવેશ થાય છે. તે યાદ રાખવું આવશ્યક છે કે અસ્થિ મજ્જાની તપાસની સાયટોલોજિકલ અને હિસ્ટોલોજીકલ પદ્ધતિઓ બાકાત નથી, પરંતુ, તેનાથી વિપરીત, પૂરક છે: બાયોપ્સી એક માત્રાત્મક અને આર્કિટેક્ચરલ પદ્ધતિ છે, જ્યારે માયલોગ્રામ એ ગુણાત્મક અને સાયટોલોજિકલ પદ્ધતિ છે.
ગોર્યાવ ચેમ્બરમાં રક્ત કોશિકાઓની ગણતરી કરવાની પદ્ધતિ.
|
ગોર્યાયેવની ચેમ્બર - પ્રવાહીના આપેલ વોલ્યુમમાં કોષોની સંખ્યા ગણવા માટે રચાયેલ ઉપકરણ. તેનો ઉપયોગ સામાન્ય રીતે લોહીના નમૂનામાં બનેલા તત્વોની સંખ્યા નક્કી કરવા માટે થાય છે. ચેમ્બર્સમાં જાડા કાચની સ્લાઇડ હોય છે જેમાં ટ્રાંસવર્સ સ્લોટ લગાવવામાં આવે છે, જે ત્રણ ટ્રાંસવર્સલી ગોઠવાયેલા સપાટ વિસ્તારો બનાવે છે. મધ્યમ પ્લેટફોર્મને રેખાંશ સ્લોટ દ્વારા બે ભાગમાં વિભાજિત કરવામાં આવે છે, જેમાંના દરેક પર એક ગ્રીડ કોતરેલી છે. ગોર્યાયેવ ચેમ્બરમાં મધ્યમ પ્લેટફોર્મની બંને બાજુઓ પર મધ્યના કરતા 0.1 મીમી (ફુચ્સ-રોસેન્થલ ચેમ્બર 0.2 મીમી) ઉંચા બે અન્ય છે. આ સાઇટ્સના વિમાનો કહેવાતા ન્યૂટોનિયન રિંગ્સ દેખાય ત્યાં સુધી કવરસ્લિપને ગ્રાઇન્ડ કરવા માટે સેવા આપે છે. કવર ગ્લાસને ઘસ્યા પછી, એક ચેમ્બર બનાવવામાં આવે છે, બે બાજુઓ પર બંધ થાય છે, અને અન્ય બે પર ગાબડા (કેપિલરી સ્પેસ) હોય છે જેના દ્વારા ચેમ્બર ભરાય છે. ગ્રીડ સિદ્ધાંત સમાન છે. તેઓ એક અથવા બીજી સંખ્યામાં ચોરસમાં વહેંચાયેલા છે, વિવિધ રીતે જૂથબદ્ધ છે. તમામ ગ્રીડમાં એક સ્થિર મૂલ્ય કહેવાતા "નાના ચોરસ" છે, જેની બાજુ 1/20 મીમી છે, તેથી, તેનો વિસ્તાર 1/400 મીમી 2 છે. ગોર્યાવ કેમેરાનો ઉપયોગ કરીને, માઇક્રોસ્કોપનું વિસ્તરણ નક્કી કરવું પણ શક્ય છે. બાહ્ય રીતે, તે પારદર્શક સમાંતર (કાચની સ્લાઇડ) છે, જેમાં ગ્રુવ્સ અને માઇક્રોસ્કોપિક ગ્રીડ લાગુ પડે છે. ગ્રીડ સેલના નાના વિભાગોના પરિમાણો 0.05 mm છે, અને મોટા વિભાગો 0.2 mm છે. આ કિસ્સામાં, ગ્રીડ બે અડીને આવેલા પ્લેટફોર્મ કરતાં 0.1 મીમી નીચા સ્થિત પ્લેટફોર્મ (કાચના વિભાગ) પર લાગુ થાય છે. આ વિસ્તારોનો ઉપયોગ કવરસ્લિપને લેપ કરવા માટે થાય છે. પરિણામે, ગોરીયેવ ગ્રીડના મોટા વિભાગો દ્વારા રચાયેલા ચોરસની ઉપરના પ્રવાહીનું પ્રમાણ 0.004 માઇક્રોલિટર છે. મોટા ચોરસ પર કોષોની સંખ્યાની ગણતરી કરીને, તમે સૂત્રનો ઉપયોગ કરીને સસ્પેન્શનમાં આપેલ સેલ પ્રકારની ઘનતાની ગણતરી કરી શકો છો: કોષોની સંખ્યા/ml = મોટા ચોરસ * 2.5 10^5 ઉપરના કોષોની સંખ્યા ગોર્યાયેવ કેમેરાનો એક પ્રકારનો ધોરણ તરીકે ઉપયોગ કરીને, તમે સૂત્ર દ્વારા માઇક્રોસ્કોપનું વિસ્તરણ નક્કી કરી શકો છો: Kg=(m2-m1)/(a*N) જ્યાં કિલો ગ્રામમાઇક્રોસ્કોપનું વિસ્તરણ છે; m 1 - ગોર્યાવ ચેમ્બરના કોષની ડાબી સરહદની સ્થિતિ; m 2 - કોષ અથવા કોષોના જૂથની જમણી સરહદની સ્થિતિ; એન- માપેલી સીમાઓ વચ્ચેના કોષોની સંખ્યા; a- ગોર્યાવ ચેમ્બરનું કોષનું કદ (0.05 મીમી જેટલું). ગોર્યાવ ચેમ્બરનો ઉપયોગ સંસ્કૃતિમાં કોષોની સંખ્યાની ગણતરી કરવા માટે પણ થાય છે. ગોર્યાવ ચેમ્બરમાં રક્ત કોશિકાઓની ગણતરી માટેનું સૂત્ર છે - x = (a 400 c) / b, જ્યાં x એ 1 mm3 માં આકારના ઘટકોની ઇચ્છિત સંખ્યા છે; a - ચેમ્બરના ચોક્કસ જથ્થામાં ગણવામાં આવતા આકારના તત્વોનો સરવાળો; b - ગણેલા નાના ચોરસની સંખ્યા; c - લોહીનું મંદન. |
|
ગોર્યાવ ચેમ્બરમાં oocysts ગણવા માટેની પદ્ધતિ. આ પદ્ધતિનો ઉપયોગ સામાન્ય રીતે પ્રાયોગિક રીતે પ્રાણીઓને oocysts (સસ્પેન્શનના મિલીલીટરની યોગ્ય માત્રાને પ્રાણીમાં ઇન્જેક્ટ કરવામાં આવે છે) સાથે ચેપ લગાડવામાં આવે છે. ગોર્યાયેવ ચેમ્બરમાં oocysts ધરાવતું 1 મિલી સસ્પેન્શન મૂકવામાં આવે છે. ગોર્યાયેવ ચેમ્બરનું પ્રમાણ 0.9 m3 હોવાથી, ગણતરી કરેલ oocysts ની સંખ્યા 1111 વડે ગુણાકાર કરવામાં આવે છે. પરિણામી સંખ્યા 1 cm3 દ્રાવણમાં oocysts ની સંખ્યા માટે પર્યાપ્ત છે. વધુ સચોટ નિર્ધારણ માટે, ગણતરીઓ ઓછામાં ઓછી ત્રણ વખત હાથ ધરવી જોઈએ, અને પછી અંકગણિત સરેરાશ મૂલ્ય મેળવવું જોઈએ. ચેપ માટે જરૂરી oocysts ની સંખ્યા ગ્રેજ્યુએટેડ પીપેટનો ઉપયોગ કરીને માપવામાં આવે છે. ઇન્ક્યુબેશન માધ્યમમાં oocystsના વધુ સમાન વિતરણ માટે, ટ્યુબની સામગ્રીને વારંવાર હલાવવાની જરૂર છે. |
|
ગોર્યાવ ચેમ્બરમાં એરિથ્રોસાઇટની ગણતરી સિદ્ધાંત. લોહીની ચોક્કસ રકમ પ્રવાહીની ચોક્કસ માત્રામાં સમાનરૂપે મિશ્રિત થાય છે અને જાણીતા વોલ્યુમ સાથે ચેમ્બરમાં મૂકવામાં આવે છે જેમાં લોહીનું સસ્પેન્શન એક સ્તરમાં વહેંચવામાં આવે છે. ચેમ્બરના તળિયે ગ્રાફ કરવામાં આવે છે, જે એરિથ્રોસાઇટ્સની ચોક્કસ ગણતરી કરવાનું શક્ય બનાવે છે. રીએજન્ટ્સ: 0.9% સોડિયમ ક્લોરાઇડ સોલ્યુશન. ખાસ સાધનો: માઈક્રોસ્કોપ, ગોર્યાયેવનો કેમેરા, લેબોરેટરી ટેસ્ટ ટ્યુબ અથવા સેલીના હેમોમીટરમાંથી રુધિરકેશિકા. વ્યાખ્યા પ્રગતિ. શુષ્ક, સ્વચ્છ ટેસ્ટ ટ્યુબમાં 0.9% સોડિયમ ક્લોરાઇડ સોલ્યુશનનું 8 મિલી અને લોહી 0.02 મિલી ઉમેરો. પીપેટની ટોચ પ્રાથમિક રીતે સાફ કરવામાં આવે છે, લોહીને ટ્યુબના તળિયે ફૂંકવામાં આવે છે, અને પ્રવાહીના ઉપલા સ્તરથી પાઇપેટને સંપૂર્ણપણે ધોવાઇ જાય છે. ટ્યુબ વેલની સામગ્રીને મિક્સ કરો. 1:400 નું લોહી પાતળું થાય છે, એટલે કે, લોહી 400 વખત પાતળું થાય છે. લોહીના ઘટ્ટ થવા સાથે, તેને 500, 600, 700, 800 વખત પાતળું કરવાની સલાહ આપવામાં આવે છે. ચેમ્બર અને કવરસ્લિપને ધોઈને સૂકી સાફ કરવી જોઈએ. કવરસ્લિપને ચેમ્બરની સામે ઘસવામાં આવે છે જેથી કરીને બહુરંગી રિંગ્સ દેખાય. ટેસ્ટ ટ્યુબમાંથી પાતળું લોહીનું એક ટીપું લો અને તેની સાથે ચેમ્બર ભરો, તેને કવરસ્લિપની ધાર પર લાગુ કરો. એરિથ્રોસાઇટ્સની ગણતરી 1 મિનિટ પછી ચેમ્બરને નીચા મેગ્નિફિકેશન માઇક્રોસ્કોપ (x8 ઉદ્દેશ્ય, x10 અથવા x15 આઇપીસ) હેઠળ કરવામાં આવે છે. ઢંકાયેલ ડાયાફ્રેમ અથવા નીચું કન્ડેન્સર (દૃશ્યના અંધારાવાળા ક્ષેત્રમાં). એરિથ્રોસાઇટ્સ ત્રાંસા ગોઠવાયેલા પાંચ મોટા (અથવા 80 નાના) ચોરસમાં ગણવામાં આવે છે. નાના ચોરસની અંદર પડેલા એરિથ્રોસાઇટ્સ, તેમજ તેની ડાબી અને ઉપરની દિવાલોને ધ્યાનમાં લેવામાં આવે છે. ચોરસની જમણી અને નીચેની રેખાઓ પર સ્થિત કોષોની ગણતરી થતી નથી.
