혈액학 연구를 위한 생물학적 물질의 수집 및 준비 요건.

혈액학 연구를 위한 생물학적 물질의 운송 및 보관 요건.

지혈 시스템 연구 방향을 올바르게 채우십시오.

환자의 이름, 나이, 성별

연구를 위한 혈액 샘플링 시간

임상 진단(간단히)

헤마토크릿

출혈 증후군(코, 자궁 출혈 등), 혈전증(국소화를 나타냄), 쇼크, 다발성 장기부전, 외상, 장기간 압박 증후군, 화상 등)

마지막 투여의 복용량, 방법 및 날짜를 ​​나타내는 지혈 매개 변수에 영향을 미치는 복용 약물을 나타냅니다.

샘플링(혈액)을 위한 시간 간격, 식이 및 운동 제한이 준수됩니다.

예정된 혈액 샘플링은 환자가 눕거나 앉아 있는 상태에서 아침 7시에서 9시 사이에 수행됩니다. 역학에서 지혈을 연구 할 때 이전과 동일한 신체 위치에서 혈액을 채취하는 것이 바람직합니다.

혈액은 마지막 식사 후 12-14시간 후 공복 상태에서 채취합니다.

채혈하기 전에 환자는 15분 동안 휴식을 취하는 것이 바람직합니다.

예외: cito에 의한 지혈 연구, APTT 평가.

계획된 연구 전날 (24 시간 이내) 환자는 상당한 육체 노동, 알코올 섭취를 자제합니다. 환자는 채혈 전날 기름진 음식을 먹지 않는 것이 바람직합니다.

외과 적 개입은 며칠에서 몇 주 동안 지혈의 변화로 이어집니다.

지혈에 영향을 미치는 요인으로는 주사, 주입, 수혈, 천자, 생검, 마사지, 투석, 방사선 불투과성 제제의 도입, 면역 신티그라피, 전리 방사선, 내시경 검사, 특별식이 요법이 있습니다.

혈액 샘플링 규칙

혈액은 말초 정맥(보통 팔과)에서 채취합니다.

혈액 샘플링은 사용된 항응고제( 구연산나트륨 3.2%)비율: 구연산나트륨 1부피 대 혈액 9부피.

연구용 혈소판 수치시험관에 채혈 EDTA와 함께(라일락 색상 코딩). 혈소판 수치 연구는 임상 혈액 검사가 없거나 임상 혈액 검사에서 혈소판 수치의 병리학 적 값을 얻은 경우 처방됩니다

짧은 지혈대는 60초 이내로 허용됩니다. 바늘이 정맥에 들어간 직후 지혈대를 제거하십시오. 응고 시스템 연구를위한 혈액 샘플링의 경우 정맥을 마사지 할 수 없으며 두드리는 것이 중요합니다.

내경이 0.7-1mm(크기 19-22)인 채혈 바늘을 사용합니다.

주사기의 사용은 혈액의 격렬한 움직임과 공기와의 혼합(거품)에 의한 혈소판 및 혈액 응고 인자의 활성화로 인해 허용되지 않습니다. 진공용기 사용시 제외됩니다.

바늘을 정맥에 삽입한 후 진공 용기를 부착하면 혈액이 중력에 의해 용기로 흐르기 시작합니다.

혈액 응고 검사를 위해 채혈 초시험관, 생화학과 같은 다른 연구에 처음으로 사용합니다. 응고시험관을 먼저 뽑는 경우에는 빈 관에 처음 5ml의 혈액을 채취하여 버린다. 조직 트롬보플라스틴이 샘플에 들어가는 것을 방지합니다.

채혈 직후 혈액에 항응고제를 거품 없이 부드럽게 섞는다(관을 3~4회 뒤집는다).

생물학적 물질의 샘플링 후 혈액 샘플을 확인하십시오. 혈액 샘플을 정확하게 검사하면 다음 오류를 방지할 수 있습니다. 혈액/구연산염 부피의 잘못된 비율; 부분적으로 응고된 혈액.

혈액은 채혈 후 45분 이내에 실험실로 전달됩니다. 운송 중 혈액이 흔들리지 않아야 합니다. 혈액 샘플은 4°C 미만 및 30°C 이상의 온도에서 운송해서는 안 됩니다.

응급 실험실 조수 (의료 기술자)는 다음을 수행합니다.

다음을 포함하여 전달된 혈액의 입력 제어: 1) 추천 양식 작성의 정확성 확인. 2)튜브의 라벨에 따라 전달된 혈액량의 적정성 확인, 3) 튜브를 천천히 기울일 때 샘플에 혈전이 없는지 확인합니다.

다음을 얻기 위해 전달된 혈액의 원심분리:

혈소판이 풍부한 혈장(원심분리 매개변수: rpm = 1000rpm(약 150-200g), 원심분리 시간 5-7분.

최적의 원심분리 조건을 선택하기 위해 원심력(g)에 의해 유도됩니다. 다음 공식을 사용할 수 있습니다.

g = 1.118 x 0.00001r x n2,

여기서 r은 원심분리기의 반경 - 로터의 축과 원심분리기 시트의 시험관 중심 사이의 거리(센티미터)입니다. n은 분당 회전 수입니다.

혈소판 결핍 혈장원심분리 매개변수: rpm = ~2500-3000rpm(약 1500-2000g), 원심분리 시간 10-20분. 혈소판을 완전히 제거하기 위해 반복적인 원심분리가 수행되고 원심분리 매개변수는 동일하게 유지됩니다.

3. 원심분리 후 혈장의 색상과 투명도를 확인합니다. 용혈된 샘플, 황달 또는 지방성(유미색) 혈장은 검사 대상이 아닙니다.

원심분리 후 상층액을 제거합니다.

바람직한동안 지혈 매개변수 연구 채혈 후 2시간, 하지만 허용된 응고학적 매개변수 연구 4시간 이내 혈장이 적혈구 및 백혈구의 침전물에서 분리된 경우.

필요하다면 장기 보관"신선한" 샘플(채혈 후 2시간 이내) 혈소판 없는 혈장한 번 될 수 있습니다 얼다-20°C에서 최대 2주 또는 -70°C에서 최대 6개월까지 보관할 수 있습니다. 혈장은 따뜻한 물(+36°C)에서 신속하게 해동하고 철저히 혼합한 다음 즉시 검사해야 합니다. 동결 후 APTT의 변경이 가능합니다.

혈액학 연구를 위한 미세 제제의 제조 방법, 고정 및 염색 방법.

혈액학 연구를 위한 혈액 도말 준비 방법.

안경의 준비 및 가공. 새로운 깨끗한 유리는 Nikiforov(96% 에틸 알코올 및 에테르의 동일 부분) 혼합물에서 탈지 후 사용할 수 있습니다. 사용한 안경은 따뜻한 비눗물 또는 세척 분말 용액(물 5리터당 분말 1테이블스푼)에 하루 동안 담가둡니다. 하루 후 용액을 배출하고 유리를 흐르는 물로 씻습니다. 그런 다음 따뜻한 비눗물 또는 세척 가루 용액을 다시 붓고 끓여서 같은 용액에서 5-10 분 동안 끓입니다 (잔이 흐려지는 것을 피하기 위해 더 이상 사용하지 않음). 용액을 냉각시킨 후 다시 배수하고 슬라이드를 흐르는 물로 헹구고 각 슬라이드를 흐르는 물에 브러시로 씻습니다. 이러한 방식으로 처리된 유리는 깨끗한 시트에 펼쳐져 건조됩니다. 탈지용 깨끗한 유리잔을 Nikiforov 또는 96% 에틸 알코올의 혼합물에 60분 동안 넣은 다음 닦아 건조시키고 목이 넓은 깨끗한 용기에 보관합니다. 깨끗한 안경은 핀셋이나 손으로 측면 가장자리를 잡고 가져가는 것이 좋습니다.

얼룩의 준비. 소량의 혈액을 유리 막대로 짧은 면에 더 가까운 건조 준비된 유리 슬라이드에 적용합니다(또는 손가락 찔린 부위에서 직접). 유리를 수평 위치에 두고 45° 각도로 잡고 건조하고 깨끗한 갈은 유리로 유리에 혈액을 묻힙니다. 짧은 가장자리로 모든 혈액이 그 위에 퍼질 때까지 기다린 후 유리 슬라이드 위로 빠르게 그려집니다. 유리 슬라이드에 강한 압력을 가하면 혈액 세포가 손상될 수 있으므로 해서는 안 됩니다. 얼룩은 공기 건조되고 표시됩니다(간단한 연필로 선호). 건조한 얼룩은 균일하게 얇고 황색을 띠며 유리 가장자리에서 1.0-1.5cm 떨어진 곳에 위치하며 유리의 거의 전체 길이를 차지하고 "원추"로 끝나야합니다. 두꺼운(짙은 분홍색) 도말은 세포 형태를 식별하기 어렵기 때문에 사용하지 않아야 합니다.

표준 품질의 도말은 도말 준비를 위해 설계되고 다양한 회사에서 제조한 자동 장치를 사용하여 얻습니다.

혈액 도말의 고정 및 염색. 염색 전에 혈액 도말은 일반적으로 메틸 알코올에 5-10분 동안 고정하여 수용성 염료로 염색하는 과정에서 물과 접촉하거나 이후 물과 접촉할 때 발생할 수 있는 용혈을 방지합니다. 고정 기술은 염색 기술과 함께 아래에 설명되어 있습니다. Wright 및 Leishman 얼룩에는 메틸 알코올이 포함되어 있으므로 고정이 필요하지 않습니다.

마른 면봉은 건조하고 따뜻한 곳에서 2일 동안 보관할 수 있으며 고정되지 않은 덥고 습한 분위기에서는 훨씬 덜 보관됩니다.

혈액 세포는 반응(pH)이 다른 호염기성 및 호산성 구조를 포함합니다. 핵은 호염기성이며 청색을 띤다. 높은 호염기성(산성) 호염기구 과립도 파란색입니다. 헤모글로빈(염기성)은 친산성, 즉 빨간색으로 염색됩니다. 산성염료와 염기성염료를 조합하여 염색하는 것을 로마노프스키 염색이라고 하며 다양한 변형(Pappenheim, Wright, Noht, Leishman, Giemsa, Jayner 등)이 있습니다. 메틸렌 블루가 주염료로 주로 사용되지만 톨루이딘 블루도 사용됩니다. 산성 염료로는 eosin, azure I 및 azure II가 사용됩니다.

좋은 염색 기준 : 적혈구의 분홍색, 분홍색 배경에 호중구의 입도의 보라색 염색, 단핵구의 부드러운 azurophilic 입도.

페인트를 희석하려면 중성의 깨끗한 증류수를 사용하는 것이 가장 좋습니다. 오래된 증류수는 대기에서 이산화탄소를 포획하여 산성이 됩니다. 증류수가 알칼리성인 경우 적혈구는 더러운 청록색으로 변합니다. 파란색으로 염색되어야 하는 백혈구 부분은 보라색이 되고 호산구 과립은 분홍색 대신 푸르스름하고 녹색이 되며 호중구 과립은 그대로 유지됩니다. 산성수에서 적혈구는 밝은 주황색으로 변하고 백혈구 핵은 매우 창백합니다. 이상적인 것은 pH 7.0의 증류수이며, 이를 보존하기 위해 완충됩니다. 증류수에 녹인 즉시 사용 가능한 완충 정제를 사용할 수 있습니다.

