ფოსფატის ბუფერული ხსნარი. ფოსფატის ბუფერული ხსნარის მომზადება. ზოგიერთი რეაგენტის მომზადება
ჰემატოლოგიური კვლევებისთვის ბიოლოგიური მასალის შეგროვებისა და მომზადების მოთხოვნები.
ბიოლოგიური მასალის ტრანსპორტირებისა და შენახვის მოთხოვნები ჰემატოლოგიური კვლევებისთვის.
ჰემოსტაზის სისტემის შესწავლის მიმართულების სწორი შევსება:
პაციენტის სრული სახელი, ასაკი, სქესი
კვლევისთვის სისხლის აღების დრო
კლინიკური დიაგნოზი (მოკლედ)
ჰემატოკრიტი
ჰემორაგიული სინდრომი (ცხვირის, საშვილოსნოდან სისხლდენა და ა.შ.), თრომბოზი (მიუთითებს ლოკალიზაციას), შოკი, მრავლობითი ორგანოს უკმარისობა, ტრავმა, გახანგრძლივებული კომპრესიის სინდრომი, დამწვრობა და ა.შ.)
მიუთითეთ მიღებული წამლები, რომლებიც გავლენას ახდენენ ჰემოსტაზის პარამეტრებზე, ბოლო შეყვანის დოზის, მეთოდისა და თარიღის მითითებით
სინჯის აღების დროის ინტერვალი (სისხლი), დიეტური და ვარჯიშის შეზღუდვები დაცულია:
გეგმიური სისხლის აღება ტარდება დილის 7-დან 9 საათამდე, პაციენტი მწოლიარე ან მჯდომარე მდგომარეობაში. ჰემოსტაზის დინამიკაში შესწავლისას სასურველია სისხლის აღება სხეულის იმავე მდგომარეობაში, როგორც წინა.
სისხლს იღებენ უზმოზე, ბოლო ჭამიდან 12-14 საათის შემდეგ.
სისხლის აღებამდე სასურველია პაციენტმა 15 წუთი დაისვენოს.
გამონაკლისები:ჰემოსტაზის კვლევები ციტოს მიხედვით, APTT-ის შეფასება.
დაგეგმილი კვლევის წინა დღეს (24 საათის განმავლობაში), პაციენტი თავს იკავებს მნიშვნელოვანი ფიზიკური დატვირთვისგან, ალკოჰოლის მიღებისგან. სასურველია, რომ პაციენტმა არ მიირთვას ცხიმიანი საკვები სისხლის აღების წინა დღეს.
ქირურგიული ჩარევა იწვევს ჰემოსტაზის ცვლილებას რამდენიმე დღიდან რამდენიმე კვირამდე.
ჰემოსტაზზე მოქმედ ფაქტორებს მიეკუთვნება ინექციები, ინფუზიები, ტრანსფუზია, პუნქცია, ბიოფსია, მასაჟი, დიალიზი, რადიოგამჭვირვალე აგენტების შეყვანა, იმუნოსინტიოგრაფია, მაიონებელი გამოსხივება, ენდოსკოპიური გამოკვლევა, სპეციალური დიეტა.
სისხლის აღების წესები
სისხლი აღებულია პერიფერიული ვენიდან (ჩვეულებრივ კუბიტალური).
სისხლის აღება ტარდება მხოლოდ ვაკუუმური სინჯის სისტემის გამოყენებით საცდელ მილებში სპეციალური ფერის მარკირებით, გამოყენებული ანტიკოაგულანტის მიხედვით ( ნატრიუმის ციტრატი 3.2%)თანაფარდობით: 1 ტომი ნატრიუმის ციტრატი 9 მოცულობით სისხლთან.
კვლევისთვის თრომბოციტების დონესისხლის აღება სინჯარაში EDTA-სთან ერთად(იასამნისფერი ფერის კოდირება). თრომბოციტების დონის შესწავლა ინიშნება კლინიკური სისხლის ტესტის არარსებობის შემთხვევაში ან როდესაც თრომბოციტების დონის პათოლოგიური მაჩვენებლები მიიღება კლინიკური სისხლის ტესტით.
დასაშვებია მოკლე ტურნიკეტი, არაუმეტეს 60 წამისა. ამოიღეთ ტურნიკეტი ნემსის ვენაში შესვლისთანავე. კოაგულაციის სისტემის შესასწავლად სისხლის აღების მიზნით, მნიშვნელოვანია, რომ არ შეიძლება ვენების მასაჟი, მათზე დარტყმა.
გამოიყენეთ სისხლის შეგროვების ნემსი შიდა დიამეტრით 0,7-1 მმ (ზომა 19-22).
შპრიცის გამოყენება დაუშვებელია თრომბოციტების და სისხლის შედედების ფაქტორების გააქტიურების გამო სისხლის ტურბულენტური მოძრაობით და მისი ჰაერთან შერევით (ქაფი). გამორიცხულია ვაკუუმური კონტეინერების გამოყენებისას.
ნემსის ვენაში ჩასმის შემდეგ, მიამაგრეთ ვაკუუმის კონტეინერი, სისხლი სიმძიმით დაიწყებს კონტეინერში შედინებას.
აიღეთ სისხლი კოაგულოლოგიური გამოკვლევისთვის მეორესაცდელი მილი, პირველად გამოიყენეთ სხვა კვლევებისთვის, მაგალითად, ბიოქიმიური. თუ კოაგულაციის სინჯარის ამოღება უნდა მოხდეს, პირველი 5 მლ სისხლი ჩაასხით ცარიელ ტუბში და გადააგდეთ ხელს უშლის ქსოვილის თრომბოპლასტინის შეღწევას ნიმუშში.
ნაზად შეურიეთ სისხლი შეგროვების შემდეგ ქაფის გარეშე ანტიკოაგულანტთან (შეაბრუნეთ მილი 3-4-ჯერ).
ბიოლოგიური მასალის სინჯის აღების შემდეგ შეამოწმეთ სისხლის ნიმუში. სისხლის ნიმუშების ზუსტი შემოწმება თავიდან აიცილებს შემდეგ შეცდომებს: სისხლის/ციტრატის მოცულობის არასწორი თანაფარდობა; ნაწილობრივ შედედებული სისხლი.
სისხლი ლაბორატორიაში მიეწოდება მისი შეგროვებიდან 45 წუთში. ტრანსპორტირების დროს სისხლი არ უნდა შეირყევა. სისხლის ნიმუშების ტრანსპორტირება არ შეიძლება 4°C-ზე და 30°C-ზე დაბალ ტემპერატურაზე.
პარამედიკოს-ლაბორანტი (მედიცინის ტექნოლოგი) ახორციელებს:
მიწოდებული სისხლის შეყვანის კონტროლი, მათ შორის: 1) რეფერალური ფორმის შევსების სისწორის შემოწმება. 2)მიწოდებული სისხლის მოცულობის ადეკვატურობის შემოწმება მილზე ეტიკეტის მიხედვით, 3) სინჯის შემოწმება თრომბის არარსებობაზე, როდესაც მილი ნელა დახრილია.
მიწოდებული სისხლის ცენტრიფუგირება, რათა მივიღოთ:
თრომბოციტებით მდიდარი პლაზმა (ცენტრიფუგაციის პარამეტრები: rpm = 1000 rpm (დაახლოებით 150-200 გ), ცენტრიფუგაციის დრო 5-7 წუთი.
ცენტრიფუგაციის ოპტიმალური პირობების შესარჩევად ისინი ხელმძღვანელობენ ცენტრიდანული ძალით (გ). შეგიძლიათ გამოიყენოთ ფორმულა:
g = 1.118 x 0.00001r x n2,
სადაც r არის ცენტრიფუგის რადიუსი - მანძილი სანტიმეტრებში როტორის ღერძსა და საცდელი მილის ცენტრს შორის ცენტრიფუგის სავარძელში; n არის რევოლუციების რაოდენობა წუთში.
თრომბოციტებით ღარიბი პლაზმაცენტრიფუგაციის პარამეტრები: rpm = ~2500-3000 rpm (დაახლოებით 1500-2000 გ), ცენტრიფუგაციის დრო 10-20 წუთი. თრომბოციტების სრული მოცილებისთვის ტარდება განმეორებითი ცენტრიფუგაცია, ცენტრიფუგაციის პარამეტრები იგივე რჩება.
3. ცენტრიფუგაციის შემდეგ, ამოწმებს პლაზმას ფერს და გამჭვირვალობას: ჰემოლიზებული ნიმუში, იქტერული ან ლიპემიური (ქილოზური) პლაზმა არ ექვემდებარება გამოკვლევას.
ცენტრიფუგაციის შემდეგ, სუპერნატანი ამოღებულია.
სასურველიაჰემოსტაზის პარამეტრების შესწავლა დროს სისხლის აღებიდან 2 საათის შემდეგ, მაგრამ დაშვებული კოაგულოლოგიური პარამეტრების შესწავლა 4 საათის განმავლობაში თუ პლაზმა გამოყოფილია ერითროციტების და ლეიკოციტების ნალექისგან.
Თუ საჭიროა გრძელვადიანი შენახვა"ახალი" ნიმუშები (სისხლის აღებიდან არაუგვიანეს 2 საათისა) თრომბოციტების თავისუფალი პლაზმაშეიძლება ერთხელ გაყინვასდა ინახება 2 კვირამდე -20°C ტემპერატურაზე ან 6 თვემდე -70°C ტემპერატურაზე. პლაზმა სწრაფად უნდა გალღობდეს თბილ წყალში (+36°C), საფუძვლიანად აურიოთ და დაუყოვნებლივ შეისწავლოთ. გაყინვის შემდეგ შესაძლებელია APTT-ის შეცვლა.
ჰემატოლოგიური კვლევებისთვის მიკროპრეპარატების მომზადების მეთოდი, ფიქსაციისა და შეღებვის მეთოდები.
ჰემატოლოგიური კვლევებისთვის სისხლის ნაცხის მომზადების მეთოდი.
სათვალეების მომზადება და დამუშავება. ახალი სუფთა სათვალეების გამოყენება შესაძლებელია ნიკიფოროვის ნარევში ცხიმის გაწმენდის შემდეგ (96% ეთილის სპირტის და ეთერის თანაბარი ნაწილები). მეორად ჭიქებს სვამენ ერთი დღის განმავლობაში თბილ საპნის ხსნარში ან სარეცხი ფხვნილის ხსნარში (1 სუფრის კოვზი ფხვნილი 5 ლიტრ წყალზე). ერთი დღის შემდეგ ხსნარს აცლიან, ჭიქას რეცხავენ გამდინარე წყლით. შემდეგ კვლავ ასხამენ თბილი საპნის ხსნარს ან სარეცხი ფხვნილის ხსნარს და მიიყვანენ ადუღებამდე, ადუღებენ იმავე ხსნარში 5-10 წუთის განმავლობაში (არა მეტი, ჭიქების დაბინდვის თავიდან ასაცილებლად). ხსნარის გაციების შემდეგ მას კვლავ აშრობენ, სლაიდებს რეცხავენ გამდინარე წყლით და თითოეულ სლაიდს რეცხავენ ფუნჯით გამდინარე წყლის ქვეშ. ასე დამუშავებული ჭიქები გასაშრობად სუფთა ფურცელზე იდება. ცხიმის მოსაშორებლად სუფთა ჭიქებს ათავსებენ ნიკიფოროვის ან 96% ეთილის სპირტის ნარევში 60 წუთის განმავლობაში, შემდეგ აშრობენ და ინახავენ სუფთა ჭურჭელში ფართო კისრით. სუფთა სათვალეების მიღება რეკომენდებულია პინცეტით ან ხელით გვერდითი კიდეებით.
ნაცხის მომზადება. სისხლის მცირე წვეთს სვამენ მშრალ მომზადებულ შუშის სლაიდზე, რომელიც უფრო ახლოსაა მოკლე მხარეს მინის ჯოხით (ან პირდაპირ თითის დაჭერის ადგილიდან). დატოვეთ ჭიქა ჰორიზონტალურ მდგომარეობაში და შეიზილეთ სისხლი მინაზე მშრალი, სუფთა, დაფქული შუშით, დაიჭირეთ იგი 45° კუთხით. მოკლე კიდით, ლოდინის შემდეგ, სანამ მასზე მთელი სისხლი არ გავრცელდება, ისინი სწრაფად იწევენ შუშის სლაიდზე. შუშის სლაიდზე ძლიერი წნევა არ უნდა იყოს, რადგან ამან შეიძლება დააზიანოს სისხლის უჯრედები. ნაცხი გაშრება ჰაერში და მონიშნულია (სასურველია უბრალო ფანქრით). გამხმარი ნაცხი უნდა იყოს თანაბრად თხელი, მოყვითალო ფერის, საკმარისი ზომის, განლაგებული ჭიქის კიდეებიდან 1,0-1,5 სმ მანძილზე, დაიკავოს შუშის თითქმის მთელი სიგრძე და დასრულდეს „პანიკით“. სქელი (ღრმა ვარდისფერი) ნაცხი არ უნდა იქნას გამოყენებული, რადგან მათში ძნელია უჯრედის მორფოლოგიის გარჩევა.
სტანდარტული ხარისხის ნაცხი მიიღება ნაცხის მოსამზადებლად შექმნილი და სხვადასხვა კომპანიის მიერ წარმოებული ავტომატური მოწყობილობების გამოყენებით.