ગણતરી: 80 નાના ચોરસમાં કોષોની ગણતરી કરેલ સંખ્યાને 1: 400 ના રક્ત મંદન પર 20,000 દ્વારા, 1: 500 ના મંદન પર 25,000 દ્વારા અથવા 1: 600 ના મંદન પર 30,000 દ્વારા ગુણાકાર કરવામાં આવે છે અને અંતિમ પરિણામ પ્રાપ્ત થાય છે. 1 μl દીઠ લાખોમાં. આ કિસ્સામાં, એવું માનવામાં આવે છે કે એક નાના ચોરસનું પ્રમાણ 1/4000 μl છે. 1 લિટરમાં કોષોની ગણતરી કરવા માટે, 1 μl માં લાલ રક્ત કોશિકાઓની સંખ્યા પણ 1,000,000 દ્વારા ગુણાકાર કરવામાં આવે છે. નૉૅધ. તેને ગંઠાવા સાથે લોહીનો અભ્યાસ કરવાની મંજૂરી નથી; ચેમ્બર ભર્યા પછી તરત જ સેલ ગણતરી (1 મિનિટ રાહ જોયા વિના); ખરાબ રીતે ધોયેલા અને સૂકાયેલા પાઈપેટ અને ટેસ્ટ ટ્યુબનો ઉપયોગ, નબળી-ગુણવત્તાવાળા રીએજન્ટ કે જે હેમોલિસિસનું કારણ બને છે. ગણતરીના તમામ નિયમોને આધીન, ભૂલ સરેરાશ ± 2.5% હશે. |
|
જીવાણુ નાશકક્રિયા નિયમો ઉપયોગ કર્યા પછી, ગોર્યાવ કેમેરાને જંતુમુક્ત કરવું આવશ્યક છે 3% સોલ્યુશનહાઇડ્રોજન પેરોક્સાઇડ, નિસ્યંદિત પાણીથી કોગળા કરો અને નરમ કપડાથી સૂકવો. કેમેરાને સૂકી જગ્યાએ રાખો. |
હેમેટોલોજીકલ વિશ્લેષકો પર કામ કરવાની પદ્ધતિ.
વિશ્લેષક-હેમેટોલોજિકલ- માત્રાત્મક સંશોધન માટે રચાયેલ ઉપકરણ (ઉપકરણોનો સમૂહ). કોષો લોહીક્લિનિકલ ડાયગ્નોસ્ટિક પ્રયોગશાળાઓમાં. સ્વચાલિત અથવા અર્ધ-સ્વચાલિત હોઈ શકે છે. અર્ધ-સ્વચાલિત હિમેટોલોજિકલ વિશ્લેષક સ્વચાલિત કરતાં અલગ છે જેમાં રક્ત નમૂનાને પાતળું કરવાની પ્રક્રિયા એક અલગ ઉપકરણ દ્વારા હાથ ધરવામાં આવે છે - એક પાતળું. આખું બ્લડ ડિલ્યુશન તૈયાર કર્યા પછી, ઓપરેટરે પાતળું સેમ્પલ માપન મોડ્યુલમાં ટ્રાન્સફર કરવું પડશે. હાલમાં, અર્ધ-સ્વચાલિત વિશ્લેષકો વ્યવહારીક રીતે ઉત્પન્ન થતા નથી.
ઓટોમેટિક હેમેટોલોજી વિશ્લેષક એ સંપૂર્ણ સ્વયંસંચાલિત સાધન છે જેમાં સમગ્ર વિશ્લેષણાત્મક પ્રક્રિયા આપમેળે હાથ ધરવામાં આવે છે.
આધુનિક સ્વચાલિત વિશ્લેષકો કલાક દીઠ ડઝનેક નમૂનાઓ (60 થી 120 સુધી) પર પ્રક્રિયા કરવામાં સક્ષમ છે, ચોક્કસતા અને પુનઃઉત્પાદનક્ષમતા સાથે, તેમજ બિલ્ટ-ઇન મેમરીમાં પરીક્ષણ પરિણામો સંગ્રહિત કરવા અને, જો જરૂરી હોય તો, તેમને બિલ્ટ-ઇન પર છાપવામાં સક્ષમ છે. થર્મલ પ્રિન્ટર અથવા બાહ્ય પ્રિન્ટર.
આધુનિક હેમેટોલોજીકલ વિશ્લેષકોને રક્ત કોશિકાઓના નિર્ધારિત સૂચકાંકોના નામકરણ અનુસાર વર્ગીકૃત કરવામાં આવે છે.
આઠ-પેરામીટર હેમેટોલોજી વિશ્લેષકોનીચેના પરિમાણો નક્કી કરો: એકાગ્રતા એરિથ્રોસાઇટ્સ(RBC) લ્યુકોસાઈટ્સ(WBC) પ્લેટલેટ્સ(plt) હિમોગ્લોબિન(Hb), તેમજ નીચેના એરિથ્રોસાઇટ પરિમાણો: સરેરાશ એરિથ્રોસાઇટ વોલ્યુમ (MCV), સરેરાશ એરિથ્રોસાઇટ હિમોગ્લોબિન સામગ્રી (MCH), સરેરાશ એરિથ્રોસાઇટ હિમોગ્લોબિન સાંદ્રતા (MCHC), હિમેટોક્રિટ(Hct).
આઠ-પેરામીટર હેમેટોલોજીકલ વિશ્લેષકો હાલમાં વ્યવહારીક રીતે ઉત્પન્ન થતા નથી.
હેમેટોલોજી વિશ્લેષકો વર્ગ 3-ભેદ. વર્ગ 3-dif ના હેમેટોલોજીકલ વિશ્લેષકો, ઉત્પાદિત મોડેલના આધારે, તમને રક્ત કોશિકાઓના 16 થી 22 સૂચકાંકો નક્કી કરવા દે છે. આ વર્ગના વિશ્લેષકો, તે પરિમાણો ઉપરાંત જે આઠ-પેરામીટર વિશ્લેષકોને નિર્ધારિત કરે છે, લ્યુકોસાઇટ્સની ત્રણ પેટા-વસ્તી નક્કી કરે છે: લિમ્ફોસાઇટ્સ (Lm), ગ્રાન્યુલોસાઇટ્સ (Gr) અને કહેવાતા સરેરાશ લ્યુકોસાઇટ્સ (મિડ), તેમજ તેમની ટકાવારી Lm%, Gr% અને મધ્ય%. તેથી વર્ગ 3-dif નું નામ. વધુમાં, આ વર્ગના હેમેટોલોજિકલ વિશ્લેષકો એરિથ્રોસાઇટ વોલ્યુમ (RDW) ની વિવિધતાના ગુણાંક અને પ્લેટલેટની લાક્ષણિકતા ધરાવતા સંખ્યાબંધ સૂચકાંકો નક્કી કરે છે: સરેરાશ પ્લેટલેટ વોલ્યુમ (MPV), પ્લેટલેટ વોલ્યુમનો અપૂર્ણાંક (Tct) (હેમેટોક્રિટના સમાન), પ્લેટલેટ વોલ્યુમની વિવિધતાના ગુણાંક (PDW).
મહત્વપૂર્ણ ડાયગ્નોસ્ટિક માહિતી, જે આ વર્ગના હેમેટોલોજીકલ વિશ્લેષકો દ્વારા મેળવી શકાય છે, તે એરિથ્રોસાઇટ્સ, લ્યુકોસાઇટ્સ અને પ્લેટલેટ્સના વોલ્યુમ દ્વારા વિતરણ કાર્યો છે - હિસ્ટોગ્રામ.
હેમેટોલોજીકલ વિશ્લેષકો વર્ગ 5-dif. 5-ડીફ હેમેટોલોજી વિશ્લેષકો અને 3-ડીફ વિશ્લેષકો વચ્ચેનો મુખ્ય તફાવત એ છે કે લ્યુકોસાઇટ્સની તમામ 5 પેટા-વસ્તી શોધવાની તેમની ક્ષમતા છે: લિમ્ફોસાઇટ્સ (લિમ), મોનોસાઇટ્સ (સોમ), ન્યુટ્રોફિલ્સ (ન્યુ), બેસોફિલ્સ (બાસ) અને ઇઓસિનોફિલ્સ (ઇઓએસ), તેમજ Lym%, Mon%, Neu%, Bas% અને Eos% ની તેમની ટકાવારી સામગ્રી. અવબાધ ગણવાની પદ્ધતિ, જેને તરીકે પણ ઓળખવામાં આવે છે કુલ્ટર કાઉન્ટર, 3-dif વિશ્લેષકોમાં ઉપયોગમાં લેવાતા, ન્યુટ્રોફિલ્સ, બેસોફિલ્સ અને ઇઓસિનોફિલ્સ વચ્ચે તફાવત કરવામાં સક્ષમ નથી, તેથી, 5-dif વિશ્લેષકોમાં કોષ ભિન્નતાની એક અલગ પદ્ધતિનો ઉપયોગ થાય છે. તે સિદ્ધાંત પર આધારિત છે વિવર્તનલ્યુકોસાઇટ કોષો પર લેસર રેડિયેશન અને સ્કેટર્ડ રેડિયેશનનું વધુ વિશ્લેષણ. "સરેરાશ" લ્યુકોસાઇટ્સ અવબાધ પદ્ધતિ દ્વારા ઓળખી શકાય તેટલા કદમાં ભિન્ન નથી, પરંતુ તેમની આંતરિક રચના અલગ છે અને રંગો સાથે અલગ રીતે ક્રિયાપ્રતિક્રિયા કરે છે. અને વિવર્તન પેટર્ન શોધવાની પદ્ધતિ કોષોની આંતરિક રચના પ્રત્યે સંવેદનશીલ હોવાનું બહાર આવ્યું છે. આમ, એરિથ્રોસાઇટ્સ અને પ્લેટલેટ્સની ગણતરી કોલ્ટર કાઉન્ટર દ્વારા કરવામાં આવે છે, અને લ્યુકોસાઇટ્સ અલગ લેસર એકમ દ્વારા ગણવામાં આવે છે.
2. ફોસ્ફેટ બફર (0.1 મીટર, pH 5.8-8.0)
|
Na 2 HPO 4 0.2 M, ml |
Na 2 H 2 PO 4 0.2 M, ml | ||
3. ટ્રિસ બફર (0.1 મીટર, pH 7.1-9.2)
24.2 ગ્રામ ટ્રિસ-(હાઈડ્રોક્સિમિથાઈલ) એમિનોમેથેન 1 લિટર વોલ્યુમેટ્રિક ફ્લાસ્કમાં ઓગળવામાં આવે છે (H 2 O ના 500 મિલીમાં). જરૂરી pH મૂલ્ય મેળવવા માટે, કોષ્ટકમાં દર્શાવેલ 1 M HCl નું વોલ્યુમ ઉમેરવામાં આવે છે અને નિસ્યંદિત પાણી સાથે વોલ્યુમ 1000 ml માં ગોઠવવામાં આવે છે.
4. એસિટેટ બફર (0.2 મીટર, પીએચ 3.6-5.8)
|
સોડિયમ એસીટેટ 0.2 M, ml |
એસિટિક એસિડ 0.2 M, ml |
સોડિયમ એસીટેટ 0.2 M, ml |
એસિટિક એસિડ 0.2 M, ml | ||
5. ગ્લાયસીન બફર (0.05 મીટર, પીએચ 8.6-10.6)
ગ્લાયસીન અને સોડિયમ હાઇડ્રોક્સાઇડના દર્શાવેલ જથ્થાને મિશ્રિત કરવામાં આવે છે અને નિસ્યંદિત પાણી સાથે વોલ્યુમને 200 મિલી સુધી ગોઠવવામાં આવે છે.
|
ગ્લાયસીન 0.2 એમ, મિલી |
NaOH 0.2 M, ml |
ગ્લાયસીન 0.2 એમ, મિલી |
NaOH 0.2 M, ml |
||
3. કેટલાક રીએજન્ટ્સની તૈયારી
ઉકેલ સક્રિય કરી રહ્યા છીએ. 155 મિલિગ્રામ ઘટાડેલું ગ્લુટાથિઓન અને 400 મિલિગ્રામ સ્ફટિકીય આલ્બ્યુમિન 100 મિલીની ક્ષમતાવાળા વોલ્યુમેટ્રિક ફ્લાસ્કમાં મૂકવામાં આવે છે, તે 50 મિલી નિસ્યંદિત પાણીમાં ઓગળવામાં આવે છે અને 1 M NaOH સોલ્યુશનનો ઉપયોગ કરીને pH 8.2 પર ગોઠવાય છે. પછી નિશાનમાં પાણી ઉમેરો.