골수 도말 염색의 경우 pH 7.4-7.5 염색이 이상적입니다.

Noht와 Pappenheim에 따른 염색 방법은 통일된 것으로 인정됩니다.

고정용 시약: 1) 메틸 알코올 또는 2) May-Grunwald eosin-methylene blue 용액.

Nokht에 따른 얼룩 얼룩용 시약 : 1) 하늘색 I의 염기성 용액 : 1g의 페인트를 1 리터의 증류수에 용해시키고 실온에서 12-14 일 동안 어두운 유리 접시에 방치 한 후 사용합니다. 2) 포타슘 에오신의 염기성 용액: 1g의 도료를 1리터의 증류수에 녹이고 실온에서 12-14일 동안 어두운 유리 용기에 방치한 후 사용한다. 3) 인산염 완충액(Weise 혼합물), pH 7.4-7.5: 인산이수소칼륨(KH2PO4) 0.49g과 인산수소나트륨(Na2HPO4) 0.909g을 혼합하고 1리터의 증류수에 용해합니다. 4) azure-eosin 작업 용액: 사용하기 전에 azure II 원액 25ml, 칼륨 에오신 원액 20ml 및 완충액 55ml를 혼합합니다(염료의 비율은 다를 수 있으며 설정됩니다. 새로운 스톡 솔루션 배치를 준비할 때 경험적으로).

Pappenheim에 따른 얼룩 얼룩용 시약: 1) May-Grunwald에 따른 에오신-메틸렌 블루 용액. 기성품 염료 용액이없는 경우 1 리터의 메틸 알코올에 1g의 건조 페인트를 용해시켜 준비합니다. 2) Nokht에 따른 azure-eosin의 작업 솔루션.

얼룩 고정. 고정 용액을 큐벳이나 마개가 있는 입이 넓은 접시에 붓습니다. 도말은 큐벳에 담그거나 5-10 분 동안 접시에 하나씩 두는 용기에 넣습니다. 안경이 든 용기를 고정 용액에서 제거하고(또는 안경을 핀셋으로 꺼내 스탠드에 둡니다) 완전히 마를 때까지 공기 중에 그대로 둡니다.

Nocht에 따른 염색. 용기에서 제거하지 않고 건조된 고정 도말을 엄격하게 정의된 시간(20-45분) 동안 작동하는 페인트 용액과 함께 큐벳에 넣습니다. 이 시간은 각 페인트 배치에 대해 경험적으로 선택됩니다. 용기가 있는 큐벳이 없는 경우 위쪽으로 스트로크와 평행하게 배치된 두 개의 유리 막대("레일")에 유리를 수평으로 놓고 작업 페인트 용액 3-4ml를 그 위에 붓습니다. 안경이 든 용기를 염료가 있는 큐벳에서 꺼내 수돗물이 든 큐벳에 넣습니다(용기가 없는 경우 유리 막대에서 페인트를 제거하지 않고 물로 유리를 씻어냅니다). 얼룩은 공기 건조됩니다.

파펜하임 채색. 고정되지 않은 건조한 혈액 도말을 용기에 넣고 May-Grunwald 용액이 담긴 큐벳에 3-5분 동안 내립니다(또는 피펫으로 고정되지 않은 도말에 3-4ml의 염료를 부음). 번짐이 있는 용기는 증류수로 큐벳에서 헹군 다음 Nokht에 따라 azure-eosin 페인트가 있는 큐벳에 8-15분 동안 둡니다. 염료를 배수하지 않고 "레일"에 놓인 슬라이드에 증류수를 1 분 동안 첨가 한 다음 페인트를 8-15 분 동안 도말에 붓고 페인트를 물로 씻어냅니다. 얼룩은 공기 건조됩니다.

Romanovsky-Giemsa에 따른 채색. Nokht에 따르면 동일한 방식으로 생산됩니다. 염료로 기성품 Romanovsky-Giemsa 용액이 사용되며, 증류수 1ml당 염료 1방울의 비율로 희석하여 사용합니다. 착색 시간은 각 염료 배치(25-40분)에 대해 경험적으로 설정됩니다.

라이트 착색. 시약. Wright's stain(건조 분말, BDH/E. Merck) 0.2g을 메탄올 100ml에 녹이고 며칠 동안 방치합니다. 적혈구가 충분히 선명하게 염색되지 않으면 0.25% 또는 0.3% 용액을 준비합니다.

채색 진행. 페인트 몇 방울(약 8방울)을 얼룩에 바르고 2-3분 동안 그대로 둔 다음(페인트가 마르지 않도록 하십시오), 동일한 양의 완충된 물을 얼룩에 붓습니다. 도료가 숙성되면 희석된 도료 표면에 금속성 광택이 있는 거품이나 필름이 나타납니다. 희석된 도료를 도말에 2~3분간 방치한 후 완충용액이나 물로 씻어낸다. 페인트가 도말 표면에 침전되어서는 안 됩니다. 이런 일이 발생하면 15-20초 동안 희석되지 않은 페인트로 도말을 채운 다음 완충액이나 물로 다시 채웁니다.

인산염 완충액의 준비.

용액 A(0.2M KH2PO4): 1리터의 증류수에 27.2g의 소금을 녹입니다.

용액 B(0.2M Na2HPO4): 1리터의 증류수에 35.6g의 Na2HPO4 × 2H2O를 녹입니다.

원하는 pH의 완충용액 100ml를 얻으려면 용액 A와 B를 표에 표시된 양만큼 배수해야 합니다. pH 값은 pH 미터로 확인합니다.

인산완충액의 제조

용액, ml	pH 값

리슈만 착색. 시약. Leishman의 건조 페인트 0.15g을 무수 메틸 알코올 133ml에 용해시킵니다. 페인트가 완전히 용해되어야 하며 미리 모르타르에서 페인트 결정을 갈아서 사용하는 것이 좋습니다. 유리 마개가 있는 병에 페인트를 보관하고 여과하지 마십시오.

채색 진행. Wright 염색과 유사하게 수행하되 완충액을 두 배로 희석합니다. 페인트 몇 방울(약 8)을 얼룩에 붓고 2분 동안 유지합니다. 완충용액 2배(16방울)를 넣고 흔들어 섞은 후 7~10분간 방치합니다. 페인트는 2-3초 안에 증류수로 씻어냅니다. 오래 세탁할수록 색이 옅어집니다. 얼룩은 공기 중 선반에서 건조됩니다.

두꺼운 피 한 방울 준비. 유리 슬라이드에 서로 일정 거리 떨어진 혈액 세 방울을 깨끗한 유리 슬라이드의 각도로 연필로 표시한 직경 약 1cm의 크기로 확장한 다음 공기 중에서 1~2시간 건조합니다.

짙은 핏방울 색칠하기. 두꺼운 핏방울은 고정되지 않습니다. 잘 말린 두꺼운 방울이있는 유리 슬라이드는 서로 어느 정도 떨어져있는 "레일"에 놓고 Nokht에 따른 azure-eosin의 작업 용액을 8-10 분 동안 붓습니다. 적혈구의 "침출"이 있습니다. 그런 다음 페인트를 배수하고 Nokht에 따른 azure-eosin 작업 용액의 새로운 부분을 30-35분 동안 제제에 붓습니다. 그런 다음 슬라이드를 증류수로 조심스럽게 헹구고 건조합니다.

얼룩 자동 염색

혈액학 검사실에서 가장 많이 요구되는 기능 중 하나가 혈액 도말의 준비와 염색이기 때문에 자동화하려는 시도는 당연합니다.

최초의 자동 도말 준비 시스템은 1990년 일본 Sysmex에서 개발되었으며 현재 전 세계적으로 1600개 이상의 시스템이 설치되어 있습니다. 이 기간 동안 축적된 방대한 경험은 시간당 최대 120번의 도말을 처리할 수 있는 완전 자동화된 SP-1000i 도말 준비 및 염색 스테이션인 차세대 시스템 개발에 사용되었습니다. SP-1000i는 지능형 쐐기 방식을 사용하여 도말 준비에서 높은 수준의 표준화 및 품질을 구현하여 사용자가 혈액 샘플의 양, 도말 블레이드의 각도, 적용 속도 및 대기 시간을 사용자에 따라 조정할 수 있습니다. 8에서 최대 16개의 다른 조절 수준을 사용하여 테스트 샘플의 헤마토크릿에 대해. 혈액 샘플링은 개방형 또는 폐쇄형 튜브에서 수동 또는 자동으로 수행할 수 있습니다. Sysmex 자동 도말 준비 및 염색 스테이션 SP-1000i(일본)

이 시스템은 최대 7개의 유연하게 사용자 지정 가능한 염색 프로토콜을 사용하여 도말 염색 품질을 표준화하고 가장 높은 요구 사항을 충족할 수 있습니다. 이중 및 단일 염색에 대해 다음 프로토콜을 사용할 수 있습니다. May-Grunwald-Giemsa, Romanovsky 및 Romanovsky-Giemsa에 따름. 혈액 도말은 카세트당 하나의 슬라이드만 포함하는 전용 카세트 시스템에서 염색됩니다. 이 방법을 사용하면 혈액 도말과 염색 시약 사이의 좋은 관계가 보장되고 시약에서 공기 중으로 메탄올이 증발하지 않습니다. 염색 전에 혈액이 잘 고정되도록 하기 위해 메탄올을 미리 고정하는 별도의 단계가 염색 과정에 통합되어 있습니다.

염색 프로토콜의 유연성으로 인해 골수 염색을 위한 특정 프로토콜을 사용할 수 있습니다.

혈액학 연구를 위한 골수 도말을 준비하는 방법.