სისხლის ნაცხის ფიქსაცია და შეღებვა. შეღებვამდე სისხლის ნაცხი ჩვეულებრივ ფიქსირდება 5-10 წუთის განმავლობაში მეთილის სპირტში ჰემოლიზის თავიდან ასაცილებლად, რაც შეიძლება მოხდეს წყალთან შეხებისას წყალში ხსნადი საღებავით შეღებვის პროცესში ან შემდგომ წყალთან შეხებისას. ფიქსაციის ტექნიკა აღწერილია ქვემოთ შეღებვის ტექნიკასთან ერთად. რაიტის და ლეიშმანის ლაქების ფიქსაცია არ არის საჭირო, რადგან ეს ლაქები შეიცავს მეთილის სპირტს.
მშრალი ტამპონები შეიძლება ინახებოდეს 2 დღის განმავლობაში მშრალ, თბილ ადგილას, ცხელ, ნოტიო ატმოსფეროში ფიქსაციის გარეშე, ისინი ინახება ბევრად ნაკლები.
სისხლის უჯრედები შეიცავს ბაზოფილურ და აციდოფილურ სტრუქტურებს, რომლებიც განსხვავდებიან რეაქციით (pH). ბირთვები ბაზოფილურია და ლურჯად შეღებილია. მაღალი ბაზოფილური (მჟავე) ბაზოფილის გრანულები ასევე ლურჯია. ჰემოგლობინი (როგორც ძირითადი) ღებავს აციდოფილურად, ანუ წითლად. მჟავე და ძირითადი საღებავების კომბინაციით შეღებვას რომანოვსკის შეღებვა ეწოდება და აქვს სხვადასხვა მოდიფიკაცია (პაპენჰაიმი, რაიტი, ნოჰტი, ლეიშმანი, გიემსა, ჯეინერი და სხვ.). მეთილენის ლურჯი ჩვეულებრივ გამოიყენება ძირითად საღებავად, მაგრამ ასევე გამოიყენება ტოლუიდინის ლურჯი. როგორც მჟავა საღებავი გამოიყენება ეოზინი, აზურ I და აზურ II.
კარგი შეღებვის კრიტერიუმები: ერითროციტების ვარდისფერი ფერი, ნეიტროფილების მარცვლოვნების მეწამული შეღებვა ვარდისფერ ფონზე, მონოციტების ნაზი აზუროფილური მარცვლოვნება.
საღებავის გასაზავებლად, უმჯობესია გამოიყენოთ ნეიტრალური სუფთა გამოხდილი წყალი. შემორჩენილი გამოხდილი წყალი მჟავე ხდება ატმოსფეროდან ნახშირორჟანგის დაჭერის გამო. თუ გამოხდილი წყალი ტუტეა, სისხლის წითელი უჯრედები იქცევა ჭუჭყიან მოლურჯო-მომწვანო ფერად; ლეიკოციტების ის ნაწილი, რომელიც ლურჯად უნდა იყოს შეღებილი, ხდება მეწამული, ეოზინოფილების გრანულები ვარდისფერის ნაცვლად მოლურჯო და მომწვანო ხდება, ხოლო ნეიტროფილების გრანულები შენარჩუნებულია. მჟავე წყალში ერითროციტები ღია ნარინჯისფერი ხდება, ლეიკოციტების ბირთვები კი ძალიან ფერმკრთალი. იდეალურია გამოხდილი წყალი pH 7.0, რომელიც ბუფერულია მის შესანარჩუნებლად. შეგიძლიათ გამოიყენოთ მზა ბუფერული ტაბლეტები, რომლებიც იხსნება გამოხდილ წყალში.
ძვლის ტვინის ნაცხის შეღებვისთვის იდეალურია pH 7.4-7.5 ლაქა.
შეღებვის მეთოდები ნოჰტისა და პაპენჰაიმის მიხედვით მიღებულია როგორც ერთიანი.
რეაგენტები ფიქსაციისთვის: 1) მეთილის სპირტი ან 2) მაი-გრაუნვალდის ეოზინ-მეთილენის ლურჯი ხსნარი.
ნაცხის შეღებვის რეაგენტები ნოხტის მიხედვით: 1) აზურის I ძირითადი ხსნარი: 1გრ საღებავს ხსნიან 1ლ გამოხდილ წყალში, ტოვებენ მუქი შუშის ჭურჭელში 12-14 დღე ოთახის ტემპერატურაზე, რის შემდეგაც გამოიყენება; 2) კალიუმის ეოზინის ძირითადი ხსნარი: 1 გ საღებავს ხსნიან 1 ლიტრ გამოხდილ წყალში, ტოვებენ მუქი შუშის ჭურჭელში 12-14 დღე ოთახის ტემპერატურაზე, რის შემდეგაც გამოიყენება; 3) ფოსფატის ბუფერი (Weise ნარევი), pH 7,4-7,5: შეურიეთ 0,49 გ კალიუმის დიჰიდროფოსფატი (KH2PO4) და 0,909 გ ნატრიუმის წყალბადოფოსფატი (Na2HPO4) და იხსნება 1 ლიტრ გამოხდილ წყალში; 4) აზურ-ეოზინის სამუშაო ხსნარი: გამოყენებამდე შეურიეთ 25 მლ Azure II-ის მარაგის ხსნარი, 20 მლ კალიუმის ეოზინის ხსნარი და 55 მლ ბუფერული ხსნარი (საღებავების პროპორციები შეიძლება განსხვავდებოდეს, ისინი დადგენილია. ემპირიულად მარაგის ხსნარების ახალი პარტიების მომზადებისას).
ნაცხის შეღებვის რეაგენტები პაპენჰაიმის მიხედვით: 1) ეოზინ-მეთილენის ლურჯის ხსნარი მაი-გრუნვალდის მიხედვით. მზა საღებავის ხსნარის არარსებობის შემთხვევაში მას ამზადებენ 1 გ მშრალი საღებავის გახსნით 1 ლიტრ მეთილის სპირტში; 2) აზურ-ეოზინის სამუშაო ხსნარი ნოხტის მიხედვით.
ნაცხის ფიქსაცია. დასამაგრებელი ხსნარი შეედინება კუვეტაში ან ფართო პირისპირ ჭურჭელში დაფქული საცობით. ნაცხი მოთავსებულია ჭურჭელში, რომელსაც ჩაყრიან კუვეტში ან სათითაოდ ათავსებენ ჭურჭელში 5-10 წუთის განმავლობაში. სათვალეების კონტეინერი ამოღებულია დასამაგრებელი ხსნარიდან (ან ჭიქები ამოიღება პინცეტით და მოთავსებულია სადგამში) და ტოვებენ ჰაერში სრულ გაშრობამდე.
შეღებვა ნოხტის მიხედვით. გამხმარი ფიქსირებული ნაცხი, კონტეინერიდან ამოღების გარეშე, მოთავსებულია კუვეტაში სამუშაო საღებავის ხსნარით მკაცრად განსაზღვრული დროით (20-45 წუთი), რომელიც შეირჩევა ემპირიულად საღებავის თითოეული პარტიისთვის. კონტეინერით კუვეტის არარსებობის შემთხვევაში, მინა იდება ჰორიზონტალურად ორ შუშის ღეროზე („ლიანდაგ“), რომლებიც მოთავსებულია პარალელურად ზევით დარტყმით და მათზე ასხამენ სამუშაო საღებავის ხსნარის 3–4 მლ. სათვალეებით ჭურჭელს იღებენ საღებავებით კუვეტიდან და ათავსებენ ონკანის წყლით კუვეტაში (კონტეინერების არარსებობის შემთხვევაში საღებავს რეცხავენ ჭიქებიდან წყლით, შუშის ღეროებიდან ამოღების გარეშე). ნაცხი გაშრება ჰაერში.
პაპენჰაიმის შეღებვა. მშრალ არაფიქსირებულ სისხლის ნაცხს ათავსებენ კონტეინერში და ასხამენ კუვეტაში მაი-გრუნვალდის ხსნარით 3-5 წუთის განმავლობაში (ან 3-4 მლ საღებავი ასხამენ არაფიქსირებულ ნაცხზე პიპეტით). ნაცხის შემცველი ჭურჭელი ირეცხება კუვეტში გამოხდილი წყლით, შემდეგ კი ათავსებენ აზურ-ეოზინის საღებავით კუვეტაში ნოხტის მიხედვით 8-15 წუთის განმავლობაში. „ლიანდაგებზე“ დადებულ სლაიდებს უმატებენ გამოხდილ წყალს 1 წუთის განმავლობაში საღებავის გამოწურვის გარეშე და შემდეგ საღებავს ასხამენ ნაცხზე 8–15 წუთის განმავლობაში, შემდეგ საღებავს რეცხავენ წყლით. ნაცხი გაშრება ჰაერში.
შეღებვა რომანოვსკი-გიემსას მიხედვით. იწარმოება ისე, როგორც ნოხტის მიხედვით. როგორც საღებავი გამოიყენება რომანოვსკი-გიემსას მზა ხსნარი, რომელიც გამოყენებამდე იხსნება 1 წვეთი საღებავის სიჩქარით 1 მლ გამოხდილ წყალზე. შეღებვის დრო ემპირიულად დგინდება საღებავის თითოეული პარტიისთვის (25-40 წთ).
რაიტის შეღებვა. რეაგენტები. 0,2 გ რაიტის ლაქა (მშრალი ფხვნილი, BDH/E. Merck) იხსნება 100 მლ მეთანოლში და აჩერებს რამდენიმე დღის განმავლობაში. თუ ერითროციტები საკმარისად მკაფიოდ არ არის შეღებილი, მოამზადეთ 0,25% ან 0,3% ხსნარი.
შეღებვის პროგრესი. საღებავის რამდენიმე (დაახლოებით 8) წვეთი წაისვით ნაცხზე, გააჩერეთ 2-3 წუთის განმავლობაში (დარწმუნდით, რომ საღებავი არ გაშრება), შემდეგ ნაცხზე ასხამენ თანაბარი რაოდენობის ბუფერულ წყალს. თუ საღებავი მომწიფდა, გაზავებული საღებავის ზედაპირზე გამოჩნდება ქაფი ან ფილმი მეტალის ბზინვარებით. განზავებული საღებავი ტოვებენ ნაცხზე 2-3 წუთის განმავლობაში, შემდეგ ჩამოიბანეთ ბუფერული ხსნარით ან წყლით. საღებავი არ უნდა დარჩეს ნაცხის ზედაპირზე. თუ ეს მოხდება, ნაცხი ივსება გაუხსნელი საღებავით 15-20 წამის განმავლობაში და შემდეგ კვლავ ბუფერული ხსნარით ან წყლით.
ფოსფატის ბუფერის მომზადება.
ხსნარი A (0,2 M KH2PO4): 1 ლიტრ გამოხდილ წყალში გავხსნათ 27,2 გ მარილი.
ხსნარი B (0,2 M Na2HPO4): გახსენით 35,6 გ Na2HPO4 × 2H20 1 ლიტრ გამოხდილ წყალში.
100 მლ ბუფერული ხსნარის მისაღებად სასურველი pH-ით, A და B ხსნარი უნდა დაიწიოს ცხრილში მითითებული რაოდენობით. pH მნიშვნელობა მოწმდება pH მეტრით.
ფოსფატის ბუფერული ხსნარის მომზადება
|
ხსნარი, მლ |
pH მნიშვნელობა |
||||||
ლეიშმანის შეღებვა. რეაგენტები. 0,15 გრ ლეიშმანის მშრალი საღებავი იხსნება 133 მლ აბსოლუტურ მეთილის სპირტში. საღებავი მთლიანად უნდა გაიხსნას, სასურველია საღებავის კრისტალები წინასწარ დაფქვათ ნაღმტყორცნებში. შეინახეთ საღებავი ბოთლში შუშის საცობით, არ გაფილტროთ.
შეღებვის პროგრესი. შესრულებულია რაიტის ლაქის მსგავსად, მაგრამ ბუფერული ხსნარის ორმაგი განზავებით. საღებავის რამდენიმე წვეთი (დაახლოებით 8) დაასხით ნაცხზე, ინახება 2 წუთის განმავლობაში. დაუმატეთ ბუფერული ხსნარის ორმაგი რაოდენობა (16 წვეთი), აურიეთ მორევით და დატოვეთ 7-10 წუთი. საღებავი ირეცხება გამოხდილი წყლით 2-3 წამში. ხანგრძლივი რეცხვისას ფერი უარესდება. ნაცხი აშრობენ თაროში ჰაერში.
ამზადებენ სისხლის სქელ წვეთს. სისხლის სამი წვეთი, რომელიც დაასხით შუშის სლაიდზე ერთმანეთისგან გარკვეულ მანძილზე, გაფართოვდება სუფთა მინის სლაიდის კუთხით დაახლოებით 1 სმ დიამეტრის ზომით, აღინიშნება ფანქრით, შემდეგ აშრობს ჰაერში 1-2 საათის განმავლობაში.