સિલ્વર નાઈટ્રેટનું એમોનિયા સોલ્યુશન. જ્યાં સુધી અવક્ષેપ ઓગળી ન જાય ત્યાં સુધી એમોનિયાનું એકાગ્ર દ્રાવણ ચાંદીના 2-3% દ્રાવણમાં ઉમેરવામાં આવે છે.
એસિટેટ બફર pH 3.6. 463 મિલી સોલ્યુશન A અને 37 મિલી સોલ્યુશન Bને ભેળવીને તૈયાર કરો, વોલ્યુમેટ્રિક ફ્લાસ્કમાં 1 લિટર પાણીથી ચિહ્ન સુધી પાતળું કરો. ઉકેલ A: 1 લિટર વોલ્યુમેટ્રિક ફ્લાસ્કમાં 11.55 મિલી ગ્લેશિયલ એસિટિક એસિડને પાણીથી પાતળું કરો. ઉકેલ B: 1 લિટર ફ્લાસ્કમાં 27.2 ગ્રામ સોડિયમ એસીટેટ પાણીમાં ઓગાળો.
બ્યુરેટ રીએજન્ટ (બેનેડિક્ટનું રીએજન્ટ). 173 ગ્રામ સોડિયમ સાઇટ્રેટ અને 100 ગ્રામ સોડિયમ કાર્બોનેટ પાણીના સ્નાનમાં 300 મિલી નિસ્યંદિત પાણીમાં ઓગળવામાં આવે છે. અલગથી, 17.3 ગ્રામ કોપર સલ્ફેટ 300 મિલી પાણીમાં ઓગળવામાં આવે છે. બંને ઉકેલો ડ્રેઇન કરવામાં આવે છે અને કુલ વોલ્યુમ 1 લિટર પર લાવવામાં આવે છે.
બફર સોલ્યુશન. 2.76 ગ્રામ વેરોનલ અને 2.06 ગ્રામ મેડિનલ 1 લિટર નિસ્યંદિત પાણીમાં ઓગળવામાં આવે છે. રેફ્રિજરેટરમાં સ્ટોર કરો; જો કોઈ અવક્ષેપ દેખાય, તો ઉકેલ ઉપયોગ માટે યોગ્ય નથી.
કોલસાનું સસ્પેન્શન. 0.25 ગ્રામ સક્રિય ચારકોલ 100 મિલી વોલ્યુમેટ્રિક ફ્લાસ્કમાં મૂકવામાં આવે છે અને એસિટેટ બફર pH 3.6 સાથે પાતળું કરવામાં આવે છે. ઉપયોગ કરતા પહેલા સારી રીતે હલાવો.
રીએજન્ટ ઘટાડવા. એસ્કોર્બિક એસિડનું 1% સોલ્યુશન 0.016% કોપર સલ્ફેટ સોલ્યુશન સાથે તૈયાર કરવામાં આવે છે.
હિમોગ્લોબિન, એસિટેટ બફરમાં 4% સોલ્યુશન (pH 4.0). સૌપ્રથમ, 8% હિમોગ્લોબિન સોલ્યુશન 8 mol/l યુરિયા સોલ્યુશનમાં તૈયાર કરવામાં આવે છે, તેને થર્મોસ્ટેટમાં 60°C પર 2 કલાક માટે રાખવામાં આવે છે, અને ઉપયોગ કરતા પહેલા એસિટેટ બફર સાથે 2 વખત પાતળું કરવામાં આવે છે.
ગ્લાયસિલ-ગ્લાયસીન. 0.55 mmol/l, pH 8.3. 3.63 ગ્રામ ગ્લાયસિલ-ગ્લાયસીન 50 મિલી વોલ્યુમેટ્રિક ફ્લાસ્કમાં મૂકવામાં આવે છે, જે માર્ક (બફર સોલ્યુશન) સુધી પાણી સાથે ટોચ પર હોય છે.
ડિનેચરિંગ સોલ્યુશન
બિલીરૂબિનના નિર્ધારણ માટે ડાયઝો રીએજન્ટ. બે ઉકેલો તૈયાર કરો. પ્રથમ સોલ્યુશન: 3 ગ્રામ સલ્ફાનિલિક એસિડ 500 મિલી નિસ્યંદિત પાણીમાં ઓગળવામાં આવે છે, 15 મિલી સાંદ્ર હાઇડ્રોક્લોરિક એસિડ ઉમેરવામાં આવે છે (ગરમ સ્નાનમાં), વોલ્યુમ પાણી સાથે 1 લિટરમાં સમાયોજિત થાય છે. બીજો દ્રાવણ: 0.5% જલીય સોડિયમ નાઈટ્રાઈટ દ્રાવણ. ઉપયોગ કરતા પહેલા, પ્રથમ સોલ્યુશનના 5 મિલી અને બીજાના 0.25 મિલી મિશ્રણ કરો.
ડાયસેટીલ, વર્કિંગ સોલ્યુશન. 1 મિલી ડાયસેટીલને 100 મિલી વોલ્યુમેટ્રિક ફ્લાસ્કમાં નિસ્યંદિત પાણીથી ભેળવવામાં આવે છે (દ્રાવણ રેફ્રિજરેટરમાં સંગ્રહિત થાય છે). ડાયસેટીલનું કાર્યકારી સોલ્યુશન ડાયસેટીલના સ્ટોક સોલ્યુશનના 1 મિલીમાં 24 મિલી નિસ્યંદિત પાણી ઉમેરીને ઉપયોગ કરતા પહેલા તૈયાર કરવામાં આવે છે.
ડિફેનીલામાઇન રીએજન્ટ. 1 ગ્રામ ડિફેનીલામાઇન 100 મિલી ગ્લેશિયલ એસિટિક એસિડમાં ઓગળવામાં આવે છે. સોલ્યુશનમાં 2.75 મિલી સાંદ્ર સલ્ફ્યુરિક એસિડ ઉમેરવામાં આવે છે.
માપાંકન ઉકેલ. મૂળભૂત - 0.75 mmol/l ALA (100 µg/ml) આધારની દ્રષ્ટિએ: ALA હાઇડ્રોક્લોરાઇડનું 0.00635 ગ્રામ 50 મિલી વોલ્યુમેટ્રિક ફ્લાસ્કમાં એસિટેટ બફર pH 3.6 માં ઓગળવામાં આવે છે. રેફ્રિજરેટરમાં એક મહિના કરતાં વધુ સમય માટે સ્ટોર કરો. કાર્યકારી કેલિબ્રેશન સોલ્યુશન મુખ્ય સોલ્યુશનમાંથી તૈયાર કરવામાં આવે છે, 1 μg / ml. એસિટેટ બફર સાથે સ્ટોક સોલ્યુશનને 100 વખત પાતળું કરીને ઉપયોગ પહેલાં તૈયાર કરો.
માપાંકન ઉકેલ. 22.5 મિલિગ્રામ ડાયહાઇડ્રોક્સાયસેટોન 25 મિલી પાણીમાં ગરમ કરીને ઓગળવામાં આવે છે. આ દ્રાવણના 1 મિલીલીટરમાં 10 μmoles dihydroxyacetone હોય છે. ડાયહાઇડ્રોક્સાયસેટોનનું કેલિબ્રેશન સોલ્યુશન સંખ્યાબંધ ટેસ્ટ ટ્યુબમાં રેડવામાં આવે છે (કામ જુઓ), જરૂરી વોલ્યુમ સુધી ટોચ પર હોય છે, અને પછી પ્રતિક્રિયા એ જ રીતે કરવામાં આવે છે જે એન્ઝાઇમની પ્રવૃત્તિ નક્કી કરે છે.
આયર્નનું માપાંકન (પ્રમાણભૂત) સોલ્યુશન (30 µmol/l).
મોરા ક્ષાર પ્રથમ તૈયાર કરવામાં આવે છે.
કેફીન રીએજન્ટ. 1 ગ્રામ શુદ્ધ કેફીન, 7.5 ગ્રામ સોડિયમ બેન્ઝોએટ, 12.5 ગ્રામ સોડિયમ એસીટેટ 90 મિલી નિસ્યંદિત પાણીમાં ઓગળવામાં આવે છે, તેને 50-60 ડિગ્રી સેલ્સિયસ તાપમાને ગરમ કરીને, હલાવી, ઠંડુ કરીને અને નિસ્યંદિત પાણીથી 100 મિલી સુધી બનાવવામાં આવે છે.
નાઈટ્રિક એસિડમાં એમોનિયમ મોલિબડેટ. 7.5 ગ્રામ એમોનિયમ મોલીબડેટ 100 મિલી પાણીમાં ઓગળવામાં આવે છે અને 100 મિલી 32% નાઈટ્રિક એસિડ ઉમેરવામાં આવે છે.
અલ્કાપ્ટોનુરિયા માટે પેશાબ. પેથોલોજીકલની ગેરહાજરીમાં, હાઇડ્રોક્વિનોન સામાન્ય પેશાબમાં 20 g/l ના દરે ઉમેરવામાં આવે છે.
હાયપરમિનોએસિડ્યુરિયા સાથે પેશાબ. પેથોલોજીકલ ગ્લાયસીનની ગેરહાજરીમાં સામાન્ય પેશાબમાં 1.0 g/l ના દરે ઉમેરવામાં આવે છે.
મ્યુકોપોલિસકેરિડોસિસ સાથે પેશાબ. પેથોલોજીકલની ગેરહાજરીમાં, 0.05-0.1 g / l ના દરે સામાન્ય પેશાબમાં કોન્સ્યુરાઇડ અથવા હેપરિન ઉમેરવામાં આવે છે.
પેન્ટોસુરિયા સાથે પેશાબ. પેથોલોજીકલની ગેરહાજરીમાં, 1.0 g/l ના દરે પેશાબમાં xylulose અથવા ribose ઉમેરવામાં આવે છે.
ટાયરોસિનોસિસ સાથે પેશાબ. પેથોલોજીકલની ગેરહાજરીમાં, ટાયરોસિન સામાન્ય પેશાબમાં 0.4-0.5 g / l ના દરે ઉમેરવામાં આવે છે.
ફ્રુક્ટોસુરિયા સાથે પેશાબ. પેથોલોજીકલની ગેરહાજરીમાં, ફ્રુક્ટોઝ સામાન્ય પેશાબમાં 0.3-0.4 g / l ના દરે ઉમેરવામાં આવે છે.
સિસ્ટિન્યુરિયા માટે પેશાબ. પેથોલોજીકલ સિસ્ટાઇનની ગેરહાજરીમાં, સામાન્ય પેશાબમાં 0.4-0.5 ગ્રામ / એલના દરે ઉમેરવામાં આવે છે.
સોડિયમ એસિટેટ 3-જલીય, સંતૃપ્ત દ્રાવણ. 375 ગ્રામ સોડિયમ એસીટેટ 3-જલીય (અથવા 226 ગ્રામ નિર્જળ મીઠું) 250 મિલી ગરમ પાણીમાં ઓગળવામાં આવે છે, ઓરડાના તાપમાને ઠંડુ થાય છે. ઓરડાના તાપમાને સ્ટોર કરો. ઉકેલ રંગહીન અને પારદર્શક હોવો જોઈએ.
સોડિયમ ફોસ્ફેટ વિસર્જન 0.25 mol/l. 200 મિલી ફ્લાસ્કમાં 9.7 g Na 2 HPO 4 ∙12H 2 O અથવા 18 g Na 2 HPO 4 ∙12H 2 O પાણીમાં ઓગાળીને તૈયાર કરો. ટ્રાઇક્લોરોએસેટિક એસિડના 1 મિલી સોલ્યુશનમાં આ દ્રાવણના 2 મિલી ઉમેરો કરતી વખતે, પીએચ 5.0-6.0 ની રેન્જમાં હોવો જોઈએ.