골수 검사 - 골수 조영상 골수 검사에서 답해야 하는 첫 번째 질문은 세포의 양적 측면입니다. 말초혈액과 관련하여 다양한 유형의 세포의 수와 백분율에 대한 많은 수치가 결정될 수 있다는 것은 잘 알려져 있습니다. 세포는 자유 상태에 있고 혈관혈액 현탁액에 비교적 균일하게 분포되어 있기 때문입니다 . 골수에 관해서는 완전히 다른 것을 말할 수 있습니다. 조혈 조직의 구성은 매우 이질적이며 골수 세포의 분포는 동일하지 않습니다. 따라서 챔버의 골수 세포의 직접 수는 정상 상태와 동일한 질병의 틀 내에서 매우 넓은 범위에서 변동합니다. 우리가 개인에서 발견한 값은 일반적으로 mm3(Ursya)당 27,000~112,000개의 핵 원소 범위였습니다. 문헌 데이터는 mm3당 12,000개 및 300,000개로 제한되어 훨씬 더 광범위하게 변동합니다(Cartwright, Page). 원심분리 후 헤마토크릿 튜브에서 다음 4개의 층이 발견됩니다. 1) 상부 지방 황색 층; 2) 플라즈마; 3) 핵 세포로부터 형성된 회백색 층; 4) 적혈구로 구성된 적색층. 유핵 세포(골수용적률)의 회백색 층의 측정은 정상 개체에서 발견되는 값도 상당한 변동을 나타내기 때문에 값이 제한적이거나 오해의 소지가 있습니다. 또한, 핵 세포는 이 층뿐만 아니라 지방 및 적혈구 층에서도 발견됩니다. 그러나 골수 농축액의 도말은 상청 혈장을 제거한 후 회백색 층에서 준비할 수 있습니다. 세포에서 직접 도말이 불량한 경우 진단 과정에서 유용한 것으로 입증되었습니다. 골수 세포 챔버 수 및 골수 용적률 측정이 제한된 재현성으로 대략적인 결과만 제공한다는 점을 감안할 때 이러한 정량화 방법은 만족스럽지 않습니다. 흡인 천자 중에 추출된 물질은 다양한 비율로 혈액과 혼합된 골수 샘플입니다. 골수가 혈액으로 희석되는 정도는 여러 요인에 따라 달라집니다. 32P 라벨링은 흡인된 골수의 혈액 희석이 40%에서 100% 범위임을 입증했습니다. 그러나 진단을 내리기 위한 골수 연구는 주로 세포 함량의 정성적 연구에 기반하고 이 함량의 양적 값에는 이차적으로만 기반한다는 점에 유의해야 합니다. 이것이 골수 세포를 결정하는 정량적 방법이 정상 샘플과 비교하여 골수의 세포 구성에 대한 반정량적 평가로 구성되는 이유입니다. b) 조직학적 섹션. 도말 연구는 주로 다음과 같은 목표를 가지고 여러 번 도말에서 건식 수정체를 사용하여 수행됩니다. a) 골수 세포 덩어리의 반정량적 평가; b) 거핵구의 존재 및 밀도 측정; c) 거대 세포 또는 비정상 세포 둥지의 탐지; d) 침수에 의한 연구에 가장 적합한 영역 식별. 골수 입자를 분쇄하여 얻은 도말에서 다음 세 가지 동심 영역이 구별됩니다. a) 중심; b) 외부; c) 중간. 중앙 구역은 지방 액포, 기질 세포, 과립구 및 수많은 파괴된 세포에 의해 형성됩니다. 외부 영역에는 골수 세포를 희석시키는 다량의 혈액이 포함되어 있습니다. 얇은 도말과 마찬가지로 골수 세포와 적혈구의 형태학적 세부 사항 연구에만 기여합니다. 가장 밀도가 높은 세포 덩어리는 중간 영역에 위치하므로 설명된 모든 질문을 명확히 할 수 있는 최적의 연구를 수행할 수 있습니다. 여기 골수 세포는 골수에서 볼 수 있는 것처럼 잘 보존되어 섬이나 둥지에 배열되어 있습니다. 골수 지형을 유지하면서 이 영역에 대한 연구 결과는 보다 균질하고 골수의 실제 상태와 일치하며, 이는 조직학적 이미지와 비교하여 확인됩니다. 세포 밀도의 반정량적 결정은 a) 정상, b) 풍부 또는 c) 정상 골수에 비해 희박으로 표현됩니다. 정상 또는 풍부한 세포 덩어리의 식별은 귀중한 발견이지만 골수가 부족한 경우 주의해서 고려해야 합니다. 실제 저형성증의 존재를 증명하려면 여러 판을 검사하고 여러 뼈 부위에 구멍을 뚫거나 뼈 생검을 실시해야 합니다. 골수 세포 덩어리에 대한 가장 정확한 정보는 조직학적 섹션을 검사하여 얻을 수 있습니다. 성인의 경우 지방과 활성 세포 실질이 차지하는 공간의 비율은 일반적으로 1:1 또는 2:1입니다. 일부 저자는 조혈 세포가 골수 덩어리의 4분의 1 미만을 차지할 때 골수를 저세포성으로 간주합니다. 진단을 내리기 위해서는 정성적 골수 검사가 필수적입니다. 그것은 얇은 얼룩과 특히 중간 영역에서 부서진 덩어리가있는 얼룩 모두에 침지하여 수행됩니다. 명확하게 정의되고 형태학적으로 잘 보존된 세포가 있는 가장 잘 늘어나고 염색된 도말을 선택하는 것이 좋습니다. 이 연구는 다음을 설명합니다.) 다른 유형의 골수 세포 식별; b) 각 세포 열의 성숙도 결정; c) 과립구와 적혈구(G/E) 간의 관계에 대한 설명 d) 유사분열 단계의 세포 식별 e) 마주치는 비정형 세포에 대한 설명. 여러 번 도말을 검사한 후 상세한 설명적인 "골수 조영술"(도말을 해독한 후 내린 결론 포함) 또는 300-500개 이상의 요소에 의해 설정된 백분율 용어의 골수 조영술이 컴파일됩니다. 백분율 골수도를 컴파일하는 두 가지 방법이 있습니다. 1) 나머지 세포 행을 100개의 과립구에 할당합니다. 2) 전체 골수 세포 수에서 각 유형의 세포에 대한 백분율 표시. 통계적 관점에서 볼 때 후자의 방법이 더 정확하고 골수의 세포 구성에 대한 실제 그림을 분명히 반영하는 것 같습니다. 골수와 같은 이질적인 조직에서 실제 평균값을 결정하기가 어렵기 때문에 개별 저자가 설정한 공식은 크게 다릅니다. 이 표는 Wintrobe에 따르면 12명의 정상인에게서 선택된 골수 샘플에 대한 연구 결과를 보여줍니다. 정상 골수

Myelogram 매개변수 평균값(%) 변동 범위(%)

망상 세포 0.9 0.1-1.6 미분화 아세포 0.6 0.1-1.1 골수아세포 1.0 0.2-1.7

전골수구 2.5 1.0-4.1

골수구 호중구 9.6 7.0-12.2 중골수구 호중구 11.5 8.0-15.0 찌르기 호중구 18.2 12.8-23.7 분절된 호중구 18.6 13.1-24.1 총 호중구 세포 60.8 52.7-68.9호산구성 골수구 0.1 0.0-0.2 호산구성 중골수구 0.2 0.1-0.4 호산구 2.8 0.4-5.2

호산구성 시리즈의 총 세포 3.2 0.5-5.8호염기성 골수구 0.1 0-0.3

호염기구 0.1 0-0.3

호염기성 시리즈의 총 세포 0.2 0-0.5림프모구 0.1 0-0.2

전림프구 0.1 0-0.2

림프구 8.8 4.3-13.3

총 림프구 9.0 4.3-13.7단모세포 0.1 0-0.2

단핵구 1.9 0.7-3.1

플라즈마 아세포 0.1 0-0.2

원형질세포 0.1 0.1-0.2

형질 세포 0.9 0.1-1.8

적혈구 0.6 0.2-1.1

호염기성 정상모세포 3.6 1.4-5.8 다염색성 정상모세포 12.9 8.9-16.9 호산성 정상모세포 3.2 0.8-5.6

총 적혈구 20.5 14.5-26.5거핵구 0.4 0.2-0.6

건강한 사람들에 대한 연구에 따르면 다음과 같은 결과가 있습니다.

과립구의 수 56-70%,

적혈구 시리즈 23-30%, 림프형질세포 시리즈 5-10%, 단세포-대식세포 시리즈 1-2% 및 거핵구 시리즈 0.1-0.8%(Ursya). 정상 골수 열의 비율 변화 또는 비정상 세포로의 교체는 종종 질병의 유형을 시사합니다. 망상 세포는 덜 자주 나타나며 또한 적은 수로 나타납니다. 아주 우연히, 도말(또는 골수 인상)은 조골 세포 및/또는 파골 세포를 보여주므로 종양 세포로 오인되어서는 안 됩니다. 이들의 존재는 소아에서 더 자주 관찰되고, 1차 골수섬유증 또는 2차적으로 암 전이 후 급성 백혈병, 골다공증 등이 있는 성인에서는 덜 자주 관찰됩니다. G/E 비는 과립구를 적혈구 수로 나누어 구합니다. 정상 성인의 경우 이 비율은 평균 3/1 또는 4/1이며 한계는 2/1(미성숙 과립구만 포함된 경우) 및 5/1(모든 과립구에 관한 경우 - 성숙 및 미성숙)로 추정됩니다. H/E 비율은 연령에 따라 변동합니다. 출생 시에는 작으며(1.8/1), 생후 2주에는 11/1로 상승한 다음 점차 감소하고 1세 아동의 경우 값에 도달합니다 ​ ​성인의. H/E 비율은 전체 골수 저형성 또는 증식의 경우뿐만 아니라 이 비율 계산에 포함되지 않은 개별 세포의 증식(예: 형질세포종)의 경우에도 정상입니다. 백혈병, 백혈병 유사 반응 및 적혈구감소증에서는 비율이 높지만 적혈구 증식이 있는 빈혈에서는 낮거나 반대입니다(거대적아구성, 용혈성 빈혈). 도말 연구 후에 얻은 골수 조영술 데이터를 발행하기 전에 다음을 명확히 할 필요가 있습니다. a) 천자 부위; b) 골밀도; c) 흡입이 일어난 조건; d) 선택한 재료의 거시적 측면. 골수 검사는 수많은 다양한 데이터의 통합을 기반으로 하는 복잡한 과정입니다. 그 결과는 변동하는 개별 수치의 기계적 등록보다 추론에 기반한 일반적인 결론을 반영해야 합니다. 골수 조영술의 결론은 골수 연구에서 발생하는 추가 연구에 대한 진단 또는 적응증을 명확히 해야 합니다. 혈액 질환에서 흡입 펑크는 80 %의 경우 덩어리가있는 도말 및 섹션의 도움으로 진단을 명확히하는 데 도움이됩니다. 다른 경우에는 뼈 생검 및 골수의 조직학적 검사가 지시됩니다. 생체 광학 선택 및 조직학적 검사는 다음과 같은 경우에 필요한 것으로 보입니다. a) 1차 또는 2차 골수 섬유증; b) 골수 무형성 또는 저형성; c) 육아종 유형의 병변으로 발생하는 질병(예: , 고지킨병, 유육종증, 결핵 등); d) 암종 전이; e) 천자에 의해 선택된 재료가 만족스럽지 않거나 골수의 측면이 설득력이 없는 모든 경우. 생체 광학 샘플링 후 조직학적 섹션은 밀집되어 있고 흩어져 있지 않으며 표준화되지 않은 조혈 세포의 구조적 세부 사항에 대한 정보를 거의 제공하지 않기 때문에 세포학적 검사를 위해 인상을 준비합니다. 또한, 고정은 세포 수축을 유발하고 조직학적 염색은 세포학적 염색보다 덜 선택적이다. 이것이 골수에 대한 완전한 검사가 연구 섹션에 대한 세포학적(도말 또는 인상에 대한 조직학적)과 조직학적인 모두를 포함하는 이유입니다. 골수 검사의 세포 학적 및 조직 학적 방법은 배제되지 않지만 반대로 상호 보완적이라는 것을 기억해야합니다. 생검은 양적 및 건축 적 방법이고 골수 조영술은 정성 및 세포 학적 방법입니다.

Goryaev 챔버에서 혈액 세포를 계산하는 방법.