სისხლის სქელი წვეთი შეღებვა. სისხლის სქელი წვეთები არ ფიქსირდება. შუშის სლაიდები კარგად გამომშრალი სქელი წვეთებით ერთმანეთისგან გარკვეულ მანძილზე დებენ „ლიანდაგებზე“ და ნოხტის მიხედვით აზურ-ეოზინის სამუშაო ხსნარს ასხამენ 8-10 წუთის განმავლობაში. ხდება ერითროციტების „გამორეცხვა“. შემდეგ საღებავს აცლიან და აზურ-ეოზინის სამუშაო ხსნარის ახალი ნაწილი ნოხტის მიხედვით ასხამენ პრეპარატებს 30-35 წუთის განმავლობაში. შემდეგ სლაიდები ფრთხილად ჩამოიბანეთ გამოხდილი წყლით და აშრობენ.
ნაცხის ავტომატური შეღებვა
ვინაიდან ჰემატოლოგიურ ლაბორატორიაში ერთ-ერთი ყველაზე მოთხოვნადი ფუნქციაა სისხლის ნაცხის მომზადება და შეღებვა, მათი ავტომატიზაციის მცდელობები ბუნებრივია.
პირველი ავტომატური ნაცხის მომზადების სისტემა შეიმუშავა Sysmex-მა (იაპონია) ჯერ კიდევ 1990 წელს და ამჟამად მსოფლიოში 1600-ზე მეტი სისტემაა დამონტაჟებული. ამ პერიოდში დაგროვილი უზარმაზარი გამოცდილება გამოიყენეს ახალი თაობის სისტემის შემუშავებაში - სრულად ავტომატიზირებული SP-1000i ნაცხის მომზადებისა და შეღებვის სადგური, რომლის სიმძლავრეა 120 ნაცხის საათში. SP-1000i ახორციელებს სტანდარტიზაციისა და ხარისხის მაღალ ხარისხს ნაცხის მომზადებისას ინტელექტუალური სოლი მეთოდის გამოყენებით, რაც მომხმარებელს საშუალებას აძლევს დაარეგულიროს გამოყენებული სისხლის ნიმუშის რაოდენობა, ნაცხის დანის კუთხე, გამოყენების სიჩქარე და ლოდინის დრო, დამოკიდებულია ტესტის ნიმუშის ჰემატოკრიტზე, 8-დან 16-მდე სხვადასხვა რეგულირების დონის გამოყენებით. სისხლის აღება შეიძლება გაკეთდეს ხელით ან ავტომატურად ღია ან დახურული მილებიდან. Sysmex ავტომატური ნაცხის მომზადებისა და შეღებვის სადგური SP-1000i (იაპონია)
სისტემა იყენებს შვიდამდე მოქნილად მორგებულ შეღებვის პროტოკოლს, რომელიც საშუალებას გაძლევთ სტანდარტიზდეს ნაცხის შეღებვის ხარისხი და დააკმაყოფილოთ უმაღლესი მოთხოვნები. შეიძლება გამოყენებულ იქნას ორმაგი და ერთჯერადი შეღებვის შემდეგი პროტოკოლები: May-Grunwald-Giemsa, Romanovsky და Romanovsky-Giemsa-ს მიხედვით. სისხლის ნაცხი შეღებილია სპეციალურ კასეტა სისტემაში, რომელიც შეიცავს მხოლოდ ერთ სლაიდს თითო კასეტაზე. ამ მეთოდით, სისხლის ნაცხისა და შეღებვის რეაგენტებს შორის კარგი ურთიერთობა გარანტირებულია და არ ხდება მეთანოლის აორთქლება რეაგენტიდან ჰაერში. შეღებვის წინ სისხლის კარგი ფიქსაციის უზრუნველსაყოფად, შეღებვის პროცესში ინტეგრირებულია მეთანოლის წინასწარი ფიქსაციის ცალკეული ეტაპი.
შეღებვის პროტოკოლის მოქნილობის გამო შეიძლება გამოყენებულ იქნას ძვლის ტვინის შეღებვის სპეციფიკური პროტოკოლი.
ჰემატოლოგიური კვლევებისთვის ძვლის ტვინის ნაცხის მომზადების მეთოდი.
ძვლის ტვინის გამოკვლევა - მიელოგრამა პირველი კითხვა, რომელსაც უნდა უპასუხოს ძვლის ტვინის გამოკვლევა, არის უჯრედების რაოდენობრივი ასპექტი. ცნობილია, რომ პერიფერიულ სისხლთან დაკავშირებით შეიძლება განისაზღვროს სხვადასხვა ტიპის უჯრედების რაოდენობისა და პროცენტული რაოდენობის რიცხვითი მნიშვნელობები, რადგან ისინი თავისუფალ მდგომარეობაში არიან და შედარებით თანაბრად ნაწილდებიან სისხლძარღვთა სისხლის შეჩერებაში. . სრულიად განსხვავებული რამ შეიძლება ითქვას ძვლის ტვინზე: სისხლმბადი ქსოვილის შემადგენლობა ძალზე არაერთგვაროვანია და ძვლის ტვინის უჯრედების განაწილება ერთნაირი არ არის. ამრიგად, მიელოკარიოციტების პირდაპირი რაოდენობა პალატაში მერყეობს ძალიან ფართო დიაპაზონში, როგორც ნორმალურ მდგომარეობაში, ასევე იმავე დაავადების ფარგლებში. მნიშვნელობები, რომლებიც ჩვენ ვიპოვნეთ ინდივიდებში, ჩვეულებრივ მერყეობდა 27,000-დან 112,000 ბირთვულ ელემენტამდე მმ3-ზე (ურსია). ლიტერატურული მონაცემები კიდევ უფრო ფართოდ მერყეობს, 12000 და 300000 ლიმიტები მმ3-ზე (Cartwright, Page). ცენტრიფუგაციის შემდეგ ჰემატოკრიტის მილში გვხვდება შემდეგი 4 ფენა: 1) ზედა ცხიმოვანი ყვითელი შრე; 2) პლაზმა; 3) ნაცრისფერ-მოთეთრო ფენა, რომელიც წარმოიქმნება ბირთვული უჯრედებისგან; 4) წითელი ფენა, რომელიც შედგება ერითროციტებისაგან. ბირთვული უჯრედების ნაცრისფერ-მოთეთრო ფენის (მიელოკრიტი) გაზომვა შეზღუდული მნიშვნელობის ან თუნდაც შეცდომაში შემყვანია, რადგან ნორმალურ ადამიანებში ნაპოვნი მნიშვნელობები ასევე აჩვენებს მნიშვნელოვან რყევებს. გარდა ამისა, ბირთვული უჯრედები გვხვდება არა მხოლოდ ამ შრეში, არამედ ცხიმოვან და ერითროციტულ შრეებშიც. მაგრამ ძვლის ტვინის კონცენტრატის ნაცხი შეიძლება მომზადდეს ნაცრისფერ-მოთეთრო ფენისგან სუპერნატანტის პლაზმის მოცილების შემდეგ. ისინი დაადასტურეს სადიაგნოსტიკო პროცესში იმ შემთხვევებში, როდესაც პირდაპირი ნაცხი ღარიბია უჯრედებში. იმის გათვალისწინებით, რომ მიელოკარიოციტების კამერის რაოდენობა და მიელოკრიტის განსაზღვრა იძლევა მხოლოდ სავარაუდო შედეგებს შეზღუდული რეპროდუცირებით, ეს რაოდენობრივი მეთოდები არ არის დამაკმაყოფილებელი. შეწოვის პუნქციის დროს ამოღებული მასალა არის ძვლის ტვინის ნიმუში შერეული სისხლით სხვადასხვა პროპორციით. ძვლის ტვინის სისხლით განზავების ხარისხი დამოკიდებულია მთელ რიგ ფაქტორებზე. 32P მარკირებამ დაამტკიცა, რომ ასპირირებული ძვლის ტვინის სისხლით განზავება მერყეობს 40%-დან 100%-მდე. თუმცა, უნდა აღინიშნოს, რომ ძვლის ტვინის შესწავლა დიაგნოზის დასადგენად, პირველ რიგში, ეფუძნება უჯრედული შინაარსის თვისობრივ შესწავლას და მხოლოდ მეორეხარისხოვან ამ შინაარსის რაოდენობრივ მნიშვნელობებს. სწორედ ამიტომ, ძვლის ტვინის უჯრედების განსაზღვრის რაოდენობრივი მეთოდები შედგება ძვლის ტვინის უჯრედული შემადგენლობის ნახევრად რაოდენობრივი შეფასებისგან, ნორმალურ ნიმუშებთან შედარებით,: ა) ნაცხზე დამსხვრეული სიმსივნის სახით; ბ) ჰისტოლოგიური სექციები. ნაცხის შესწავლა ტარდება ძირითადად მშრალი ლინზებით, რამდენიმე ნაცხზე, შემდეგი მიზნებით: ა) ძვლის ტვინის უჯრედული მასის ნახევრად რაოდენობრივი შეფასება; ბ) მეგაკარიოციტების არსებობისა და სიმკვრივის განსაზღვრა; გ) გიგანტური უჯრედების ან პათოლოგიური უჯრედების ბუდეების გამოვლენა; დ) კვლევისთვის ყველაზე შესაფერისი ტერიტორიების იდენტიფიცირება ჩაძირვის გზით. ძვლის ტვინის ნაწილაკების დამსხვრევით მიღებულ ნაცხებზე გამოიყოფა შემდეგი სამი კონცენტრული ზონა: ა) ცენტრალური; ბ) გარე; გ) შუალედური. ცენტრალურ ზონას ქმნიან ცხიმოვანი ვაკუოლები, სტრომული უჯრედები, გრანულოციტები და მრავალი განადგურებული უჯრედი. გარე ზონა შეიცავს დიდი რაოდენობით სისხლს, რომელიც ასუფთავებს ძვლის ტვინის უჯრედებს. თხელი ნაცხის მსგავსად, ის მხოლოდ ხელს უწყობს მიელოიდური უჯრედების და ერითროციტების მორფოლოგიური დეტალების შესწავლას. უჯრედის ყველაზე მკვრივი მასა განლაგებულია შუალედურ ზონაში, რაც იძლევა ოპტიმალური შესწავლის საშუალებას, რომელსაც შეუძლია ახსნას ყველა ის კითხვა, რაც გამოკვეთილია. აქ ტვინის უჯრედები კარგად არის შემონახული და განლაგებულია კუნძულებად ან ბუდეებად, ისევე როგორც ჩანს ტვინში. ძვლის ტვინის ტოპოგრაფიის შენარჩუნებისას ამ ზონის შესწავლის შედეგები უფრო ერთგვაროვანია და შეესაბამება ძვლის ტვინის ფაქტობრივ მდგომარეობას, რაც დასტურდება მის ჰისტოლოგიურ გამოსახულებებთან შედარებით. უჯრედის სიმკვრივის ნახევრად რაოდენობრივი განსაზღვრა გამოიხატება როგორც: ა) ნორმალური, ბ) მდიდარი ან გ) მჭლე ნორმალური ძვლის ტვინთან შედარებით. ნორმალური ან უხვი უჯრედული მასის იდენტიფიცირება ღირებული აღმოჩენაა, ხოლო მწირი ძვლის ტვინი სიფრთხილით უნდა იქნას განხილული. ფაქტობრივი ჰიპოპლაზიის არსებობის დასადასტურებლად საჭიროა რამდენიმე ფირფიტის გამოკვლევა, პუნქცია რამდენიმე ძვლის მიდამოში