Gematologik tadqiqotlar uchun biologik materialni yig'ish va tayyorlashga qo'yiladigan talablar.

Gematologik tadqiqotlar uchun biologik materialni tashish va saqlashga qo'yiladigan talablar.

Gemostaz tizimini o'rganish uchun yo'nalishni to'g'ri to'ldirish:

Bemorning to'liq ismi, yoshi, jinsi

Tadqiqot uchun qon namunasi olish vaqti

Klinik tashxis (qisqacha)

Gematokrit

Gemorragik sindrom (burun, bachadondan qon ketish va boshqalar), tromboz (lokalizatsiyani ko'rsatadi), shok, ko'p a'zolar etishmovchiligi, travma, uzoq muddatli siqilish sindromi, kuyishlar va boshqalar.

Gemostaz parametrlariga ta'sir ko'rsatadigan qabul qilingan dori-darmonlarni ko'rsating, bunda oxirgi qo'llashning dozasi, usuli va sanasi ko'rsatiladi.

Namuna olish (qon) uchun vaqt oralig'i, parhez va jismoniy mashqlar cheklovlari kuzatiladi:

Rejali qon namunasi ertalab soat 7 dan 9 gacha, bemor yotgan yoki o'tirgan holda amalga oshiriladi. Gemostazni dinamikada o'rganayotganda, qonni oldingi holatda bo'lgani kabi tananing bir xil holatida olish maqsadga muvofiqdir.

Qon och qoringa, oxirgi ovqatdan 12-14 soat o'tgach olinadi.

Qon olishdan oldin bemorga 15 daqiqa dam olish tavsiya etiladi.

Istisnolar: cito orqali gemostazni o'rganish, APTTni baholash.

Rejalashtirilgan tadqiqot arafasida (24 soat ichida) bemor jiddiy jismoniy kuch ishlatishdan, spirtli ichimliklarni iste'mol qilishdan bosh tortadi. Bemorning qon namunalarini olish arafasida yog'li ovqat iste'mol qilmasligi ma'qul.

Jarrohlik aralashuvi gemostazning bir necha kundan bir necha haftagacha o'zgarishiga olib keladi.

Elektron gemostaza ta'sir qiluvchi omillarga in'ektsiya, infuziya, transfüzyon, ponksiyon, biopsiya, massaj, dializ, radiopak agentlarni kiritish, immunossintiografiya, ionlashtiruvchi nurlanish, endoskopik tekshiruv, maxsus parhezlar kiradi.

QON NAMALA OLISH QOIDALARI

Qon periferik venadan (odatda kubital) olinadi.

Qon namunasini olish faqat ishlatiladigan antikoagulyantga qarab maxsus rang belgisi bo'lgan probirkalarda vakuumli namuna olish tizimi yordamida amalga oshiriladi ( natriy sitrat 3,2% nisbatda: 1 hajm natriy sitrat 9 hajm qonga.

Tadqiqot uchun trombotsitlar darajasi sinov naychasida qon olish EDTA bilan(lilac rang kodlash). Trombotsitlar darajasini o'rganish klinik qon tekshiruvi bo'lmaganda yoki klinik qon testida trombotsitlar darajasining patologik qiymatlari olinganda buyuriladi.

Qisqa turniketga ruxsat beriladi, 60 soniyadan oshmasligi kerak. Igna tomir ichiga kirgandan so'ng darhol turniketni olib tashlang. Koagulyatsion tizimni o'rganish uchun qon namunalarini olish uchun siz tomirlarni massaj qila olmaysiz, ularni taqillata olmaysiz.

Ichki diametri 0,7-1 mm (o'lchami 19-22) bo'lgan qon yig'ish ignasidan foydalaning.

Qonning turbulent harakati va uning havo bilan aralashishi (ko'piklanish) tufayli trombotsitlar va qon ivish omillarining faollashishi tufayli shpritsdan foydalanish mumkin emas. Vakuumli idishlardan foydalanganda istisno qilinadi.

Ignani tomir ichiga kiritgandan so'ng, vakuumli idishni ulang, qon tortishish kuchi bilan idishga oqib chiqa boshlaydi.

Koagulologik tekshiruv uchun qon oling ikkinchi sinov naychasi, birinchi navbatda boshqa tadqiqotlar uchun foydalaning, masalan, biokimyoviy. Agar birinchi bo'lib koagulyatsion probirka olinadigan bo'lsa, birinchi 5 ml qonni bo'sh probirkaga tushiring va u erga tashlang. to'qima tromboplastinining namunaga kirishiga yo'l qo'ymaslik.

To'plangandan so'ng darhol qonni antikoagulyant bilan ko'piklanmasdan muloyimlik bilan aralashtiring (naychani 3-4 marta aylantiring).

Biologik materialdan namuna olingandan so'ng, qon namunasini tekshiring. Qon namunalarini aniq tekshirish quyidagi xatolardan qochadi: qon / sitrat hajmlarining noto'g'ri nisbati; qisman ivish qon.

Qon olinganidan keyin 45 minut ichida laboratoriyaga yetkaziladi. Tashish paytida qonni silkitmaslik kerak. Qon namunalarini 4 ° C dan past va 30 ° C dan yuqori haroratlarda tashish mumkin emas.

Feldsher-laborant (tibbiy texnolog) quyidagilarni amalga oshiradi:

etkazib berilgan qonni kiritish nazorati, shu jumladan: 1) yo'llanma shaklini to'ldirishning to'g'riligini tekshirish. 2) trubkadagi yorliq bo'yicha etkazib beriladigan qon hajmining etarliligini tekshirish, 3) trubka sekin egilganida namunani pıhtılar yo'qligini tekshirish.

Quyidagilarni olish uchun yuborilgan qonni sentrifugalash:

trombotsitlarga boy plazma ( santrifüj parametrlari: rpm = 1000 rpm (taxminan 150-200g), santrifüj vaqti 5-7 minut.

Optimal santrifüj sharoitlarini tanlash uchun ular markazdan qochma kuch (g) tomonidan boshqariladi. Siz formuladan foydalanishingiz mumkin:

g = 1,118 x 0,00001r x n2,

bu erda r - sentrifuga radiusi - rotorning o'qi va santrifuga o'rindig'idagi probirka markazi orasidagi santimetrdagi masofa; n - daqiqada aylanishlar soni.

trombotsitlar kam plazma santrifüj parametrlari: rpm = ~2500-3000 rpm (taxminan 1500-2000g), santrifüj vaqti 10-20 minut. Trombotsitlarni to'liq olib tashlash uchun takroriy santrifüjlash amalga oshiriladi, santrifüj parametrlari bir xil bo'lib qoladi.

3. Santrifüjdan so'ng plazmaning rangi va shaffofligini tekshiradi: gemolizlangan namuna, ikterik yoki lipemik (xiloz) plazma tekshirilmaydi.

Santrifüjdan keyin supernatant chiqariladi.

Istalgan davomida gemostaz parametrlarini o'rganish Qon namunasidan 2 soat o'tgach, lekin ruxsat berilgan koagulologik parametrlarni o'rganish 4 soat ichida plazma eritrotsitlar va leykotsitlar cho'kmasidan ajratilgan bo'lsa.

Zarur bo'lsa uzoq muddatli saqlash"yangi" namunalar (qon olishdan keyin 2 soatdan kechiktirmay) trombotsitlarsiz plazma bir marta bo'lishi mumkin muzlatmoq va -20°C da 2 haftagacha yoki -70°C da 6 oygacha saqlanadi. Plazma tezda iliq suvda (+36 ° C) eritilishi kerak, yaxshilab aralashtiriladi va darhol tekshiriladi. Muzlatgandan so'ng, APTT o'zgarishi mumkin.

Gematologik tadqiqotlar uchun mikropreparatlarni tayyorlash usuli, mahkamlash va bo'yash usullari.

Gematologik tadqiqotlar uchun qon smearlarini tayyorlash usuli.

Ko'zoynak tayyorlash va qayta ishlash. Yangi toza ko'zoynaklar Nikiforov aralashmasida (96% etil spirti va efirning teng qismlari) yog'sizlantirishdan keyin foydalanish mumkin. Ishlatilgan ko'zoynaklar bir kun davomida iliq sabunlu eritmada yoki kir yuvish kukuni eritmasida (5 litr suv uchun 1 osh qoshiq kukun) namlanadi. Bir kundan keyin eritma drenajlanadi, stakan suv bilan yuviladi. Keyin ular yana iliq sovunli eritma yoki kir yuvish kukuni eritmasi bilan quyiladi va qaynatishga keltiriladi, xuddi shu eritmada 5-10 daqiqa davomida qaynatiladi (ko'zoynakni xiralashtirmaslik uchun). Eritmani sovutgandan so'ng, u yana drenajlanadi, slaydlar oqadigan suv bilan yuviladi va har bir slaydni oqar suv ostida cho'tka bilan yuviladi. Shu tarzda ishlov berilgan ko'zoynaklar quritish uchun toza choyshabga yotqiziladi. Yog'sizlantirish uchun toza ko'zoynaklar Nikiforov yoki 96% etil spirti aralashmasiga 60 daqiqa davomida joylashtiriladi, keyin quritiladi va keng bo'yinli toza idishda saqlanadi. Toza ko'zoynakni cımbız yoki qo'l bilan yon chetidan olish tavsiya etiladi.

Smearlarni tayyorlash. Kichik bir tomchi qon quruq tayyorlangan shisha slaydga shisha tayoq bilan qisqa tomonga yaqinroq (yoki to'g'ridan-to'g'ri barmoq teshilgan joydan) qo'llaniladi. Stakanni gorizontal holatda qoldiring va qonni stakanga quruq, toza, maydalangan stakan bilan surting, uni 45 ° burchak ostida ushlab turing. Qisqa qirra bilan, barcha qon uning ustiga tarqalguncha kutgandan so'ng, ular tezda shisha slaydga tortiladi. Shisha slaydga kuchli bosim bo'lmasligi kerak, chunki bu qon hujayralariga zarar etkazishi mumkin. Smearlar havoda quritiladi va markalanadi (yaxshisi oddiy qalam bilan). Quritilgan smear bir tekis yupqa, sarg'ish rangda, etarlicha kattalikda, oynaning chetidan 1,0-1,5 sm masofada joylashgan bo'lishi kerak, shishaning deyarli butun uzunligini egallashi va "panikula" bilan tugashi kerak. Qalin (chuqur pushti) smearlardan foydalanmaslik kerak, chunki ularda hujayra morfologiyasini aniqlash qiyin.

Standart sifatli smearlar smearlarni tayyorlash uchun mo'ljallangan va turli kompaniyalar tomonidan ishlab chiqarilgan avtomatik qurilmalar yordamida olinadi.

Qon smearlarini mahkamlash va bo'yash. Bo'yashdan oldin qon smetalari odatda 5-10 daqiqa davomida metil spirtida o'rnatiladi, bu suvda eruvchan bo'yoq bilan bo'yash jarayonida yoki keyinchalik suv bilan aloqa qilishda suv bilan aloqa qilishda yuzaga kelishi mumkin bo'lgan gemolizning oldini olish uchun. Fiksatsiya texnikasi binoni texnikasi bilan birga quyida tavsiflanadi. Rayt va Leyshman dog'lari uchun fiksatsiya talab etilmaydi, chunki bu dog'lar tarkibida metil spirti mavjud.

Quruq tamponlar quruq, iliq joyda 2 kun davomida saqlanishi mumkin; issiq, nam muhitda mahkamlanmasdan, ular kamroq saqlanadi.

Qon hujayralarida reaktsiya (pH) bo'yicha farq qiluvchi bazofil va atsidofil tuzilmalar mavjud. Yadrolari bazofil bo'lib, ko'k rangga bo'yalgan. Yuqori bazofil (kislotali) bazofil granulalari ham ko'k rangga ega. Gemoglobin (asosiy bo'lib) atsidofil, ya'ni qizil rangda bo'yadi. Kislotali va asosli bo'yoqlarning kombinatsiyasi bilan bo'yash Romanovskiy bo'yash deb ataladi va turli xil modifikatsiyaga ega (Pappenxaym, Rayt, Noht, Leyshman, Giemsa, Jayner va boshqalar). Odatda asosiy bo'yoq sifatida metilen ko'k ishlatiladi, ammo toluidin ko'k ham ishlatiladi. Kislota bo'yoq sifatida eozin, azure I va azure II ishlatiladi.

Yaxshi bo'yash mezonlari: eritrotsitlarning pushti rangi, pushti fonda neytrofillar donadorligining binafsha rangga bo'yalishi, monositlarning yumshoq azurofil donadorligi.

Bo'yoqni suyultirish uchun neytral toza distillangan suvdan foydalanish yaxshidir. Qattiq distillangan suv atmosferadan karbonat angidridni ushlash tufayli kislotali bo'ladi. Distillangan suv gidroksidi bo'lsa, qizil qon hujayralari iflos mavimsi-yashil rangga aylanadi; leykotsitlarning ko'k rangga bo'yalishi kerak bo'lgan qismi binafsha rangga aylanadi, eozinofil granulalari pushti o'rniga ko'karish va yashil rangga ega bo'ladi va neytrofil granulalar saqlanib qoladi. Kislotali suvda eritrotsitlar yorqin to'q sariq rangga aylanadi, leykotsitlar yadrolari esa juda rangpar. Ideal pH 7,0 bo'lgan distillangan suv bo'lib, uni saqlab qolish uchun buferlanadi. Siz distillangan suvda erigan foydalanishga tayyor bufer tabletkalaridan foydalanishingiz mumkin.