고리예프의 방 - 주어진 부피의 액체에서 세포의 수를 세도록 설계된 장치. 일반적으로 혈액 샘플에서 형성된 요소의 수를 결정하는 데 사용됩니다. 챔버는 가로 슬롯이 적용된 두꺼운 유리 슬라이드로 구성되어 가로로 배열된 3개의 평평한 영역을 형성합니다. 중간 플랫폼은 세로 슬롯에 의해 두 개로 나뉘며 각 슬롯에는 그리드가 새겨져 있습니다. Goryaev 챔버의 중간 플랫폼 양쪽에는 중간 플랫폼보다 0.1mm 더 높은 다른 두 개(Fuchs-Rosenthal 챔버에서 0.2mm)가 있습니다. 이 사이트의 평면은 소위 뉴턴 고리가 나타날 때까지 커버슬립을 연마하는 역할을 합니다. 커버 유리를 문지른 후 챔버가 만들어지고 두 면이 닫히고 다른 두 면에는 챔버가 채워지는 틈(모세관 공간)이 있습니다. 그리드 원리는 동일합니다. 그것들은 다양한 방식으로 그룹화된 하나 또는 다른 수의 사각형으로 나뉩니다. 모든 그리드의 일정한 값은 측면이 1/20mm인 소위 "작은 정사각형"이므로 면적은 1/400mm2입니다. Goryaev 카메라를 사용하여 현미경의 배율을 결정할 수도 있습니다. 바깥쪽으로는 홈과 미세한 격자가 적용된 투명한 평행 육면체(유리 슬라이드)입니다. 격자 셀의 작은 눈금의 치수는 0.05mm이고 큰 눈금은 0.2mm입니다. 이 경우 그리드는 인접한 두 플랫폼보다 0.1mm 낮은 플랫폼(유리 섹션)에 적용됩니다. 이 영역은 커버슬립을 랩핑하는 데 사용됩니다. 결과적으로 Goryaev 그리드의 큰 분할에 의해 형성된 정사각형 위의 액체 부피는 0.004마이크로리터입니다. 큰 정사각형의 셀 수를 계산하면 다음 공식을 사용하여 현탁액에 있는 주어진 셀 유형의 밀도를 계산할 수 있습니다. 세포 수/ml = 큰 정사각형 위의 세포 수 * 2.5 10^5 Goryaev 카메라를 일종의 표준으로 사용하면 다음 공식으로 현미경의 배율을 결정할 수 있습니다. Kg=(m2-m1)/(a*N) 어디 킬로그램현미경의 배율입니다. 중 1 - Goryaev 챔버 셀의 왼쪽 경계 위치; 중 2 - 셀 또는 셀 그룹의 오른쪽 테두리 위치. N- 측정된 경계 사이의 셀 수 ㅏ- Goryaev 챔버의 셀 크기(0.05mm와 동일). Goryaev 챔버는 또한 배양된 세포의 수를 계산하는 데 사용됩니다. Goryaev 챔버에서 혈액 세포를 계산하는 공식은 다음과 같습니다. x = (a 400c) / b, 여기서 x는 1mm3의 원하는 모양 요소 수입니다. a - 챔버의 특정 부피에서 계산된 형상 요소의 합; b - 계산된 작은 사각형의 수; c - 혈액 희석.

Goryaev 챔버에서 난모낭을 계산하는 방법. 이 방법은 일반적으로 정확하게 결정된 양의 난모낭으로 동물을 실험적으로 감염시킬 때 사용됩니다(적절한 양의 현탁액을 동물에 주입). 난모낭이 포함된 현탁액 1ml를 Goryaev 챔버에 넣습니다. Goryaev 챔버의 부피가 0.9m3이므로 계산된 난포낭의 수에 1111을 곱합니다. 결과 수는 1cm3의 용액에 있는 난모낭의 수에 적합합니다. 보다 정확한 판단을 위해서는 최소 3번 이상의 계산을 거쳐 산술평균값을 도출해야 한다. 감염에 필요한 난모낭의 수는 눈금이 매겨진 피펫을 사용하여 측정됩니다. 배양 배지에서 난모낭이 보다 균일하게 분포되도록 하려면 튜브의 내용물을 반복적으로 흔들어야 합니다.

Goryaev 챔버의 적혈구 수 원칙. 정확한 양의 혈액을 일정량의 액체에 고르게 혼합하고 혈액 현탁액이 단일 층으로 분포된 알려진 부피의 챔버에 넣습니다. 챔버 바닥은 그래프로 표시되어 적혈구를 정확하게 계산할 수 있습니다. 시약: 0.9% 염화나트륨 용액. 특수 장비: 현미경, Goryaev의 카메라, 실험실 테스트 튜브 또는 Saly의 혈액계의 모세관. 정의 진행. 건조하고 깨끗한 시험관에 0.9% 염화나트륨용액 8ml와 혈액 0.02ml를 넣는다. 피펫의 끝을 미리 닦고 혈액을 튜브 바닥으로 불어 피펫을 액체의 상층으로 철저히 씻습니다. 튜브의 내용물을 잘 섞는다. 1:400의 혈액 희석이 얻어집니다. 즉, 혈액이 400배 희석됩니다. 혈액이 농축되면 500, 600, 700, 800배로 희석하는 것이 좋습니다. 챔버와 커버슬립은 세척하고 건조시켜야 합니다. 커버슬립은 무지개 빛깔의 고리가 나타나도록 챔버에 문지릅니다. 시험관에서 희석된 혈액 한 방울을 취하여 챔버를 채우고 커버슬립의 가장자리에 적용합니다. 적혈구는 저배율 현미경(x8 대물렌즈, x10 또는 x15 접안렌즈)으로 챔버를 채운 후 1분 후에 계산됩니다. 덮인 다이어프램 또는 낮아진 콘덴서(어두운 시야에서) . 적혈구는 대각선으로 배열된 5개의 큰(또는 80개의 작은) 정사각형으로 계산됩니다. 작은 사각형 내부와 왼쪽 및 위쪽 벽에 있는 적혈구가 고려됩니다. 사각형의 오른쪽과 아래쪽에 있는 셀은 계산하지 않습니다. 계산: 80개의 작은 정사각형에 있는 계산된 세포 수에 1:400의 혈액 희석에서 20,000, 1:500의 희석에서 25,000 또는 1:600의 희석에서 30,000을 곱하여 최종 결과를 얻습니다. 1 μl당 수백만. 이 경우 작은 정사각형 하나의 부피는 1/4000μl라고 가정합니다. 1리터의 세포 수를 계산하려면 1μl의 적혈구 수도 1,000,000을 곱합니다. 메모. 혈전이 있는 혈액을 연구하는 것은 허용되지 않습니다. 챔버를 채운 직후의 세포 수(1분 대기 없이); 용혈을 유발하는 품질이 좋지 않은 시약, 세척 및 건조가 불량한 피펫 및 시험관 사용. 모든 계산 규칙에 따라 오차는 평균 ± 2.5%입니다.

소독 규칙 사용 후에는 Goryaev 카메라를 소독해야 합니다. 3% 용액과산화수소, 증류수로 헹구고 부드러운 천으로 말리십시오. 카메라를 건조한 장소에 보관하십시오.

혈액 분석기 작업 방법.

분석기-혈액학- 정량적 연구를 위해 설계된 장치(장비 세트) 세포 피임상 진단 실험실에서. 자동 또는 반자동일 수 있습니다. 반자동 혈액 분석기는 혈액 샘플을 희석하는 과정이 별도의 장치 인 희석기에 의해 수행된다는 점에서 자동 혈액 분석기와 다릅니다. 전혈 희석액을 준비한 후 작업자는 희석된 샘플을 측정 모듈로 옮겨야 합니다. 현재 반자동 분석기는 실제로 생산되지 않습니다.

자동 혈액학 분석기는 전체 분석 프로세스가 자동으로 수행되는 완전 자동화된 기기입니다.

최신 자동 분석기는 사양에 대한 정확성과 재현성으로 시간당 수십 개의 샘플(60~120개)을 처리할 수 있을 뿐만 아니라 테스트 결과를 내장 메모리에 저장하고 필요한 경우 내장 메모리에 인쇄할 수 있습니다. 열전사 프린터 또는 외부 프린터.

현대 혈액 분석기는 결정된 혈액 세포 지표의 명명법에 따라 분류됩니다.

8개 매개변수 혈액학 분석기다음 매개변수를 결정합니다. 농도 적혈구(적혈구) 백혈구(백혈구) 혈소판(주) 헤모글로빈(Hb) 및 다음 적혈구 매개변수: 평균 적혈구 용적(MCV), 평균 적혈구 헤모글로빈 함량(MCH), 평균 적혈구 헤모글로빈 농도(MCHC), 헤마토크릿(Hct).

8-파라미터 혈액 분석기는 현재 실질적으로 생산되지 않습니다.

혈액학 분석기 클래스 3-diff. 생산된 모델에 따라 클래스 3-dif의 혈액 분석기를 사용하면 16~22개의 혈액 세포 지표를 결정할 수 있습니다. 이 클래스의 분석기는 8 매개 변수 분석기를 결정하는 매개 변수 외에도 림프구 (Lm), 과립구 (Gr) 및 소위 평균 백혈구 (Mid)의 농도와 같은 백혈구의 세 가지 하위 집단을 결정합니다. 그들의 백분율 Lm%, Gr% 및 Mid%. 따라서 클래스의 이름은 3-dif입니다. 또한이 등급의 혈액 분석기는 적혈구 용적 (RDW)의 변동 계수와 혈소판을 특징 짓는 여러 지표 : 평균 혈소판 용적 (MPV), 혈소판 용적 (Tct)의 분율 (헤마토크릿과 유사), 혈소판 용적의 변동 계수(PDW).

이 클래스의 혈액 분석기로 얻을 수 있는 중요한 진단 정보는 적혈구, 백혈구 및 혈소판의 부피에 따른 분포 함수(히스토그램)입니다.

혈액 분석기 클래스 5-dif. 5-dif 혈액학 분석기와 3-dif 분석기의 주요 차이점은 림프구(Lym), 단핵구(Mon), 호중구(Neu), 호염기구(Bas) 및 호산구(Eos), 뿐만 아니라 Lym%, Mon%, Neu%, Bas% 및 Eos%의 백분율 함량. 라고도 하는 임피던스 계산 방법 쿨터 카운터 3-dif 분석기에 사용되는 는 호중구, 호염기구 및 호산구를 구별할 수 없으므로 5-dif 분석기에서 다른 세포 분화 방법이 사용됩니다. 원리에 근거하고 있다 회절백혈구 세포에 대한 레이저 방사선 및 산란 방사선의 추가 분석. "평균" 백혈구는 임피던스 방법으로 구별할 수 있을 만큼 크기가 다르지 않지만 내부 구조가 다르고 염료와 다르게 상호 작용합니다. 그리고 회절 패턴을 감지하는 방법은 세포의 내부 구조에 민감한 것으로 밝혀졌습니다. 따라서 적혈구와 혈소판은 Coulter 계수기로 계수하고 백혈구는 별도의 레이저 장치로 계수합니다.