და/ან ძვლის ბიოფსია. ძვლის ტვინის უჯრედული მასის შესახებ ყველაზე ზუსტი ინფორმაცია მიიღება ჰისტოლოგიური მონაკვეთების გამოკვლევით. მოზრდილებში ცხიმისა და აქტიური უჯრედის პარენქიმის მიერ დაკავებული სივრცის თანაფარდობა ჩვეულებრივ არის 1:1 ან 2:1. ზოგიერთი ავტორი მიიჩნევს, რომ ძვლის ტვინი ჰიპოცელულურია, როდესაც ჰემატოპოეზური უჯრედები იკავებენ ძვლის ტვინის სიმსივნის მეოთხედზე ნაკლებს. დიაგნოზის დასადგენად აუცილებელია ძვლის ტვინის თვისებრივი გამოკვლევა. იგი ტარდება ჩაძირვით, როგორც თხელ ნაცხებზე, ასევე, კერძოდ, შუალედური ზონიდან დამსხვრეული სიმსივნის ნაცხებზე. რეკომენდებულია საუკეთესო სწორად დაჭიმული და შეღებილი ნაცხის შერჩევა მკაფიოდ განსაზღვრული და მორფოლოგიურად კარგად შენახული უჯრედებით. ეს კვლევა ასახავს: ა) სხვადასხვა ტიპის მიელოიდური უჯრედების იდენტიფიკაციას; ბ) უჯრედის თითოეული რიგის მომწიფების ხარისხის განსაზღვრა; გ) გრანულოციტებისა და ერითრობლასტების (G/E) ურთიერთობის გარკვევა დ) უჯრედების იდენტიფიკაცია მიტოზის ფაზაში; ე) შემხვედრი ატიპიური უჯრედების აღწერა. რამდენიმე ნაცხის გამოკვლევის შემდეგ ან შედგენილია დეტალური აღწერითი „მიელოგრამა“ (რომელიც შეიცავს ნაცხის გაშიფვრის შემდეგ გაკეთებულ დასკვნებს), ან მიელოგრამა პროცენტული თვალსაზრისით, რომელიც დადგენილია მინიმუმ 300-500 ელემენტით. პროცენტული მიელოგრამის შედგენის ორი გზა არსებობს: 1) დარჩენილი უჯრედების რიგების მინიჭება 100 გრანულოციტზე; 2) თითოეული ტიპის უჯრედების პროცენტული ჩვენება ძვლის ტვინის უჯრედების მთლიანი რაოდენობით. სტატისტიკური თვალსაზრისით, ეს უკანასკნელი მეთოდი, როგორც ჩანს, უფრო სწორია და აშკარად ასახავს ძვლის ტვინის ფიჭური შემადგენლობის რეალურ სურათს. ცალკეული ავტორების მიერ დადგენილი ფორმულები მნიშვნელოვნად განსხვავდება, რადგან ძნელია რეალური საშუალო მნიშვნელობების დადგენა ისეთ ჰეტეროგენულ ქსოვილში, როგორიცაა ძვლის ტვინი. ცხრილი აჩვენებს, ვინტრობის მიხედვით, 12 ნორმალური ადამიანის შერჩეული ძვლის ტვინის ნიმუშების კვლევის შედეგები. ნორმალური მიელოგრამა
მიელოგრამის პარამეტრები საშუალო მნიშვნელობა (%) რყევების დიაპაზონი (%)
რეტიკულური უჯრედები 0.9 0.1-1.6 არადიფერენცირებული ბლასტები 0.6 0.1-1.1 მიელობლასტები 1.0 0.2-1.7
პრომიელოციტები 2.5 1.0-4.1
მიელოციტები ნეიტროფილები 9.6 7.0-12.2 მეტამიელოციტები ნეიტროფილები 11.5 8.0-15.0 სტაბი ნეიტროფილები 18.2 12.8-23.7 სეგმენტირებული ნეიტროფილები 18.6 13.1-24.1 სულ ნეიტროფილების უჯრედები 60.8 52.7-68.9ეოზინოფილური მიელოციტები 0.1 0.0-0.2 ეოზინოფილური მეტამიელოციტები 0.2 0.1-0.4 ეოზინოფილები 2.8 0.4-5.2
ეოზინოფილური სერიის მთლიანი უჯრედები 3.2 0.5-5.8ბაზოფილური მიელოციტები 0.1 0-0.3
ბაზოფილები 0.1 0-0.3
ბაზოფილური სერიის მთლიანი უჯრედები 0.2 0-0.5ლიმფობლასტები 0.1 0-0.2
პროლიმფოციტები 0.1 0-0.2
ლიმფოციტები 8.8 4.3-13.3
სულ ლიმფოიდური უჯრედები 9.0 4.3-13.7მონობლასტები 0.1 0-0.2
მონოციტები 1.9 0.7-3.1
პლაზმაბლასტები 0.1 0-0.2
პროპლაზმოციტები 0.1 0.1-0.2
პლაზმური უჯრედები 0.9 0.1-1.8
ერითრობლასტები 0.6 0.2-1.1
ბაზოფილური ნორმობლასტები 3.6 1.4-5.8 პოლიქრომატოფილური ნორმობლასტები 12.9 8.9-16.9 ოქსიფილური ნორმობლასტები 3.2 0.8-5.6
სულ ერითროიდული უჯრედები 20.5 14.5-26.5მეგაკარიოციტები 0.4 0.2-0.6
ჯანმრთელ ადამიანებზე ჩვენი კვლევების მიხედვით, შედეგები ასეთია:
გრანულოციტების რაოდენობა 56-70%,
ერითრობლასტური სერიები 23-30%, ლიმფოპლაზმოციტური სერიები 5-10%, მონოციტო-მაკროფაგების სერია 1-2% და მეგაკარიოციტების სერია 0,1-0,8% (ურსია). ნორმალური მიელოიდური რიგების პროპორციის ცვლილება ან მათი ჩანაცვლება პათოლოგიური უჯრედებით ხშირად მიუთითებს დაავადების ტიპზე. რეტიკულური უჯრედები ჩნდება ნაკლებად ხშირად და უფრო მეტიც, მცირე რაოდენობით. სრულიად შემთხვევით, ნაცხი (ან ძვლის ტვინის ანაბეჭდები) აჩვენებს ოსტეობლასტებს და/ან ოსტეოკლასტებს, რომლებიც არ უნდა იყოს შეცდომით სიმსივნურ უჯრედებში. მათი არსებობა უფრო ხშირად აღინიშნება ბავშვებში, ნაკლებად ხშირად მოზრდილებში პირველადი მიელოფიბროზით ან მეორად, კარცინომატოზური მეტასტაზების შემდეგ, მწვავე ლეიკემიით, ოსტეოპოროზით და ა.შ. G/E თანაფარდობა მიიღება გრანულოციტების ერითრობლასტების რაოდენობაზე გაყოფით. ნორმალურ ზრდასრულ ადამიანში ეს თანაფარდობა საშუალოდ არის 3/1 ან 4/1, ლიმიტები შეფასებულია 2/1-ზე (როდესაც შედის მხოლოდ მოუმწიფებელი გრანულოციტები) და 5/1 (როდესაც ეს ეხება ყველა გრანულოციტს - სექსუალურ და მოუმწიფებელს). H/E კოეფიციენტი მერყეობს ასაკთან ერთად: დაბადებისას ის მცირეა (1,8/1), 2 კვირის ასაკში ის იზრდება 11/1-მდე, შემდეგ თანდათან მცირდება, ხოლო ერთი წლის ბავშვებში აღწევს მნიშვნელობებს. ზრდასრული ადამიანის. H/E თანაფარდობა ნორმალურია ძვლის ტვინის გლობალური ჰიპო- ან ჰიპერპლაზიის შემთხვევაში, აგრეთვე ცალკეული უჯრედების პროლიფერაციისას, რომლებიც არ შედის ამ თანაფარდობის გამოთვლაში, მაგალითად, პლაზმაციტომაში. ლეიკემიების, ლეიკომის მსგავსი რეაქციების და ერითრობლასტოპენიების დროს ეს თანაფარდობა მაღალია, ხოლო ერითრობლასტური ჰიპერპლაზიის მქონე ანემიების დროს დაბალი ან საპირისპიროა (მეგალობლასტური, ჰემოლიზური ანემიები). ნაცხის შესწავლის შემდეგ მიღებული მიელოგრამის მონაცემების გაცემამდე საჭიროა დაზუსტდეს: ა) პუნქციის ადგილი; ბ) ძვლის სიმკვრივე; გ) პირობები, რომლებშიც მოხდა შეწოვა; დ) შერჩეული მასალის მაკროსკოპული ასპექტი. ძვლის ტვინის გამოკვლევა რთული პროცესია, რომელიც ეფუძნება მრავალრიცხოვან და მრავალფეროვან მონაცემებს. მისი შედეგი უნდა ასახავდეს ზოგად დასკვნებს, დაფუძნებული უფრო მეტად დასკვნაზე, ვიდრე ცალკეული ფიგურების მექანიკურ აღრიცხვაზე, რომლებიც, უფრო მეტიც, მერყეობენ. ნებისმიერი მიელოგრამის დასკვნამ უნდა გაარკვიოს დიაგნოზი ან მითითებები დამატებითი კვლევებისთვის, რომლებიც წარმოიქმნება ძვლის ტვინის შესწავლით. სისხლის დაავადებებში შეწოვის პუნქცია ხელს უწყობს დიაგნოზის გარკვევას ნაცხისა და სიმსივნეებით სექციების დახმარებით შემთხვევების 80%-ში. სხვა შემთხვევებში ნაჩვენებია ძვლის ბიოფსია და ძვლის ტვინის ჰისტოლოგიური გამოკვლევა. ბიოოპტიკური შერჩევა და ჰისტოლოგიური გამოკვლევა აუცილებელია: ა) პირველადი ან მეორადი მიელოფიბროზისთვის; ბ) ძვლის ტვინის აპლაზია ან ჰიპოპლაზია; გ) გრანულომატოზური ტიპის დაზიანებით წარმოქმნილი დაავადებები (მაგ. , გოდკინის დაავადება, სარკოიდოზი, ტუბერკულოზი და სხვ.); დ) კარცინომატოზური მეტასტაზები; ე) ყველა შემთხვევაში, როდესაც პუნქციის გზით შერჩეული მასალა არადამაკმაყოფილებელია ან ძვლის ტვინის ასპექტი არ არის დამაჯერებელი. ბიოოპტიკური ნიმუშის აღების შემდეგ, ანაბეჭდები მზადდება ციტოლოგიური გამოკვლევისთვის, ვინაიდან ჰისტოლოგიური სექციები მცირე ინფორმაციას გვაწვდის სისხლმბადი უჯრედების სტრუქტურული დეტალების შესახებ, რომლებიც ხალხმრავლობაა, არ არის გაფანტული და არასტანდარტიზებული. გარდა ამისა, ფიქსაცია იწვევს უჯრედების რეტრაქციას და ჰისტოლოგიური შეღებვა ნაკლებად შერჩევითია, ვიდრე ციტოლოგიური შეღებვა. სწორედ ამიტომ, ძვლის ტვინის სრული გამოკვლევა მოიცავს როგორც ციტოლოგიურ - ნაცხზე ან ანაბეჭდებს, ასევე ჰისტოლოგიურ - კვლევის მონაკვეთებს. უნდა გვახსოვდეს, რომ ძვლის ტვინის გამოკვლევის ციტოლოგიური და ჰისტოლოგიური მეთოდები არ არის გამორიცხული, არამედ, პირიქით, ავსებენ ერთმანეთს: ბიოფსია რაოდენობრივი და არქიტექტურული მეთოდია, ხოლო მიელოგრამა ხარისხობრივი და ციტოლოგიური.
გორიაევის პალატაში სისხლის უჯრედების დათვლის მეთოდი.