Suyak iligi smearlarini bo'yash uchun pH 7,4-7,5 bo'yoq idealdir.

Noht va Pappenxaym bo'yicha bo'yash usullari birlashtirilgan deb qabul qilinadi.

Fikslash uchun reaktivlar: 1) metil spirti yoki 2) Mey-Grunvald eozin-metilen koʻk eritmasi.

Noxt bo'yicha smearlarni bo'yash uchun reagentlar: 1) azur I ning asosiy eritmasi: 1 g bo'yoq 1 litr distillangan suvda eritiladi, qorong'i shisha idishda 12-14 kun davomida xona haroratida qoldiriladi, so'ngra ishlatiladi; 2) kaliy eozinning asosiy eritmasi: 1 g bo'yoq 1 litr distillangan suvda eritiladi, qorong'i shisha idishda xona haroratida 12-14 kun davomida qoldiriladi, shundan so'ng u ishlatiladi; 3) fosfat buferi (Vayse aralashmasi), pH 7,4-7,5: 0,49 g kaliy dihidrofosfat (KH2PO4) va 0,909 g natriy vodorod fosfat (Na2HPO4) aralashtiriladi va 1 litr distillangan suvda eritiladi; 4) azur-eozinning ishchi eritmasi: ishlatishdan oldin 25 ml azure II eritmasi, 20 ml kaliy eozin eritmasi va 55 ml bufer eritmasi aralashtiriladi (bo'yoqlarning nisbati har xil bo'lishi mumkin, ular belgilanadi. birja eritmalarining yangi partiyalarini tayyorlashda empirik tarzda).

Pappengeym bo'yicha smearlarni bo'yash uchun reaktivlar: 1) Mey-Grunvald bo'yicha eozin-metilen ko'k eritmasi. Tayyor bo'yoq eritmasi bo'lmasa, u 1 g quruq bo'yoqni 1 litr metil spirtida eritib tayyorlanadi; 2) Noxt bo'yicha azure-eozinning ishchi eritmasi.

Smearlarni mahkamlash. Fikslash eritmasi kyuvetaga yoki maydalagich bilan keng og'izli idishga quyiladi. Smears idishga solinadi, u kyuvetaga botiriladi yoki 5-10 daqiqa davomida idishga birma-bir joylashtiriladi. Ko'zoynakli idish mahkamlash eritmasidan chiqariladi (yoki ko'zoynaklar cımbız bilan chiqariladi va stendga joylashtiriladi) va to'liq quriguncha havoda qoldiriladi.

Nocht bo'yicha bo'yash. Quritilgan mahkamlangan surtmalar, idishdan olib tashlanmasdan, bo'yoqning har bir partiyasi uchun empirik ravishda tanlab olinadigan qat'iy belgilangan vaqtga (20-45 minut) ishlaydigan bo'yoq eritmasi bilan kyuvetaga joylashtiriladi. Idishli kyuvetka bo'lmasa, shisha gorizontal ravishda yuqoriga qarab strok bilan parallel ravishda joylashtirilgan ikkita shisha tayoqqa ("relslar") joylashtiriladi va ularga 3-4 ml ishchi bo'yoq eritmasi quyiladi. Ko'zoynakli idish bo'yoq solingan kyuvettadan chiqariladi va musluk suvi solingan kyuvetaga joylashtiriladi (idishlar yo'q bo'lganda, bo'yoq stakanlarni shisha tayoqchalardan chiqarmasdan suv bilan yuviladi). Smearlar havoda quritiladi.

Pappenxaym rang berish. Quruq fiksatsiyalanmagan qon surtmalari idishga solinadi va 3-5 daqiqa davomida May-Grunvald eritmasi solingan kyuvetaga tushiriladi (yoki 3-4 ml bo'yoq pipetka bilan mahkamlanmagan surtma ustiga quyiladi). Smear solingan idish distillangan suv bilan kyuvetada yuviladi, so'ngra Nokht bo'yicha azur-eozin bo'yoqli kyuvettaga 8-15 daqiqaga joylashtiriladi. Distillangan suv, bo'yoqni to'kib tashlamasdan, 1 daqiqa davomida "relslarga" qo'yilgan slaydlarga qo'shiladi, so'ngra bo'yoq smearga 8-15 daqiqa davomida quyiladi, so'ngra bo'yoq suv bilan yuviladi. Smearlar havoda quritiladi.

Romanovskiy-Giemsa bo'yicha rang berish. Nokhtga ko'ra bir xil tarzda ishlab chiqarilgan. Bo'yoq sifatida tayyor Romanovskiy-Giemsa eritmasi ishlatiladi, u ishlatishdan oldin 1 ml distillangan suv uchun 1 tomchi bo'yoq miqdorida suyultiriladi. Bo'yash vaqti har bir bo'yoq partiyasi uchun empirik tarzda o'rnatiladi (25-40 minut).

Rayt rang berish. Reaktivlar. 0,2 g Rayt dog‘i (quruq kukun, BDH/E. Merck) 100 ml metanolda eritiladi va bir necha kun turishiga ruxsat beriladi. Agar eritrotsitlar etarlicha aniq bo'yalmagan bo'lsa, 0,25% yoki 0,3% eritma tayyorlang.

Rang berish jarayoni. Smearga bir necha (taxminan 8) tomchi bo'yoq qo'llaniladi, 2-3 daqiqaga qoldiring (bo'yoq qurib ketmasligiga ishonch hosil qiling), so'ngra smearga teng miqdorda tamponlangan suv quyiladi. Agar bo'yoq pishgan bo'lsa, suyultirilgan bo'yoq yuzasida metall nashrida ko'pik yoki plyonka paydo bo'ladi. Suyultirilgan bo'yoq smearda 2-3 daqiqa davomida qoldiriladi, so'ngra bufer eritmasi yoki suv bilan yuviladi. Bo'yoqning smear yuzasiga joylashishiga yo'l qo'ymaslik kerak. Agar bu sodir bo'lsa, smear 15-20 soniya davomida suyultirilmagan bo'yoq bilan to'ldiriladi va keyin yana bufer eritmasi yoki suv bilan to'ldiriladi.

Fosfat tamponini tayyorlash.

A eritmasi (0,2 M KH2PO4): 1 litr distillangan suvda 27,2 g tuz eritiladi.

B eritmasi (0,2 M Na2HPO4): 1 litr distillangan suvda 35,6 g Na2HPO4 × 2H20 eritiladi.

Kerakli pH ga ega bo'lgan 100 ml bufer eritmasini olish uchun A va B eritmalarini jadvalda ko'rsatilgan miqdorda drenajlash kerak. PH qiymati pH o'lchagich bilan tekshiriladi.

Fosfat bufer eritmasini tayyorlash

Eritma, ml	pH qiymati

Leishman rang berish. Reaktivlar. 0,15 g Leyshmanning quruq bo'yog'i 133 ml absolyut metil spirtida eritiladi. Bo'yoq butunlay erishi kerak, bo'yoq kristallarini oldindan ohakda maydalash tavsiya etiladi. Bo'yoqni shisha tiqin bilan shishada saqlang, filtrlamang.

Rang berish jarayoni. Rayt bo'yog'iga o'xshash tarzda amalga oshiriladi, ammo bufer eritmasining ikki marta suyultirilishi bilan. Bir necha tomchi bo'yoq (taxminan 8) smear ustiga quyiladi, 2 daqiqa davomida saqlanadi. Ikki marta bufer eritmasini (16 tomchi) qo'shing, silkitib aralashtiring va 7-10 daqiqaga qoldiring. Bo'yoq distillangan suv bilan 2-3 soniyada yuviladi. Uzoqroq yuvish bilan rang yomonlashadi. Smearlar havoda tokchada quritiladi.

Qalin qon tomchisini tayyorlash. Bir-biridan ma'lum masofada joylashgan shisha slaydga qo'llaniladigan uch tomchi qon, toza shisha slaydning burchagi bilan taxminan 1 sm diametrli o'lchamga kengaytiriladi, qalam bilan belgilanadi, so'ngra 1-2 soat davomida havoda quritiladi.

Qalin tomchi qonni bo'yash. Qalin qon tomchilari aniqlanmaydi. Yaxshi quritilgan qalin tomchilari bo'lgan shisha slaydlar "relslar" ustiga bir-biridan ma'lum masofada joylashtiriladi va ularning ustiga 8-10 daqiqa davomida Noxt bo'yicha azure-eozinning ishchi eritmasi quyiladi. Eritrositlarning "suvlanishi" mavjud. Keyin bo'yoq drenajlanadi va 30-35 daqiqa davomida preparatlar ustiga Nokht bo'yicha azure-eozinning ishchi eritmasining yangi qismi quyiladi. Keyin slaydlar ehtiyotkorlik bilan distillangan suv bilan yuviladi va quritiladi.

Smearlarni avtomatik bo'yash

Gematologiya laboratoriyasida eng ko'p talab qilinadigan vazifalardan biri qon smearlarini tayyorlash va bo'yash bo'lganligi sababli, ularni avtomatlashtirishga urinishlar tabiiydir.

Birinchi avtomatik smear tayyorlash tizimi 1990 yilda Sysmex (Yaponiya) tomonidan ishlab chiqilgan va hozirda butun dunyo bo'ylab 1600 dan ortiq tizimlar o'rnatilgan. Bu davrda to‘plangan katta tajriba yangi avlod tizimi – to‘liq avtomatlashtirilgan SP-1000i smear tayyorlash va bo‘yash quvvati soatiga 120 tagacha bo‘lgan smear stansiyasini yaratishda foydalanildi. SP-1000i aqlli xanjar usuli yordamida surtma tayyorlashda yuqori standartlashtirish va sifatni amalga oshiradi, bu esa foydalanuvchiga qo'llaniladigan qon namunasi miqdorini, surtish pichog'ining burchagini, surtish tezligini va kutish vaqtini moslashtirishga imkon beradi. 8 dan 16 gacha turli xil tartibga solish darajasidan foydalangan holda sinov namunasining gematokritiga. Qon namunalarini qo'lda yoki avtomatik ravishda ochiq yoki yopiq naychalardan olish mumkin. Sysmex avtomatlashtirilgan smear tayyorlash va bo'yash stantsiyasi SP-1000i (Yaponiya)

Tizim smearni bo'yash sifatini standartlashtirish va eng yuqori talablarga javob berish imkonini beruvchi yettitagacha moslashuvchan moslashtirilgan binoni protokollaridan foydalanadi. Ikki va bitta binoni uchun quyidagi protokollardan foydalanish mumkin: May-Grunvald-Giemsa bo'yicha, Romanovskiy va Romanovskiy-Giemsa bo'yicha. Qon smearlari har bir kassetada faqat bitta slaydni o'z ichiga olgan maxsus kasseta tizimida bo'yaladi. Ushbu usul bilan qon smetasi va bo'yash reagentlari o'rtasida yaxshi munosabat kafolatlanadi va metanolning reagentdan havoga bug'lanishi yo'q. Bo'yashdan oldin qonning yaxshi fiksatsiyasini ta'minlash uchun binoni jarayoniga metanolni oldindan mahkamlash uchun alohida qadam qo'shiladi.

Bo'yash protokolining moslashuvchanligi tufayli suyak iligini bo'yash uchun maxsus protokoldan foydalanish mumkin.

Gematologik tadqiqotlar uchun suyak iligi smearlarini tayyorlash usuli.