작업 8. 혈청 내 단백질의 정량적 측정

4. 복합단백질의 구성과 성질

작업 9. 헴단백질의 화학적 성질

작업 10. 당단백질의 탄수화물 성분 동정

작업 11. 인단백질에 대한 정성적 반응

작업 12. Hess 방법에 의한 혈청 내 시알산 함량의 정량적 측정

작업 13. 핵단백질의 화학적 성질

핵산

1. 핵산의 화학적 성질 연구

작업 14. 핵산 성분에 대한 정성적 반응

핵산 측정을 위한 정량적 방법

작업 15. A.S. Spirin에 따른 핵산 정량을 위한 분광광도법

작업 16. 핵산의 정량적 측정을 위한 광도색법

작업 17. 인지질 연구

작업 18. 스테로이드에 대한 정성적 반응

효소

효소와 비생물학적 촉매의 비교 작용

작업 19. 전분 가수분해 반응에 대한 타액의 α-아밀라아제와 염산의 작용 비교

2. 다른 부류에 속하는 효소의 동정

작업 20. 생물학적 물질의 산화환원효소 검출

작업 21. 콜린에스테라제의 검출

Herzfeld와 Stumpf의 명시적 방법에 의한 혈청 내

작업 22. V.I. Tovarnitsky 및 E.N. Voluyskaya의 방법에 따른 혈청 내 fructose-1,6-bisphosphate aldolase의 활성 측정

교정 그래프의 구성

작업 23. 포도당 인산염 이성질화 효소의 결정

혈청에서

3. 효소의 동역학적 특성 연구

작업 24. 타액 α-아밀라제의 예에 대한 효소 반응의 동역학

4. 효소 작용의 특이성

작업 25. 절대 기질 특이성의 입증

5. 효소 활성 조절제

작업 27. 타액 α-아밀라아제의 활성화제 및 억제제

근육 조직

작업 29. 혈액 카탈라아제의 비경쟁적 억제

6. 효소 활성의 정량화

작업 30. Kornberg에 따른 약물 젖산 탈수소 효소의 활성에 대한 정량적 연구

작업 31. Sevel 및 Tovarek에 따른 혈청 내 젖산 탈수소효소 활성 연구를 위한 광색계 방법

작업 32. Bodansky에 따른 혈청 내 알칼리성 인산분해효소 활성 측정

7. 동종효소 연구

작업 33. Dietz와 Lubrano에 따른 폴리아크릴아미드 겔에서 전기영동에 의한 혈청의 젖산 탈수소효소 동종효소 분리

작업 34. 혈청에서 γ-글루타밀트랜스퍼라제의 활성 측정

소화의 생화학

작업 35. 위액의 산성 성분 연구

작업 36. 진단 키트 "Acidotest"로 위액의 산도 측정

작업 37. 소화관의 효소에 의한 단백질 가수분해

작업 38. 췌장 리파제의 작용에 따른 트리아실글리세롤의 가수분해 역학 연구

에너지 교환(바이오에너지)

1. 동물 조직에서 생물학적 산화 과정 연구 작업 39. 근육 조직에서 시토크롬 산화효소 검출

작업 40. 산화적 인산화 과정과 이에 대한 언커플러의 작용 시연

작업 41. 근육 조직의 해당 작용 감지

작업 42. 이온 교환 박막 크로마토그래피에 의한 아데닌 뉴클레오티드 분석

작업 43. Ennor 및 Rosenberg에 따른 혈청 내 크레아틴 포스포키나제 활성 측정

광합성 유기체의 색소 및 산화 과정 분석

작업 44. 식물 색소에 대한 정성적 반응

작업 45. A.N. Boyarkin의 방법에 따른 식물 재료의 과산화효소 활성 측정

탄수화물 대사

작업 46. 혈액 내 포도당 측정

작업 47. 포도당 산화 효소법에 의한 혈액 내 포도당의 정량적 측정

작업 48. Barker와 Summerson에 따른 혈액 내 젖산 함량 측정

작업 49. Friedemann과 Haugen에 따른 혈액 내 피루브산 함량 측정

지질 대사

일 50

일 51

작업 52. Ilk의 방법에 따른 혈청 내 콜레스테롤 측정

작업 53. 혈청 내 총 인지질 함량 측정

작업 54. 박층 크로마토그래피에 의한 혈청 지질의 분리

단백질과 아미노산의 대사

작업 55. 탁도법에 의한 혈청의 단백질 분획 함량 측정

작업 56. A.A. Pokrovsky, A.I. Archakov 및 O.N.에 따른 혈청 내 카텝신 활성 측정

카텝신

작업 57. Reitman과 Frenkel에 따른 혈청 내 아스파르테이트 및 알라닌 아미노트랜스퍼라제의 활성 측정

작업 58. V.A.에 의해 수정된 Tabor 및 Mehler에 따른 혈청의 히스티다제 활성 측정

작업 59. Neumann과 Logan에 따른 소변의 유리 히드록시프롤린 함량 측정, p.

질소 함유 비단백질 물질의 대사

1. 질소 대사의 일반적인 산물 연구

작업 60. 광비색법에 의한 혈중 잔류 질소의 정량적 측정

작업 61. 혈청 및 소변 요소의 정량적 측정

작업 62. 브라운 방법에 의한 크레아틴 및 크레아티닌의 정량적 측정

2. 핵산과 ​​뉴클레오티드의 교환 연구

작업 63. A.A.에 따른 혈청 내 acid deoxyribonuclease(dnCase) 활성 측정

작업 64. Muller와 Seifert의 방법에 따른 혈청 내 요산 함량 측정

3. 포르피린(색소) 대사 연구

작업 65. Yendrashik, Cleghorn 및 Grof에 따른 혈청 내 빌리루빈 및 분획 측정

분자 병리학

1. 아미노산 대사 병리의 신속한 진단 작업 66. 고아미노산뇨증의 검출

작업 67. 페닐케톤뇨증 진단을 위한 익스프레스 방법

작업 68. 티로신증의 진단 티로신에 대한 Millon 테스트

작업 69. 균질산 검사에 의한 알캅톤뇨증 검출

일 70

2. 탄수화물 대사 병리의 신속한 진단 작업

작업 72. Selivanov의 테스트에 의한 fructosuria의 감지

작업 73. 톨루이딘 블루를 이용한 점액다당류 검사에 의한 점액다당류 검출

작업 74. 소변의 포르포빌리노겐 함량 측정

작업 75. 소변에서 델타-아미노레불린산 함량의 정량적 측정

일 76

대사 조절제

1. 비타민 연구 작업 77. 비타민에 대한 정성적 반응

작업 78. 종합 비타민 제제에서 형광 측정법에 의한 티아민 및 리보플라빈 함량 측정

작업 79. 약용 식물에서 아스코르브산의 정량적 측정

2. 호르몬, 매개체 및 대사산물 연구

작업 80. 단백질 펩티드 호르몬에 대한 정성적 반응.

작업 81. 호르몬에 대한 정성적 반응 - 아미노산 유도체

작업 82. 스테로이드 호르몬 및 그 대사 산물에 대한 정성적 반응

작업 83. 동물의 혈액에서 인슐린과 포도당의 아드레날린 수치 조절

작업 84. N.V. Klimkina 및 S.I. Plitman에 따른 디아조화 n-니트로아닐린을 사용한 혈액 내 히스타민의 정량적 측정

생체액 연구

1. 생화학적 혈액 검사 작업 85. 혈액의 빛 흡수에 의한 헤모글로빈 함량 측정

작업 86. 인간 적혈구의 태아 헤모글로빈 함량 측정

작업 87. 광비색법에 의한 적혈구의 당화 헤모글로빈 함량 측정

작업 88. 광비색법에 의한 혈청 내 합토글로빈 농도 측정

일 89

작업 90. ​​아밀로클라스틱법에 의한 혈청 내 α-아밀라아제 활성 측정

작업 91. murexide 방법에 의한 혈청 내 칼슘 함량 측정

작업 92. Huergo와 Popper에 따른 Thymol 테스트

작업 93. 승화-퇴적 반응

작업 94. 혈청 내 철분 함량의 정량적 측정

2. 소변의 생화학적 연구

작업 95. 소변의 물리화학적 특성 연구

작업 96. 소변의 케톤체 및 포도당 측정

작업 97. Brandenberg-Roberts-Stolnikov 방법에 의한 소변의 단백질 측정

작업 98. 소변 지표의 정성적 결정

작업 99. 소변에서 일부 색소 검출.

생체 이물 대사

제노바이오틱스의 산화 및 접합 과정 연구 Work 100. 마이크로솜의 호흡 활동 공개

작업 101. 간 마이크로솜의 산화적 n-탈메틸화 연구

작업 102. Kato 및 Gilet에 따른 간 마이크로솜의 수산화효소 활성 측정

작업 103

작업 104. Shkursky et al.에 따른 혈청 내 알코올 탈수소효소 활성 측정.

일 105

작업 106. 체내 isonicotinic acid hydrazide(징크)의 아세틸화(불활성화) 검출

생물학적 막의 지질 과산화 연구

작업 107. 과산화물 용혈에 대한 적혈구의 민감도 측정

작업 108. 생체막에서 지질 과산화 속도 측정

신청

2.혈장 생화학적 지표

1. 일반적인 임상 규범

2. 소변의 특별검사

위액

2. 인산염 완충액(0.1m, pH 5.8-8.0)

3. 트리스 완충액(0.1m, pH 7.1-9.2)

4. 아세테이트 완충액(0.2m, pH 3.6-5.8)

5. 글리신 완충액(0.05m, pH 8.6-10.6)

3. 일부 시약의 준비

목차

2. 인산염 완충액(0.1m, pH 5.8-8.0)

Na 2 HPO 4 0.2M, ml	Na 2 H 2 PO 4 0.2 M, ml

3. 트리스 완충액(0.1m, pH 7.1-9.2)

24.2g의 트리스-(히드록시메틸)아미노메탄을 1L 부피 플라스크(500ml의 H 2 O 중)에 용해시킨다. 필요한 pH 값을 얻기 위해 표에 표시된 1M HCl의 부피를 추가하고 증류수로 부피를 1000ml로 조정합니다.

4. 아세테이트 완충액(0.2m, pH 3.6-5.8)

아세트산나트륨 0.2M, ml	아세트산 0.2M, ml		아세트산나트륨 0.2M, ml	아세트산 0.2M, ml

5. 글리신 완충액(0.05m, pH 8.6-10.6)

표시된 부피의 글리신과 수산화나트륨을 혼합하고 증류수로 부피를 200 ml로 조정합니다.

	글리신 0.2M, ml	NaOH 0.2M, ml		글리신 0.2M, ml	NaOH 0.2M, ml

3. 일부 시약의 준비

활성화 솔루션. 환원글루타치온 155mg과 결정알부민 400mg을 100ml 용량의 메스플라스크에 넣고 증류수 50ml에 녹이고 1M NaOH 용액을 사용하여 pH를 8.2로 맞춘다. 그런 다음 표시에 물을 추가합니다.

질산은의 암모니아 용액. 침전물이 녹을 때까지 2-3% 은 용액에 암모니아 농축 용액을 가합니다.

아세테이트 완충액 pH 3.6. A용액 463ml와 B용액 37ml를 혼합하여 메스플라스크에 물을 넣어 표시선까지 희석하여 1리터로 한다. 용액 A: 1리터 메스플라스크에 빙초산 11.55ml를 물로 희석한다. 용액 B: 1리터 플라스크에 27.2g의 아세트산나트륨을 물에 녹입니다.

뷰렛 시약(베네딕트 시약). 구연산나트륨 173g과 탄산나트륨 100g을 수욕조에서 증류수 300ml에 녹인다. 따로 황산구리 17.3g을 물 300ml에 녹인다. 두 용액 모두 배수되고 총 부피가 1리터가 됩니다.

완충액. Veronal 2.76g과 Medinal 2.06g을 증류수 1리터에 녹입니다. 냉장고에 보관하고 침전물이 나타나면 용액을 사용하기에 적합하지 않습니다.