ક્રિએટિનાઇન મૂળભૂત કેલિબ્રેશન સોલ્યુશન, 10 mmol/l. 113.1 મિલિગ્રામ ક્રિએટિનાઇનને 0.1 mol/l હાઇડ્રોક્લોરિક એસિડ સોલ્યુશન સાથે 100 મિલીમાં ગોઠવવામાં આવે છે. કેલિબ્રેશન ગ્રાફ બનાવતી વખતે, સ્ટોક સોલ્યુશનને પાણીથી 100 વખત પાતળું કરીને સ્ટોક સોલ્યુશનમાંથી વર્કિંગ સોલ્યુશન તૈયાર કરવામાં આવે છે, સોલ્યુશનના 1 મિલીમાં 0.1 એમએમઓએલ ક્રિએટિનાઇન હોય છે. તેના આધારે, ક્રિએટાઇનની અનુરૂપ સાંદ્રતા સાથે સંખ્યાબંધ ટેસ્ટ ટ્યુબ મેળવવામાં આવે છે.
થાઇમિનના નિર્ધારણ માટે ઓક્સિડાઇઝિંગ મિશ્રણ. 1% પોટેશિયમ હેક્સાસાયનોફેરેટ (III) ના 8 મિલી માં 30% NaOH સોલ્યુશનના 20 મિલી ઉમેરવામાં આવે છે, સારી રીતે ભળી દો. ઉપયોગ કરતા પહેલા તૈયાર કરો.
ઓર્સિન રીએજન્ટ. ઓરસીનના 1 ગ્રામમાં 30% હાઇડ્રોક્લોરિક એસિડનું 500 મિલી (ઘનતા 1.15 ગ્રામ/સેમી 3) ઉમેરો. ઓગળી જાય ત્યાં સુધી હલાવો અને 4-5 મિલી 10% આયર્ન ક્લોરાઇડ સોલ્યુશન (III) FeCl 3 ઉમેરો. રીએજન્ટને ચુસ્ત રીતે બંધ કરેલી ડાર્ક બોટલમાં સંગ્રહિત કરવામાં આવે છે.
p-nitroaniline મૂળભૂત કેલિબ્રેશન સોલ્યુશન. 0.0829 ગ્રામ p-nitroaniline 100 ml વોલ્યુમેટ્રિક ફ્લાસ્કમાં મૂકવામાં આવે છે, જે પાણીથી ચિહ્ન સુધી બને છે અને ઓગળવામાં આવે છે.
અવક્ષેપયુક્ત ઉકેલ. 1 લિટર નિસ્યંદિત પાણીમાં 561 ગ્રામ એમોનિયમ સલ્ફેટ ઓગાળો અને 24 કલાક પછી ફિલ્ટર કરો.
મૂળભૂત ફોસ્ફેટ બફર સોલ્યુશન અને તેના કાર્યકારી ઉકેલો નંબર 1-4. 500 મિલીની ક્ષમતાવાળા વોલ્યુમેટ્રિક ફ્લાસ્કમાં 400 મિલી પાણીમાં 33.5 ગ્રામ NaOH ઓગાળો અને KH 2 PO 4 નું 226.8 ગ્રામ ઉમેરો, સંપૂર્ણપણે ઓગળી જાય ત્યાં સુધી હલાવો, ઠંડુ કરો અને ચિહ્નમાં પાણી ઉમેરો. મૂળભૂત ફોસ્ફેટ બફરના કાર્યકારી ઉકેલો તૈયાર કરવા માટે, મૂળભૂત ફોસ્ફેટ બફરના નીચેના જથ્થાઓ (મિલીમાં) 100 મિલીની ક્ષમતાવાળા વોલ્યુમેટ્રિક ફ્લાસ્કમાં માપવામાં આવે છે: નંબર 1 - 92.51; નંબર 2 - 74.91; નંબર 3 - 59.18 અને નંબર 4 - 48.68, જેના પછી તેમની સામગ્રીને પાણી સાથે ચિહ્ન પર લાવવામાં આવે છે.
પીક્રીક એસિડ, સંતૃપ્ત ઉકેલ. કોમોડિટી પિકરિક એસિડમાં 15-20% ભેજ હોય છે, એસિડને સૂકવશો નહીં. વિસ્ફોટક! ગરમ સ્નાનમાં ગરમ કરીને 100 મિલી પાણીમાં 2 ગ્રામ પિક્રિક એસિડ ઓગાળો. તે પછી, ઉકેલને 24 કલાક માટે ઊભા રહેવા માટે છોડી દેવામાં આવે છે, ક્યારેક ક્યારેક હલાવતા રહો. પછી સોલ્યુશન ફિલ્ટર કરવામાં આવે છે. ઉકેલ સ્થિર છે અને ડાર્ક ગ્લાસ કન્ટેનરમાં સંગ્રહિત છે.
પાયરોફોસ્ફેટ બફર 0.05 M pH 8.2. 4.46 ગ્રામ સોડિયમ પાયરોફોસ્ફેટને 200 મિલી વોલ્યુમેટ્રિક ફ્લાસ્કમાં સ્થાનાંતરિત કરો, તેને લગભગ 100 મિલી પાણીમાં ઓગાળો, 0.1 M HCl સોલ્યુશન સાથે pH ને 8.2 પર સમાયોજિત કરો અને નિસ્યંદિત પાણી સાથે ટોચ પર ચિહ્નિત કરો.
પાયરોફોસ્ફેટ બફર 0.1 M pH 8.5. 4.46 ગ્રામ સોડિયમ પાયરોફોસ્ફેટને 100 મિલીની ક્ષમતાવાળા વોલ્યુમેટ્રિક ફ્લાસ્કમાં સ્થાનાંતરિત કરો, તેને 50 મિલી પાણીમાં ઓગાળો, 0.1 એમ એચસીએલ સોલ્યુશન સાથે પીએચને 8.5 પર સમાયોજિત કરો અને ચિહ્નમાં નિસ્યંદિત પાણી ઉમેરો.
વર્કિંગ રીએજન્ટ. 0.3 N સોડિયમ હાઇડ્રોક્સાઇડના 30 ભાગોને ભેળવીને નિર્ધારણના દિવસે તૈયાર કરો. 2 ભાગ 0.5% ફિનોલ્ફથાલીન સોલ્યુશન અને 1 ભાગ 0.12% કોપર સલ્ફેટ સોલ્યુશન.
એસીટોન સાયનોહાઇડ્રિન સોલ્યુશન. 1 લીટર નિસ્યંદિત પાણીમાં એસીટોન સાયનોહાઈડ્રિન (રક્તમાં હિમોગ્લોબિન નક્કી કરવા માટેની કીટમાંથી 0.5 મિલી - 0.47 ગ્રામ) ના 1 એમ્પૂલને ઓગાળો.
ફેરિયાસીટોન સાયનોહાઇડ્રિન સોલ્યુશન. 1 લિટર નિસ્યંદિત પાણીમાં 200 મિલિગ્રામ પોટેશિયમ ફેરીસાયનાઇડ અને 1 એમ્પૂલ (0.5 મિલી - 0.47 ગ્રામ) એસિટોન સાયનોહાઇડ્રેન ઓગાળો: રક્ત હિમોગ્લોબિન નક્કી કરવા માટે રૂપાંતરિત દ્રાવણ તૈયાર કરવા માટે રીએજન્ટ્સના સમૂહમાંથી ઉપયોગ કરવો શક્ય છે. ઓરડાના તાપમાને ડાર્ક ગ્લાસ કન્ટેનરમાં સંગ્રહિત કરવામાં આવે ત્યારે કેટલાક મહિનાઓ સુધી સ્થિર.
ગ્લુઓક્સિડેઝ સોલ્યુશન. લગભગ 300 એકમો સમાવે છે. 1 મિલિગ્રામ માં. સૂકી તૈયારીની યોગ્ય માત્રાને 10 મિલી પાણીમાં ઓગાળીને તૈયાર કરો.
સલ્ફોનેટેડ બેટો-ફેનાન્થ્રોલિનનો ઉકેલ. ટેસ્ટ ટ્યુબમાં, 100 મિલિગ્રામ બાથોફેનાન્થ્રોલિનમાં 0.5 મિલી ક્લોરોસલ્ફોનિક એસિડ ઉમેરવામાં આવે છે, તેને ઉકળતા પાણીના સ્નાનમાં 30 સેકંડ સુધી ગરમ કરીને ઠંડુ કરવામાં આવે છે અને 10 મિલી બિડિસ્ટિલ્ડ પાણી ધીમે ધીમે ઉમેરવામાં આવે છે, ફરીથી પાણીના સ્નાનમાં 5 મિનિટ માટે ગરમ કરવામાં આવે છે. મિશ્રણને 200 મિલી ફ્લાસ્કમાં સ્થાનાંતરિત કરવામાં આવે છે, 100 મિલી પાણી ઉમેરવામાં આવે છે, સોલ્યુશનનો pH 4-5 N NaOH પર ગોઠવવામાં આવે છે, અને 200 મિલીની માત્રામાં પાણી ઉમેરવામાં આવે છે.
પોટેશિયમ આયોડાઇડમાં આયોડીનનું સોલ્યુશન (લુગોલનું સોલ્યુશન). 100 મિલી નિસ્યંદિત પાણીમાં 20 ગ્રામ પોટેશિયમ આયોડાઇડ અને 10 ગ્રામ આયોડિન ઓગાળો. ઉપયોગ કરતા પહેલા, સોલ્યુશન 5 વખત પાતળું થાય છે.
પી-નાઈટ્રોસોડિમેથાઈલનીલાઈન (NDMA)નું સોલ્યુશન. વ્યાપારી રીતે ઉપલબ્ધ NDMA તૈયારી એથિલ ઈથરમાંથી પુનઃસ્થાપિત કરવામાં આવે છે. આલ્કોહોલ ડિહાઈડ્રોજેનેઝ માપવા માટે, 1 મિલિગ્રામ એનડીએમએ 0.1 એમ પાયરોફોસ્ફેટ બફર (પીએચ 8.5) ના 100 મિલીમાં ઓગળવામાં આવે છે. પરિણામી સોલ્યુશન પેપર ફિલ્ટર દ્વારા ફિલ્ટર કરવામાં આવે છે અને ફિલ્ટ્રેટને સમાન બફર સાથે 2 વખત પાતળું કરવામાં આવે છે. બે મહિના માટે 4 ડિગ્રી સેલ્સિયસ પર સ્ટોર કરો.
ઇલ્કાનું રીએજન્ટ. એસિટિક એનહાઇડ્રાઇડના 5 ભાગો (વોલ્યુમ દ્વારા) માં, ગ્લેશિયલ એસિટિક એસિડનો 1 ભાગ ઉમેરો, પછી ધીમે ધીમે સાંદ્ર સલ્ફ્યુરિક એસિડનો 1 ભાગ રેડો. રીએજન્ટને ઠંડીમાં સ્ટોર કરો!
મિલોન રીએજન્ટ. (દબાણ હેઠળ તૈયાર! ) 40 ગ્રામ પારો 57 મિલી સાંદ્રિત નાઈટ્રિક એસિડમાં ઓગળવામાં આવે છે, પ્રથમ ઠંડીમાં, અને પછી પાણીના સ્નાનમાં ગરમ કરવામાં આવે છે. પરિણામી સોલ્યુશનને 2 જથ્થાના પાણીથી ભેળવવામાં આવે છે, તેને સ્થાયી થવા દેવામાં આવે છે અને કાંપમાંથી બહાર કાઢવામાં આવે છે. ડાર્ક કાચની બોટલમાં સ્ટોર કરો.
એમોનિયમ મોલીબડેટ રીએજન્ટ. 2.5 ગ્રામ એમોનિયમ મોલીબડેટ 60 મિલી નિસ્યંદિત પાણીમાં ઓગળવામાં આવે છે, ફિલ્ટર કરવામાં આવે છે. સોલ્યુશનને 100 મિલી ફ્લાસ્કમાં ઉમેરવામાં આવે છે. અન્ય ફ્લાસ્કમાં, 7.5 મિલી ઘટ્ટ સલ્ફ્યુરિક એસિડ 25 મિલી નિસ્યંદિત પાણીમાં ઉમેરવામાં આવે છે. બીજા સોલ્યુશનને પ્રથમમાં ઉમેરવામાં આવે છે, તેને ઠંડુ કરવામાં આવે છે અને નિસ્યંદિત પાણીથી ચિહ્નિત કરવામાં આવે છે. ઉકેલ એક મહિના માટે યોગ્ય છે.