Suyak iligi tekshiruvi - mielogramma Suyak iligi tekshiruvi javob berishi kerak bo'lgan birinchi savol - bu hujayralarning miqdoriy jihati. Ma'lumki, periferik qonga nisbatan har xil turdagi hujayralar soni va ulushi uchun bir qator raqamli qiymatlarni aniqlash mumkin, chunki ular erkin holatda va tomir qonining suspenziyasida nisbatan bir xil taqsimlanadi. . Suyak iligi haqida butunlay boshqacha narsa aytish mumkin: gematopoetik to'qimalarning tarkibi juda heterojen va suyak iligi hujayralarining tarqalishi bir xil emas. Shunday qilib, kameradagi miyelokaryotsitlarning to'g'ridan-to'g'ri soni normal holatda ham, bir xil kasallik doirasida ham juda keng diapazonda o'zgarib turadi. Biz odamlarda topilgan qiymatlar odatda mm3 (Ursya) uchun 27000 dan 112000 yadro elementigacha bo'lgan. Adabiyot ma'lumotlari yanada kengroq o'zgarib turadi, chegaralar mm3 uchun 12 000 va 300 000 (Kartrayt, Page). Sentrifugadan so'ng gematokrit trubkasida quyidagi 4 ta qatlam topiladi: 1) yuqori yog'li sariq qatlam; 2) plazma; 3) yadro hujayralaridan hosil bo'lgan kulrang-oq rangli qatlam; 4) eritrotsitlardan tashkil topgan qizil qavat. Yadroli hujayralarning kulrang-oq qatlamini (miyelokrit) o'lchash cheklangan qiymatga ega yoki hatto noto'g'ri, chunki oddiy odamlarda topilgan qiymatlar ham sezilarli tebranishlarni ko'rsatadi. Bundan tashqari, yadro hujayralari nafaqat bu qatlamda, balki yog 'va eritrotsit qatlamlarida ham mavjud. Ammo suyak iligi konsentratining smearlarini supernatant plazmasi olib tashlangandan keyin kulrang-oq qatlamdan tayyorlash mumkin. Ular to'g'ridan-to'g'ri smear hujayralarida kambag'al bo'lgan hollarda diagnostika jarayonida foydali ekanligini isbotladi. Miyelokaryotsitlar kamerasini hisoblash va miyelokritni aniqlash cheklangan takrorlanish qobiliyatiga ega bo'lgan faqat taxminiy natijalarni berishini hisobga olsak, bu miqdorni aniqlash usullari qoniqarli emas. So'rg'ich ponksiyon paytida olingan material turli nisbatlarda qon bilan aralashtirilgan suyak iligi namunasidir. Suyak iligining qon bilan suyultirish darajasi bir qator omillarga bog'liq. 32P belgisi aspiratsiya qilingan suyak iligining qon bilan suyultirilishi 40% dan 100% gacha ekanligini isbotladi. Ammo shuni ta'kidlash kerakki, tashxis qo'yish uchun suyak iligini o'rganish birinchi navbatda hujayra tarkibini sifatli o'rganishga va ikkinchidan, bu tarkibning miqdoriy qiymatlariga asoslanadi. Shuning uchun suyak iligi hujayralarini aniqlashning miqdoriy usullari suyak iligining hujayra tarkibini oddiy namunalar bilan solishtirganda yarim miqdoriy baholashdan iborat: a) maydalangan bo'laklar bilan surtish; b) gistologik kesmalar. Smearni o'rganish asosan quruq linza bilan, bir nechta smearlarda, quyidagi maqsadlarda amalga oshiriladi: a) suyak iligi hujayralari massasini yarim miqdoriy baholash; b) megakaryotsitlarning mavjudligi va zichligini aniqlash; v) gigant hujayralar yoki anormal hujayralar uyalarini aniqlash; d) immersion yo'li bilan tadqiqot uchun eng mos yo'nalishlarni aniqlash. Suyak iligi zarralarini maydalash natijasida olingan surtmalarda quyidagi uchta konsentrik zonalar ajratiladi: a) markaziy; b) tashqi; c) oraliq. Markaziy zonani yog 'vakuolalari, stromal hujayralar, granulotsitlar va ko'plab vayron qilingan hujayralar hosil qiladi. Tashqi zonada suyak iligi hujayralarini suyultiradigan katta miqdordagi qon mavjud. Yupqa smear kabi, u faqat miyeloid hujayralar va eritrotsitlarning morfologik tafsilotlarini o'rganishga yordam beradi. Eng zich hujayra massasi oraliq zonada joylashgan bo'lib, bu ko'rsatilgan barcha savollarga aniqlik kirita oladigan optimal o'rganish imkonini beradi. Bu erda ilik hujayralari yaxshi saqlanadi va xuddi ilikda ko'rinib turganidek, orolchalar yoki uyalarda joylashgan. Suyak iligi topografiyasini saqlab qolgan holda, ushbu zonani o'rganish natijalari bir hil bo'lib, suyak iligining haqiqiy holatiga mos keladi, bu uning gistologik tasvirlari bilan taqqoslangan holda tasdiqlanadi. Hujayra zichligini yarim miqdoriy aniqlash quyidagicha ifodalanadi: a) normal, b) boy yoki v) oddiy suyak iligiga nisbatan ozg'in. Oddiy yoki ko'p hujayra massasini aniqlash qimmatli topilma bo'lib, kam suyak iligi esa ehtiyotkorlik bilan ko'rib chiqilishi kerak. Haqiqiy gipoplaziya mavjudligini isbotlash uchun bir nechta plitalarni tekshirish kerak, bir nechta suyak joylarida ponksiyon va / yoki suyak biopsiyasi qilish kerak. Suyak iligi hujayra massasi haqida eng aniq ma'lumot gistologik bo'limlarni tekshirish orqali olinadi. Voyaga etgan odamda yog 'va faol hujayra parenximasi egallagan bo'shliqning nisbati odatda 1: 1 yoki 2: 1 ni tashkil qiladi. Ba'zi mualliflar gematopoetik hujayralar suyak iligi bo'laklarining to'rtdan biridan kamroq qismini egallaganida, suyak iligi gipocellular deb hisoblashadi. Tashxis qo'yish uchun suyak iligining sifatli tekshiruvi zarur. U cho'milish yo'li bilan, ham yupqa surtmalarda, ham, xususan, oraliq zonadan maydalangan bo'laklar bilan surtishda amalga oshiriladi. Aniq belgilangan va morfologik jihatdan yaxshi saqlanib qolgan hujayralar bilan eng yaxshi to'g'ri cho'zilgan va bo'yalgan smearlarni tanlash tavsiya etiladi. Ushbu tadqiqotda quyidagilar ko'rsatilgan: a) miyeloid hujayralarning har xil turlarini aniqlash; b) har bir hujayra qatorining yetilish darajasini aniqlash; v) granulotsitlar va eritroblastlar (G/E) o'rtasidagi bog'liqlikni aniqlash;d) mitoz fazadagi hujayralarni aniqlash; e) duch kelgan atipik hujayralar tavsifi. Bir nechta smearlarni tekshirgandan so'ng, batafsil tavsiflovchi "miyelogramma" tuziladi (smearlarni shifrlashdan keyin qilingan xulosalarni o'z ichiga oladi) yoki kamida 300-500 element bilan o'rnatilgan foizlarda miyelogramma. Foiz miyelogrammasini tuzishning ikki yo'li mavjud: 1) qolgan hujayra qatorlarini 100 ta granulotsitga belgilash; 2) suyak iligi hujayralarining umumiy sonidan har bir turdagi hujayralarni foizli ko'rsatish. Statistik nuqtai nazardan, oxirgi usul to'g'riroq ko'rinadi va suyak iligining hujayra tarkibining haqiqiy rasmini aks ettiradi. Ayrim mualliflar tomonidan o'rnatilgan formulalar sezilarli darajada farq qiladi, chunki suyak iligi kabi heterojen to'qimalarda haqiqiy o'rtacha qiymatlarni aniqlash qiyin. Jadvalda Wintrobe ma'lumotlariga ko'ra, 12 oddiy odamdan tanlangan suyak iligi namunalarini o'rganish natijalari ko'rsatilgan. Oddiy miyelogramma

Miyelogramma parametrlari O'rtacha qiymat (%) Dalgalanish diapazoni (%)

Retikulyar hujayralar 0,9 0,1-1,6 Differentsiatsiyalanmagan blastlar 0,6 0,1-1,1 Miyeloblastlar 1,0 0,2-1,7

Promiyelotsitlar 2,5 1,0-4,1

Miyelotsitlar neytrofillar 9,6 7,0-12,2 Metamyelotsitlar neytrofillar 11,5 8,0-15,0 Stab neytrofillar 18,2 12,8-23,7 Segmentli neytrofillar 18,6 13,1-24,1 Jami neytrofil hujayralar 60,8 52,7-68,9 Eozinofil miyelotsitlar 0,1 0,0-0,2 Eozinofil metamiyelotsitlar 0,2 0,1-0,4 Eozinofiller 2,8 0,4-5,2

Eozinofil seriyasining umumiy hujayralari 3,2 0,5-5,8 Bazofil miyelotsitlar 0,1 0-0,3

Bazofillar 0,1 0-0,3

Bazofil seriyasining umumiy hujayralari 0,2 0-0,5 Limfoblastlar 0,1 0-0,2

Prolimfotsitlar 0,1 0-0,2

Limfotsitlar 8,8 4,3-13,3

Jami limfoid hujayralar 9,0 4,3-13,7 Monoblastlar 0,1 0-0,2

Monotsitlar 1,9 0,7-3,1

Plazmablastlar 0,1 0-0,2

Proplazmositlar 0,1 0,1-0,2

Plazma hujayralari 0,9 0,1-1,8

Eritroblastlar 0,6 0,2-1,1

Bazofil normoblastlar 3,6 1,4-5,8 Polixromatofil normoblastlar 12,9 8,9-16,9 Oksifil normoblastlar 3,2 0,8-5,6

Jami eritroid hujayralari 20,5 14,5-26,5 Megakaryotsitlar 0,4 0,2-0,6

Sog'lom odamlar ustida olib borgan tadqiqotlarimizga ko'ra, natijalar quyidagicha:

granulotsitlar soni 56-70%,

eritroblastik qator 23-30%, limfoplazmatik qator 5-10%, monotsito-makrofaglar qatori 1-2% va megakaryotsitlar qatori 0,1-0,8% (Ursya). Oddiy miyeloid qatorlar nisbati o'zgarishi yoki ularning anormal hujayralar bilan almashtirilishi ko'pincha kasallikning turini ko'rsatadi. Retikulyar hujayralar kamroq tez-tez va bundan tashqari, oz miqdorda paydo bo'ladi. Tasodifan, smear (yoki suyak iligi taassurotlari) osteoblastlar va / yoki osteoklastlarni ko'rsatadi, ularni neoplastik hujayralar bilan adashtirmaslik kerak. Ularning mavjudligi ko'pincha bolalarda, kamdan-kam hollarda kattalarda birlamchi miyelofibroz yoki ikkilamchi, karsinomatoz metastazdan so'ng, o'tkir leykemiya, osteoporoz va boshqalar bilan kuzatiladi G / E nisbati granulotsitlarni eritroblastlar soniga bo'lish yo'li bilan olinadi. Oddiy kattalarda bu nisbat o'rtacha 3/1 yoki 4/1 ni tashkil qiladi, chegaralari 2/1 (faqat etuk bo'lmagan granulotsitlar kiritilganda) va 5/1 (barcha granulotsitlarga tegishli bo'lsa - etuk va etuk). H/E nisbati yoshga qarab o'zgarib turadi: tug'ilishda u kichik (1,8/1), 2 haftalikda u 11/1 ga ko'tariladi, keyin asta-sekin kamayadi va bir yoshli bolalarda u qiymatlarga etadi. kattalarning. H/E nisbati global suyak iligi gipo- yoki giperplaziyasi holatlarida, shuningdek, bu nisbatni hisoblashga kiritilmagan alohida hujayralar ko'payishida, masalan, plazmatsitomada normaldir. Leykoz, leykomaga o'xshash reaktsiyalar va eritroblastopeniyalarda bu nisbat yuqori bo'lsa, eritroblastik giperplaziyali anemiyalarda u past yoki teskari (megaloblastik, gemolitik anemiyalar) bo'ladi. Smearlarni o'rganishdan so'ng olingan miyelogramma ma'lumotlarini berishdan oldin quyidagilarni aniqlashtirish kerak: a) ponksiyon joyi; b) suyak zichligi; c) assimilyatsiya sodir bo'lgan shartlar; d) tanlangan materialning makroskopik tomoni. Suyak iligi tekshiruvi ko'p va xilma-xil ma'lumotlarni birlashtirishga asoslangan murakkab jarayondir. Uning natijasi, bundan tashqari, o'zgaruvchan individual raqamlarni mexanik ro'yxatga olishdan ko'ra ko'proq xulosaga asoslangan umumiy xulosalarni aks ettirishi kerak. Har qanday miyelogrammaning xulosasi tashxisni yoki suyak iligini o'rganish natijasida kelib chiqadigan qo'shimcha tadqiqotlar uchun ko'rsatmalarni aniqlashtirishi kerak. Qon kasalliklarida assimilyatsiya ponksiyoni 80% hollarda smear va bo'laklar yordamida tashxisni aniqlashtirishga yordam beradi. Boshqa hollarda suyak biopsiyasi va suyak iligining gistologik tekshiruvi ko'rsatiladi. Biooptik tanlash va gistologik tekshirish: a) birlamchi yoki ikkilamchi mielofibroz; b) suyak iligi aplaziyasi yoki gipoplaziyasi; c) granulomatoz tipdagi shikastlanishlar bilan kechadigan kasalliklar (masalan. , Godgkin kasalligi, sarkoidoz, sil kasalligi va boshqalar); d) karsinomatoz metastazlar; e) ponksiyon bilan tanlangan material qoniqarsiz yoki suyak iligi tomoni ishonarli bo'lmagan barcha hollarda. Biooptik namuna olishdan so'ng, taassurotlar sitologik tekshirish uchun tayyorlanadi, chunki gistologik bo'limlar to'plangan, tarqalmagan va standartlashtirilmagan gematopoetik hujayralarning strukturaviy tafsilotlari haqida kam ma'lumot beradi. Bundan tashqari, fiksatsiya hujayra retraktsiyasini keltirib chiqaradi va gistologik bo'yash sitologik bo'yashga qaraganda kamroq tanlanadi. Shuning uchun suyak iligini to'liq tekshirish sitologik - smear yoki taassurot bo'yicha va gistologik - tadqiqot bo'limlarini o'z ichiga oladi. Shuni esda tutish kerakki, suyak iligini tekshirishning sitologik va gistologik usullari istisno qilinmaydi, aksincha, bir-birini to'ldiradi: biopsiya miqdoriy va me'moriy usul, miyelogramma esa sifatli va sitologik hisoblanadi.

Goryaev kamerasida qon hujayralarini hisoblash usuli.