석탄의 정지. 활성탄 0.25g을 100ml 부피 플라스크에 넣고 아세테이트 완충액 pH 3.6으로 희석합니다. 사용하기 전에 잘 흔들어 주십시오.

환원제. 0.016% 황산구리 용액으로 제조된 1% 아스코르브산 용액.

헤모글로빈, 아세테이트 완충액(pH 4.0) 중 4% 용액. 먼저 8 mol/l 요소수에 8% 헤모글로빈 용액을 준비하여 60°C 항온조에 2시간 방치한 후 아세테이트 완충액으로 2배 희석하여 사용한다.

글리실-글리신. 0.55mmol/l, pH 8.3. 글리실-글리신 3.63g을 50ml 메스플라스크에 넣고 물을 표시선까지 채운다(완충액).

변성 용액

빌리루빈 측정을 위한 디아조 시약. 두 가지 솔루션을 준비합니다. 제1용액 : 술파닐산 3g을 증류수 500ml에 녹이고 진한 염산 15ml를 가하고(온욕에서) 물로 1리터로 한다. 두 번째 용액: 0.5% 아질산나트륨 수용액. 사용하기 전에 첫 번째 용액 5ml와 두 번째 용액 0.25ml를 혼합하십시오.

디아세틸, 작동 용액. 100ml 메스플라스크에 1ml의 디아세틸을 증류수로 희석한다(용액은 냉장고에 보관한다). 디아세틸 원액 1ml에 증류수 24ml를 가하여 사용전에 디아세틸의 작동용액을 조제한다.

디페닐아민 시약. 디페닐아민 1g을 빙초산 100ml에 녹인다. 이 용액에 진한 황산 2.75ml를 가한다.

교정 솔루션. 염기성 - 염기로 환산한 0.75mmol/l ALA(100μg/ml): 0.00635g의 ALA 염산염을 50ml 부피 플라스크의 아세테이트 완충액 pH 3.6에 용해합니다. 한 달 이상 냉장고에 보관하지 마십시오. 작업 보정 용액은 주 용액인 1μg/ml에서 준비됩니다. 아세테이트 완충액으로 스톡 용액을 100배 희석하여 사용하기 전에 준비하십시오.

교정 솔루션. 22.5mg의 디하이드록시아세톤을 25ml의 물에 가열하면서 용해시킨다. 이 용액 1ml에는 10μmole의 디하이드록시아세톤이 들어 있습니다. 디하이드록시아세톤 보정용액을 여러 개의 시험관에 붓고(작업 참조) 필요한 부피만큼 채우고 효소의 활성을 측정할 때와 같은 방법으로 반응을 한다.

철의 교정(표준) 용액(30 µmol/l).

먼저 모라솔트를 준비합니다.

카페인 시약. 순수카페인 1g, 안식향산나트륨 7.5g, 초산나트륨 12.5g을 증류수 90ml에 녹이고 50~60℃로 가열하고 교반하고 식힌 다음 증류수로 100ml로 한다.

질산의 암모늄 몰리브데이트. 몰리브덴산암모늄 7.5g을 물 100ml에 녹이고 32% 질산 100ml를 가한다.

알캅톤뇨증을 위한 소변. 병리가 없는 경우 하이드로퀴논은 20g/l의 비율로 정상 소변에 추가됩니다.

고아미노산뇨증이 있는 소변. 병리학적인 글리신이 없는 경우 정상 소변에 1.0g/l의 비율로 첨가됩니다.

점액다당증이 있는 소변. 병리가 없으면 chonsuride 또는 heparin이 0.05-0.1g / l의 비율로 정상 소변에 추가됩니다.

Pentosuria가있는 소변. 병리학적 요인이 없으면 자일룰로스 또는 리보스가 1.0g/l의 비율로 소변에 추가됩니다.

티로시노증이 있는 소변. 병리가 없으면 티로신이 0.4-0.5g / l의 비율로 정상 소변에 첨가됩니다.

결석이 있는 소변. 병리가 없으면 과당이 0.3-0.4g / l의 비율로 정상 소변에 추가됩니다.

시스틴뇨증용 소변. 병리학 적 시스틴이 없으면 정상 소변에 0.4-0.5g / l의 비율로 첨가됩니다.

아세트산 나트륨 3 수용액, 포화 용액. 아세트산나트륨 3수용액 375g(또는 무수염 226g)을 따뜻한 물 250ml에 녹이고 실온으로 냉각시킨다. 실온에서 보관하십시오. 용액은 무색 투명해야 합니다.

인산나트륨 이치환 0.25 mol/l. 200ml 플라스크의 물에 9.7g Na 2 HPO 4 ∙12H 2 O 또는 18g Na 2 HPO 4 ∙12H 2 O를 용해하여 준비합니다. 이 액 2ml를 트리클로로아세트산용액 1ml에 가할 때의 pH는 5.0~6.0이어야 한다.

크레아티닌 염기성 교정 용액, 10mmol/l. 113.1mg의 크레아티닌을 0.1mol/l 염산용액으로 100ml로 조정한다. 교정그래프를 작성할 때 원액을 물로 100배 희석하여 원액으로부터 작업용액을 조제하는데, 이 용액 1ml에는 0.1mmol의 크레아티닌이 함유되어 있다. 이를 기반으로 해당 농도의 크레아틴으로 여러 시험관을 얻습니다.

티아민 측정을 위한 산화 혼합물. 1% 헥사시아노철산칼륨(III) 8ml에 30% NaOH용액 20ml를 가하고 잘 섞는다. 사용하기 전에 준비하십시오.

오르신 시약. 오르신 1g에 30% 염산(밀도 1.15g/cm3) 500ml를 가한다. 용해될 때까지 저어주고 4-5ml의 10% 염화철 용액(III) FeCl 3 를 추가합니다. 시약은 단단히 마개가 있는 어두운 병에 보관됩니다.

p-니트로아닐린 염기성 교정 용액. 이 품목 0.0829g을 100ml 메스플라스크에 넣고 표시선까지 물로 채우고 녹인다.

침전 용액. 황산암모늄 561g을 증류수 1리터에 녹이고 24시간 후에 여과한다.

염기성 인산완충액 및 그 작동용액 No. 1-4. 500ml 용량의 메스플라스크에 물 400ml에 NaOH 33.5g을 녹이고 KH 2 PO 4 226.8g을 넣고 완전히 녹을 때까지 흔든 다음 식힌 다음 물을 표시선까지 가한다. 염기성 인산염 완충액의 작업 용액을 준비하기 위해 다음 부피의 염기성 인산염 완충액(ml)을 100ml 용량의 부피 플라스크에 측정합니다: No. 1 - 92.51; 번호 2 - 74.91; No. 3 - 59.18 및 No. 4 - 48.68, 그 후에 내용물을 물로 표시합니다.

피크르산, 포화 용액. 상품 picric acid는 15-20%의 수분을 함유하고 있으며 산을 건조시키지 마십시오. 폭발물! 물 100ml에 피크르산 2g을 뜨거운 욕조에서 가열하여 녹인다. 그 후, 때때로 저어주면서 용액을 24시간 동안 방치한다. 그런 다음 용액을 여과합니다. 용액은 안정적이며 어두운 유리 용기에 보관됩니다.

피로인산 완충액 0.05M pH 8.2. 피로인산나트륨 4.46g을 200ml 메스플라스크에 옮겨 물 약 100ml에 녹이고 0.1M 염산용액으로 pH를 8.2로 조정하고 증류수로 표시선까지 채운다.

피로인산염 완충액 0.1 M pH 8.5. 피로인산나트륨 4.46g을 용량 100ml의 메스플라스크에 옮겨 물 50ml에 녹이고 0.1M 염산용액으로 pH를 8.5로 조정하고 증류수를 표시선까지 가한다.

작동 시약. 측정 당일 0.3N 수산화나트륨 30부를 혼합하여 조제한다. 0.5% 페놀프탈레인 용액 ​​2부 및 0.12% 황산구리 용액 1부.

아세톤 시아노히드린 용액. 아세톤 시아노히드린 1앰플(혈액 내 헤모글로빈 측정 키트에서 0.5ml - 0.47g)을 증류수 1리터에 녹입니다.

페리아세톤 시아노히드린 용액. 200 mg의 페리시안화 칼륨과 1 앰플 (0.5 ml - 0.47 g)의 아세톤 시아노히드린을 1 리터의 증류수에 녹입니다. 혈액 헤모글로빈 측정을 위한 변형 용액을 준비하기 위한 시약 세트에서 사용할 수 있습니다. 실온에서 어두운 유리 용기에 보관하면 몇 개월 동안 안정합니다.

글루코시다제 용액. 약 300 유닛이 들어 있습니다. 1mg에서. 건조제제 적당량을 물 10ml에 녹여 조제한다.

설폰화 바토페난트롤린 용액. 시험관에 바소페난트롤린 100mg에 클로로설폰산 0.5ml를 가하고 끓는 수욕에서 30초간 가열한 다음 식힌 다음 이차증류수 10ml를 천천히 가하고 다시 수욕에서 5분간 가열한다. 혼합물을 200ml 플라스크에 옮기고, 물 100ml를 첨가하고, 용액의 pH를 4-5N NaOH로 조정하고, 물을 200ml 부피로 첨가한다.

요오드화칼륨의 요오드 용액(루골 용액). 요오드화칼륨 20g과 요오드 10g을 증류수 100ml에 녹인다. 사용하기 전에 용액을 5배 희석합니다.

p-니트로소디메틸아닐린(NDMA) 용액. 상업적으로 이용 가능한 NDMA 제제는 에틸 에테르로부터 재결정화됩니다. 알코올 탈수소효소를 측정하기 위해 NDMA 1mg을 0.1M 피로인산 완충액(pH 8.5) 100ml에 녹입니다. 생성된 용액을 종이여과기로 여과하고 여액을 동일한 완충액으로 2배 희석한다. 2개월 동안 4°C에서 보관하십시오.

일카의 시약. 무수아세트산 5부에 빙초산 1부를 넣고 진한 황산 1부를 서서히 붓는다. 시약을 찬물에 보관하십시오!

밀론 시약. (압박감에 준비 완료! ) 수은 40g을 진한 질산 57ml에 먼저 찬물에 녹이고 수욕에서 가열한다. 생성된 용액을 2 부피의 물로 희석하고 침전물에서 침전시키고 배수시킨다. 어두운 유리병에 보관하십시오.

암모늄 몰리브덴산염 시약. 몰리브덴산암모늄 2.5g을 증류수 60ml에 녹이고 여과한다. 용액을 100ml 플라스크에 첨가한다. 다른 플라스크에 진한 황산 7.5ml를 증류수 25ml에 가한다. 두 번째 용액을 첫 번째 용액에 첨가하고 식힌 다음 증류수로 표시선까지 희석합니다. 솔루션은 한 달 동안 적합합니다.

시약 "NADI". 1% 디메틸-p-페닐렌디아민 용액을 1% 알코올 및 1.5% 탄산나트륨 용액에 1% α-나프톨 용액과 동일한 부피로 혼합합니다. 용액은 짙은 갈색이며 분홍색 색조가 없어야 합니다. 수업 1시간 전에 준비했습니다.

시약 나샤. 100ml 용량의 플라스크에 초산암모늄 15.4g, 빙초산 0.3g 및 아세틸아세톤 0.2g을 가하고 증류수를 가하여 녹이고 표시선까지 가한다.