રીએજન્ટ "NADI". આલ્કોહોલમાં α-naphthol ના 1% સોલ્યુશન અને 1.5% સોડિયમ કાર્બોનેટ સોલ્યુશનના સમાન જથ્થામાં ડાઇમેથાઈલ-પી-ફેનીલેનેડિયામાઈનનું 1% દ્રાવણ મિશ્રિત કરવામાં આવે છે. સોલ્યુશન ઘેરા બદામી રંગનું છે અને તેમાં ગુલાબી રંગ હોવો જોઈએ નહીં. વર્ગ પહેલાં 1 કલાક તૈયાર.
રીએજન્ટ નાશા. 100 મિલીની ક્ષમતાવાળા ફ્લાસ્કમાં 15.4 ગ્રામ એમોનિયમ એસીટેટ, 0.3 ગ્રામ ગ્લેશિયલ એસિટિક એસિડ અને 0.2 ગ્રામ એસિટિલેસેટોન ઉમેરવામાં આવે છે, તેને નિસ્યંદિત પાણીમાં ઓગળવામાં આવે છે અને વોલ્યુમ ચિહ્નમાં ગોઠવાય છે.
નેસ્લરનું રીએજન્ટ. 500 મિલી, 150 ગ્રામ પોટેશિયમ આયોડાઈડ, 110 ગ્રામ આયોડિન, 100 મિલી નિસ્યંદિત પાણી અને લગભગ 140-150 ગ્રામ મેટાલિક પારો ભેળવવામાં આવે છે અને 15 મિનિટ સુધી જોરશોરથી હલાવવામાં આવે છે. આ કિસ્સામાં, સોલ્યુશન સ્વયંભૂ ગરમ થાય છે, અને ઓગળેલા આયોડિનને લીધે રંગ ધીમે ધીમે નિસ્તેજ થઈ જાય છે. પછી મિશ્રણને વહેતા પાણીની નીચે ઠંડુ કરવામાં આવે છે જ્યાં સુધી એક અલગ લાલ રંગ જાળવવામાં ન આવે, ત્યાર બાદ જ્યાં સુધી લાલ રંગ બદલાઈને લીલોતરી ન થઈ જાય ત્યાં સુધી સામગ્રીને હલાવવામાં આવે છે. ડિકેન્ટેશન પછી, પારાના અવક્ષેપને પાણીથી સારી રીતે ધોવાઇ જાય છે. સોલ્યુશન અને વોશિંગ્સને ભેગું કરો, તેમને 2 લિટર પાણીથી પાતળું કરો. પરિણામી સોલ્યુશનના 75 મિલીલીટરને 0.5 લિટરના વોલ્યુમેટ્રિક ફ્લાસ્કમાં લો જેમાં 75 મિલી પાણી અને 350 મિલી 10% સોડિયમ હાઇડ્રોક્સાઇડ સોલ્યુશન હોય અને ચિહ્ન સુધી પાણીથી પાતળું કરો.
ફેહલિંગનું રીએજન્ટ. બે ઉકેલો અલગથી તૈયાર કરવામાં આવે છે. સોલ્યુશન 1: 1 L વોલ્યુમેટ્રિક ફ્લાસ્કમાં 200 ગ્રામ રોશેલ મીઠું અને 150 ગ્રામ NaOH ઓગાળો અને પાણીથી ચિહ્ન સુધી પાતળું કરો. સોલ્યુશન 2: 1 લિટરની ક્ષમતાવાળા વોલ્યુમેટ્રિક ફ્લાસ્કમાં, 40 ગ્રામ કોપર (II) સલ્ફેટને પાણીમાં ઓગાળો અને ચિહ્ન સુધી પાણીથી પાતળું કરો. ઉપયોગ કરતા પહેલા આ સોલ્યુશનની સમાન માત્રામાં મિશ્રણ કરો.
ફોલિનનું રીએજન્ટ. 1 લિટર ફ્લાસ્કમાં, 750 મિલી પાણીમાં 1 ગ્રામ સોડિયમ ટંગસ્ટેટ અને 20 ગ્રામ ફોસ્ફોમોલિબિક એસિડ ઓગાળો. રિફ્લક્સ કન્ડેન્સર સાથે સ્ટોપર સાથે ફ્લાસ્ક બંધ કરો અને, રેફ્રિજરેટરમાં પાણીનો પ્રવાહ ચાલુ કરીને, સમાવિષ્ટો 10 કલાક માટે ઉકાળવામાં આવે છે; પછી તેને ઠંડુ કરવામાં આવે છે, વોલ્યુમેટ્રિક ફ્લાસ્કમાં રેડવામાં આવે છે અને રીએજન્ટના જલીય વોલ્યુમને 1 લિટરમાં સમાયોજિત કરવામાં આવે છે.
એર્લિચનું રીએજન્ટ. 0.7 ગ્રામ p-dimethylaminobenzaldehyde 150 ml concentrated hydrochloric acid માં ઓગળવામાં આવે છે, તેને 100 ml પાણીમાં ઉમેરીને મિશ્રિત કરવામાં આવે છે. ઉકેલ રંગહીન અથવા સહેજ પીળો હોવો જોઈએ. ડાર્ક ગ્લાસ કન્ટેનરમાં સ્ટોર કરો. રીએજન્ટ સ્થિર છે.
એર્લિચનું રીએજન્ટ. 1 ગ્રામ p-dimethylaminobenzaldehyde 50 ml વોલ્યુમેટ્રિક ફ્લાસ્કમાં 35 ml ગ્લેશિયલ એસિટિક એસિડમાં ઓગાળો, 8 ml 57% perchloric acid ઉમેરો અને ગ્લેશિયલ એસિટિક એસિડ સાથે માર્ક અપ કરો. એક અઠવાડિયા સુધી રેફ્રિજરેટરમાં ડાર્ક ગ્લાસ કન્ટેનરમાં સ્ટોર કરો.
થાઇમોલ આલ્કોહોલ સોલ્યુશન (10%). 10 ગ્રામ શુદ્ધ થાઇમોલ 96˚ ઇથિલ આલ્કોહોલના 100 મિલીલીટરમાં ઓગળવામાં આવે છે. શુદ્ધ થાઇમોલ મેળવવાનું નીચે પ્રમાણે હાથ ધરવામાં આવે છે. 100 ગ્રામ થાઇમોલ 96˚ ઇથિલ આલ્કોહોલના 100 મિલીલીટરમાં ઓગળવામાં આવે છે, ફિલ્ટર કરવામાં આવે છે. ગાળણમાં 1 લિટર ઠંડું નિસ્યંદિત પાણી ઉમેરો, જોરશોરથી હલાવો અને 20 મિનિટ માટે ઊભા રહેવા દો. ફિલ્ટર ફિલ્ટર કરવામાં આવે છે અને ફિલ્ટર પર બાકી રહેલા સ્ફટિકોને ઠંડા નિસ્યંદિત પાણીથી બે વાર ધોવામાં આવે છે. પહેલા ફિલ્ટર પેપર પર સુકાવો, પછી સતત વજન સુધી નિર્જળ કેલ્શિયમ ક્લોરાઇડ પર ડેસીકેટરમાં 2-3 દિવસ સુધી.
પ્રમાણભૂત ઉકેલ. પ્રમાણભૂત દ્રાવણની તૈયારી બે ઉકેલોને મિશ્રિત કરીને હાથ ધરવામાં આવે છે: 1) બેરિયમ ક્લોરાઇડનું 0.0962 n સોલ્યુશન: 1.175 ગ્રામ સ્ફટિકીય BaCl 2 ∙2H 2 O વોલ્યુમેટ્રિક ફ્લાસ્કમાં 100 મિલી પાણીમાં ઓગળવામાં આવે છે. 2) 0.2 એન સલ્ફ્યુરિક એસિડ સોલ્યુશન. આગળ, બેરિયમ સલ્ફેટનું સસ્પેન્શન મેળવવામાં આવે છે: બેરિયમ ક્લોરાઇડના 0.0962 N સોલ્યુશનના 3 મિલીલીટરને 100 મિલી વોલ્યુમેટ્રિક ફ્લાસ્કમાં રેડવામાં આવે છે અને + 10 ° સે તાપમાને સલ્ફ્યુરિક એસિડના 0.2 N સોલ્યુશન સાથે વોલ્યુમ એડજસ્ટ કરવામાં આવે છે. આ તાપમાને, અવક્ષેપિત બેરિયમ સલ્ફેટના કણોનું કદ પ્રમાણમાં સ્થિર પરિણામ આપે છે).
સબસ્ટ્રેટ બફર સોલ્યુશન: ટેસ્ટ ટ્યુબમાં 10 મિલી પાણી રેડવું અને તેમાં 0.028 ગ્રામ એલ-ગ્લુટામિલ-પી-નાઇટ્રોએનિલિન અને 0.082 ગ્રામ સોડિયમ ક્લોરાઇડ ઉમેરો અને, જગાડવાનું બંધ કર્યા વિના, ટેસ્ટ ટ્યુબની સામગ્રીને ઉકળતા પાણીના સ્નાનમાં 60 સેકન્ડ માટે ઓગાળી દો. . પછી દ્રાવણને 37°C પર ઠંડુ કરવામાં આવે છે અને 2.5 મિલી બફર સોલ્યુશન ઉમેરવામાં આવે છે. તૈયાર સબસ્ટ્રેટ સોલ્યુશન ઓપરેશન દરમિયાન 37°C તાપમાને પાણીના સ્નાનમાં સંગ્રહિત થાય છે. ન વપરાયેલ સબસ્ટ્રેટ સોલ્યુશન રેફ્રિજરેટરમાં એક અઠવાડિયા સુધી સંગ્રહિત કરી શકાય છે. સબસ્ટ્રેટ નબળી રીતે દ્રાવ્ય છે અને ઓરડાના તાપમાને અવક્ષેપિત થાય છે. તેથી, ઉપયોગ કરતા પહેલા, સ્ફટિકીય સબસ્ટ્રેટને ઉકળતા પાણીના સ્નાનમાં ગરમ કરીને ઓગળવામાં આવે છે. સબસ્ટ્રેટની ગરમી અને વિસર્જનને બે કરતા વધુ વખત પુનરાવર્તિત કરી શકાતું નથી.
ALT ના નિર્ધારણ માટે સબસ્ટ્રેટ સોલ્યુશન (સોલ્યુશન નંબર 1). α-કેટોગ્લુટેરિક એસિડના 29.2 મિલિગ્રામ અને એલાનિનના 1.78 ગ્રામ (α-alanineનું 0.89 ગ્રામ) નમૂનાઓનું વિશ્લેષણાત્મક સંતુલન પર વજન કરવામાં આવે છે અને જ્યાં સુધી અવક્ષેપ સંપૂર્ણપણે ઓગળી ન જાય ત્યાં સુધી 1 M સોડિયમ હાઇડ્રોક્સાઇડના દ્રાવણમાં ઓગળવામાં આવે છે (pH 7.4). સોલ્યુશનને 100 મિલી ફ્લાસ્કમાં રેડવામાં આવે છે અને વોલ્યુમને 0.1 M ફોસ્ફેટ બફર (pH 7.4) સાથે માર્ક પર ગોઠવવામાં આવે છે. ક્લોરોફોર્મનું 1 ટીપું ઉમેરો. ઉકેલ રેફ્રિજરેટરમાં સ્થિર સંગ્રહિત થાય છે.