Goryaev xonasi - suyuqlikning ma'lum hajmidagi hujayralar sonini hisoblash uchun mo'ljallangan qurilma. Odatda qon namunasida hosil bo'lgan elementlarning sonini aniqlash uchun ishlatiladi. Kameralar qalin shisha slayddan iborat bo'lib, ularga ko'ndalang bo'shliqlar qo'llaniladi va uchta ko'ndalang tartibga solingan tekis maydonlarni hosil qiladi. O'rta platforma uzunlamasına tirqish bilan ikkiga bo'lingan, ularning har birida panjara o'yilgan. Goryaev kamerasida o'rta platformaning ikkala tomonida o'rtadan 0,1 mm balandroq (Fuchs-Rosenthal kamerasida 0,2 mm) balandroq ikkitasi bor. Ushbu saytlarning tekisliklari Nyuton halqalari paydo bo'lguncha qoplamani maydalash uchun xizmat qiladi. Qopqoq oynani ishqalagandan so'ng, kamera hosil bo'ladi, ikki tomondan yopiladi, qolgan ikkitasida bo'shliqlar (kapillyar bo'shliqlar) mavjud bo'lib, ular orqali kamera to'ldiriladi. Tarmoq printsipi bir xil. Ular turli yo'llar bilan guruhlangan u yoki bu kvadratchalarga bo'lingan. Barcha tarmoqlarda doimiy qiymat "kichik kvadrat" deb ataladi, uning tomoni 1/20 mm, shuning uchun uning maydoni 1/400 mm2 ni tashkil qiladi. Goryaev kamerasi yordamida mikroskopning kattalashishini ham aniqlash mumkin. Tashqi tomondan, bu shaffof parallelepiped (shisha slayd), oluklar va mikroskopik panjara qo'llaniladi. To'r katakchasining kichik bo'linmalarining o'lchamlari 0,05 mm, katta bo'linmalari esa 0,2 mm. Bunday holda, panjara ikkita qo'shni platformadan 0,1 mm pastroqda joylashgan platformaga (shisha qismi) qo'llaniladi. Bu joylar qoplamani laxtalash uchun ishlatiladi. Natijada, Goryaev panjarasining katta bo'linmalari hosil qilgan kvadrat ustidagi suyuqlik hajmi 0,004 mikrolitrni tashkil qiladi. Katta kvadrat ustidagi hujayralar sonini sanab, formuladan foydalanib, suspenziyadagi ma'lum bir hujayra turining zichligini hisoblashingiz mumkin: Hujayralar soni / ml = katta kvadrat ustidagi hujayralar soni * 2,5 10^5 Goryaev kamerasidan standart sifatida foydalanib, siz mikroskopning kattalashishini quyidagi formula bo'yicha aniqlashingiz mumkin: Kg=(m2-m1)/(a*N) qayerda kg mikroskopni kattalashtirish; m 1 - Goryaev kamerasi kamerasining chap chegarasining holati; m 2 - hujayra yoki hujayralar guruhining o'ng chegarasining holati; N- o'lchangan chegaralar orasidagi hujayralar soni; a- Goryaev kamerasining hujayra o'lchami (0,05 mm ga teng). Goryaev kamerasi kulturadagi hujayralar sonini hisoblash uchun ham ishlatiladi. Goryaev kamerasida qon hujayralarini hisoblash formulasi - x = (a 400 c) / b, bu erda x - 1 mm3 shakldagi elementlarning kerakli soni; a - kameraning ma'lum hajmida hisoblangan shaklli elementlarning yig'indisi; b - hisoblangan kichik kvadratlar soni; c - qonni suyultirish.

Goryaev kamerasida ookistlarni hisoblash usuli. Bu usul odatda hayvonlarni aniq belgilangan miqdordagi ookistlar bilan eksperimental yuqtirganda qo'llaniladi (hayvonga tegishli miqdorda millilitr suspenziya yuboriladi). Goryaev kamerasiga ookistlar bo'lgan 1 ml suspenziya qo'yiladi. Goryaev kamerasining hajmi 0,9 m3 bo'lganligi sababli, hisoblangan ookistlar soni 1111 ga ko'paytiriladi. Olingan son 1 sm3 eritmadagi ookistlar soniga mos keladi. Aniqroq aniqlash uchun hisob-kitoblar kamida uch marta amalga oshirilishi kerak, so'ngra o'rtacha arifmetik qiymat olinishi kerak. Infektsiya uchun zarur bo'lgan ookistlar soni gradusli pipetka yordamida o'lchanadi. Inkubatsiya muhitida ookistlarning bir tekis taqsimlanishi uchun kolba tarkibini qayta-qayta silkitib turish kerak.

Goryaev kamerasida eritrotsitlar soni Prinsip. Qonning aniq miqdori ma'lum miqdordagi suyuqlikda teng ravishda aralashtiriladi va qon suspenziyasi bir qatlamda taqsimlangan ma'lum hajmga ega bo'lgan kameraga joylashtiriladi. Kameraning pastki qismi grafikalangan, bu eritrotsitlarni aniq hisoblash imkonini beradi. Reaktivlar: 0,9% natriy xlorid eritmasi. Maxsus jihozlar: mikroskop, Goryaev kamerasi, laboratoriya probirkalari yoki Sali gemometridan kapillyar. Ta'rif taraqqiyoti. Quruq, toza probirkaga 8 ml 0,9% natriy xlorid eritmasidan va 0,02 ml qon qo‘shing. Pipetkaning uchi oldindan artiladi, qon naycha tubiga puflanadi va pipetka suyuqlikning yuqori qatlami bilan yaxshilab yuviladi. Naychaning tarkibini yaxshilab aralashtiring. 1:400 nisbatda qonni suyultirish olinadi, ya'ni qon 400 marta suyultiriladi. Qonning qalinlashishi bilan uni 500, 600, 700, 800 marta suyultirish tavsiya etiladi. Kamera va qoplamani yuvish va quritish kerak. Qopqoq kameraga surtiladi, shunda iridescent halqalar paydo bo'ladi. Probirkadan suyultirilgan qondan bir tomchi oling va u bilan kamerani to'ldiring, uni qopqoq chetiga suring.Eritrotsitlar kamerani past kattalashtiruvchi mikroskop (x8 ob'ektiv, x10 yoki x15 okulyar) bilan to'ldirgandan 1 minut o'tgach hisoblanadi. yopiq diafragma yoki tushirilgan kondensator (qorong'i ko'rish maydonida). Eritrositlar diagonal ravishda joylashtirilgan beshta katta (yoki 80 ta kichik) kvadratchalarda hisoblanadi. Kichkina kvadrat ichida, shuningdek, uning chap va yuqori devorlarida yotadigan eritrotsitlar hisobga olinadi. Kvadratning o'ng va pastki qatorlarida joylashgan hujayralar hisobga olinmaydi. Hisoblash: 80 ta kichik kvadratchalardagi hisoblangan hujayralar soni qon 1:400 suyultirilganda 20 000 ga, 1: 500 suyultirilganda 25 000 ga yoki 1: 600 suyultirilganda 30 000 ga ko'paytiriladi va yakuniy natija olinadi. 1 mkl uchun millionlarda. Bunday holda, bitta kichik kvadratning hajmi 1/4000 mkl deb hisoblanadi. 1 litrdagi hujayralarni hisoblash uchun 1 mkldagi qizil qon tanachalari soni ham 1 000 000 ga ko'paytiriladi. Eslatma. Qonni quyqalar bilan o'rganishga yo'l qo'yilmaydi; kamerani to'ldirgandan so'ng darhol hujayralar soni (1 daqiqa kutmasdan); yomon yuvilgan va quritilgan pipetkalar va probirkalardan, gemolizga olib keladigan sifatsiz reagentlardan foydalanish. Barcha hisoblash qoidalariga rioya qilgan holda, xato o'rtacha ± 2,5% ni tashkil qiladi.

Dezinfeksiya qoidalari Foydalanishdan keyin Goryaev kamerasini dezinfektsiya qilish kerak 3% eritma vodorod periks, distillangan suv bilan yuvib tashlang va yumshoq mato bilan quriting. Kamerani quruq joyda saqlang.

Gematologik analizatorlarda ishlash usuli.

Analizator-gematologik- miqdoriy tadqiqotlar uchun mo'ljallangan qurilma (uskunalar majmui). hujayralar qon klinik diagnostika laboratoriyalarida. Avtomatik yoki yarim avtomatik bo'lishi mumkin. Yarim avtomatik gematologik analizator avtomatikdan farq qiladi, chunki qon namunasini suyultirish jarayoni alohida qurilma - suyultiruvchi tomonidan amalga oshiriladi. To'liq qonni suyultirishni tayyorlagandan so'ng, operator suyultirilgan namunani o'lchash moduliga o'tkazishi kerak. Hozirgi vaqtda yarim avtomatik analizatorlar deyarli ishlab chiqarilmaydi.

Avtomatik gematologiya analizatori to'liq avtomatlashtirilgan asbob bo'lib, unda butun tahlil jarayoni avtomatik ravishda amalga oshiriladi.

Zamonaviy avtomatik analizatorlar soatiga o'nlab namunalarni (60 dan 120 gacha) aniqlik va aniqlik bilan qayta ishlashga, shuningdek sinov natijalarini o'rnatilgan xotirada saqlashga va kerak bo'lganda ularni o'rnatilgan qurilmada chop etishga qodir. termal printer yoki tashqi printer.

Zamonaviy gematologik analizatorlar qon hujayralarining aniqlangan ko'rsatkichlari nomenklaturasi bo'yicha tasniflanadi.

Sakkiz parametrli gematologik analizatorlar quyidagi parametrlarni aniqlang: konsentratsiya eritrotsitlar(RBC) leykotsitlar(WBC) trombotsitlar(plt) gemoglobin(Hb), shuningdek, quyidagi eritrotsitlar parametrlari: eritrotsitlarning o'rtacha hajmi (MCV), o'rtacha eritrotsitlar gemoglobin miqdori (MCH), eritrotsitlar gemoglobinining o'rtacha kontsentratsiyasi (MCHC), gematokrit(Hct).

Sakkiz parametrli gematologik analizatorlar hozirda deyarli ishlab chiqarilmaydi.

Gematologik analizatorlar sinf 3-diff. 3-dif sinfining gematologik analizatorlari ishlab chiqarilgan modelga qarab qon hujayralarining 16 dan 22 gacha ko'rsatkichlarini aniqlashga imkon beradi. Ushbu toifadagi analizatorlar, sakkiz parametrli analizatorlarni aniqlaydigan parametrlarga qo'shimcha ravishda, leykotsitlarning uchta subpopulyatsiyasini aniqlaydilar: limfotsitlar (Lm), granulotsitlar (Gr) va o'rtacha leykotsitlar (O'rta) kontsentratsiyasi, shuningdek. ularning foizi Lm%, Gr% va O'rta%. 3-dif sinfining nomi shundan kelib chiqqan. Bundan tashqari, ushbu sinfning gematologik analizatorlari eritrotsitlar hajmining o'zgarish koeffitsientini (RDW) va trombotsitlarni tavsiflovchi bir qator ko'rsatkichlarni aniqlaydi: trombotsitlarning o'rtacha hajmi (MPV), trombotsitlar hajmining ulushi (Tct) (gematokritga o'xshash), trombotsitlar hajmining o'zgarish koeffitsienti (PDW).

Ushbu sinfning gematologik analizatorlari tomonidan olinishi mumkin bo'lgan muhim diagnostika ma'lumotlari eritrotsitlar, leykotsitlar va trombotsitlar hajmi bo'yicha taqsimlash funktsiyalari - gistogrammalardir.

Gematologik analizatorlar sinfi 5-dif. 5-dif gematologiya analizatorlari va 3-dif analizatorlari o'rtasidagi asosiy farq ularning leykotsitlarning barcha 5 subpopulyatsiyasini aniqlash qobiliyatidir: limfotsitlar (Lym), monositlar (Mon), neytrofillar (Neu), bazofillar (Bas) va eozinofiller (Eos), shuningdek, Lym%, Mon%, Neu%, Bas% va Eos% ularning foiz tarkibi. Empedansni hisoblash usuli sifatida ham tanilgan Kollektor hisoblagichi, 3-dif analizatorlarda qo'llaniladi, neytrofillar, bazofillar va eozinofillarni ajrata olmaydi, shuning uchun 5-dif analizatorlarda hujayralarni farqlashning boshqa usuli qo'llaniladi. U printsipga asoslanadi diffraktsiya leykotsit hujayralarida lazer nurlanishi va tarqoq nurlanishning keyingi tahlili. "O'rtacha" leykotsitlar impedans usuli bilan ajralib turadigan darajada kattaligi bilan farq qilmaydi, lekin ular boshqa ichki tuzilishga ega va bo'yoqlar bilan boshqacha ta'sir qiladi. Va diffraktsiya naqshini aniqlash usuli hujayralarning ichki tuzilishiga sezgir bo'lib chiqadi. Shunday qilib, eritrotsitlar va trombotsitlar Coulter hisoblagichi, leykotsitlar esa alohida lazer birligi bilan hisoblanadi.

Ish 8. Qon zardobidagi oqsilni miqdoriy aniqlash

4. Murakkab oqsillarning tarkibi va xossalari

Ish 9. Geproteinlarning kimyoviy tabiati

Ish 10. Glikoproteinlarning uglevod komponentini aniqlash

Ish 11. Fosfoproteinlarga sifatli reaksiyalar

Ish 12. Qon zardobidagi sial kislotalar miqdorini Gess usulida miqdoriy aniqlash.

Ish 13. Nukleoproteinlarning kimyoviy tabiati

Nuklein kislotalar

1. Nuklein kislotalarning kimyoviy tabiatini o'rganish

Ish 14. Nuklein kislota komponentlariga sifatli reaksiyalar

Nuklein kislotalarni aniqlashning miqdoriy usullari

Ish 15. A.S.Spirin bo'yicha nuklein kislotalarni miqdoriy aniqlashning spektrofotometrik usuli.