네슬러의 시약. 용량 500ml의 메스플라스크에 요오드화칼륨 150g, 요오드 110g, 증류수 100ml, 금속수은 약 140~150g을 넣고 15분간 세게 흔든다. 이 경우 용액은 저절로 따뜻해지고 용해된 요오드로 인해 색이 점차 옅어진다. 그런 다음 혼합물을 뚜렷한 붉은 색이 유지될 때까지 흐르는 물에 식힌 다음 붉은 색이 녹색으로 변할 때까지 내용물을 흔든다. 경사분리 후, 수은 침전물을 물로 완전히 씻는다. 용액과 세척액을 결합하고 물로 2 리터로 희석하십시오. 이 용액 75ml를 취하여 물 75ml와 10% 수산화나트륨용액 350ml가 들어 있는 0.5리터 메스플라스크에 넣고 물로 표시선까지 묽힌다.

펠링의 시약. 두 가지 솔루션이 별도로 준비됩니다. 액 1: 1L 메스플라스크에 로셸염 200g과 NaOH 150g을 넣어 녹이고 물로 표시선까지 묽힌다. 액 2 : 용량 1리터의 메스플라스크에 황산구리(II) 40g을 물에 녹이고 물로 표시선까지 묽힌다. 사용하기 전에 이러한 용액을 동일한 양으로 혼합하십시오.

폴린의 시약. 1리터 플라스크에 1g의 텅스텐산나트륨과 20g의 인몰리브덴산을 물 750ml에 녹입니다. 환류 응축기가있는 마개로 플라스크를 닫고 냉장고의 물 흐름을 켜고 내용물을 10 시간 동안 끓입니다. 그런 다음 냉각하고 부피 플라스크에 붓고 시약의 수성 부피를 1리터로 조정합니다.

에를리히의 시약. 이 품목 0.7g을 농염산 150ml에 녹이고 물 100ml를 가하여 혼합한다. 용액은 무색이거나 약간 노란색이어야 합니다. 어두운 유리 용기에 보관하십시오. 시약은 안정적입니다.

에를리히의 시약. 50ml 메스플라스크에 1g의 p-디메틸아미노벤즈알데하이드를 35ml의 빙초산에 녹이고 8ml의 57% 과염소산을 가하고 빙초산으로 표시선까지 채운다. 최대 일주일 동안 냉장고에 어두운 유리 용기에 보관하십시오.

티몰 알코올 용액(10%). 정제한 티몰 10g을 96˚에틸알코올 100ml에 녹인다. 정제된 티몰을 얻는 것은 다음과 같이 수행된다. 이 품목 100g을 96˚에틸알코올 100ml에 녹이고 여과한다. 여액에 냉증류수 1리터를 넣고 세게 흔든 후 20분간 방치한다. 필터를 여과하고 필터에 남아있는 결정을 찬 증류수로 2회 세척한다. 먼저 여과지에서 건조시킨 다음 데시케이터에서 무수 염화칼슘으로 2-3일 동안 일정한 중량으로 건조합니다.

표준 용액. 표준 용액의 준비는 다음 두 가지 용액을 혼합하여 수행합니다. 1) 염화바륨 용액 0.0962n: 결정성 BaCl 2 ∙2H 2 O 1.175g을 메스플라스크의 물 100ml에 용해합니다. 2) 0.2N 황산 용액. 다음으로, 황산바륨 현탁액이 얻어진다: 염화바륨의 0.0962N 용액 3ml를 100ml 부피 플라스크에 붓고 + 10℃의 온도에서 0.2N 황산 용액으로 부피를 조정한다( 이 온도에서 침전된 황산바륨의 입자 크기는 비교적 안정적인 결과를 제공합니다.

기질 완충액: 시험관에 물 10ml를 가하고 L-글루타밀-p-니트로아닐린 0.028g 및 염화나트륨 0.082g을 가하여 교반을 멈추지 않고 끓는 수욕조에서 시험관의 내용물을 60초간 녹인다. . 그 다음 용액을 37℃로 냉각시키고 완충용액 2.5ml를 첨가한다. 준비된 기질 용액은 작동 중 37°C의 수조에 보관됩니다. 사용하지 않은 기질 용액은 최대 일주일 동안 냉장고에 보관할 수 있습니다. 기질은 잘 녹지 않으며 실온에서 침전됩니다. 따라서 사용하기 전에 결정화된 기질을 끓는 수조에서 가열하여 용해시킨다. 기판의 가열 및 용해는 2회 이상 반복할 수 없습니다.

ALT 측정을 위한 기질 용액(솔루션 번호 1). α-케토글루타르산 29.2mg 및 알라닌 1.78g(α-알라닌 0.89g)의 샘플을 분석 저울로 달아 침전물이 완전히 용해될 때까지(pH 7.4) 1M 수산화나트륨 용액에 용해시킨다. 용액을 100ml 플라스크에 붓고 0.1M 인산염 완충액(pH 7.4)으로 표시선까지 부피를 조정합니다. 클로로포름 1방울을 넣는다. 용액은 냉장고에 냉동 보관됩니다.

AsAT 측정을 위한 기질 용액(솔루션 번호 2). 29.2mg의 α-케토글루타르산 및 2.66g의 α-아스파르트산(α-아스파르트산 1.33g)의 샘플을 분석 저울에서 칭량합니다. 다음으로 1번 용액과 동일한 방법으로 용액을 조제한다.

포도당 인산염 이성질화효소 측정을 위한 기질 용액. 약초 아세테이트 완충액 pH 7.4를 준비합니다(초산나트륨 9.714g 및 약초 14.714g을 물에 용해시키고 부피를 500ml로 조정함). 포도당-6-인산이나트륨염의 0.03M 용액 8.33ml를 중간 아세테이트 완충액 25ml와 혼합합니다. 혼합물에 0.1M 염산용액 25ml를 가하고 물로 100ml로 희석한다. 차갑게 유지하십시오.

젖산 탈수소효소 측정을 위한 기질 용액. 1M 젖산나트륨 용액 1ml, 9M NaCl 용액, 0.05M Cl 2 , 10g/L NAD 용액을 섞습니다. 0.5M 인산완충액(pH 7.4) 2.5ml와 니트로테트라졸륨블루용액 1g/l를 가한다. 사용하기 전에 1g / l 농도의 phenanzine methasulfate 용액 0.25ml를 혼합물에 첨가합니다.

fructose bisphosphate aldolase 측정을 위한 기질 용액. 과당중인산바륨염 270mg을 1M 염산 3.5ml에 녹인다. 14% 황산나트륨 용액 1ml를 첨가하고 형성된 침전물을 원심분리에 의해 제거한다. 상층액에 황산나트륨 1방울을 넣는다. 탁도의 출현은 바륨 이온의 불충분한 완전한 침착을 나타냅니다. 이 경우 더 많은 황산나트륨을 추가하고 다시 원심분리합니다. 원심분리기를 3% 수산화나트륨 용액으로 pH 7.4-7.6으로 조정하고 25ml 플라스크로 옮기고 부피를 표시선으로 조정합니다. 생성된 용액을 0.56M 염화히드라진 용액 25ml, 모노요오도아세트산 0.002M 용액 25ml, 0.5% 탄산나트륨 용액 100ml 및 증류수 25ml와 혼합한다. 냉장고에 보관.

티몰-베로날 완충액. 100ml 메스플라스크에 완충용액 80ml와 티몰 10% 알코올용액 1ml를 섞어 흔들어 섞은 다음 완충용액을 표시선에 가한다. pH 값은 7.55여야 합니다.

o-톨루이딘 시약. 0.15g의 티오요소를 94ml의 빙초산에 녹이고 6ml의 증류된 O-톨루이딘과 혼합한다. 어두운 병에 보관됩니다.

물로 포화된 페놀. 증류 페놀 100g에 물 35ml를 가하고 교반하면서 약간 가열하여 페놀의 용해를 촉진시킨다.

페놀프탈렌, 작동 용액. 이 품목 75mg을 0.1N 수산화나트륨용액 15ml에 녹여 조제할 때 액은 무색 또는 약간 분홍빛이어야 하며 유색용액은 작업에 적합하지 않다. 시약의 내성을 높이기 위해 3mg의 트리론이 첨가되어 중금속 염을 결합하여 대기 산소에 의한 페놀프탈레인의 자동 산화를 방지합니다.

섬유소. 소 혈액 피브린은 흰 응고가 얻어질 때까지 며칠 동안 흐르는 물에 있는 혈액 색소에서 씻어냅니다. 물을 짜내고 글리세린으로 채워진 피브린을 단단히 밀폐 된 병에 보관합니다. 사용하기 전에 섬유소는 글리세린에서 씻어냅니다.

인-바닐린 시약. 진한 인산 4부(부피 기준)를 0.6% 바닐린 수용액 1부와 혼합합니다. 시약은 실온에서 어두운 유리 용기에 보관됩니다.

과당 1,6-이인산, 나트륨염. 25ml 플라스크에 과당-1,6-이인산나트륨염 10%용액 2.0ml를 넣고 물을 표시선까지 가하여 희석한다. 냉장고에 보관하면 안정적입니다.

요소용 착색제. 디아세틸 모노옥심 및 티오세미카바지드를 함유하는 요소 측정용 키트의 정제를 50ml 플라스크에서 가열하여 용해시킨다. 용액은 3주 동안 안정적입니다. 사용하기 전에 준비된 용액과 9.6% 황산 용액을 같은 부피로 혼합합니다.

β-글리세로인산염의 알칼리 용액. 용량 100ml의 메스플라스크에 β-글리세로인산나트륨 1g과 약액 0.85g을 넣고 증류수 약 30ml를 가하여 녹이고 물로 표시선까지 채운다. 100ml 용량의 다른 메스플라스크에 조제된 β-글리세로인산액 50ml, 0.1M 수산화나트륨용액 2.8ml를 넣고 증류수(용액 pH 8.6)로 표시선까지 맞춘다. 톨루엔 약 3ml를 액체 위에 놓습니다. 용액을 냉장고에 10일 이상 보관하지 마십시오.

혈액을 채취하여 "얇은 얼룩"과 "두꺼운 방울"을 준비합니다.

박테리아의 움직임. 편모의 구조, 두께, 길이, 화학 성분. 고정 제제의 제조 및 미생물의 살아있는 세포 제제.

화학적으로 순수한 시약은 완충액을 준비하는 데 사용됩니다. 특별히 준비된 분석 등급. 시약은 다음과 같이 준비됩니다.

인산칼륨 일치환, KH 2 PO 4 , 분자량 136.09. 이 약 100g을 물 150ml에 끓일 때 녹인다. 용액을 뜨겁게 여과합니다. 지속적으로 교반하면서 여액을 10ºC로 냉각합니다. 그런 다음 에틸 알코올 150ml를 추가합니다. 여액을 지속적으로 교반하면서 분리된 결정을 흡인 깔때기에서 여과하고 동일한 조건에서 다시 재결정화합니다. 결정은 105...110ºC에서 일정한 무게로 건조됩니다. 주성분 함량이 99.9 ... 100.0 % 범위 인 제제가있는 경우 물질의 예비 준비가 수행되지 않습니다.