AsAT ના નિર્ધારણ માટે સબસ્ટ્રેટ સોલ્યુશન (સોલ્યુશન નંબર 2). α-કેટોગ્લુટેરિક એસિડના 29.2 મિલિગ્રામ અને α-એસ્પાર્ટિક એસિડના 2.66 ગ્રામ (α-એસ્પાર્ટિક એસિડનું 1.33 ગ્રામ) નમૂનાઓનું વિશ્લેષણાત્મક સંતુલન પર વજન કરવામાં આવે છે. આગળ, ઉકેલ નંબર 1 ની જેમ જ ઉકેલ તૈયાર કરવામાં આવે છે.
ગ્લુકોઝ ફોસ્ફેટ આઇસોમેરેઝના નિર્ધારણ માટે સબસ્ટ્રેટ સોલ્યુશન. મેડિનલ એસિટેટ બફર સોલ્યુશન pH 7.4 તૈયાર કરવામાં આવે છે (9.714 ગ્રામ સોડિયમ એસિટેટ અને 14.714 ગ્રામ મેડિનલ પાણીમાં ઓગળી જાય છે અને વોલ્યુમ 500 મિલી સુધી ગોઠવાય છે). ગ્લુકોઝ-6-ફોસ્ફેટના ડિસોડિયમ સોલ્ટના 0.03 એમ સોલ્યુશનના 8.33 મિલીલીટરને 25 મિલી મેડિયલ એસિટેટ બફર સાથે મિક્સ કરો; મિશ્રણમાં 0.1 એમ હાઇડ્રોક્લોરિક એસિડ સોલ્યુશનના 25 મિલી ઉમેરો અને 100 મિલી પાણીથી પાતળું કરો. ઠંડુ રાખો.
લેક્ટેટ ડિહાઇડ્રોજેનેઝના નિર્ધારણ માટે સબસ્ટ્રેટ સોલ્યુશન. 1 M સોડિયમ લેક્ટેટ સોલ્યુશનનું 1 મિલી, 9 M NaCl સોલ્યુશન, 0.05 M Cl 2 , 10 g/L NAD સોલ્યુશન મિક્સ કરો. 0.5 M ફોસ્ફેટ બફર સોલ્યુશન (pH 7.4) નું 2.5 ml અને 1 g/l નાઈટ્રોટેટ્રાઝોલિયમ બ્લુ સોલ્યુશન સામગ્રીમાં ઉમેરવામાં આવે છે. ઉપયોગ કરતા પહેલા, મિશ્રણમાં 1 g/l ની સાંદ્રતા સાથે ફેનાન્ઝાઇન મેથાસલ્ફેટના 0.25 મિલી દ્રાવણ ઉમેરવામાં આવે છે.
ફ્રુક્ટોઝ બિસ્ફોસ્ફેટ એલ્ડોલેઝના નિર્ધારણ માટે સબસ્ટ્રેટ સોલ્યુશન. ફ્રુક્ટોઝ બિસ્ફોસ્ફેટનું બેરિયમ મીઠું 270 મિલિગ્રામ 1 M હાઇડ્રોક્લોરિક એસિડના 3.5 મિલીલીટરમાં ઓગળવામાં આવે છે. 14% સોડિયમ સલ્ફેટ સોલ્યુશનમાં 1 મિલી ઉમેરવામાં આવે છે અને રચાયેલ અવક્ષેપને સેન્ટ્રીફ્યુગેશન દ્વારા દૂર કરવામાં આવે છે. સુપરનેટન્ટમાં સોડિયમ સલ્ફેટનું 1 ટીપું ઉમેરો. ટર્બિડિટીનો દેખાવ બેરિયમ આયનોના અપૂરતા સંપૂર્ણ જુબાની સૂચવે છે. આ કિસ્સામાં, વધુ સોડિયમ સલ્ફેટ ઉમેરવામાં આવે છે અને ફરીથી સેન્ટ્રીફ્યુજ કરવામાં આવે છે. સેન્ટ્રીફ્યુગેટને 3% સોડિયમ હાઇડ્રોક્સાઇડ સોલ્યુશન સાથે pH 7.4-7.6 માં ગોઠવવામાં આવે છે, 25 મિલી ફ્લાસ્કમાં સ્થાનાંતરિત થાય છે અને વોલ્યુમ માર્ક પર ગોઠવાય છે. પરિણામી દ્રાવણને હાઇડ્રેજીન ક્લોરાઇડના 0.56 એમ સોલ્યુશનના 25 મિલી, મોનોઆયોડોએસેટિક એસિડના 0.002 એમ સોલ્યુશનના 25 મિલી, 0.5% સોડિયમ કાર્બોનેટ સોલ્યુશનના 100 મિલી અને નિસ્યંદિત પાણીના 25 મિલી સાથે મિશ્રિત કરવામાં આવે છે. રેફ્રિજરેટરમાં સંગ્રહિત.
થાઇમોલ-વેરોનલ બફર. 100 મિલી વોલ્યુમેટ્રિક ફ્લાસ્કમાં, 80 મિલી બફર સોલ્યુશન અને 1 મિલી થાઇમોલના 10% આલ્કોહોલ સોલ્યુશનને મિક્સ કરો, હલાવો અને બફર સોલ્યુશનને માર્ક પર ઉમેરો. pH મૂલ્ય 7.55 હોવું જોઈએ.
ઓ-ટોલુઇડિન રીએજન્ટ. 0.15 ગ્રામ થિયોરિયા 94 મિલી ગ્લેશિયલ એસિટિક એસિડમાં ઓગળવામાં આવે છે અને 6 મિલી નિસ્યંદિત ઓ-ટોલુઇડિન સાથે મિશ્રિત થાય છે. શ્યામ બોટલમાં સંગ્રહિત.
ફિનોલ પાણી સાથે સંતૃપ્ત. નિસ્યંદિત ફિનોલના 100 ગ્રામમાં 35 મિલી પાણી ઉમેરવામાં આવે છે અને ફિનોલના વિસર્જનને વેગ આપવા માટે મિશ્રણને સહેજ ગરમ કરીને હલાવવામાં આવે છે.
ફેનોલ્ફથાલિન, કાર્યકારી ઉકેલ. 0.1 N સોડિયમ હાઇડ્રોક્સાઇડ સોલ્યુશનના 15 મિલીલીટરમાં 75 મિલિગ્રામ પદાર્થને ઓગાળીને તૈયાર કરો, સોલ્યુશન રંગહીન અથવા સહેજ ગુલાબી હોવું જોઈએ, રંગીન દ્રાવણ કામ માટે યોગ્ય નથી. રીએજન્ટના પ્રતિકારને વધારવા માટે, તેમાં 3 મિલિગ્રામ ટ્રાઇલોન ઉમેરવામાં આવે છે, જે ભારે ધાતુઓના ક્ષારને બાંધીને, વાતાવરણીય ઓક્સિજન દ્વારા ફેનોલ્ફથાલિનના ઓટોક્સિડેશનને અટકાવે છે.
ફાઈબ્રિન. બોવાઇન બ્લડ ફાઇબ્રિન લોહીના રંગદ્રવ્યોમાંથી વહેતા પાણીમાં સફેદ ગંઠાઇ ન આવે ત્યાં સુધી ઘણા દિવસો સુધી ધોવાઇ જાય છે. પાણી સ્ક્વિઝ્ડ કરવામાં આવે છે, અને ગ્લિસરીનથી ભરેલું ફાઈબ્રિન, ચુસ્તપણે બંધ જારમાં સંગ્રહિત થાય છે. ઉપયોગ કરતા પહેલા, ફાઈબરિન ગ્લિસરીનમાંથી ધોવાઇ જાય છે.
ફોસ્ફરસ-વેનીલીન રીએજન્ટ. કેન્દ્રિત ફોસ્ફોરિક એસિડના 4 ભાગો (વોલ્યુમ દ્વારા) વેનીલિનના 0.6% જલીય દ્રાવણના 1 ભાગ સાથે મિશ્ર કરવામાં આવે છે. રીએજન્ટ ઓરડાના તાપમાને ડાર્ક ગ્લાસ કન્ટેનરમાં સંગ્રહિત થાય છે.
ફ્રુક્ટોઝ 1,6-બિસ્ફોસ્ફેટ, સોડિયમ મીઠું. ફ્રુક્ટોઝ-1,6-બિસ્ફોસ્ફેટના સોડિયમ સોલ્ટના 10% સોલ્યુશનના 2.0 મિલીલીટરને 25 મિલી ફ્લાસ્કમાં ચિહ્ન સુધી પાણી સાથે ભળે છે. રેફ્રિજરેટરમાં સંગ્રહિત થાય ત્યારે સ્થિર.
યુરિયા માટે રંગ રીએજન્ટ. ડાયસેટીલ મોનોક્સાઈમ અને થિયોસેમીકાર્બાઝાઈડ ધરાવતા યુરિયાના નિર્ધારણ માટે કીટમાંથી ટેબ્લેટને 50 મિલી ફ્લાસ્કમાં ગરમ કરીને ઓગળવામાં આવે છે. ઉકેલ ત્રણ અઠવાડિયા માટે સ્થિર છે. ઉપયોગ કરતા પહેલા, તૈયાર સોલ્યુશનની સમાન માત્રા અને 9.6% સલ્ફ્યુરિક એસિડ સોલ્યુશન મિક્સ કરો.
β-ગ્લાયસેરોફોસ્ફેટનું આલ્કલાઇન સોલ્યુશન. 100 મિલીની ક્ષમતાવાળા વોલ્યુમેટ્રિક ફ્લાસ્કમાં 1 ગ્રામ સોડિયમ β-ગ્લાયસેરોફોસ્ફેટ અને 0.85 ગ્રામ મેડિનલ ઉમેરો, લગભગ 30 મિલી નિસ્યંદિત પાણી ઉમેરો, વિસર્જન કરો અને પાણીથી વોલ્યુમને ચિહ્ન પર લાવો. 100 ml ની ક્ષમતાવાળા બીજા વોલ્યુમેટ્રિક ફ્લાસ્કમાં 50 ml β-glycerophosphate ના તૈયાર સોલ્યુશન, 0.1 M સોડિયમ હાઈડ્રોક્સાઇડ સોલ્યુશનનું 2.8 ml ઉમેરો અને નિસ્યંદિત પાણી (સોલ્યુશન pH 8.6) વડે ચિહ્ન પર લાવો. લગભગ 3 મિલી ટોલ્યુએન પ્રવાહી પર મૂકો. સોલ્યુશનને રેફ્રિજરેટરમાં 10 દિવસથી વધુ સમય માટે સ્ટોર કરો.
રાસાયણિક રીતે શુદ્ધ રીએજન્ટ્સનો ઉપયોગ બફર ઉકેલો તૈયાર કરવા માટે થાય છે. અને વિશ્લેષણાત્મક ગ્રેડ, ખાસ તૈયાર. રીએજન્ટ નીચે પ્રમાણે તૈયાર કરવામાં આવે છે.
પોટેશિયમ ફોસ્ફેટ મોનોસબસ્ટીટ્યુટેડ, KH 2 PO 4 , પરમાણુ વજન 136.09. જ્યારે 150 મિલી પાણીમાં ઉકાળીને ગરમ કરવામાં આવે ત્યારે 100 ગ્રામ દવા ઓગળી જાય છે. ઉકેલ ગરમ ફિલ્ટર કરવામાં આવે છે. સતત હલાવતા, ગાળણને 10 ºС સુધી ઠંડુ કરવામાં આવે છે. પછી 150 મિલી એથિલ આલ્કોહોલ ઉમેરો. ફિલ્ટ્રેટને સતત હલાવવાથી અલગ થયેલા સ્ફટિકોને સક્શન ફનલ પર ફિલ્ટર કરવામાં આવે છે અને તે જ પરિસ્થિતિઓમાં ફરીથી રિક્રિસ્ટલ કરવામાં આવે છે; સ્ફટિકોને 105...110 ºС પર સતત વજનમાં સૂકવવામાં આવે છે. 99.9 ... 100.0% ની રેન્જમાં મુખ્ય પદાર્થની સામગ્રી સાથેની તૈયારીની હાજરીમાં, પદાર્થની પ્રારંભિક તૈયારી હાથ ધરવામાં આવતી નથી.