Ish 16. Nuklein kislotalarni miqdoriy aniqlashning fotokolorimetrik usullari

Ish 17. Fosfolipidlarni o'rganish

Ish 18. Steroidlarga sifatli reaktsiyalar

Fermentlar

Fermentlar va biologik bo'lmagan katalizatorlarning qiyosiy ta'siri

Ish 19. So'lak va xlorid kislotaning a-amilazasining kraxmal gidrolizi reaksiyasiga ta'sirini solishtirish.

2. Turli sinflarga mansub fermentlarni aniqlash

Ish 20. Biologik materialda oksidoreduktazalarni aniqlash

Ish 21. Xolinesterazani aniqlash

Gertsfeld va Stumpfning ekspress usuli bilan qon zardobida

Ish 22. Qon zardobidagi fruktoza-1,6-bifosfat aldolazaning faolligini V.I.Tovarnitskiy va E.N.Voluyskaya usuli bo‘yicha aniqlash.

Kalibrlash grafigini qurish

Ish 23. Glyukozafosfat izomerazasini aniqlash

Qon zardobida

3. Fermentlarning kinetik xossalarini o'rganish

Ish 24. Tuprik a-amilaza misolida fermentativ reaksiyalarning kinetikasi

4. Ferment ta'sirining o'ziga xosligi

Ish 25. Substratning mutlaq o'ziga xosligini ko'rsatish

5. Ferment faolligini o'zgartiruvchilar

Ish 27. Tuprik a-amilazasini faollashtiruvchi va ingibitorlari

mushak to'qimasi

Ish 29. Qon katalazasining raqobatdosh bo'lmagan inhibisyonu

6. Ferment faolligini miqdoriy jihatdan aniqlash

Ish 30. Kornberg bo'yicha laktat dehidrogenaza preparatining faolligini miqdoriy o'rganish.

Ish 31. Sevel va Tovarek bo'yicha qon zardobidagi laktat dehidrogenaza faolligini o'rganishning fotokolorimetrik usuli.

Ish 32. Bodanskiy bo'yicha qon zardobidagi ishqoriy fosfataza faolligini aniqlash.

7. Izofermentlarni o'rganish

Ish 33. Dits va Lubrano bo'yicha poliakrilamid gelda elektroforez yo'li bilan qon zardobining laktat dehidrogenaza izofermentlarini ajratish.

Ish 34. Qon zardobidagi g-glutamiltransferaza faolligini aniqlash

Ovqat hazm qilish biokimyosi

Ish 35. Oshqozon shirasining kislotali komponentlarini o'rganish

Ish 36. "Asidotest" diagnostik to'plami bilan me'da shirasining kislotaliligini aniqlash.

Ish 37. Ovqat hazm qilish traktining fermentlari bilan oqsil gidrolizi

Ish 38. Pankreatik lipaz ta'sirida triatsilgliserinlarning gidrolizlanishi dinamikasini o'rganish.

Energiya almashinuvi (bioenergiya)

1. Hayvon to‘qimalarida biologik oksidlanish jarayonlarini o‘rganish Ish 39. Mushak to‘qimalarida sitoxrom oksidazani aniqlash.

Ish 40. Oksidlanishli fosforlanish jarayonini va unga bog'lovchilarning ta'sirini ko'rsatish.

Ish 41. Mushak to'qimalarida glikolizni aniqlash

Ish 42. Adenin nukleotidlarini ion almashinadigan yupqa qatlam xromatografiyasi orqali tahlil qilish.

Ish 43. Ennor va Rozenberg bo'yicha qon zardobidagi kreatinfosfokinaz faolligini aniqlash.

Fotosintetik organizmlarning pigmentlari va oksidlanish jarayonlarini tahlil qilish

Ish 44. O'simlik pigmentlariga sifatli reaktsiyalar

Ish 45. A.N.Boyarkin usuli bo'yicha o'simlik materialida peroksidaza faolligini aniqlash.

Karbongidrat almashinuvi

Ish 46. Qonda glyukoza miqdorini aniqlash

Ish 47. Glyukoza oksidaza usuli bilan qondagi glyukoza miqdorini aniqlash.

Ish 48. Barker va Summerson bo'yicha qondagi sut kislotasi miqdorini aniqlash

Ish 49. Fridemann va Haugen bo'yicha qondagi piruvik kislota miqdorini aniqlash

lipidlar almashinuvi

Ish 50

Ish 51

Ish 52. Qon zardobida xolesterin miqdorini Ilk usuli bo'yicha aniqlash

Ish 53. Qon zardobidagi umumiy fosfolipidlar miqdorini aniqlash

Ish 54. Qon zardobi lipidlarini yupqa qatlamli xromatografiya bilan ajratish

Oqsillar va aminokislotalar almashinuvi

Ish 55. Qon zardobidagi oqsil fraksiyalarini turbidimetrik usulda aniqlash.

Ish 56. A.A.Pokrovskiy, A.I.Archakov va O.N.ga koʻra qon zardobidagi katepsinlarning faolligini aniqlash.

Katepsinlar

Ish 57. Qon zardobidagi aspartat va alanin aminotransferaza faolligini Reytman va Frenkel bo'yicha aniqlash.

Ish 58. Qon zardobida gistidaza faolligini Tabor va Mehler bo'yicha aniqlash, o'zgartirilgan V.A.

Ish 59. Neumann va Logan bo'yicha siydikda erkin gidroksiprolin miqdorini aniqlash, p tomonidan o'zgartirilgan.

Azot o'z ichiga olgan oqsil bo'lmagan moddalar almashinuvi

1. Azot almashinuvining keng tarqalgan mahsulotlarini o'rganish

Ish 60. Qondagi qoldiq azotni fotokolorimetrik usulda miqdoriy aniqlash.

Ish 61. Qon zardobida va siydikda karbamid miqdorini aniqlash

Ish 62. Braun usulida kreatin va kreatinin miqdorini aniqlash.

2. Nuklein kislotalar va nukleotidlar almashinuvini o'rganish

Ish 63. Qon zardobida kislota deoksiribonukleaza (dnCase) faolligini A.A.ga ko'ra aniqlash.

Ish 64. Qon zardobidagi siydik kislotasi miqdorini Myuller va Seyfert usuli bo'yicha aniqlash.

3. Porfirin (pigment) almashinuvini o'rganish

Ish 65. Qon zardobidagi bilirubin va uning fraktsiyalarini Yendrashik, Kleghorn va Grof bo'yicha aniqlash.

Molekulyar patologiya

1. Aminokislotalar almashinuvi patologiyasining ekspress diagnostikasi Ish 66. Giperaminoatsiduriyani aniqlash.

Ish 67. Fenilketonuriya diagnostikasining ekspress usullari

Ish 68. Tirozinoz diagnostikasi Tirozin uchun Million testi

Ish 69. Alkaptonuriyani gomogentis kislotasi uchun test yordamida aniqlash

Ish 70

2. Uglevod almashinuvi patologiyalarining ekspress diagnostikasi ish 71. Bial testi yordamida pentozuriyani aniqlash.

Ish 72. Selivanov testi bilan fruktozuriyani aniqlash

Ish 73. Mukopolisaxaridlarni toluidin ko'k bilan tekshirish orqali mukopolisaxaridozlarni aniqlash.

Ish 74. Siydikdagi porfobilinogen miqdorini aniqlash

Ish 75. Siydikdagi delta-aminolevulin kislota miqdorini miqdoriy aniqlash.

Ish 76

Metabolik regulyatorlar

1. Vitaminlarni o'rganish Ish 77. Vitaminlarga sifatli reaktsiyalar

Ish 78. Multivitaminli preparatlarda tiamin va riboflavin miqdorini ftorimetrik usulda aniqlash.

Ish 79. Dorivor o'simliklarda askorbin kislotani miqdoriy aniqlash

2. Gormonlar, mediatorlar va ularning metabolitlarini o'rganish

Ish 80. Protein-peptid gormonlariga sifatli reaksiyalar.

Ish 81. Gormonlarga sifatli reaktsiyalar - aminokislotalarning hosilalari

Ish 82. Ukol gormonlar va ularning metabolitlariga sifatli reaktsiyalar

Ish 83. Hayvonlar qonida glyukozaning insulin va adrenalin darajasini tartibga solish

Ish 84. N.V.Klimkina va S.I.Plitman bo'yicha diazotlangan n-nitroanilin bilan qondagi gistamin miqdorini aniqlash.

Biologik suyuqliklarni o'rganish

1. Biokimyoviy qon tekshiruvlari Ish 85. Qonda gemoglobin miqdorini yorug'lik singishi orqali aniqlash.

Ish 86. Inson eritrotsitlarida homila gemoglobin miqdorini aniqlash

Ish 87. Eritrositlarda glikozillangan gemoglobin miqdorini fotokolorimetrik usulda aniqlash.

Ish 88. Qon zardobidagi haptoglobinlar kontsentratsiyasini fotokolorimetrik usulda aniqlash.

Ish 89

Ish 90. Qon zardobidagi a-amilaza faolligini amiloklastik usul bilan aniqlash

Ish 91. Qon zardobidagi kaltsiy miqdorini mureksid usuli bilan aniqlash

Ish 92. Huergo va Popper bo'yicha timol testi

Ish 93. Sublimat-cho'kindi reaktsiyasi

Ish 94. Qon zardobidagi temir miqdorini miqdoriy aniqlash

2. Siydikni biokimyoviy o'rganish

Ish 95. Siydikning fizik-kimyoviy xususiyatlarini o'rganish

Ish 96. Siydikdagi keton tanachalari va glyukozani aniqlash

Ish 97. Siydikdagi oqsilni Brandenberg-Roberts-Stolnikov usulida aniqlash.

Ish 98. Siydikdagi indikanni sifat jihatidan aniqlash

Ish 99. Siydikda ba'zi pigmentlarni aniqlash.

Ksenobiotiklarning metabolizmi

Ksenobiotiklarning oksidlanish va konjugatsiya jarayonlarini o'rganish 100-ish.Mikrosomalarning nafas olish faolligini aniqlash.

Ish 101. Jigar mikrosomalarida oksidlovchi n-demetilatsiyani o'rganish.

Ish 102. Jigar mikrosomalarining gidroksilaza faolligini Kato va Gilet bo'yicha aniqlash.

Ish 103

Ish 104. Shkurskiy va boshqalarga ko'ra qon zardobida spirtli dehidrogenaza faolligini aniqlash.

Ish 105

Ish 106. Organizmda izonikotin kislota gidrazidining (gink) atsetillanishini (inaktivatsiyasini) aniqlash.

Biologik membranalarning lipid peroksidlanishini o'rganish

Ish 107. Eritrositlarning peroksid gemolizga sezgirligini aniqlash.

Ish 108. Biomembranlarda lipid peroksidlanish tezligini aniqlash

Ilova

2.Qon plazmasining biokimyoviy ko'rsatkichlari

1. Umumiy klinik normalar

2. Siydikni maxsus tekshirish

Oshqozon sharbati

2. Fosfat buferi (0,1 m, pH 5,8-8,0)

3. Tris buferi (0,1 m, pH 7,1-9,2)

4. Asetat buferi (0,2 m, pH 3,6-5,8)

5. Glitsin buferi (0,05 m, pH 8,6-10,6)

3. Ayrim reaktivlarni tayyorlash

Mundarija

2. Fosfat buferi (0,1 m, pH 5,8-8,0)

Na 2 HPO 4 0,2 M, ml	Na 2 H 2 PO 4 0,2 M, ml

3. Tris buferi (0,1 m, pH 7,1-9,2)

24,2 g tris-(gidroksimetil)aminometan 1 l hajmli oʻlchov kolbasida (500 ml H 2 O da) eritiladi. Kerakli pH qiymatini olish uchun jadvalda ko'rsatilgan 1 M HCl hajmi qo'shiladi va hajmi distillangan suv bilan 1000 ml ga o'rnatiladi.

4. Asetat buferi (0,2 m, pH 3,6-5,8)

Natriy asetat 0,2 M, ml	Sirka kislotasi 0,2 M, ml		Natriy asetat 0,2 M, ml	Sirka kislotasi 0,2 M, ml

5. Glitsin buferi (0,05 m, pH 8,6-10,6)

Glitsin va natriy gidroksidning ko'rsatilgan hajmlari aralashtiriladi va hajmi distillangan suv bilan 200 ml ga o'rnatiladi.

	Glitsin 0,2 M, ml	NaOH 0,2 M, ml		Glitsin 0,2 M, ml	NaOH 0,2 M, ml

3. Ayrim reaktivlarni tayyorlash

Faollashtiruvchi yechim. 155 mg qaytarilgan glutation va 400 mg kristalli albumin 100 ml hajmli o'lchov kolbasiga solinadi, ular 50 ml distillangan suvda eritiladi va 1 M NaOH eritmasi yordamida pH 8,2 ga o'rnatiladi. Keyin belgiga suv qo'shing.

Kumush nitratning ammiak eritmasi. Ammiakning konsentrlangan eritmasi kumushning 2-3% li eritmasiga cho`kma eriguncha qo`shiladi.

Asetat buferi pH 3,6. 463 ml A eritma va 37 ml B eritmani aralashtirib tayyorlang, o'lchov kolbadagi suv bilan 1 litrgacha suyultiriladi. Yechim A: 11,55 ml muzli sirka kislotasi 1 litr hajmli o‘lchov kolbasida suv bilan suyultiriladi. B yechim: 1 litrli kolbada 27,2 g natriy asetat suvda eritiladi.