|
გორიაევის პალატა - მოწყობილობა, რომელიც შექმნილია უჯრედების რაოდენობის დასათვლელად სითხის მოცემულ მოცულობაში. ჩვეულებრივ გამოიყენება სისხლის ნიმუშში წარმოქმნილი ელემენტების რაოდენობის დასადგენად. კამერები შედგება სქელი შუშის სლაიდისგან, მათზე განივი სლოტებით, რომლებიც ქმნიან სამ განივად განლაგებულ ბრტყელ ადგილს. შუა პლატფორმა გრძივი ჭრილით იყოფა ორად, რომელთაგან თითოეულს აქვს ბადე ამოტვიფრული. გორიაევის კამერაში შუა პლატფორმის ორივე მხარეს არის ორი სხვა 0,1 მმ უფრო მაღალი (ფუქს-როსენტალის კამერაში 0,2 მმ) უფრო მაღალი ვიდრე შუა. ამ ადგილების სიბრტყეები ემსახურება საფარის დაფქვას, სანამ არ გამოჩნდება ეგრეთ წოდებული ნიუტონის რგოლები. გადასაფარებელი შუშის გახეხვის შემდეგ იქმნება კამერა, რომელიც ორ მხარეს იკეტება, დანარჩენ ორზე კი არის ხარვეზები (კაპილარული სივრცეები), რომლებითაც ივსება კამერა. ქსელის პრინციპი იგივეა. ისინი იყოფა კვადრატების ამა თუ იმ რაოდენობად, რომლებიც დაჯგუფებულია სხვადასხვა გზით. ყველა ბადეში მუდმივი მნიშვნელობაა ეგრეთ წოდებული „პატარა კვადრატი“, რომლის გვერდი არის 1/20 მმ, შესაბამისად, მისი ფართობია 1/400 მმ2. გორიაევის კამერის გამოყენებით ასევე შესაძლებელია მიკროსკოპის გადიდების დადგენა. გარეგნულად, ეს არის გამჭვირვალე პარალელეპიპედი (მინის სლაიდი), ღარებითა და მიკროსკოპული ბადით. ბადის უჯრედის მცირე განყოფილებების ზომებია 0,05 მმ, ხოლო დიდი დანაყოფები 0,2 მმ. ამ შემთხვევაში, ბადე გამოიყენება პლატფორმაზე (მინის მონაკვეთზე), რომელიც მდებარეობს ორ მიმდებარე პლატფორმაზე 0,1 მმ-ით დაბლა. ეს ადგილები გამოიყენება საფარის მოსახვევად. შედეგად, სითხის მოცულობა კვადრატის ზემოთ, რომელიც ჩამოყალიბებულია გორიაევის ქსელის დიდი დანაყოფებით არის 0,004 მიკროლიტრი. უჯრედების რაოდენობის დათვლით დიდ კვადრატზე, შეგიძლიათ გამოთვალოთ მოცემული უჯრედის ტიპის სიმკვრივე სუსპენზიაში ფორმულის გამოყენებით: უჯრედების რაოდენობა/მლ = უჯრედების რაოდენობა დიდი კვადრატის ზემოთ * 2.5 10^5 გორიაევის კამერის, როგორც ერთგვარი სტანდარტის გამოყენებით, შეგიძლიათ განსაზღვროთ მიკროსკოპის გადიდება ფორმულით: კგ=(მ2-მ1)/(a*N) სადაც კგარის მიკროსკოპის გადიდება; მ 1 - გორიაევის პალატის უჯრედის მარცხენა საზღვრის პოზიცია; მ 2 - უჯრედის ან უჯრედების ჯგუფის მარჯვენა საზღვრის პოზიცია; ნ- უჯრედების რაოდენობა გაზომილ საზღვრებს შორის; ა- გორიაევის კამერის უჯრედის ზომა (ტოლია 0,05 მმ). გორიაევის კამერა ასევე გამოიყენება კულტურაში უჯრედების რაოდენობის დასათვლელად. გორიაევის პალატაში სისხლის უჯრედების დათვლის ფორმულა არის - x = (a 400 c) / b, სადაც x არის ფორმის ელემენტების სასურველი რაოდენობა 1 მმ3-ში; ა - კამერის გარკვეულ მოცულობაში დათვლილი ფორმის ელემენტების ჯამი; ბ - დათვლილი პატარა კვადრატების რაოდენობა; გ - სისხლის განზავება. |
|
გორიაევის პალატაში ოოცისტების დათვლის მეთოდი. ეს მეთოდი ჩვეულებრივ გამოიყენება ცხოველების ექსპერიმენტულად ინფიცირებისას ოოცისტების ზუსტად განსაზღვრული რაოდენობით (ცხოველში შეჰყავთ სუსპენზიის შესაბამისი რაოდენობა). გორიაევის კამერაში მოთავსებულია 1 მლ ოოცისტების შემცველი სუსპენზია. ვინაიდან გორიაევის კამერის მოცულობა არის 0,9 მ3, დათვლილი ოოცისტების რაოდენობა მრავლდება 1111-ზე. მიღებული რიცხვი ადეკვატურია ოოცისტების რაოდენობის 1 სმ3 ხსნარში. უფრო ზუსტი განსაზღვრისთვის, გამოთვლები უნდა განხორციელდეს მინიმუმ სამჯერ, შემდეგ კი საშუალო არითმეტიკული მნიშვნელობა უნდა იქნას მიღებული. ინფექციისთვის საჭირო ოოცისტების რაოდენობა იზომება გრადუირებული პიპეტის გამოყენებით. ინკუბაციურ გარემოში ოოცისტების უფრო ერთგვაროვანი განაწილებისთვის, მილის შიგთავსი არაერთხელ უნდა შეირყევა. |
|
ერითროციტების რაოდენობა გორიაევის პალატაში პრინციპი. სისხლის ზუსტი რაოდენობა თანაბრად შერეულია გარკვეული რაოდენობის სითხეში და მოთავსებულია ცნობილი მოცულობის კამერაში, რომელშიც სისხლის სუსპენზია ნაწილდება ერთ ფენად. კამერის ფსკერი გრაფიკულია, რაც შესაძლებელს ხდის ერითროციტების ზუსტად დათვლას. რეაგენტები: 0,9% ნატრიუმის ქლორიდის ხსნარი. სპეციალური აღჭურვილობა: მიკროსკოპი, გორიაევის კამერა, ლაბორატორიული საცდელი მილები ან კაპილარი სალის ჰემომეტრიდან. განმარტების პროგრესი. დაამატეთ 8 მლ 0,9% ნატრიუმის ქლორიდის ხსნარი და 0,02 მლ სისხლი მშრალ, სუფთა სინჯარაში. პიპეტის წვერი წინასწარ იწმინდება, სისხლი იფეთქება მილის ძირში და პიპეტი კარგად ირეცხება სითხის ზედა ფენით. კარგად აურიეთ მილის შიგთავსი. მიიღება სისხლის განზავება 1:400, ანუ სისხლი განზავებულია 400-ჯერ. სისხლის გასქელებასთან ერთად მიზანშეწონილია მისი განზავება 500, 600, 700, 800-ჯერ. კამერა და გადასაფარებელი უნდა გაირეცხოს და მშრალი იყოს. გადასაფარებელი იხსნება კამერაზე ისე, რომ მოლურჯო რგოლები გამოჩნდეს. აიღეთ სინჯარიდან განზავებული სისხლის წვეთი და შეავსეთ კამერა, წაისვით საფარის კიდეზე. ერითროციტები ითვლიან კამერის შევსებიდან 1 წუთის შემდეგ დაბალი გადიდების მიკროსკოპით (x8 ობიექტივი, x10 ან x15 ოკულარი) დაფარული დიაფრაგმა ან დაშვებული კონდენსატორი (დაბნელებულ ხედში). ერითროციტები ითვლიან დიაგონალურად განლაგებულ ხუთ დიდ (ან 80 პატარა) კვადრატად. მხედველობაში მიიღება ერითროციტები, რომლებიც დევს პატარა კვადრატის შიგნით, ასევე მის მარცხენა და ზედა კედლებზე. კვადრატის მარჯვენა და ქვედა ხაზებზე მდებარე უჯრედები არ ითვლება.
გაანგარიშება: უჯრედების გამოთვლილი რაოდენობა 80 პატარა კვადრატში მრავლდება 20000-ზე სისხლის განზავებისას 1:400, 25000-ზე 1:500 ან 30000-ზე 1:600 განზავებისას და მიიღება საბოლოო შედეგი. მილიონებში 1 მლ-ზე. ამ შემთხვევაში, ვარაუდობენ, რომ ერთი პატარა კვადრატის მოცულობა არის 1/4000 μl. 1 ლიტრში უჯრედების დასათვლელად, სისხლის წითელი უჯრედების რაოდენობა 1 μl-ში ასევე მრავლდება 1,000,000-ზე. Შენიშვნა. დაუშვებელია სისხლის შესწავლა თრომებით; უჯრედების დათვლა კამერის შევსებისთანავე (1 წთ მოლოდინის გარეშე); ცუდად გარეცხილი და გამხმარი პიპეტების და საცდელი მილების, უხარისხო რეაგენტების გამოყენება, რომლებიც იწვევენ ჰემოლიზს. ყველა გაანგარიშების წესის გათვალისწინებით, შეცდომა იქნება საშუალოდ ± 2,5%. |
|
დეზინფექციის წესები გამოყენების შემდეგ, გორიაევის კამერა უნდა იყოს დეზინფექცია 3% ხსნარიწყალბადის ზეჟანგი, ჩამოიბანეთ გამოხდილი წყლით და გააშრეთ რბილი ქსოვილით. შეინახეთ კამერა მშრალ ადგილას. |
ჰემატოლოგიურ ანალიზატორებზე მუშაობის მეთოდი.
ანალიზატორი-ჰემატოლოგიური- მოწყობილობა (აღჭურვილობის ნაკრები), რომელიც განკუთვნილია რაოდენობრივი კვლევისთვის უჯრედები სისხლიკლინიკურ დიაგნოსტიკურ ლაბორატორიებში. შეიძლება იყოს ავტომატური ან ნახევრად ავტომატური. ნახევრად ავტომატური ჰემატოლოგიური ანალიზატორი განსხვავდება ავტომატურისგან იმით, რომ სისხლის ნიმუშის განზავების პროცესი ცალკე მოწყობილობით - გამხსნელით ხორციელდება. მთლიანი სისხლის განზავების მომზადების შემდეგ, ოპერატორმა უნდა გადაიტანოს განზავებული ნიმუში გაზომვის მოდულში. ამჟამად ნახევრად ავტომატური ანალიზატორები პრაქტიკულად არ იწარმოება.
ავტომატური ჰემატოლოგიური ანალიზატორი არის სრულად ავტომატიზირებული ინსტრუმენტი, რომელშიც მთელი ანალიტიკური პროცესი ხორციელდება ავტომატურად.
თანამედროვე ავტომატურ ანალიზატორებს შეუძლიათ საათში ათობით ნიმუშის (60-დან 120-მდე) დამუშავება, სიზუსტით და რეპროდუცირებით, ასევე ტესტის შედეგების შენახვა ჩაშენებულ მეხსიერებაში და, საჭიროების შემთხვევაში, დაბეჭდვა ჩაშენებულში. თერმული პრინტერი ან გარე პრინტერი.
თანამედროვე ჰემატოლოგიური ანალიზატორები კლასიფიცირდება სისხლის უჯრედების განსაზღვრული მაჩვენებლების ნომენკლატურის მიხედვით.
რვა პარამეტრიანი ჰემატოლოგიური ანალიზატორებიგანსაზღვრეთ შემდეგი პარამეტრები: კონცენტრაცია ერითროციტები(RBC) ლეიკოციტები(WBC) თრომბოციტები(plt) ჰემოგლობინი(Hb), ისევე როგორც ერითროციტების შემდეგი პარამეტრები: ერითროციტების საშუალო მოცულობა (MCV), ერითროციტების ჰემოგლობინის საშუალო შემცველობა (MCH), ერითროციტების ჰემოგლობინის საშუალო კონცენტრაცია (MCHC), ჰემატოკრიტი(Hct).
რვა პარამეტრიანი ჰემატოლოგიური ანალიზატორები ამჟამად პრაქტიკულად არ იწარმოება.
ჰემატოლოგიური ანალიზატორები კლასი 3-განსხვავებები. მე-3 კლასის ჰემატოლოგიური ანალიზატორები, წარმოებული მოდელის მიხედვით, საშუალებას გაძლევთ განსაზღვროთ სისხლის უჯრედების 16-დან 22-მდე მაჩვენებელი. ამ კლასის ანალიზატორები, გარდა იმ პარამეტრებისა, რომლებიც განსაზღვრავენ რვა პარამეტრიან ანალიზატორებს, განსაზღვრავენ ლეიკოციტების სამ ქვეპოპულაციას: ლიმფოციტების კონცენტრაციას (Lm), გრანულოციტების (Gr) და ე.წ. საშუალო ლეიკოციტების (Mid), ასევე. მათი პროცენტი Lm%, Gr% და Mid%. აქედან მოდის კლასის სახელი 3-dif. გარდა ამისა, ამ კლასის ჰემატოლოგიური ანალიზატორები განსაზღვრავენ ერითროციტების მოცულობის (RDW) ცვალებადობის კოეფიციენტს და თრომბოციტების დამახასიათებელ ინდიკატორებს: თრომბოციტების საშუალო მოცულობა (MPV), თრომბოციტების მოცულობის ფრაქცია (Tct) (ჰემატოკრიტის ანალოგი), თრომბოციტების მოცულობის ვარიაციის კოეფიციენტი (PDW).
მნიშვნელოვანი დიაგნოსტიკური ინფორმაცია, რომლის მიღებაც შესაძლებელია ამ კლასის ჰემატოლოგიური ანალიზატორებით, არის ერითროციტების, ლეიკოციტების და თრომბოციტების მოცულობის მიხედვით განაწილების ფუნქციები - ჰისტოგრამები.
ჰემატოლოგიური ანალიზატორები კლასი 5-dif.მთავარი განსხვავება 5-dif ჰემატოლოგიურ ანალიზატორებსა და 3-dif ანალიზატორებს შორის არის მათი უნარი, გამოავლინონ ლეიკოციტების ხუთივე ქვეპოპულაცია: ლიმფოციტები (Lym), მონოციტები (Mon), ნეიტროფილები (Neu), ბაზოფილები (Bas) და ეოზინოფილები (Eos). ასევე მათი პროცენტული შემცველობა Lym%, Mon%, Neu%, Bas% და Eos%. წინაღობის დათვლის მეთოდი, რომელიც ასევე ცნობილია როგორც Coulter counter, რომელიც გამოიყენება 3-dif ანალიზატორებში, არ შეუძლია განასხვავოს ნეიტროფილები, ბაზოფილები და ეოზინოფილები, ამიტომ უჯრედების დიფერენცირების განსხვავებული მეთოდი გამოიყენება 5-განსხვავებულ ანალიზატორებში. იგი ეფუძნება პრინციპს დიფრაქციალაზერული გამოსხივება ლეიკოციტების უჯრედებზე და გაფანტული გამოსხივების შემდგომი ანალიზი. „საშუალო“ ლეიკოციტები არ განსხვავდებიან იმდენი ზომით, რომ გამოირჩეოდნენ წინაღობის მეთოდით, მაგრამ მათ აქვთ განსხვავებული შინაგანი სტრუქტურა და განსხვავებულად ურთიერთობენ საღებავებთან. და დიფრაქციული ნიმუშის გამოვლენის მეთოდი აღმოჩნდება მგრძნობიარე უჯრედების შიდა სტრუქტურის მიმართ. ამრიგად, ერითროციტები და თრომბოციტები ითვლიან Coulter მრიცხველით, ხოლო ლეიკოციტები ცალკე ლაზერული ერთეულით.
2. ფოსფატის ბუფერი (0,1 მ, pH 5,8-8,0)
|
Na 2 HPO 4 0,2 M, მლ |
Na 2 H 2 PO 4 0.2 M, მლ | ||
3. ტრის ბუფერი (0,1 მ, pH 7,1-9,2)
24,2 გ ტრის-(ჰიდროქსიმეთილ)ამინომეთანი იხსნება 1 ლ მოცულობით კოლბაში (500 მლ H 2 O-ში). საჭირო pH მნიშვნელობის მისაღებად ემატება ცხრილში მითითებულ 1 M HCl მოცულობას და არეგულირებს მოცულობას 1000 მლ-მდე გამოხდილი წყლით.