અવ્યવસ્થિત સોડિયમ ફોસ્ફેટ, Na 2 HPO 4 12H 2 O, પરમાણુ વજન 358.12. દવા તૈયાર કરવાની બે રીત છે.
a) 150 ગ્રામ દવા 150 મિલી પાણીમાં ઓગળી જાય છે જ્યારે તેને 100 0 સે. સુધી ગરમ કરવામાં આવે છે. સોલ્યુશનને ગરમ કરીને ફિલ્ટર કરવામાં આવે છે અને ઠંડક પછી, અવક્ષેપિત સ્ફટિકોને ફિલ્ટર કરવામાં આવે છે. પુનઃસ્થાપનને 100 ºС સુધી ગરમ કરીને પુનરાવર્તિત કરવામાં આવે છે. પુનઃસ્થાપિત તૈયારીને પોર્સેલેઇન કપમાં પાણીના સ્નાનમાં સતત હલાવતા રહીને ગરમ કરવામાં આવે છે જ્યાં સુધી તૈયારી સંપૂર્ણપણે સુકાઈ ન જાય. પરિણામી મીઠું દિવસ દરમિયાન ફ્યુઝ્ડ કેલ્શિયમ ક્લોરાઇડ પર ડેસીકેટરમાં સૂકવવામાં આવે છે. પુનઃસ્થાપિત તૈયારીમાં (Na 2 HPO 4 ·2H 2 O), મુખ્ય પદાર્થની સામગ્રી તપાસવામાં આવે છે. આ કરવા માટે, લગભગ 0.5000 ગ્રામ દવા 50 મિલી પાણીમાં ઓગળવામાં આવે છે, 2 ... 3 મિલી સંતૃપ્ત સોડિયમ ક્લોરાઇડ સોલ્યુશન ઉમેરવામાં આવે છે અને મિથાઈલ રેડના સૂચકની હાજરીમાં 0.1 એન હાઇડ્રોક્લોરિક એસિડ સોલ્યુશન સાથે ટાઇટ્રેટ કરવામાં આવે છે. . જો જરૂરી હોય તો, નમૂનાના કદમાં ગોઠવણો કરો. બરાબર 0.1 N હાઇડ્રોક્લોરિક એસિડનું 1 મિલી Na 2 HPO 4 2H 2 O ના 0.0178 ગ્રામને અનુરૂપ છે.
b) 75 ગ્રામ દવા 250 મિલી પાણીમાં 60 ºС સુધી ગરમ કરવામાં આવે છે. સોલ્યુશનને ગરમ ફિલ્ટર કરવામાં આવે છે, ગાળણને 10 ºС સુધી સતત હલાવતા ઠંડુ કરવામાં આવે છે. અવક્ષેપિત સ્ફટિકોને સક્શન ફનલ પર ફિલ્ટર કરવામાં આવે છે અને તે જ પરિસ્થિતિઓમાં ફરીથી રિક્રિસ્ટલાઇઝ કરવામાં આવે છે. પરિણામી મીઠું પ્રથમ 24 કલાક માટે 30 ºС થી વધુ ન હોય તેવા તાપમાને સૂકવવામાં આવે છે, પછી તેને 3-4 કલાક માટે 50 ºС પર પકાવવાની નાની ભઠ્ઠીમાં સૂકવવાનું ચાલુ રાખવામાં આવે છે, અને અંતે 120 ± 5 ºС પર સતત વજનમાં, મીઠું અટકાવે છે. પીગળવું. સૂકાયા પછી, મીઠામાં Na 2 HPO 4 રચના હોય છે.
રીએજન્ટ્સ તૈયાર કર્યા પછી, પોટેશિયમ ફોસ્ફેટ મોનોસબસ્ટીટ્યુટેડ અને સોડિયમ ફોસ્ફેટ અવ્યવસ્થિતના સ્ટોક સોલ્યુશન તૈયાર કરવામાં આવે છે.
9.078 ગ્રામ વજનના નિર્જળ પોટેશિયમ ફોસ્ફેટ મોનોસબસ્ટીટ્યુટેડ KH 2 PO 4 નો એક ભાગ પાણીમાં ઓગળવામાં આવે છે અને દ્રાવણનું પ્રમાણ 1 લિટર સુધી ગોઠવવામાં આવે છે. ઉકેલને સ્થિર કરવા માટે ટોલ્યુએનના 3-4 ટીપાં ઉમેરો.
સોડિયમ ફોસ્ફેટ વિસર્જન કરેલ Na 2 HPO 4 12H 2 O નો એક ભાગ, જેનું વજન 11.876 ગ્રામ છે, તે પાણીમાં ઓગળવામાં આવે છે અને સોલ્યુશનનું પ્રમાણ 1 લિટરમાં ગોઠવવામાં આવે છે. ઉકેલને સ્થિર કરવા માટે ટોલ્યુએનના 3-4 ટીપાં ઉમેરો.
પ્રારંભિક ઉકેલોમાંથી કોષ્ટક A.2 અનુસાર 4.94 થી 9.18 ના pH સાથે ફોસ્ફેટ બફર ઉકેલો તૈયાર કરો.
કોષ્ટક A.2 - 4.94 ... 9.18 ના pH સાથે ફોસ્ફેટ બફર સોલ્યુશન
| pH | Na 2 HPO 4 12H 2 O સોલ્યુશન, મિલી | KH 2 PO 4 સોલ્યુશન, મિલી |
| 4,94 | 1,0 | 99,0 |
| 5,29 | 2,5 | 97,5 |
| 5,59 | 5,0 | 95,0 |
| 5,91 | 10,0 | 90,0 |
| 6,24 | 20,0 | 80,0 |
| 6,47 | 30,0 | 70,0 |
| 6,64 | 40,0 | 60,0 |
| 6,81 | 50,0 | 50,0 |
| 6,98 | 60,0 | 40,0 |
| 7,17 | 70,0 | 30,0 |
| 7,38 | 80,0 | 20,0 |
| 7,73 | 90,0 | 10,0 |
| 8,04 | 95,0 | 5,0 |
| 8,34 | 97,5 | 2,5 |
| 8,67 | 99,0 | 1,0 |
| 9,18 | 100,0 | 0,0 |
ઉમેરવાની તારીખ: 2015-08-06 | દૃશ્યો: 4058 |
બફર સોલ્યુશનના pH ની ગણતરી હેન્ડરસન-હેસલબેક સમીકરણ અનુસાર કરવામાં આવે છે:
- એસિડ બફર માટે, સમીકરણ ફોર્મ ધરાવે છે
- મુખ્ય બફર માટે
સમીકરણો દર્શાવે છે કે આપેલ રચનાના બફર સોલ્યુશનનું pH એસિડ અને મીઠું અથવા આધાર અને મીઠાની સાંદ્રતાના ગુણોત્તર દ્વારા નક્કી કરવામાં આવે છે, અને તેથી તે મંદન પર આધારિત નથી. જ્યારે સોલ્યુશનની માત્રા બદલાય છે, ત્યારે દરેક ઘટકની સાંદ્રતા સમાન સંખ્યામાં બદલાય છે.
બફર ક્ષમતા
સતત pH જાળવવા માટે બફર ઉકેલોની ક્ષમતા મર્યાદિત છે. તે. બફર સોલ્યુશનના પીએચમાં નોંધપાત્ર ફેરફાર કર્યા વિના એસિડ અથવા આલ્કલી ઉમેરવાનું ફક્ત મર્યાદિત માત્રામાં જ શક્ય છે.
જ્યારે એસિડ અને આલ્કલી ઉમેરવામાં આવે છે ત્યારે માધ્યમની પ્રતિક્રિયામાં પરિવર્તનનો સામનો કરવા માટે બફર દ્રાવણની ક્ષમતાને દર્શાવતું મૂલ્ય દ્રાવણની બફર ક્ષમતા (B) કહેવાય છે.
બફર ક્ષમતા મજબૂત એસિડ અથવા બેઝના છછુંદર સમકક્ષ સંખ્યા દ્વારા માપવામાં આવે છે, જેમાં બફર સોલ્યુશનના 1 લિટરનો ઉમેરો પીએચમાં એક દ્વારા ફેરફાર કરે છે.
ગાણિતિક રીતે, બફર ક્ષમતા નીચે પ્રમાણે વ્યાખ્યાયિત કરવામાં આવે છે:
B દ્વારા એસિડ (mol/l અથવા mmol/l):
,
જ્યાં n(1/z HA) એ એસિડના મોલ સમકક્ષ સંખ્યા છે, pH 0 અને pH એ એસિડ ઉમેરતા પહેલા અને પછી બફર સોલ્યુશનના pH છે, V B એ બફર સોલ્યુશનનું વોલ્યુમ છે.
આલ્કલીમાં (mol/l અથવા mmol/l):
,
જ્યાં n (1/z VOH) એ આલ્કલીના મોલ સમકક્ષની સંખ્યા છે, બાકીના હોદ્દાઓ સમાન છે.
બફર ક્ષમતા સંખ્યાબંધ પરિબળો પર આધારિત છે:
1. ઉમેરાયેલ પદાર્થો અને બફર સોલ્યુશનના ઘટકોની પ્રકૃતિમાંથી. કારણ કે કેટલાક પદાર્થો અદ્રાવ્ય સંયોજનો અથવા સંકુલ બનાવી શકે છે અથવા બફર સિસ્ટમના ઘટકો સાથે અન્ય અનિચ્છનીય પ્રતિક્રિયાઓ આપી શકે છે, પછી બફર ક્ષમતાનો ખ્યાલ તેનો અર્થ ગુમાવે છે.
2. બફર સિસ્ટમના ઘટકોની પ્રારંભિક સાંદ્રતામાંથી.
દ્રાવણમાં એસિડ-બેઝ જોડીના ઘટકોની સંખ્યા જેટલી વધારે છે, આ દ્રાવણની બફર ક્ષમતા વધારે છે.
બફર સોલ્યુશનના ઘટકોની સાંદ્રતાના ગુણોત્તરની મર્યાદા, જેના પર સિસ્ટમ હજી પણ તેના ગુણધર્મો જાળવી રાખે છે. pH અંતરાલ = pK ± 1 એ સિસ્ટમની બફર ક્રિયાનો ઝોન કહેવાય છે. આ 1/10 થી 10/1 સુધી મીઠું /C થી-તમ સાથેના ગુણોત્તરની શ્રેણીને અનુરૂપ છે.
B થી (લોહી) \u003d 0.05 mol / l; B થી (પ્લાઝમા) \u003d 0.03 mol / l; B થી (સીરમ રક્ત) = 0.025 mol/l
બ્લડ બફર સિસ્ટમ્સ
સજીવોના એસિડ-બેઝ સંતુલન જાળવવા માટે બફર સિસ્ટમ્સ ખાસ કરીને મહત્વપૂર્ણ છે. મોટાભાગના અંતઃકોશિક પ્રવાહીનું pH મૂલ્ય 6.8 થી 7.8 ની રેન્જમાં છે.
એસિડ - માનવ રક્તમાં મૂળભૂત સંતુલન હાઇડ્રોકાર્બોનેટ, ફોસ્ફેટ, પ્રોટીન અને હિમોગ્લોબિન બફર સિસ્ટમ્સ દ્વારા પ્રદાન કરવામાં આવે છે. રક્ત પ્લાઝ્માનું સામાન્ય pH મૂલ્ય 7.40 ± 0.05 છે.
હિમોગ્લોબિન બફર સિસ્ટમ રક્તની 35% બફર ક્ષમતા પ્રદાન કરે છે: 
. ઓક્સિહેમોગ્લોબિન ઘટેલા હિમોગ્લોબિન કરતાં વધુ મજબૂત એસિડ છે. ઓક્સિહેમોગ્લોબિન સામાન્ય રીતે પોટેશિયમ મીઠાના સ્વરૂપમાં હોય છે.