Biuret reaktivi (Benedikt reaktivi). 173 g natriy sitrat va 100 g natriy karbonat 300 ml distillangan suvda suv hammomida eritiladi. Alohida 17,3 g mis sulfat 300 ml suvda eritiladi. Ikkala eritma ham drenajlanadi va umumiy hajm 1 litrga keltiriladi.

bufer eritmasi. 2,76 g Veronal va 2,06 g Medinal 1 litr distillangan suvda eritiladi. Muzlatgichda saqlang, agar cho'kma paydo bo'lsa, eritma ishlatish uchun mos emas.

ko'mirni to'xtatib turish. 0,25 g faollashtirilgan ko'mir 100 ml hajmli o'lchov kolbasiga solinadi va pH 3,6 asetat buferi bilan suyultiriladi. Ishlatishdan oldin yaxshilab silkiting.

Qaytaruvchi reagent. 0,016% mis sulfat eritmasi bilan tayyorlangan askorbin kislotaning 1% eritmasi.

Gemoglobin, asetat tamponidagi 4% eritma (pH 4,0). Birinchidan, 8% gemoglobin eritmasi 8 mol / l karbamid eritmasida tayyorlanadi, 60 ° C da termostatda 2 soat davomida saqlanadi va ishlatishdan oldin 2 marta asetat tampon bilan suyultiriladi.

Glitsil-glisin. 0,55 mmol/l, pH 8,3. 3,63 g glitsil-glisin 50 ml hajmli o'lchov kolbasiga solinadi, ustiga suv bilan to'ldiriladi (bufer eritmasi).

Denaturatsiya qiluvchi eritma

Bilirubinni aniqlash uchun diazoreagent. Ikkita yechim tayyorlang. Birinchi eritma: 3 g sulfanil kislota 500 ml distillangan suvda eritiladi, 15 ml konsentrlangan xlorid kislota qo'shiladi (issiq vannada), suv bilan hajmi 1 litrga o'rnatiladi. Ikkinchi eritma: 0,5% suvli natriy nitrit eritmasi. Ishlatishdan oldin 5 ml birinchi eritma va 0,25 ml ikkinchi eritma aralashtiriladi.

Diasetil, ishlaydigan eritma. 1 ml diatsetil distillangan suv bilan 100 ml o'lchov kolbasida suyultiriladi (eritma muzlatgichda saqlanadi). Diasetilning ishchi eritmasi foydalanishdan oldin 1 ml diatsetil eritmasiga 24 ml distillangan suv qo'shib tayyorlanadi.

Difenilamin reaktivi. 1 g difenilamin 100 ml muzli sirka kislotada eritiladi. Probirkaga 2,75 ml konsentrlangan sulfat kislota qo'shiladi.

Kalibrlash eritmasi. Asosiy - asos bo'yicha 0,75 mmol/l ALA (100 mkg/ml): 0,00635 g ALA gidroxloridi 50 ml hajmli o'lchov kolbasida pH 3,6 asetat tamponida eritiladi. Muzlatgichda bir oydan ko'p bo'lmagan muddatga saqlang. Ishchi kalibrlash eritmasi asosiy eritmadan tayyorlanadi, 1 mkg / ml. Ishlatishdan oldin eritmani asetat tampon bilan 100 marta suyultirish orqali tayyorlang.

Kalibrlash eritmasi. 22,5 mg dihidroksiaseton 25 ml suvda qizdirilganda eritiladi. 1 ml bu eritmada 10 mkmol dihidroksiaseton mavjud. Digidroksiasetonning kalibrlash eritmasi bir qancha probirkalarga quyiladi (ishga qarang), kerakli hajmgacha to'ldiriladi, so'ngra reaksiya xuddi ferment faolligini aniqlashda bo'lgani kabi amalga oshiriladi.

Temirning kalibrlash (standart) eritmasi (30 mkmol/l).

Mora tuzlari birinchi navbatda tayyorlanadi.

kofein reaktivi. 1 g sof kofein, 7,5 g natriy benzoat, 12,5 g natriy asetat 90 ml distillangan suvda eritiladi, 50-60°C gacha qizdiriladi, aralashtiriladi, sovutiladi va distillangan suv bilan 100 ml ga yetkaziladi.

Azot kislotasidagi ammoniy molibdat. 7,5 g ammoniy molibdat 100 ml suvda eritiladi va 100 ml 32% nitrat kislota qo'shiladi.

Alkaptonuriya uchun siydik. Patologik bo'lmasa, gidrokinon 20 g / l miqdorida oddiy siydikka qo'shiladi.

Giperaminoatsiduriya bilan siydik. Patologik yo'q bo'lganda glitsin 1,0 g / l miqdorida oddiy siydikka qo'shiladi.

Mukopolisakkaridoz bilan siydik. Patologik bo'lmasa, xonsurid yoki geparin 0,05-0,1 g / l miqdorida oddiy siydikka qo'shiladi.

Pentozuriya bilan siydik. Patologik bo'lmasa, siydikka 1,0 g / l miqdorida ksiluloza yoki riboza qo'shiladi.

Tirozinoz bilan siydik. Patologik bo'lmasa, tirozin 0,4-0,5 g / l miqdorida oddiy siydikka qo'shiladi.

Fruktozuriya bilan siydik. Patologik bo'lmasa, fruktoza normal siydikga 0,3-0,4 g / l miqdorida qo'shiladi.

Sistinuriya uchun siydik. Patologik sistin yo'q bo'lganda, 0,4-0,5 g / l miqdorida oddiy siydikka qo'shiladi.

Natriy asetat 3-suvli, to'yingan eritma. 375 g natriy asetat 3-suvli (yoki 226 g suvsiz tuz) 250 ml iliq suvda eritiladi, xona haroratiga qadar sovutiladi. Xona haroratida saqlang. Eritma rangsiz va shaffof bo'lishi kerak.

Natriy fosfat 0,25 mol/l ga almashtirildi. 9,7 g Na 2 HPO 4 ∙12H 2 O yoki 18 g Na 2 HPO 4 ∙12H 2 O ni suvda 200 ml li kolbada eritib tayyorlang. 1 ml trikloroasetik kislota eritmasiga 2 ml bu eritma qo'shilganda pH 5,0-6,0 oralig'ida bo'lishi kerak.

Kreatininning asosiy kalibrlash eritmasi, 10 mmol/l. 113,1 mg kreatinin 0,1 mol/l xlorid kislota eritmasi bilan 100 ml ga o'rnatiladi. Kalibrlash grafigini tuzishda 1 ml eritmada 0,1 mmol kreatinin mavjud bo'lgan 100 marta suv bilan suyultirilgan eritmadan ishchi eritma tayyorlanadi. Shunga asoslanib, kreatinning tegishli konsentratsiyasiga ega bo'lgan bir qancha probirkalar olinadi.

Tiaminni aniqlash uchun oksidlovchi aralashma. 8 ml 1% li kaliy geksasiyanoferrat (III) ga 20 ml 30% li NaOH eritmasi qo'shiladi, yaxshilab aralashtiriladi. Ishlatishdan oldin tayyorlang.

Orsin reaktivi. 1 g orsinga 500 ml 30% xlorid kislota qo'shing (zichligi 1,15 g / sm 3). Eriguncha aralashtiriladi va 4-5 ml 10% temir xlorid eritmasi (III) FeCl 3 qo'shiladi. Reagent mahkam yopilgan qorong'i shishada saqlanadi.

p-nitroanilin asosiy kalibrlash eritmasi. 0,0829 g p-nitroanilin 100 ml hajmli o`lchov kolbasiga solinadi, suv bilan belgigacha to`ldiriladi va eritiladi.

Cho'ktiruvchi eritma. 561 g ammoniy sulfat 1 litr distillangan suvda eritiladi va 24 soatdan keyin filtrlanadi.

Asosiy fosfat bufer eritmasi va uning ishchi eritmalari No 1-4. 33,5 g NaOH 400 ml suvda 500 ml hajmli o'lchov kolbasida eritiladi va unga 226,8 g KH 2 PO 4 qo'shiladi, to'liq eriguncha chayqatiladi, sovutiladi va markaga suv qo'shiladi. Asosiy fosfat buferining ishchi eritmalarini tayyorlash uchun 100 ml hajmli o'lchov kolbalarida asosiy fosfat tamponining quyidagi hajmlari (ml larda) o'lchanadi: No 1 - 92,51; № 2 - 74,91; No 3 - 59,18 va No 4 - 48,68, shundan so'ng ularning tarkibi suv bilan belgiga keltiriladi.

Pikrik kislota, to'yingan eritma. Tovar pikrik kislotasi 15-20% namlikni o'z ichiga oladi, kislotani quritmang. Portlovchi! 2 g pikrik kislotani 100 ml suvda issiq vannada qizdirib eritiladi. Shundan so'ng, eritma vaqti-vaqti bilan aralashtirib, 24 soat turish uchun qoldiriladi. Keyin eritma filtrlanadi. Eritma barqaror va qorong'i shisha idishda saqlanadi.

Pirofosfat tampon 0,05 M pH 8,2. 4,46 g natriy pirofosfat 200 ml hajmli o‘lchov kolbasiga solinadi, uni taxminan 100 ml suvda eritiladi, 0,1 M HCl eritmasi bilan pH ni 8,2 ga sozlang va belgigacha distillangan suv bilan to‘ldiriladi.

Pirofosfat tampon 0,1 M pH 8,5. 4,46 g natriy pirofosfat sig’imi 100 ml bo’lgan o’lchov kolbasiga solinadi, 50 ml suvda eritiladi, 0,1 M HCl eritmasi bilan pH ni 8,5 ga sozlang va markaga distillangan suv qo’shing.

Ishchi reaktiv. Aniqlash kunida 0,3 n natriy gidroksidning 30 qismini aralashtirib tayyorlang. 2 qismli 0,5% fenolftalein eritmasi va 1 qismli 0,12% mis sulfat eritmasi.

Aseton siyanogidrin eritmasi. 1 litr distillangan suvda 1 ampula aseton siyanogidrin (qondagi gemoglobinni aniqlash uchun to'plamdan 0,5 ml - 0,47 g) eritiladi.

Ferriaseton siyanogidrin eritmasi. 200 mg kaliy ferrisiyanidi va 1 ampulani (0,5 ml - 0,47 g) aseton siyanogidrinni 1 litr distillangan suvda eritib yuboring: qon gemoglobinini aniqlash uchun o'zgartiruvchi eritma tayyorlash uchun reagentlar to'plamidan foydalanish mumkin. Xona haroratida qorong'i shisha idishda saqlanganida bir necha oy davomida barqaror.

Glyuoksidaza eritmasi. Taxminan 300 birlikdan iborat. 1 mg ichida. Tegishli miqdorda quruq preparatni 10 ml suvda eritib tayyorlang.

Sulfonatlangan bato-fenantrolin eritmasi. Probirkada 100 mg batofenantrolinga 0,5 ml xlorsulfon kislotasi solinadi, qaynab turgan suv hammomida 30 s isitiladi, sovitiladi va 10 ml bidistillangan suv sekin qo’shiladi, yana suv hammomida 5 daqiqa qizdiriladi. Aralash 200 ml li kolbaga solinadi, 100 ml suv qo`shiladi, eritmaning pH qiymati 4-5 n NaOH ga o`rnatiladi va 200 ml hajmgacha suv qo`shiladi.

Kaliy yodiddagi yod eritmasi (Lyugol eritmasi). 100 ml distillangan suvda 20 g kaliy yodid va 10 g yod eritiladi. Ishlatishdan oldin eritma 5 marta suyultiriladi.

p-nitrosodimetilanilin (NDMA) eritmasi. Savdoda mavjud bo'lgan NDMA preparati etil efirdan qayta kristallanadi. Spirtli dehidrogenazani o'lchash uchun 1 mg NDMA 100 ml 0,1 M pirofosfat tamponida (pH 8,5) eritiladi. Olingan eritma qog'oz filtri orqali filtrlanadi va filtrat bir xil bufer bilan 2 marta suyultiriladi. Ikki oy davomida 4 ° C haroratda saqlang.

Ilka reaktivi. Sirka angidridining 5 qismiga (hajmi bo'yicha) 1 qism muzli sirka kislotasi qo'shing, so'ngra asta-sekin konsentrlangan sulfat kislotaning 1 qismini quying. Reaktivni sovuq joyda saqlang!

Million reaktivi. (Bosim ostida tayyor! ) 40 g simob 57 ml konsentrlangan nitrat kislotada avval sovuqda eritiladi, keyin suv hammomida qizdiriladi. Olingan eritma 2 hajmli suv bilan suyultiriladi, cho'ktirishga ruxsat beriladi va cho'kindidan chiqariladi. Qorong'i shisha idishda saqlang.

Ammoniy molibdat reaktivi. 2,5 g ammoniy molibdat 60 ml distillangan suvda eritiladi, filtrlanadi. Eritma 100 ml li kolbaga solinadi. Boshqa kolbaga 25 ml distillangan suvga 7,5 ml konsentrlangan sulfat kislota qo`shiladi. Ikkinchi eritma birinchisiga qo'shiladi, sovutiladi va distillangan suv bilan belgigacha suyultiriladi. Eritma bir oyga mos keladi.