4. აცეტატის ბუფერი (0,2 მ, pH 3,6-5,8)
|
ნატრიუმის აცეტატი 0,2 მ, მლ |
ძმარმჟავა 0,2 მ, მლ |
ნატრიუმის აცეტატი 0,2 მ, მლ |
ძმარმჟავა 0,2 მ, მლ | ||
5. გლიცინის ბუფერი (0,05 მ, pH 8,6-10,6)
გლიცინის და ნატრიუმის ჰიდროქსიდის მითითებული მოცულობები შერეულია და მოცულობა რეგულირდება გამოხდილი წყლით 200 მლ-მდე.
|
გლიცინი 0,2 მ, მლ |
NaOH 0,2 მ, მლ |
გლიცინი 0,2 მ, მლ |
NaOH 0,2 მ, მლ |
||
3. ზოგიერთი რეაგენტის მომზადება
გამააქტიურებელი ხსნარი. 155 მგ შემცირებული გლუტათიონი და 400 მგ კრისტალური ალბუმინი მოთავსებულია 100 მლ მოცულობის მოცულობით კოლბაში, ხსნიან 50 მლ გამოხდილ წყალში და 1 M NaOH ხსნარის გამოყენებით რეგულირდება pH 8,2-მდე. შემდეგ დაამატეთ წყალი ნიშანს.
ვერცხლის ნიტრატის ამიაკის ხსნარი. ამიაკის კონცენტრირებულ ხსნარს უმატებენ ვერცხლის 2-3%-იან ხსნარს, სანამ ნალექი არ დაიშლება.
აცეტატის ბუფერი pH 3.6. მოამზადეთ 463 მლ A ხსნარის და 37 მლ B ხსნარის შერევით, მოცულობით კოლბაში წყლით ნიშნულამდე განზავდეს 1 ლიტრამდე. ხსნარი A: 1 ლიტრიანი მოცულობითი კოლბაში განზავდეს 11,55 მლ გამყინვარების ძმარმჟავა წყლით. ხსნარი B: 1 ლიტრიან კოლბაში იხსნება 27,2 გ ნატრიუმის აცეტატი წყალში.
ბიურეტის რეაგენტი (ბენედიქტეს რეაგენტი). 173 გრ ნატრიუმის ციტრატი და 100 გრ ნატრიუმის კარბონატი იხსნება 300 მლ გამოხდილ წყალში წყლის აბაზანაში. ცალკე, 17,3 გ სპილენძის სულფატი იხსნება 300 მლ წყალში. ორივე ხსნარი გაჟღენთილია და მთლიანი მოცულობა მიიყვანება 1 ლიტრამდე.
ბუფერული ხსნარი. 2,76 გ ვერონალი და 2,06 გ მედინალი იხსნება 1 ლიტრ გამოხდილ წყალში. შეინახეთ მაცივარში, ნალექის გაჩენის შემთხვევაში ხსნარი არ არის გამოსაყენებლად ვარგისი.
ნახშირის შეჩერება. 0,25გრ აქტივირებული ნახშირი მოთავსებულია 100მლ მოცულობით კოლბაში და განზავებულია აცეტატის ბუფერით pH 3,6. Გამოყენებამდე კარგად შეანჯღრიეთ.
შემცირების რეაგენტი. ასკორბინის მჟავას 1% ხსნარი მომზადებული 0,016% სპილენძის სულფატის ხსნარით.
ჰემოგლობინი, 4% ხსნარი აცეტატის ბუფერში (pH 4.0). პირველ რიგში, 8% ჰემოგლობინის ხსნარს ამზადებენ 8 მოლ/ლ შარდოვანას ხსნარში, ინახება 2 საათის განმავლობაში თერმოსტატში 60°C-ზე და გამოყენებამდე განზავებულია აცეტატის ბუფერით 2-ჯერ.
გლიცილ-გლიცინი. 0,55 მმოლ/ლ, pH 8,3. 3,63 გ გლიცილ-გლიცინი მოთავსებულია 50 მლ მოცულობით კოლბაში, ზემოდან ავსებენ წყალს ნიშნულამდე (ბუფერული ხსნარი).
დენატურირებადი ხსნარი
დიაზო რეაგენტი ბილირუბინის დასადგენად. მოამზადეთ ორი გამოსავალი. პირველი ხსნარი: 3 გ სულფანილის მჟავა იხსნება 500 მლ გამოხდილ წყალში, ემატება 15 მლ კონცენტრირებული მარილმჟავა (ცხელ აბაზანაში), მოცულობა რეგულირდება 1 ლიტრამდე წყლით. მეორე ხსნარი: 0,5% ნატრიუმის ნიტრიტის წყალხსნარი. გამოყენებამდე შეურიეთ 5 მლ პირველი ხსნარი და 0,25 მლ მეორე.
დიაცეტილი, სამუშაო ხსნარი. 1 მლ დიაცეტილს აზავებენ გამოხდილი წყლით 100 მლ მოცულობით კოლბაში (ხსნარი ინახება მაცივარში). დიაცეტილის სამუშაო ხსნარი მზადდება გამოყენებამდე 24 მლ გამოხდილი წყლის დამატებით 1 მლ დიაცეტილის მარაგის ხსნარში.
დიფენილამინის რეაგენტი. 1 გ დიფენილამინი იხსნება 100 მლ გამყინვარების ძმარმჟავაში. ხსნარს ემატება 2,75 მლ კონცენტრირებული გოგირდის მჟავა.
კალიბრაციის ხსნარი. ძირითადი - 0,75 მმოლ/ლ ALA (100 მკგ/მლ) ფუძის მიხედვით: 0,00635 გ ALA ჰიდროქლორიდი იხსნება აცეტატის ბუფერში pH 3,6 50 მლ მოცულობით კოლბაში. შეინახეთ მაცივარში არა უმეტეს ერთი თვისა. ძირითადი ხსნარისგან მზადდება სამუშაო კალიბრაციის ხსნარი, 1 მკგ/მლ. მომზადება გამოყენებამდე აცეტატის ბუფერით 100-ჯერ განზავებით.
კალიბრაციის ხსნარი. 22,5 მგ დიჰიდროქსიაცეტონი გახურებით იხსნება 25 მლ წყალში. ამ ხსნარის 1 მლ შეიცავს 10 მკმოლ დიჰიდროქსიაცეტონს. დიჰიდროქსიაცეტონის კალიბრაციის ხსნარი შეედინება მთელ რიგ საცდელ მილებში (იხ. სამუშაო), ზემოდან ავსებენ საჭირო მოცულობას და შემდეგ რეაქცია ტარდება ისევე, როგორც ფერმენტის აქტივობის განსაზღვრისას.
რკინის კალიბრაციის (სტანდარტული) ხსნარი (30 მკმოლ/ლ).
ჯერ მორას მარილები ამზადებენ.
კოფეინის რეაგენტი. 1 გ სუფთა კოფეინს, 7,5 გ ნატრიუმის ბენზოატი, 12,5 გ ნატრიუმის აცეტატს ხსნიან 90 მლ გამოხდილ წყალში, აცხელებენ 50-60°C-მდე, ურევენ, აციებენ და 100 მლ-მდე იღებენ გამოხდილი წყლით.
ამონიუმის მოლიბდატი აზოტმჟავაში. 7,5გ ამონიუმის მოლიბდატს ხსნიან 100მლ წყალში და უმატებენ 100მლ 32%-იან აზოტმჟავას.
შარდი ალკაპტონურიისთვის. პათოლოგიის არარსებობის შემთხვევაში ნორმალურ შარდში ჰიდროქინონი ემატება 20 გ/ლ სიჩქარით.
შარდი ჰიპერამინოაცდურიით. პათოლოგიური გლიცინის არარსებობის შემთხვევაში ნორმალურ შარდში ემატება 1.0 გ/ლ სიჩქარით.
შარდი მუკოპოლისაქარიდოზით. პათოლოგიური არარსებობის შემთხვევაში, ქონსურიდს ან ჰეპარინს ემატება ნორმალურ შარდში 0,05-0,1 გ/ლ სიჩქარით.
შარდი პენტოზურიით. პათოლოგიის არარსებობის შემთხვევაში, შარდში ემატება ქსილულოზა ან რიბოზა 1,0 გ/ლ სიჩქარით.
შარდი ტიროზინოზით. პათოლოგიის არარსებობის შემთხვევაში, ტიროზინი ემატება ნორმალურ შარდს 0,4-0,5 გ/ლ სიჩქარით.
შარდი ფრუქტოზურია. პათოლოგიის არარსებობის შემთხვევაში, ფრუქტოზა ემატება ნორმალურ შარდს 0,3-0,4 გ/ლ სიჩქარით.
შარდი ცისტინურიისთვის. პათოლოგიური ცისტინის არარსებობის შემთხვევაში ნორმალურ შარდში ემატება 0,4-0,5 გ/ლ სიჩქარით.
ნატრიუმის აცეტატის 3-წყლიანი, გაჯერებული ხსნარი. 375 გრ ნატრიუმის აცეტატი 3-წყლიანი (ან 226 გრ უწყლო მარილი) იხსნება 250 მლ თბილ წყალში, გაცივდება ოთახის ტემპერატურამდე. შეინახეთ ოთახის ტემპერატურაზე. ხსნარი უნდა იყოს უფერო და გამჭვირვალე.
ნატრიუმის ფოსფატი უცვლელი 0,25 მოლ/ლ. მოამზადეთ 9,7 გ Na 2 HPO 4 ∙12H 2 O ან 18 გ Na 2 HPO 4 ∙12H 2 O წყალში 200 მლ კოლბაში გახსნით. ტრიქლოროძმარმჟავას 1 მლ ხსნარში 2 მლ ამ ხსნარის დამატებისას pH უნდა იყოს 5,0-6,0 დიაპაზონში.
კრეატინინის ძირითადი კალიბრაციის ხსნარი, 10 მმოლ/ლ. 113,1 მგ კრეატინინი რეგულირდება 100 მლ-მდე 0,1 მოლ/ლ მარილმჟავას ხსნარით. კალიბრაციის გრაფიკის აგებისას ამზადებენ სამუშაო ხსნარს მარაგის ხსნარიდან ხსნარის 100-ჯერ განზავებით წყლით, ხსნარის 1 მლ შეიცავს 0,1 მმოლ კრეატინინს. ამის საფუძველზე მიიღება მთელი რიგი საცდელი მილები კრეატინის შესაბამისი კონცენტრაციით.
ჟანგვის ნარევი თიამინის დასადგენად. 8 მლ 1% კალიუმის ჰექსაციანოფერატს (III) ემატება 20 მლ 30% NaOH ხსნარი, კარგად აურიეთ. მოამზადეთ გამოყენებამდე.
ორცინის რეაგენტი. 1 გ ორცინს დაამატეთ 500 მლ 30% მარილმჟავა (სიმკვრივე 1,15 გ / სმ 3). ურიეთ სანამ არ გაიხსნება და დაამატეთ 4-5 მლ 10% რკინის ქლორიდის ხსნარი (III) FeCl 3 . რეაგენტი ინახება მჭიდროდ დახურულ ბნელ ბოთლში.
პ-ნიტროანილინის ძირითადი კალიბრაციის ხსნარი. 0,0829 გ პ-ნიტროანილინი მოთავსებულია 100 მლ მოცულობით კოლბაში, სრულდება ნიშნულამდე წყლით და იხსნება.
ნალექიანი ხსნარი. 561 გ ამონიუმის სულფატი გავხსნათ 1 ლიტრ გამოხდილ წყალში და გავფილტროთ 24 საათის შემდეგ.
ძირითადი ფოსფატის ბუფერული ხსნარი და მისი სამუშაო ხსნარები No1-4. 500 მლ მოცულობის მოცულობით კოლბაში გავხსნათ 33,5 გ NaOH 400 მლ წყალში და დავამატოთ 226,8 გ KH 2 PO 4, შეანჯღრიეთ სრულ გახსნამდე, გააგრილეთ და დაუმატეთ წყალი ნიშნულზე. ძირითადი ფოსფატის ბუფერის სამუშაო ხსნარების მოსამზადებლად 100 მლ მოცულობის მოცულობით კოლბაში იზომება ძირითადი ფოსფატის ბუფერის შემდეგი მოცულობები (მლ): No1 - 92,51; No2 - 74,91; No3 - 59.18 და No4 - 48.68, რის შემდეგაც მათი შიგთავსი წყალთან ერთად ნიშნულზე მიდის.
პიკრინის მჟავა, გაჯერებული ხსნარი. სასაქონლო პიკრინის მჟავა შეიცავს 15-20% ტენიანობას, არ გააშროთ მჟავა. ფეთქებადი! ცხელ აბაზანაში გაცხელებით გახსენით 2 გ პიკრინის მჟავა 100 მლ წყალში. ამის შემდეგ ხსნარს ტოვებენ 24 საათის განმავლობაში, დროდადრო ურიეთ. შემდეგ ხსნარი იფილტრება. ხსნარი სტაბილურია და ინახება მუქი შუშის კონტეინერში.
პიროფოსფატის ბუფერი 0.05 M pH 8.2. გადაიტანეთ 4,46 გ ნატრიუმის პიროფოსფატი 200 მლ მოცულობით კოლბაში, გახსენით დაახლოებით 100 მლ წყალში, დააყენეთ pH 0,1 მ HCl ხსნარით 8,2-მდე და შეავსეთ გამოხდილი წყალი ნიშნულამდე.