이치환된 인산나트륨, Na 2 HPO 4 12H 2 O, 분자량 358.12. 약을 준비하는 방법에는 두 가지가 있습니다.

a) 이 약 150g을 100℃로 가열할 때 물 150ml에 녹인다. 용액을 뜨겁게 여과하고 냉각시킨 후 석출된 결정을 여과한다. 100ºC로 가열하여 재결정화를 반복합니다. 재결정된 조제물은 조제물이 완전히 건조될 때까지 계속 교반하면서 수조의 도자기 컵에서 가열됩니다. 생성된 염은 낮 동안 용융 염화칼슘 위의 데시케이터에서 건조됩니다. 재결정된 제제(Na2HPO4·2H2O)에서 주성분의 함량을 확인한다. 이를 위해 약 0.5000g의 약물을 50ml의 물에 용해시키고 2 ... 3ml의 포화 염화나트륨 용액을 첨가하고 메틸 레드 지시약의 존재하에 0.1N 염산 용액으로 적정한다 . 필요한 경우 샘플 크기를 조정합니다. 정확히 0.1N 염산 1ml는 Na 2 HPO 4 2H 2 O 0.0178g에 해당합니다.

b) 75g의 약물을 60ºC로 가열된 250ml의 물에 용해시킨다. 용액을 뜨겁게 여과하고, 여액을 10ºC까지 지속적으로 교반하면서 냉각합니다. 석출된 결정을 흡인 깔때기에서 여과하고 동일한 조건에서 다시 재결정화합니다. 생성된 소금은 먼저 30ºC를 초과하지 않는 온도에서 24시간 동안 건조된 다음 50ºC의 오븐에서 3-4시간 동안 계속 건조되고 마지막으로 120±5ºC에서 일정한 중량으로 계속 건조되어 소금이 부식되는 것을 방지합니다. 녹는. 건조 후, 염은 조성 Na 2 HPO 4 를 갖는다.

시약을 준비한 후 일치환된 인산칼륨 및 이치환된 인산나트륨의 스톡 용액을 준비합니다.

무수 인산칼륨 일치환된 KH 2 PO 4 9.078g의 일부를 물에 녹이고 용액의 부피를 1리터로 조정한다. 용액을 안정화시키기 위해 톨루엔 3-4방울을 추가합니다.

무게가 11.876g인 인산나트륨 이치환된 Na 2 HPO 4 12H 2 O의 일부를 물에 용해시키고 용액의 부피를 1리터로 조정한다. 용액을 안정화시키기 위해 톨루엔 3-4방울을 추가합니다.

초기 용액에서 표 A.2에 따라 pH 4.94 ~ 9.18의 인산완충액을 준비합니다.

표 A.2 - pH가 4.94 ... 9.18인 인산염 완충 용액

pH	Na 2 HPO 4 12H 2 O 용액, ml	KH 2 PO 4 용액, ml
4,94	1,0	99,0
5,29	2,5	97,5
5,59	5,0	95,0
5,91	10,0	90,0
6,24	20,0	80,0
6,47	30,0	70,0
6,64	40,0	60,0
6,81	50,0	50,0
6,98	60,0	40,0
7,17	70,0	30,0
7,38	80,0	20,0
7,73	90,0	10,0
8,04	95,0	5,0
8,34	97,5	2,5
8,67	99,0	1,0
9,18	100,0	0,0

추가 날짜: 2015-08-06 | 조회수: 4058 |

완충 용액의 pH는 Henderson-Hasselbach 방정식에 따라 계산됩니다.

– 산 완충액의 경우 방정식은 다음과 같은 형식을 갖습니다.

– 메인 버퍼용

방정식은 주어진 조성의 완충 용액의 pH가 산과 염 또는 염기와 염의 농도 비율에 의해 결정되므로 희석에 의존하지 않는다는 것을 보여줍니다. 용액의 부피가 변하면 각 성분의 농도가 같은 횟수만큼 변합니다.

버퍼 용량

일정한 pH를 유지하기 위한 완충 용액의 능력은 제한적입니다. 저것들. 완충용액의 pH를 크게 변화시키지 않고 산 또는 알칼리를 첨가하는 것은 제한된 양에서만 가능합니다.

산과 알칼리가 첨가되었을 때 매질의 반응 변화에 대응하는 완충 용액의 능력을 특징짓는 값을 용액(B)의 완충 용량이라고 합니다.

완충용량은 강산 또는 강염기의 몰당량수로 측정하며, 완충용액 1리터에 이를 첨가하면 pH가 1씩 변한다.

수학적으로 버퍼 용량은 다음과 같이 정의됩니다.

B 산(mol/l 또는 mmol/l):

,

여기서 n(1/z HA)은 산의 몰당량, pH 0 및 pH는 산을 추가하기 전과 후의 완충용액의 pH, V B는 완충용액의 부피입니다.

알칼리(mol/l 또는 mmol/l):

,

여기서 n(1/z VOH)은 알칼리의 몰 당량 수이고 나머지 지정은 동일합니다.

버퍼 용량은 다음과 같은 여러 요인에 따라 달라집니다.

1. 완충용액에 첨가되는 물질 및 성분의 성질에서. 왜냐하면 일부 물질은 불용성 화합물 또는 착물을 형성하거나 완충 시스템의 구성 요소와 다른 바람직하지 않은 반응을 일으킬 수 있으며 완충 용량 개념은 의미를 잃습니다.

2. 버퍼 시스템 구성 요소의 초기 농도에서.

용액에서 산-염기 쌍의 성분 수가 많을수록 이 용액의 완충 용량이 커집니다.

시스템이 여전히 특성을 유지하는 완충 용액 성분 농도 비율의 한계. pH 간격 = pK ± 1은 시스템의 완충 작용 영역이라고 합니다. 이것은 1/10에서 10/1까지 소금 /C 대 당신의 비율의 범위에 해당합니다.

B에서 (혈액) \u003d 0.05 mol / l; B에서 (플라즈마) \u003d 0.03 mol / l; B에서 (혈청 혈액) = 0.025 mol / l

혈액 완충 시스템

완충 시스템은 유기체의 산-염기 균형을 유지하는 데 특히 중요합니다. 대부분의 세포내액의 pH 값은 6.8에서 7.8 사이입니다.

산 - 인간 혈액의 기본 균형은 탄화수소, 인산염, 단백질 및 헤모글로빈 완충 시스템에 의해 제공됩니다. 혈장의 정상적인 pH 값은 7.40 ± 0.05입니다.

헤모글로빈 완충 시스템은 혈액의 35% 완충 용량을 제공합니다. . 산소 헤모글로빈은 환원 헤모글로빈보다 더 강한 산입니다. 산소 헤모글로빈은 일반적으로 칼륨 염의 형태입니다.

탄산염 완충 시스템 : 권력 면에서 1위다. 탄산(H 2 CO 3 )과 중탄산나트륨 또는 중탄산칼륨(NaHCO 3, KHCO 3 )을 1/20의 비율로 나타냅니다. 중탄산염 완충제는 신체의 산-염기 장애를 교정하는 데 널리 사용됩니다.

인산염 완충 시스템 . 디히드로포스페이트는 약산의 성질을 가지고 있으며 혈류에 들어가는 알칼리성 생성물과 상호작용합니다. 인산수소염은 약알칼리 성질을 가지고 있어 강산과 반응한다.

단백질 완충 시스템은 양쪽성 특성으로 인해 산과 알칼리를 중화하는 역할을 합니다. 산성 환경에서 혈장 단백질은 염기성, 산과 같은 염기성 환경에서 다음과 같이 행동합니다.

완충 시스템은 조직에도 존재하며, 이는 조직의 pH를 비교적 일정한 수준으로 유지하는 데 기여합니다. 주요 조직 완충액은 단백질과 인산염입니다. pH 유지는 또한 폐와 신장의 도움으로 수행됩니다. 과도한 이산화탄소는 폐를 통해 제거됩니다. 산증이있는 신장은 더 많은 산성 일염기성 인산 나트륨을 분비하고 알칼리증이 있으면 더 많은 알칼리성 염을 분비합니다 : 이염기성 인산 나트륨 및 중탄산 나트륨.

문제 해결의 예

해결책:

다음 공식을 사용하여 산 완충 용액의 pH를 계산합니다.

대답: 5,76

해결책:

다음 공식을 사용하여 버퍼 용량을 계산합니다.

대답: 0.021몰/리터

실시예 3

완충용액은 0.1 mol/l 아세트산 100 ml와 0.2 mol/l 아세트산나트륨 200 ml로 구성되어 있습니다. 이 용액에 0.2 mol/l 수산화나트륨 용액 30 ml를 가하면 이 용액의 pH가 어떻게 변합니까?

해결책:

다음 공식을 사용하여 완충액의 pH를 계산합니다.

완충용액에 NaOH를 첨가하면 염의 양이 증가하고 완충용액의 산의 양이 감소합니다.

0,006 0,006 0,006

CH 3 COOH + NaOH \u003d CH 3 COONa + H 2 O

우리는 n (NaOH) \u003d 0.03 l 0.2 mol / l \u003d 0.006 mol을 계산하므로 완충 용액에서 산의 양이 0.006 mol 감소하고 염의 양이 0.006 mol 증가합니다.

다음 공식을 사용하여 용액의 pH를 계산합니다.

따라서: pH 2 - pH 1 = 5.82 - 5.3 = 0.52

대답:완충액 pH 변화 = 0.52.

독립 솔루션을 위한 작업

4. 혈액 2ml를 적정하여 pH를 초기값(7.36)에서 최종값(7.0)으로 변경하려면 0.01M HCl 용액 1.6ml를 추가해야 합니다. 산 버퍼 용량을 계산합니다.

5. 수소이온 농도를 300배 낮추기 위해 초산 300ml에 초산나트륨을 몇 몰 넣어야 하는지(K dis(CH 3 coon) = 1.85.10 -5).

6. 생화학 연구에서는 pH = 7.4인 인산염 완충액이 사용됩니다. 이러한 완충 용액 (pK (H 2 PO 4 -) \u003d 7.4)을 얻기 위해 인산 수소 나트륨과 인산이 수소 나트륨의 용액을 각각 0.1 mol / l의 농도로 혼합해야합니다.

7. 혈액 pH = 7.20, Pco 2 = 38 mm Hg와 같은 지표로 CBS 위반이 관찰됩니다. Art., BO = 30mmol / l, SBO = -4mmol / l. 이 KOS 위반을 제거하는 방법은 무엇입니까?

테스트 작업

Tween-20 Phosphate Wash Buffer for Immunohistochemistry는 희석 후 시약 슬라이드를 세척하고 절차 사이에 면역 조직 화학 표본을 단기간 보관하는 데 사용되는 농축액(20x)입니다. 희석 후 바로 사용할 수 있는 0.01M 용액의 pH는 7.4±0.1입니다. 이 인산염 완충 식염수를 사용하면 고품질 세척을 제공할 수 있을 뿐만 아니라 사용된 항체와 에피토프의 형태학적 특성을 보존할 수 있어 면역조직화학 반응에 필요한 특정 결합을 촉진합니다. PBS에 Tween-20을 첨가하면 보다 효율적인 세척을 촉진하고 비특이적 염색을 방지할 수 있습니다.

우리의 장점:

현재 우리는 실험실 시약의 주요 외국 제조업체와 협력하고 있습니다. 우리의 고객은 모스크바와 러시아의 다른 도시에 있는 의료 기관을 포함한 비국가 및 국가 기관입니다. 일반 고객의 경우 할인 시스템이 있습니다.