"NADI" reaktivi. Dimetil-p-fenilendiaminning 1% li eritmasiga teng hajmdagi a-naftolning spirtdagi 1% li eritmasi va 1,5% natriy karbonat eritmasi aralashtiriladi. Eritma quyuq jigarrang rangga ega va pushti rangga ega bo'lmasligi kerak. Darsdan 1 soat oldin tayyorlanadi.

Reaktiv Nasha. 100 ml sig‘imli kolbaga 15,4 g ammoniy asetat, 0,3 g muzli sirka kislota va 0,2 g atsetilaseton solinadi, distillangan suvda eritiladi va hajmi belgilangan belgiga moslashtiriladi.

Nessler reaktivi. 500 ml hajmli o'lchov kolbasiga 150 g kaliy yodid, 110 g yod, 100 ml distillangan suv va taxminan 140-150 g metall simob aralashtiriladi va 15 daqiqa davomida kuchli chayqatiladi. Bunday holda, eritma o'z-o'zidan qiziydi va erigan yod tufayli rang asta-sekin oqarib ketadi. Keyin aralash aniq qizil rang saqlanib qolguncha oqadigan suv ostida sovutiladi, shundan so'ng tarkibi qizil rang yashil rangga o'zgarmaguncha chayqatiladi. Dekanatsiyadan so'ng simob cho'kmasi suv bilan yaxshilab yuviladi. Eritma va yuvish vositalarini birlashtirib, ularni 2 litr suv bilan suyultiring. Olingan eritmadan 75 ml dan 75 ml suv va 350 ml 10% li natriy gidroksid eritmasidan solingan 0,5 l hajmli o`lchov kolbasiga solinadi va suv bilan belgilangan belgigacha suyultiriladi.

Feling reaktivi. Ikkita eritma alohida tayyorlanadi. Yechim 1: 200 g Roshel tuzi va 150 g NaOH 1 l hajmli o‘lchov kolbasida eritiladi va suv bilan belgigacha suyultiriladi. 2-yechim: 1 l hajmli o'lchov kolbasiga 40 g mis (II) sulfat suvda eritiladi va suv bilan belgigacha suyultiriladi. Ishlatishdan oldin bu eritmalarni teng miqdorda aralashtiring.

Folin reaktivi. 1 litrli kolbada 1 g natriy volfram va 20 g fosfomolibdik kislota 750 ml suvda eritiladi. Kolbani qayta oqim kondensatori bilan tiqin bilan yoping va muzlatgichdagi suv oqimini yoqib, tarkibi 10 soat davomida qaynatiladi; keyin sovutiladi, o'lchov kolbasiga quyiladi va reaktivning suvli hajmi 1 litrga o'rnatiladi.

Erlix reaktivi. 0,7 g p-dimetilaminobenzaldegid 150 ml konsentrlangan xlorid kislotada eritiladi, 100 ml suvga solinadi va aralashtiriladi. Eritma rangsiz yoki ozgina sariq bo'lishi kerak. Qorong'i shisha idishda saqlang. Reagent barqaror.

Erlix reaktivi. 1 g p-dimetilaminobenzaldegidni 50 ml hajmli o‘lchov kolbasida 35 ml muzli sirka kislotada eritib, 8 ml 57% li perklorik kislota qo‘shing va muzli sirka kislotasi bilan belgigacha to‘ldiring. Sovutgichda qorong'i shisha idishda bir haftagacha saqlang.

Timol spirti eritmasi (10%). 10 g tozalangan timol 100 ml 96˚ etil spirtida eritiladi. Tozalangan timolni olish quyidagicha amalga oshiriladi. 100 g timol 100 ml 96˚ etil spirtida eritiladi, filtrlanadi. Filtrga 1 litr sovuq distillangan suv qo'shing, kuchli silkiting va 20 daqiqaga qoldiring. Filtr filtrlanadi va filtrda qolgan kristallar ikki marta sovuq distillangan suv bilan yuviladi. Avval filtr qog'ozida, so'ngra 2-3 kun davomida eksikatorda suvsiz kaltsiy xlorid ustida doimiy og'irlikda quriting.

Standart yechim. Standart eritma tayyorlash ikki probirkani aralashtirish orqali amalga oshiriladi: 1) 0,0962 n bariy xlorid eritmasi: 1,175 g kristall BaCl 2 ∙2H 2 O 100 ml suvda o’lchov kolbasida eritiladi. 2) 0,2 n sulfat kislota eritmasi. Keyinchalik, bariy sulfat suspenziyasi olinadi: 3 ml 0,0962 N bariy xlorid eritmasi 100 ml o'lchov kolbasiga quyiladi va hajmi + 10 ° C haroratda 0,2 N sulfat kislota eritmasi bilan o'rnatiladi ( bu haroratda cho'kma boriy sulfatning zarracha o'lchamlari nisbatan barqaror natija beradi).

Substrat bufer eritmasi: probirkaga 10 ml suv quying va unga 0,028 g L-glutamil-p-nitroanilin va 0,082 g natriy xlorid qo'shing va aralashtirishni to'xtatmasdan, probirka ichidagini qaynoq suv hammomida 60 soniya davomida eritib yuboring. . Keyin eritma 37°C ga qadar sovutiladi va 2,5 ml bufer eritmasi qo'shiladi. Tayyorlangan substrat eritmasi ish paytida suv hammomida 37 ° C haroratda saqlanadi. Foydalanilmayotgan substrat eritmasi muzlatgichda bir haftagacha saqlanishi mumkin. Substrat yomon eriydi va xona haroratida cho'kadi. Shuning uchun, ishlatishdan oldin, kristallangan substrat qaynoq suv hammomida isitish orqali eritiladi. Substratni isitish va eritish ikki martadan ko'p bo'lmagan takrorlanishi mumkin.

ALT ni aniqlash uchun substrat eritmasi (1-sonli eritma). 29,2 mg a-ketoglutar kislota va 1,78 g alanin (0,89 g a-alanin) namunalari analitik tarozida tortiladi va cho‘kma to‘liq eriguncha (pH 7,4) 1 M natriy gidroksid eritmasida eritiladi. Eritma 100 ml li kolbaga quyiladi va hajmi 0,1 M fosfat buferi (pH 7,4) bilan belgiga moslashtiriladi. 1 tomchi xloroform qo'shing. Eritma muzlatgichda muzlatilgan holda saqlanadi.

AsAT ni aniqlash uchun substrat eritmasi (yechim № 2). 29,2 mg a-ketoglutar kislota va 2,66 g a-aspartik kislota (1,33 g a-aspartik kislota) namunalari analitik tarozida tortiladi. Keyinchalik, eritma №1 eritma bilan bir xil tarzda tayyorlanadi.

Glyukoza fosfat izomerazasini aniqlash uchun substrat eritmasi. Medinal asetat bufer eritmasi pH 7,4 tayyorlanadi (9,714 g natriy asetat va 14,714 g medinal suvda eritiladi va hajmi 500 ml ga o'rnatiladi). 8,33 ml 0,03 M disodiy tuzi glyukoza-6-fosfat eritmasini 25 ml medial asetat buferi bilan aralashtiring; aralashmaga 25 ml 0,1 M xlorid kislota eritmasidan qo'shing va 100 ml suv bilan suyultiriladi. Sovuq tuting.

Laktat dehidrogenazani aniqlash uchun substrat eritmasi. 1 ml 1 M natriy laktat eritmasi, 9 M NaCl eritmasi, 0,05 M Cl 2, 10 g/l NAD eritmasi aralashtiriladi. Tarkibiga 2,5 ml 0,5 M fosfat bufer eritmasi (pH 7,4) va 1 g/l nitrotetrazolium ko'k eritmasi qo'shiladi. Ishlatishdan oldin aralashmaga 1 g / l konsentratsiyali 0,25 ml fenanzin metasulfat eritmasi qo'shiladi.

Fruktoza bifosfat aldolazani aniqlash uchun substrat eritmasi. 270 mg fruktoza bisfosfatning bariy tuzi 3,5 ml 1 M xlorid kislotada eritiladi. 1 ml 14% li natriy sulfat eritmasi qo'shiladi va hosil bo'lgan cho'kma sentrifugalash orqali chiqariladi. Supernatantga 1 tomchi natriy sulfat qo'shing. Loyqalikning ko'rinishi bariy ionlarining etarli darajada to'liq cho'kmaganligini ko'rsatadi. Bunday holda, ko'proq natriy sulfat qo'shiladi va yana sentrifuga qilinadi. Tsentrifugat 3% li natriy gidroksid eritmasi bilan pH 7,4-7,6 ga o‘rnatiladi, 25 ml li kolbaga o‘tkaziladi va hajmi belgilangan belgigacha o‘rnatiladi. Olingan probirkaga 25 ml 0,56 M gidrazin xlorid eritmasi, 25 ml 0,002 M monoiodosirka kislota eritmasi, 100 ml 0,5 % li natriy karbonat eritmasi va 25 ml distillangan suv aralashtiriladi. Muzlatgichda saqlanadi.

Timol-veronal bufer. 100 ml hajmli o'lchov kolbasiga 80 ml bufer eritmasi va 1 ml timolning 10% li spirt eritmasidan aralashtiriladi, chayqatiladi va belgigacha bufer eritmasi qo'shiladi. pH qiymati 7,55 bo'lishi kerak.

o-toluidin reaktivi. 0,15 g tiokarbamid 94 ml muzli sirka kislotada eritiladi va 6 ml distillangan O-toluidin bilan aralashtiriladi. Qorong'i shishada saqlanadi.

Fenol suv bilan to'yingan. 100 g distillangan fenolga 35 ml suv qo'shiladi va aralashtiriladi, fenolning erishini tezlashtirish uchun aralashmani biroz qizdiradi.

Fenolftalin, ishchi eritma. 75 mg moddani 15 ml 0,1 n natriy gidroksid eritmasida eritib tayyorlang, eritma rangsiz yoki biroz pushti rangga ega bo'lishi kerak, rangli eritmalar ish uchun mos emas. Reagentning qarshiligini oshirish uchun unga 3 mg trilon qo'shiladi, bu og'ir metallarning tuzlarini bog'lash orqali fenolftaleinning atmosfera kislorodi bilan avtooksidlanishini oldini oladi.

Fibrin. Qon pigmentlaridan qoramol qon fibrini oq pıhtı olinmaguncha bir necha kun davomida oqadigan suvda yuviladi. Suv siqib chiqariladi va glitserin bilan to'ldirilgan fibrin mahkam yopiq idishda saqlanadi. Ishlatishdan oldin fibrin glitserindan yuviladi.

Fosfor-vanillin reaktivi. Konsentrlangan fosfor kislotasining 4 qismi (hajmi bo'yicha) vanillinning 0,6% suvli eritmasining 1 qismi bilan aralashtiriladi. Reagent xona haroratida qorong'i shisha idishda saqlanadi.

Fruktoza 1,6-bifosfat, natriy tuzi. 2,0 ml fruktoza-1,6-bisfosfat natriy tuzining 10% li eritmasi 25 ml li kolbada suv bilan belgilangan belgigacha suyultiriladi. Sovutgichda saqlanganda barqaror.

Karbamid uchun rangli reagent. Diasetil monooksim va tiosemikarbazidni o'z ichiga olgan karbamidni aniqlash uchun to'plamdagi planshet 50 ml li kolbada qizdirilganda eritiladi. Eritma uch hafta davomida barqaror bo'ladi. Ishlatishdan oldin tayyorlangan eritmaning teng hajmlari va 9,6% sulfat kislota eritmasi aralashtiriladi.

b-gliserofosfatning ishqoriy eritmasi. 100 ml hajmli o'lchov kolbasiga 1 g natriy b-glitserofosfat va 0,85 g medinal qo'shing, 30 ml ga yaqin distillangan suv qo'shing, eritib oling va suv bilan hajmini belgiga keltiring. 100 ml sig'imli boshqa o'lchov kolbasiga 50 ml tayyorlangan b-gliserofosfat eritmasidan, 2,8 ml 0,1 M natriy gidroksid eritmasidan soling va distillangan suv bilan belgiga keltiring (eritma pH 8,6). Suyuqlikka taxminan 3 ml toluol qo'ying. Eritmani muzlatgichda 10 kundan ortiq bo'lmagan muddatda saqlang.

Qon olish, "nozik smear" va "qalin tomchi" tayyorlash

bakteriyalar harakati. Flagellumning tuzilishi, qalinligi, uzunligi, kimyoviy tarkibi. Statsionar preparatlar va mikroorganizmlarning tirik hujayralari preparatlarini tayyorlash.

Bufer eritmalarini tayyorlash uchun kimyoviy toza reagentlardan foydalaniladi. va maxsus tayyorlangan analitik daraja. Reaktivlar quyidagicha tayyorlanadi.

Kaliy fosfat monoalmashtirilgan, KH 2 PO 4 , molekulyar og'irligi 136,09. 100 g preparat 150 ml suvda qaynaguncha qizdirilganda eritiladi. Eritma issiq filtrlanadi. Doimiy aralashtirish bilan filtrat 10ºS ga qadar sovutiladi. Keyin 150 ml etil spirti qo'shing. Filtrni doimiy aralashtirish bilan ajratilgan kristallar assimilyatsiya voronkasida filtrlanadi va yana bir xil sharoitda qayta kristallanadi; kristallar doimiy og'irlikda 105...110 ºS da quritiladi. Asosiy moddaning tarkibi 99,9 ... 100,0% oralig'ida bo'lgan preparat mavjud bo'lganda, moddani dastlabki tayyorlash amalga oshirilmaydi.