პიროფოსფატის ბუფერი 0.1 M pH 8.5. 4,46 გ ნატრიუმის პიროფოსფატი გადაიტანეთ 100 მლ მოცულობის მოცულობით კოლბაში, გახსენით 50 მლ წყალში, დააყენეთ pH 0,1 მ HCl ხსნარით 8,5-მდე და დაუმატეთ გამოხდილი წყალი ნიშნულზე.
მოქმედი რეაგენტი. მოამზადეთ განსაზღვრის დღეს 0,3 N ნატრიუმის ჰიდროქსიდის 30 ნაწილის შერევით. 2 წილი 0,5% ფენოლფთალეინის ხსნარი და 1 ნაწილი 0,12% სპილენძის სულფატის ხსნარი.
აცეტონის ციანოჰიდრინის ხსნარი. აცეტონ ციანოჰიდრინის 1 ამპულა (0,5 მლ - 0,47 გ სისხლში ჰემოგლობინის დასადგენად) იხსნება 1 ლიტრ გამოხდილ წყალში.
ფერიაცეტონის ციანოჰიდრინის ხსნარი. 200 მგ კალიუმის ფეროციანიდი და 1 ამპულა (0,5 მლ - 0,47 გ) აცეტონ ციანოჰიდრინი იხსნება 1 ლიტრ გამოხდილ წყალში: შესაძლებელია რეაგენტების ნაკრებიდან გამოყენება ტრანსფორმაციული ხსნარის მოსამზადებლად სისხლში ჰემოგლობინის დასადგენად. სტაბილურია რამდენიმე თვის განმავლობაში ოთახის ტემპერატურაზე მუქი შუშის კონტეინერში შენახვისას.
გლუოქსიდაზას ხსნარი. შეიცავს დაახლოებით 300 ერთეულს. 1 მგ-ში. მოამზადეთ მშრალი პრეპარატის შესაბამისი რაოდენობის 10 მლ წყალში გახსნით.
სულფონირებული ბატო-ფენანთროლინის ხსნარი. სინჯარაში უმატებენ 0,5 მლ ქლოროსულფონის მჟავას 100 მგ ბათოფენანთროლინს, აცხელებენ მდუღარე წყლის აბაზანაში 30 წმ, გაცივდებიან და ნელ-ნელა ემატება 10 მლ ბიდისტილირებული წყალი, კვლავ თბება წყლის აბაზანაში 5 წუთის განმავლობაში. ნარევი გადააქვთ 200 მლ კოლბაში, ემატება 100 მლ წყალი, ხსნარის pH რეგულირდება 4-5 N NaOH-მდე და ემატება წყალი 200 მლ მოცულობამდე.
იოდის ხსნარი კალიუმის იოდიდში (ლუგოლის ხსნარი). 100 მლ გამოხდილ წყალში გავხსნათ 20გრ კალიუმის იოდიდი და 10გრ იოდი. გამოყენებამდე ხსნარი განზავებულია 5-ჯერ.
პ-ნიტროსოდიმეთილანილინის ხსნარი (NDMA). კომერციულად ხელმისაწვდომი NDMA პრეპარატი რეკრისტალიზებულია ეთილის ეთერისგან. ალკოჰოლის დეჰიდროგენაზას გასაზომად, 1 მგ NDMA იხსნება 100 მლ 0,1 M პიროფოსფატის ბუფერში (pH 8,5). მიღებულ ხსნარს ფილტრავენ ქაღალდის ფილტრის მეშვეობით და ფილტრატი განზავებულია 2-ჯერ იმავე ბუფერით. შეინახეთ 4°C ტემპერატურაზე ორი თვის განმავლობაში.
ილკას რეაგენტი. ძმარმჟავას 5 წილ (მოცულობით) დაუმატეთ 1 წილი გამყინვარების ძმარმჟავას, შემდეგ თანდათან დაასხით 1 წილი კონცენტრირებული გოგირდმჟავა. შეინახეთ რეაგენტი სიცივეში!
Millon რეაგენტი. (მზად არის ზეწოლის ქვეშ! ) 40გრ ვერცხლისწყალს ხსნიან 57მლ კონცენტრირებულ აზოტმჟავაში ჯერ ცივში და შემდეგ აცხელებენ წყლის აბაზანაში. მიღებულ ხსნარს აზავებენ 2 მოცულობით წყალში, აძლევენ დადნებას და ასუფთავებენ ნალექისგან. შეინახეთ მუქი შუშის ბოთლში.
ამონიუმის მოლიბდატის რეაგენტი. 2,5 გ ამონიუმის მოლიბდატი იხსნება 60 მლ გამოხდილ წყალში, ფილტრავენ. ხსნარს ემატება 100 მლ კოლბაში. სხვა კოლბაში 25 მლ გამოხდილ წყალს უმატებენ 7,5 მლ კონცენტრირებულ გოგირდმჟავას. მეორე ხსნარს უმატებენ პირველს, აციებენ და აზავებენ გამოხდილი წყლით ნიშნულამდე. გამოსავალი განკუთვნილია ერთი თვის განმავლობაში.
რეაგენტი "NADI". დიმეთილ-პ-ფენილენდიამინის 1%-იან ხსნარს ურევენ სპირტში α-ნაფთოლის 1%-იან ხსნარს და ნატრიუმის კარბონატის 1,5%-იან ხსნარს. ხსნარი მუქი ყავისფერია და არ უნდა ჰქონდეს ვარდისფერი ელფერი. მომზადებულია გაკვეთილამდე 1 საათით ადრე.
რეაგენტი ნაშა. 100 მლ ტევადობის კოლბას ემატება 15,4 გ ამონიუმის აცეტატი, 0,3 გ გამყინვარების ძმარმჟავა და 0,2 გ აცეტილაცეტონი, იხსნება გამოხდილ წყალში და მოცულობა რეგულირდება ნიშნულზე.
ნესლერის რეაგენტი. 500 მლ მოცულობის მოცულობით კოლბაში აურიეთ 150 გრ კალიუმის იოდიდი, 110 გრ იოდი, 100 მლ გამოხდილი წყალი და დაახლოებით 140-150 გრ მეტალის ვერცხლისწყალი და ენერგიულად შეანჯღრიეთ 15 წუთის განმავლობაში. ამ შემთხვევაში ხსნარი სპონტანურად თბება და გახსნილი იოდის გამო ფერი თანდათან ფერმკრთალი ხდება. შემდეგ ნარევი გაცივდება გამდინარე წყლის ქვეშ, სანამ მკაფიო წითელი ფერი არ შენარჩუნდება, რის შემდეგაც შიგთავსი შეირყევა მანამ, სანამ წითელი ფერი არ გახდება მომწვანო. დეკანტაციის შემდეგ, ვერცხლისწყლის ნალექი კარგად ირეცხება წყლით. შეუთავსეთ ხსნარი და სარეცხი საშუალებები, განზავდეს წყლით 2 ლიტრამდე. მიღებული ხსნარის 75 მლ გადაიტანეთ 0,5 ლ მოცულობით კოლბაში, რომელიც შეიცავს 75 მლ წყალს და 350 მლ 10% ნატრიუმის ჰიდროქსიდის ხსნარს და განზავეთ წყლით ნიშნულამდე.
Fehling-ის რეაგენტი. ორი ხსნარი მზადდება ცალკე. ხსნარი 1: გახსენით 200 გრ როშელის მარილი და 150 გ NaOH 1 ლ მოცულობით კოლბაში და განზავდეს ნიშნულამდე წყლით. ხსნარი 2: 1ლ მოცულობის მოცულობით კოლბაში გავხსნათ 40გრ სპილენძის (II) სულფატი წყალში და გავაზავოთ წყლით ნიშნულამდე. გამოყენებამდე აურიეთ ამ ხსნარების თანაბარი მოცულობები.
ფოლინის რეაგენტი. 1 ლიტრიან კოლბაში 750 მლ წყალში გავხსნათ 1 გ ნატრიუმის ვოლფრამი და 20 გ ფოსფომოლიბდის მჟავა. დახურეთ კოლბა რეფლუქს კონდენსატორით საცობით და მაცივარში წყლის ნაკადის ჩართვით, შიგთავსი ადუღდება 10 საათის განმავლობაში; შემდეგ გაცივდება, ასხამენ მოცულობით კოლბაში და რეაგენტის წყლის მოცულობას არეგულირებენ 1 ლიტრზე.
ერლიხის რეაგენტი. 0,7 გ პ-დიმეთილამინბენზალდეჰიდი იხსნება 150 მლ კონცენტრირებულ მარილმჟავაში, უმატებენ 100 მლ წყალს და ურევენ. ხსნარი უნდა იყოს უფერო ან ოდნავ ყვითელი. შეინახეთ მუქი შუშის კონტეინერში. რეაგენტი სტაბილურია.
ერლიხის რეაგენტი. 50 მლ მოცულობით კოლბაში იხსნება 1 გ პ-დიმეთილამინბენზალდეჰიდი 35 მლ გამყინვარების ძმარმჟავაში, დაამატეთ 8 მლ 57% პერქლორმჟავა და შეავსეთ ნიშნულამდე გამყინვარებული ძმარმჟავით. შეინახეთ მუქი შუშის კონტეინერში მაცივარში ერთ კვირამდე.
თიმოლის სპირტის ხსნარი (10%). 10 გ გაწმენდილი თიმოლი იხსნება 100 მლ 96˚ ეთილის სპირტში. გასუფთავებული თიმოლის მიღება ხდება შემდეგნაირად. 100 გრ თიმოლი იხსნება 100 მლ 96˚ ეთილის სპირტში, გაფილტრული. ფილტრატს დაუმატეთ 1 ლიტრი ცივი გამოხდილი წყალი, ენერგიულად შეანჯღრიეთ და გააჩერეთ 20 წუთი. ფილტრი იფილტრება და ფილტრზე დარჩენილი კრისტალები ორჯერ ირეცხება ცივი გამოხდილი წყლით. გააშრეთ ჯერ ფილტრის ქაღალდზე, შემდეგ 2-3 დღის განმავლობაში დეზიკატორში უწყლო კალციუმის ქლორიდზე მუდმივ წონამდე.
სტანდარტული ხსნარი. სტანდარტული ხსნარის მომზადება ხდება ორი ხსნარის შერევით: 1) 0,0962 ნ ბარიუმის ქლორიდის ხსნარი: 1,175 გ კრისტალური BaCl 2 ∙2H 2 O იხსნება 100 მლ წყალში მოცულობით კოლბაში. 2) 0,2 ნ გოგირდმჟავას ხსნარი. შემდეგ მიიღება ბარიუმის სულფატის სუსპენზია: 3 მლ ბარიუმის ქლორიდის 0,0962 N ხსნარი შეედინება 100 მლ მოცულობით კოლბაში და მოცულობა რეგულირდება გოგირდმჟავას 0,2 N ხსნარით + 10 ° C ტემპერატურაზე ( ამ ტემპერატურაზე ნალექი ბარიუმის სულფატის ნაწილაკების ზომები შედარებით სტაბილურ შედეგს იძლევა).
სუბსტრატის ბუფერული ხსნარისინჯარაში ჩაასხით 10 მლ წყალი და დაუმატეთ 0,028 გ L-გლუტამილ-პ-ნიტროანილინი და 0,082 გ ნატრიუმის ქლორიდი და, მორევის შეუჩერებლად, გახსენით სინჯარის შიგთავსი მდუღარე წყლის აბაზანაში 60 წამის განმავლობაში. . შემდეგ ხსნარი გაცივებულია 37°C-მდე და ემატება 2,5 მლ ბუფერული ხსნარი. მომზადებული სუბსტრატის ხსნარი ექსპლუატაციის დროს ინახება წყლის აბაზანაში 37°C ტემპერატურაზე. გამოუყენებელი სუბსტრატის ხსნარი შეიძლება ინახებოდეს მაცივარში ერთ კვირამდე. სუბსტრატი ცუდად ხსნადია და ნალექს ოთახის ტემპერატურაზე. ამიტომ გამოყენებამდე კრისტალიზებული სუბსტრატი იხსნება მდუღარე წყლის აბაზანაში გაცხელებით. სუბსტრატის გათბობა და დაშლა შეიძლება განმეორდეს არა უმეტეს ორჯერ.
სუბსტრატის ხსნარი ALT-ის დასადგენად (ხსნარი No1). 29,2 მგ α-კეტოგლუტარის მჟავას და 1,78 გ ალანინის (0,89 გ α-ალანინის) ნიმუშები იწონება ანალიტიკურ ბალანსზე და იხსნება 1 M ნატრიუმის ჰიდროქსიდის ხსნარში, სანამ ნალექი მთლიანად არ დაიშლება (pH 7,4). ხსნარი შეედინება 100 მლ კოლბაში და მოცულობა რეგულირდება ნიშნულამდე 0,1 მ ფოსფატის ბუფერით (pH 7,4). დაამატეთ 1 წვეთი ქლოროფორმი. ხსნარი ინახება გაყინულ მაცივარში.
სუბსტრატის ხსნარი AsAT-ის დასადგენად (ხსნარი No2). 29,2 მგ α-კეტოგლუტარის მჟავას და 2,66გ α-ასპარტინის მჟავას (1,33გ α-ასპარტინის მჟავას) ნიმუშები იწონება ანალიტიკურ ბალანსზე. შემდეგ ხსნარი მზადდება ისე, როგორც No1 ხსნარი.