કાર્બોનેટ બફર સિસ્ટમ :
શક્તિની દ્રષ્ટિએ પ્રથમ ક્રમે છે. તે 1/20 ના ગુણોત્તરમાં કાર્બોનિક એસિડ (H 2 CO 3) અને સોડિયમ અથવા પોટેશિયમ બાયકાર્બોનેટ (NaHCO 3, KHCO 3) દ્વારા રજૂ થાય છે. બાયકાર્બોનેટ બફરનો ઉપયોગ શરીરમાં એસિડ-બેઝ વિક્ષેપને સુધારવા માટે વ્યાપકપણે થાય છે.
ફોસ્ફેટ બફર સિસ્ટમ 
.
ડાયહાઇડ્રોફોસ્ફેટ નબળા એસિડના ગુણધર્મો ધરાવે છે અને લોહીના પ્રવાહમાં પ્રવેશતા આલ્કલાઇન ઉત્પાદનો સાથે ક્રિયાપ્રતિક્રિયા કરે છે. હાઇડ્રોફોસ્ફેટમાં નબળા આલ્કલીના ગુણધર્મો છે અને તે મજબૂત એસિડ સાથે પ્રતિક્રિયા આપે છે.
પ્રોટીન બફર સિસ્ટમ તેના એમ્ફોટેરિક ગુણધર્મોને કારણે એસિડ અને આલ્કલીને તટસ્થ કરવાની ભૂમિકા ભજવે છે: એસિડિક વાતાવરણમાં, પ્લાઝ્મા પ્રોટીન પાયાની જેમ વર્તે છે, મૂળભૂતમાં - એસિડની જેમ: 
બફર સિસ્ટમો પેશીઓમાં પણ હાજર છે, જે પ્રમાણમાં સતત સ્તરે પેશીઓના pH જાળવવામાં ફાળો આપે છે. મુખ્ય પેશી બફર પ્રોટીન અને ફોસ્ફેટ્સ છે. ફેફસાં અને કિડનીની મદદથી પણ pH જાળવવામાં આવે છે. વધારાનું કાર્બન ડાયોક્સાઇડ ફેફસાં દ્વારા દૂર કરવામાં આવે છે. એસિડિસિસવાળી કિડની વધુ એસિડ મોનોબેસિક સોડિયમ ફોસ્ફેટ સ્ત્રાવ કરે છે, અને આલ્કલોસિસ સાથે - વધુ આલ્કલાઇન ક્ષાર: ડાયબેસિક સોડિયમ ફોસ્ફેટ અને સોડિયમ બાયકાર્બોનેટ.
સમસ્યા હલ કરવાના ઉદાહરણો
ઉકેલ:
પછી અમે સૂત્રનો ઉપયોગ કરીને એસિડ બફર સોલ્યુશનના pH ની ગણતરી કરીએ છીએ
જવાબ: 5,76
ઉકેલ:
અમે સૂત્રનો ઉપયોગ કરીને બફર ક્ષમતાની ગણતરી કરીએ છીએ: 
જવાબ: 0.021 mol/l
ઉદાહરણ 3
બફર સોલ્યુશનમાં 100 ml 0.1 mol/l એસિટિક એસિડ અને 200 ml 0.2 mol/l સોડિયમ એસિટેટ હોય છે. જો 0.2 mol/l સોડિયમ હાઇડ્રોક્સાઇડ સોલ્યુશનનું 30 મિલી તેમાં ઉમેરવામાં આવે તો આ દ્રાવણનો pH કેવી રીતે બદલાશે.
ઉકેલ:
અમે સૂત્રનો ઉપયોગ કરીને બફર સોલ્યુશનના pH ની ગણતરી કરીએ છીએ:
જ્યારે બફર સોલ્યુશનમાં NaOH ઉમેરવામાં આવે છે, ત્યારે મીઠાનું પ્રમાણ વધે છે અને બફર સોલ્યુશનમાં એસિડનું પ્રમાણ ઘટે છે:
0,006 0,006 0,006
CH 3 COOH + NaOH \u003d CH 3 COONa + H 2 O
અમે n (NaOH) \u003d 0.03 l 0.2 mol / l \u003d 0.006 mol ની ગણતરી કરીએ છીએ, તેથી, બફર સોલ્યુશનમાં, એસિડનું પ્રમાણ 0.006 mol દ્વારા ઘટે છે, અને મીઠાનું પ્રમાણ 0.006 mol દ્વારા વધે છે.
અમે સૂત્રનો ઉપયોગ કરીને ઉકેલના pH ની ગણતરી કરીએ છીએ:
તેથી: pH 2 - pH 1 = 5.82 - 5.3 = 0.52
જવાબ:બફર pH ફેરફાર = 0.52.
સ્વતંત્ર ઉકેલ માટે કાર્યો
4. પ્રારંભિક મૂલ્ય (7.36) થી અંતિમ મૂલ્ય (7.0) માં pH બદલવા માટે 2 મિલી રક્તનું ટાઇટ્રેટ કરવા માટે, 0.01 M HCl સોલ્યુશનનું 1.6 મિલી ઉમેરવું જરૂરી હતું. એસિડ બફર ક્ષમતાની ગણતરી કરો.
5. હાઇડ્રોજન આયનોની સાંદ્રતા 300 ગણી (K dis (CH 3 coon) = 1.85.10 -5) ઘટાડવા માટે 300 ml એસિટિક એસિડમાં સોડિયમ એસિટેટના કેટલા મોલ્સ ઉમેરવા જોઈએ.
6. બાયોકેમિકલ અભ્યાસમાં, pH = 7.4 સાથે ફોસ્ફેટ બફરનો ઉપયોગ થાય છે. આવા બફર સોલ્યુશન (pK (H 2 PO 4 -) \u003d 7.4) મેળવવા માટે સોડિયમ હાઇડ્રોજન ફોસ્ફેટ અને સોડિયમ ડાયહાઇડ્રોજન ફોસ્ફેટના સોલ્યુશનને 0.1 mol/l દરેકની સાંદ્રતા સાથે કયા ગુણોત્તરમાં મિશ્રિત કરવું જોઈએ.
7. નીચેના સૂચકાંકો સાથે સીબીએસના કયા ઉલ્લંઘનો જોવા મળે છે: રક્ત pH = 7.20, Pco 2 = 38 mm Hg. આર્ટ., BO = 30 mmol / l, SBO = -4 mmol / l. KOS ના આ ઉલ્લંઘનને કેવી રીતે દૂર કરવું?
પરીક્ષણ કાર્યો
ઇમ્યુનોહિસ્ટોકેમિસ્ટ્રી માટે ટ્વીન-20 ફોસ્ફેટ વોશ બફર એ એક સાંદ્રતા (20x) છે જે, મંદન પછી, પ્રક્રિયાઓ વચ્ચે રીએજન્ટ્સની સ્લાઇડ્સ અને ઇમ્યુનોહિસ્ટોકેમિસ્ટ્રીના નમૂનાઓના ટૂંકા ગાળાના સંગ્રહને ધોવા માટે વપરાય છે. મંદન પછી, ઉપયોગ માટે તૈયાર 0.01 M સોલ્યુશનનું pH 7.4±0.1 છે. આ ફોસ્ફેટ-બફર કરેલ ખારાનો ઉપયોગ માત્ર ઉચ્ચ ગુણવત્તાની ધોવા માટે જ નહીં, પરંતુ ઉપયોગમાં લેવાતા એન્ટિબોડીઝ અને તેમના એપિટોપ્સની મોર્ફોલોજિકલ લાક્ષણિકતાઓને જાળવવા માટે પણ પરવાનગી આપે છે, જે ઇમ્યુનોહિસ્ટોકેમિકલ પ્રતિક્રિયા માટે જરૂરી ચોક્કસ બંધનને સરળ બનાવે છે. પીબીએસમાં ટ્વીન-20નો ઉમેરો વધુ કાર્યક્ષમ ધોવાને પ્રોત્સાહન આપે છે અને બિન-વિશિષ્ટ સ્ટેનિંગને અટકાવે છે.
|
|
|
અમારા ફાયદા:
આ ક્ષણે અમે લેબોરેટરી રીએજન્ટ્સના અગ્રણી વિદેશી ઉત્પાદકો સાથે સહકાર આપી રહ્યા છીએ. અમારા ગ્રાહકો મોસ્કો અને રશિયાના અન્ય શહેરોમાં તબીબી સંસ્થાઓ સહિત બિન-રાજ્ય અને રાજ્ય સંસ્થાઓ છે. નિયમિત ગ્રાહકો માટે ડિસ્કાઉન્ટની સિસ્ટમ છે.
સમાન લેખો
-
રશિયન ફેડરેશનની સરકારનો હુકમનામું 307
જો ઠેકેદાર મકાનમાલિકોની ભાગીદારી, હાઉસિંગ બાંધકામ, આવાસ અથવા અન્ય વિશિષ્ટ ગ્રાહક સહકારી અથવા મેનેજિંગ સંસ્થા છે, તો પછી ઉપયોગિતાઓ માટે ચૂકવણીની રકમની ગણતરી, અને ...
-
પુરુષોમાં શક્તિ કેવી રીતે ઘટાડવી?
કેટલીકવાર માણસની વધેલી શક્તિ ઓછી અગવડતાનું કારણ બની શકે છે. મજબૂત સેક્સના કેટલાક પ્રતિનિધિઓ કામવાસનાનું સ્તર ઘટાડવા માંગે છે, કારણ કે ઉત્થાન દિવસમાં દસ વખત થાય છે. ખાસ કરીને આ ટ્રેન્ડ...
-
એક વર્ષ માટે આલ્ફા પ્રોપર્ટી વીમા માટે AlfaStrakhovanie નિયમોમાં મિલકત વીમો
વીઆઈપી ક્લાયંટ માટે સેવા વીઆઈપી ક્લાયંટ કેવી રીતે બનવું વીમાના પ્રકાર ઓટો ઈન્સ્યોરન્સ વ્યાપાર ઉડ્ડયન વીમો મિલકત વીમો યાટ અને બોટ વીમો સાંસ્કૃતિક મિલકત વીમો આંતરરાષ્ટ્રીય આરોગ્ય વીમો...
-
સ્વપ્ન પુસ્તક મુજબ રાજદ્રોહનું સ્વપ્ન શા માટે સ્વપ્નનું અર્થઘટન સ્વપ્નનું અર્થઘટન શા માટે રાજદ્રોહનું સ્વપ્ન
એસ. કરાટોવનું સ્વપ્ન અર્થઘટન સ્વપ્ન પુસ્તક મુજબ રાજદ્રોહનું સ્વપ્ન શા માટે: રાજદ્રોહ, બદલો - તમારી સાથે છેતરપિંડી થઈ રહી છે તે જોવું એ તમારી વફાદારીની નિશાની છે. તમે જે બદલાયા છો તે જોવું એ નુકશાન છે. જુઓ. આ પણ જુઓ: પત્નીનું સ્વપ્ન શું છે, પતિનું સ્વપ્ન શું છે, સ્વપ્ન શું છે ...
-
શા માટે પલાળેલા ચોખા વજન ઘટાડવા માટે આરોગ્યપ્રદ છે અને તેને યોગ્ય રીતે કેવી રીતે રાંધવા?
પોષણ મુદ્દાઓ આધુનિક લોકોમાં ખૂબ જ લોકપ્રિય છે, ખાસ કરીને જેઓ બિનજરૂરી વજનથી છુટકારો મેળવવા માંગે છે. ચોખાની ખાદ્ય પ્રણાલી વિશે અને ઉપયોગમાં લેવાતા ખોરાક વિશે બે વિરોધી મંતવ્યો છે, જેમ કે બ્રાઉન અને ...
-
ફોસ્ફેટ બફર સોલ્યુશનની તૈયારી
હિમેટોલોજિકલ અભ્યાસ માટે જૈવિક સામગ્રીના સંગ્રહ અને તૈયારી માટેની આવશ્યકતાઓ. હિમેટોલોજિકલ અભ્યાસ માટે જૈવિક સામગ્રીના પરિવહન અને સંગ્રહ માટેની આવશ્યકતાઓ. સાચું...