Ikki almashtirilgan natriy fosfat, Na 2 HPO 4 12H 2 O, molekulyar og'irligi 358,12. Preparatni tayyorlashning ikki yo'li mavjud.

a) 150 g preparat 100 0 S gacha qizdirilganda 150 ml suvda eritiladi.Eritma issiqda filtrlanadi va sovigandan keyin cho`kma hosil bo`lgan kristallar filtrlanadi. Qayta kristallanish 100 ºS ga qizdirilganda takrorlanadi. Qayta kristallangan preparat chinni idishda suv hammomida preparat to'liq quruq bo'lgunga qadar doimiy aralashtirish bilan isitiladi. Olingan tuz kun davomida eritilgan kaltsiy xlorid ustida quritgichda quritiladi. Qayta kristallangan preparatda (Na 2 HPO 4 ·2H 2 O) asosiy moddaning tarkibi tekshiriladi. Buning uchun taxminan 0,5000 g preparat 50 ml suvda eritiladi, 2 ... 3 ml to'yingan natriy xlorid eritmasi qo'shiladi va metil qizil indikator ishtirokida 0,1 n xlorid kislota eritmasi bilan titrlanadi. . Agar kerak bo'lsa, namunaning o'lchamiga tuzatish kiriting. 1 ml aynan 0,1 n xlorid kislota 0,0178 g Na 2 HPO 4 2H 2 O ga to'g'ri keladi.

b) 75 g preparat 60 ºS ga qadar qizdirilgan 250 ml suvda eritiladi. Eritma issiq suziladi, filtrat doimiy aralashtirib 10ºS ga sovutiladi. Cho‘kma hosil bo‘lgan kristallar assimilyatsiya voronkasida filtrlanadi va xuddi shu sharoitda qayta kristallanadi. Olingan tuz avval 24 soat davomida 30 ºS dan yuqori bo'lmagan haroratda quritiladi, so'ngra pechda 50 ºS da 3-4 soat davomida quritilishi davom ettiriladi va nihoyat 120 ± 5 ºS da doimiy og'irlikda tuzning paydo bo'lishining oldini oladi. erish. Quritgandan keyin tuz Na 2 HPO 4 tarkibiga ega.

Reagentlarni tayyorlagandan so'ng, kaliy fosfat monoalmashinuvi va natriy fosfatning ikki o'rnini bosuvchi eritmalari tayyorlanadi.

Og'irligi 9,078 g bo'lgan suvsiz kaliy fosfat monoalmashtirilgan KH 2 PO 4 ning bir qismi suvda eritiladi va eritmaning hajmi 1 litrga o'rnatiladi. Eritmani barqarorlashtirish uchun 3-4 tomchi toluol qo'shing.

Og'irligi 11,876 g bo'lgan Na 2 HPO 4 12H 2 O natriy fosfatining bir qismi suvda eritiladi va eritmaning hajmi 1 litrga o'rnatiladi. Eritmani barqarorlashtirish uchun 3-4 tomchi toluol qo'shing.

Dastlabki eritmalardan A.2-jadvalga muvofiq pH 4,94 dan 9,18 gacha bo'lgan fosfat bufer eritmalarini tayyorlang.

Jadval A.2 - pH 4,94 ... 9,18 bo'lgan fosfat tampon eritmasi

pH	Na 2 HPO 4 12H 2 O eritmasi, ml	KH 2 PO 4 eritmasi, ml
4,94	1,0	99,0
5,29	2,5	97,5
5,59	5,0	95,0
5,91	10,0	90,0
6,24	20,0	80,0
6,47	30,0	70,0
6,64	40,0	60,0
6,81	50,0	50,0
6,98	60,0	40,0
7,17	70,0	30,0
7,38	80,0	20,0
7,73	90,0	10,0
8,04	95,0	5,0
8,34	97,5	2,5
8,67	99,0	1,0
9,18	100,0	0,0

Qo'shilgan sana: 2015-08-06 | Ko'rishlar: 4058 |

Bufer eritmalarining pH qiymati Henderson-Hasselbax tenglamasi bo'yicha hisoblanadi:

– kislota buferi uchun tenglama shaklga ega

- asosiy bufer uchun

Tenglamalar shuni ko'rsatadiki, berilgan tarkibdagi bufer eritmaning pH darajasi kislota va tuz yoki asos va tuz konsentratsiyasining nisbati bilan belgilanadi va shuning uchun suyultirishga bog'liq emas. Eritmaning hajmi o'zgarganda, har bir komponentning konsentratsiyasi bir xil marta o'zgaradi.

Bufer sig'imi

Bufer eritmalarning doimiy pH ni saqlash qobiliyati cheklangan. Bular. bufer eritmasining pH qiymatini sezilarli darajada o'zgartirmasdan kislota yoki gidroksidi qo'shish faqat cheklangan miqdorda mumkin.

Bufer eritmaning kislotalar va ishqorlar qo'shilganda muhit reaksiyasining siljishiga qarshi turish qobiliyatini tavsiflovchi qiymat eritmaning bufer sig'imi (B) deb ataladi.

Bufer sig'imi kuchli kislota yoki asosning mol ekvivalentlari soni bilan o'lchanadi, buning 1 litr bufer eritmasiga qo'shilishi pH qiymatini birga o'zgartiradi.

Matematik jihatdan bufer sig'imi quyidagicha aniqlanadi:

B kislota bilan (mol/l yoki mmol/l):

,

bu yerda n(1/z HA) kislotaning mol ekvivalentlari soni, pH 0 va pH bufer eritmaning kislota qo‘shgunga qadar va qo‘shilgandan keyingi pH qiymati, V B bufer eritmasining hajmi.

Ishqorda (mol / l yoki mmol / l):

,

bu erda n (1/z VOH) ishqorning mol ekvivalentlari soni, qolgan belgilari bir xil.

Bufer sig'imi bir qator omillarga bog'liq:

1. Bufer eritmaning qo'shilgan moddalari va tarkibiy qismlarining tabiatidan. Chunki ba'zi moddalar erimaydigan birikmalar yoki komplekslar hosil qilishi yoki bufer tizimining tarkibiy qismlari bilan boshqa kiruvchi reaktsiyalar berishi mumkin, keyin bufer sig'imi tushunchasi o'z ma'nosini yo'qotadi.

2. Bufer tizimining tarkibiy qismlarining dastlabki konsentratsiyasidan.

Eritmada kislota-ishqor juftining komponentlari qancha ko'p bo'lsa, bu eritmaning bufer sig'imi shunchalik katta bo'ladi.

Bufer eritmasi komponentlari konsentratsiyasining nisbati chegarasi, bunda tizim hali ham o'z xususiyatlarini saqlab qoladi. PH oralig'i = pK ± 1 tizimning bufer ta'siri zonasi deb ataladi. Bu 1/10 dan 10/1 gacha bo'lgan tuz / C ning sizga nisbati diapazoniga to'g'ri keladi.

B dan (qon) \u003d 0,05 mol / l; B dan (plazma) \u003d 0,03 mol / l; B dan (zardob qoni) = 0,025 mol / l

Qon bufer tizimlari

Bufer tizimlar organizmlarning kislota-ishqor muvozanatini saqlashda ayniqsa muhimdir. Ko'pgina hujayra ichidagi suyuqliklarning pH qiymati 6,8 dan 7,8 gacha.

Inson qonidagi kislota - asosiy muvozanat gidrokarbonat, fosfat, oqsil va gemoglobin bufer tizimlari tomonidan ta'minlanadi. Qon plazmasining normal pH qiymati 7,40 ± 0,05 ni tashkil qiladi.

Gemoglobin bufer tizimi qonning 35% bufer sig'imini ta'minlaydi: . Oksigemoglobin kamaytirilgan gemoglobinga qaraganda kuchliroq kislotadir. Oksigemoglobin odatda kaliy tuzi shaklida bo'ladi.

Karbonat tampon tizimi : kuchi bo‘yicha birinchi o‘rinda turadi. U 1/20 nisbatda karbonat kislotasi (H 2 CO 3) va natriy yoki kaliy bikarbonat (NaHCO 3, KHCO 3) bilan ifodalanadi. Bikarbonat buferi organizmdagi kislota-asos buzilishlarini tuzatish uchun keng qo'llaniladi.

Fosfat bufer tizimi . Dihidrofosfat zaif kislotaning xususiyatlariga ega va qon oqimiga kiradigan gidroksidi mahsulotlar bilan o'zaro ta'sir qiladi. Gidrofosfat zaif gidroksidi xususiyatlarga ega va kuchliroq kislotalar bilan reaksiyaga kirishadi.

Protein bufer tizimi amfoter xususiyatlariga ko'ra kislotalar va ishqorlarni neytrallash rolini o'ynaydi: kislotali muhitda plazma oqsillari o'zini asoslar kabi, asosiysida esa kislotalarga o'xshash:

Bufer tizimlar to'qimalarda ham mavjud bo'lib, bu to'qimalarning pH darajasini nisbatan doimiy darajada saqlashga yordam beradi. To'qimalarning asosiy tamponlari oqsillar va fosfatlardir. PH ni saqlash ham o'pka va buyraklar yordamida amalga oshiriladi. Ortiqcha karbonat angidrid o'pka orqali chiqariladi. Atsidozli buyraklar ko'proq kislotali monobazli natriy fosfatni, alkaloz bilan esa ko'proq ishqoriy tuzlarni chiqaradi: ikki asosli natriy fosfat va natriy bikarbonat.

Muammoni hal qilishga misollar

Yechim:

Formuladan foydalanib, kislota bufer eritmasining pH qiymatini hisoblaymiz, keyin

Javob: 5,76

Yechim:

Bufer sig'imini formuladan foydalanib hisoblaymiz:

Javob: 0,021 mol/l

3-misol

Bufer eritmasi 100 ml 0,1 mol/l sirka kislota va 200 ml 0,2 mol/l natriy asetatdan iborat. Agar unga 30 ml 0,2 mol/l natriy gidroksid eritmasi qo`shilsa, bu eritmaning pH qiymati qanday o`zgaradi.

Yechim:

Bufer eritmasining pH qiymatini formuladan foydalanib hisoblaymiz:

Bufer eritmasiga NaOH qo‘shilganda tuz miqdori ortadi va bufer eritmasidagi kislota miqdori kamayadi:

0,006 0,006 0,006

CH 3 COOH + NaOH \u003d CH 3 COONa + H 2 O

Biz n (NaOH) \u003d 0,03 l 0,2 mol / l \u003d 0,006 mol ni hisoblaymiz, shuning uchun bufer eritmasida kislota miqdori 0,006 molga kamayadi va tuz miqdori 0,006 molga ko'payadi.

Eritmaning pH qiymatini formuladan foydalanib hisoblaymiz:

Demak: pH 2 - pH 1 = 5,82 - 5,3 = 0,52

Javob: bufer pH o'zgarishi = 0,52.

Mustaqil hal qilish uchun vazifalar

4. PH ni dastlabki qiymatdan (7,36) yakuniy qiymatga (7,0) o'zgartirish uchun 2 ml qonni titrlash uchun 1,6 ml 0,01 M HCl eritmasini qo'shish kerak edi. Kislota bufer sig'imini hisoblang.

5. Vodorod ionlarining konsentratsiyasini 300 marta kamaytirish uchun 300 ml sirka kislotasiga qancha mol natriy asetat qo'shish kerak (K dis (CH 3 koon) = 1,85,10 -5).

6. Biokimyoviy tadqiqotlarda pH = 7,4 bo'lgan fosfat tampon ishlatiladi. Bunday tampon eritmani olish uchun natriy vodorod fosfat va natriy dihidrogen fosfat eritmalarini har biri 0,1 mol / l konsentratsiya bilan qanday nisbatda aralashtirish kerak (pK (H 2 PO 4 -) \u003d 7,4).

7. Quyidagi ko'rsatkichlar bilan CBS ning qanday buzilishi kuzatiladi: qon pH = 7,20, Pco 2 = 38 mm Hg. Art., BO = 30 mmol / l, SBO = -4 mmol / l. KOSning bu buzilishini qanday bartaraf etish mumkin?

Test topshiriqlari

Immunohistokimyo uchun Tween-20 Fosfat yuvish buferi kontsentratdir (20x), suyultirilgandan so'ng, reagentlar slaydlarini yuvish va protseduralar orasida immunohistokimyo namunalarini qisqa muddatli saqlash uchun ishlatiladi. Suyultirilgandan so'ng, foydalanishga tayyor 0,01 M eritma pH 7,4 ± 0,1 ga teng. Ushbu fosfat-buferli sho'r suvdan foydalanish nafaqat yuqori sifatli yuvishni ta'minlash, balki immunohistokimyoviy reaktsiya uchun zarur bo'lgan maxsus bog'lanishni osonlashtiradigan ishlatiladigan antikorlar va ularning epitoplarining morfologik xususiyatlarini saqlab qolish imkonini beradi. PBS ga Tween-20 qo'shilishi yanada samarali yuvishga yordam beradi va o'ziga xos bo'lmagan bo'yashning oldini oladi.

Bizning afzalliklarimiz:

Ayni paytda laboratoriya reaktivlarini ishlab chiqaruvchi yetakchi xorijiy kompaniyalar bilan hamkorlik qilmoqdamiz. Bizning mijozlarimiz nodavlat va davlat muassasalari, shu jumladan Moskva va Rossiyaning boshqa shaharlaridagi tibbiy tashkilotlardir. Doimiy mijozlar uchun chegirmalar tizimi mavjud.