სუბსტრატის ხსნარი გლუკოზაფოსფატ იზომერაზას დასადგენად. მზადდება მედინალის აცეტატის ბუფერული ხსნარი pH 7,4 (9,714 გ ნატრიუმის აცეტატი და 14,714 გ მედინალი იხსნება წყალში და მოცულობა რეგულირდება 500 მლ-მდე). შეურიეთ 8,33 მლ გლუკოზა-6-ფოსფატის დინატრიუმის მარილის 0,03 M ხსნარი 25 მლ მედიალური აცეტატის ბუფერთან; ნარევს დაუმატეთ 25 მლ 0,1 მ მარილმჟავას ხსნარი და გააზავეთ 100 მლ-მდე წყლით. შეინახეთ ცივი.
სუბსტრატის ხსნარი ლაქტატდეჰიდროგენაზას დასადგენად. შეურიეთ 1 მლ 1 M ნატრიუმის ლაქტატის ხსნარი, 9 M NaCl ხსნარი, 0.05 M Cl 2, 10 გ/ლ NAD ხსნარი. შიგთავსს ემატება 2,5 მლ 0,5 მ ფოსფატის ბუფერული ხსნარი (pH 7,4) და 1 გ/ლ ნიტროტეტრაზოლის ლურჯი ხსნარი. გამოყენებამდე ნარევს ემატება 0,25 მლ ფენანზინის მეთასულფატის ხსნარი 1 გ/ლ კონცენტრაციით.
სუბსტრატის ხსნარი ფრუქტოზის ბიფოსფატ ალდოლაზას დასადგენად. ფრუქტოზა ბიფოსფატის 270 მგ ბარიუმის მარილი იხსნება 3,5 მლ 1 M მარილმჟავაში. ემატება 1 მლ 14% ნატრიუმის სულფატის ხსნარი და წარმოქმნილი ნალექი ამოღებულია ცენტრიფუგირებით. ზენატანს დაამატეთ 1 წვეთი ნატრიუმის სულფატი. სიმღვრივის გამოჩენა მიუთითებს ბარიუმის იონების არასაკმარისად სრულ დეპონირებაზე. ამ შემთხვევაში ემატება მეტი ნატრიუმის სულფატი და ისევ ცენტრიფუგირდება. ცენტრიფუგას რეგულირდება 3% ნატრიუმის ჰიდროქსიდის ხსნარით pH 7,4-7,6, გადადის 25 მლ კოლბაში და მოცულობა რეგულირდება ნიშნულამდე. მიღებულ ხსნარს ურევენ 25 მლ ჰიდრაზინის ქლორიდის 0,56 M ხსნარს, 25 მლ მონოიოდოძმარმჟავას 0,002 M ხსნარს, 100 მლ 0,5% ნატრიუმის კარბონატის ხსნარს და 25 მლ გამოხდილ წყალს. ინახება მაცივარში.
თიმოლ-ვერონალური ბუფერი. 100 მლ მოცულობით კოლბაში შეურიეთ 80 მლ ბუფერული ხსნარი და 1 მლ თიმოლის 10%-იანი სპირტიანი ხსნარი, შეანჯღრიეთ და დაუმატეთ ბუფერული ხსნარი ნიშნულზე. pH მნიშვნელობა უნდა იყოს 7.55.
ო-ტოლუიდინის რეაგენტი. 0,15 გ თიოურა იხსნება 94 მლ გამყინვარების ძმარმჟავაში და ურევენ 6 მლ გამოხდილ ო-ტოლუიდინს. ინახება მუქ ბოთლში.
წყლით გაჯერებული ფენოლი. 35 მლ წყალს უმატებენ 100 გ გამოხდილ ფენოლს და ურევენ, ნარევი ოდნავ აცხელებენ ფენოლის დაშლის დასაჩქარებლად.
ფენოლფტალინი, სამუშაო ხსნარი. მოამზადეთ ნივთიერების 75 მგ გახსნით 15 მლ 0,1 N ნატრიუმის ჰიდროქსიდის ხსნარში, ხსნარი უნდა იყოს უფერო ან ოდნავ მოვარდისფრო, ფერადი ხსნარები არ არის შესაფერისი სამუშაოდ. რეაგენტის წინააღმდეგობის გასაზრდელად მას ემატება 3 მგ ტრილონი, რომელიც მძიმე ლითონების მარილების შეკვრით ხელს უშლის ფენოლფთალეინის აუტოქსიდაციას ატმოსფერული ჟანგბადით.
ფიბრინი. მსხვილფეხა რქოსანი სისხლის ფიბრინი ირეცხება სისხლის პიგმენტებიდან გამდინარე წყალში რამდენიმე დღის განმავლობაში, სანამ თეთრი შედედება არ მიიღება. წყალი იწურება და გლიცერინით სავსე ფიბრინი ინახება მჭიდროდ დახურულ ქილაში. გამოყენებამდე ფიბრინი გარეცხილია გლიცერინისაგან.
ფოსფორ-ვანილინის რეაგენტი. კონცენტრირებული ფოსფორის მჟავას 4 ნაწილი (მოცულობით) ურევენ ვანილინის 0,6% წყალხსნარის 1 ნაწილს. რეაგენტი ინახება მუქი შუშის კონტეინერში ოთახის ტემპერატურაზე.
ფრუქტოზა 1,6-ბისფოსფატი, ნატრიუმის მარილი. 2.0 მლ ფრუქტოზა-1,6-ბისფოსფატის ნატრიუმის მარილის 10%-იანი ხსნარი განზავებულია 25 მლ კოლბაში წყალთან ერთად ნიშნულამდე. სტაბილურია მაცივარში შენახვისას.
ფერადი რეაგენტი შარდოვანისთვის. დიაცეტილ მონოქსიმის და თიოსემიკარბაზიდის შემცველი შარდოვანას განსაზღვრის ნაკრებიდან ტაბლეტი იხსნება 50 მლ კოლბაში გაცხელებით. ხსნარი სტაბილურია სამი კვირის განმავლობაში. გამოყენებამდე შეურიეთ თანაბარი მოცულობის მომზადებული ხსნარი და 9,6% გოგირდმჟავას ხსნარი.
β-გლიცეროფოსფატის ტუტე ხსნარი. 100 მლ მოცულობის მოცულობით კოლბაში დაამატეთ 1 გ ნატრიუმის β-გლიცეროფოსფატი და 0,85 გ მედინალი, დაამატეთ დაახლოებით 30 მლ გამოხდილი წყალი, გახსენით და მოცულობა მიიყვანეთ ნიშნულამდე წყლით. 100 მლ მოცულობის სხვა მოცულობით კოლბაში დაამატეთ 50 მლ β-გლიცეროფოსფატის მომზადებული ხსნარი, 2,8 მლ 0,1 მ ნატრიუმის ჰიდროქსიდის ხსნარი და მიიყვანეთ ნიშნულამდე გამოხდილი წყლით (ხსნარის pH 8,6). დაასხით სითხეზე დაახლოებით 3 მლ ტოლუოლი. შეინახეთ ხსნარი მაცივარში არა უმეტეს 10 დღისა.
ბუფერული ხსნარების მოსამზადებლად გამოიყენება ქიმიურად სუფთა რეაგენტები. და ანალიტიკური შეფასება, სპეციალურად მომზადებული. რეაგენტები მზადდება შემდეგნაირად.
კალიუმის ფოსფატი მონოჩანაცვლებული, KH 2 PO 4 , მოლეკულური წონა 136,09. 100 გ პრეპარატი იხსნება 150 მლ წყალში ადუღებამდე გაცხელებისას. ხსნარი იფილტრება ცხელი. მუდმივი მორევით ფილტრატი გაცივდება 10 ºС-მდე. შემდეგ დაამატეთ 150 მლ ეთილის სპირტი. ფილტრატის მუდმივი მორევით გამოყოფილი კრისტალები იფილტრება შეწოვის ძაბრზე და ხელახლა კრისტალიზდება იმავე პირობებში; კრისტალები აშრობენ მუდმივ წონამდე 105...110 ºС. პრეპარატის თანდასწრებით ძირითადი ნივთიერების შემცველობით 99,9 ... 100,0% დიაპაზონში, ნივთიერების წინასწარი მომზადება არ ხორციელდება.
ნატრიუმის ფოსფატი, Na 2 HPO 4 12H 2 O, მოლეკულური წონა 358,12. პრეპარატის მომზადების ორი გზა არსებობს.
ა) 150 გ პრეპარატი იხსნება 150 მლ წყალში 100 0 C-მდე გაცხელებისას. ხსნარი იფილტრება ცხლად და გაციების შემდეგ, ნალექის კრისტალები ფილტრავენ. ხელახალი კრისტალიზაცია მეორდება 100 ºС-მდე გაცხელებით. რეკრისტალიზებული პრეპარატი თბება ფაიფურის ჭიქაში წყლის აბაზანაში განუწყვეტელი მორევით, სანამ პრეპარატი მთლიანად არ გაშრება. მიღებულ მარილს აშრობენ დეზიკატორში დადებულ კალციუმის ქლორიდზე დღის განმავლობაში. რეკრისტალიზებულ პრეპარატში (Na 2 HPO 4 · 2H 2 O) მოწმდება ძირითადი ნივთიერების შემცველობა. ამისათვის დაახლოებით 0,5000 გ პრეპარატი იხსნება 50 მლ წყალში, ემატება 2 ... 3 მლ გაჯერებული ნატრიუმის ქლორიდის ხსნარი და ტიტრირდება 0,1 N მარილმჟავას ხსნარით მეთილის წითელი ინდიკატორის თანდასწრებით. . საჭიროების შემთხვევაში, შეასწორეთ ნიმუშის ზომა. ზუსტად 0,1 N მარილმჟავას 1 მლ შეესაბამება 0,0178 გ Na 2 HPO 4 2H 2 O.
ბ) 75 გ პრეპარატი იხსნება 60 ºС-მდე გახურებულ 250 მლ წყალში. ხსნარი იფილტრება ცხლად, ფილტრატი ცივდება მუდმივი მორევით 10 ºС-მდე. დალექილი კრისტალები იფილტრება შეწოვის ძაბრზე და ხელახლა კრისტალიზდება იმავე პირობებში. მიღებულ მარილს ჯერ აშრობენ არაუმეტეს 30ºС ტემპერატურაზე 24 საათის განმავლობაში, შემდეგ აგრძელებენ გაშრობას ღუმელში 50ºС-ზე 3-4 საათის განმავლობაში და ბოლოს 120±5ºС-ზე მუდმივ წონამდე, რაც ხელს უშლის მარილის წარმოქმნას. დნობის. გაშრობის შემდეგ მარილს აქვს შემადგენლობა Na 2 HPO 4 .
რეაგენტების მომზადების შემდეგ ამზადებენ კალიუმის ფოსფატის მონოჩანაცვლებული და ნატრიუმის ფოსფატის დისპსტიტუციურ ხსნარებს.
უწყლო კალიუმის ფოსფატის მონოშემცვლელი KH 2 PO 4 9,078 გ მასის ნაწილი იხსნება წყალში და ხსნარის მოცულობა რეგულირდება 1 ლიტრამდე. ხსნარის სტაბილიზაციისთვის დაამატეთ 3-4 წვეთი ტოლუოლი.
ნატრიუმის ფოსფატის ნატრიუმის ფოსფატის დისკუსია Na 2 HPO 4 12H 2 O, მასით 11,876 გ, იხსნება წყალში და ხსნარის მოცულობა რეგულირდება 1 ლიტრამდე. ხსნარის სტაბილიზაციისთვის დაამატეთ 3-4 წვეთი ტოლუოლი.
საწყისი ხსნარებიდან მოამზადეთ ფოსფატის ბუფერული ხსნარები 4,94-დან 9,18-მდე pH-ით, A.2-ის შესაბამისად.
ცხრილი A.2 - ფოსფატის ბუფერული ხსნარი pH 4,94 ... 9,18
| pH | Na 2 HPO 4 12H 2 O ხსნარი, მლ | KH 2 PO 4 ხსნარი, მლ |
| 4,94 | 1,0 | 99,0 |
| 5,29 | 2,5 | 97,5 |
| 5,59 | 5,0 | 95,0 |
| 5,91 | 10,0 | 90,0 |
| 6,24 | 20,0 | 80,0 |
| 6,47 | 30,0 | 70,0 |
| 6,64 | 40,0 | 60,0 |
| 6,81 | 50,0 | 50,0 |
| 6,98 | 60,0 | 40,0 |
| 7,17 | 70,0 | 30,0 |
| 7,38 | 80,0 | 20,0 |
| 7,73 | 90,0 | 10,0 |
| 8,04 | 95,0 | 5,0 |
| 8,34 | 97,5 | 2,5 |
| 8,67 | 99,0 | 1,0 |
| 9,18 | 100,0 | 0,0 |
დამატების თარიღი: 2015-08-06 | ნახვები: 4058 |
ბუფერული ხსნარების pH გამოითვლება ჰენდერსონ-ჰასელბახის განტოლების მიხედვით:
– მჟავა ბუფერისთვის განტოლებას აქვს ფორმა
– ძირითადი ბუფერისთვის
განტოლებები აჩვენებს, რომ მოცემული შემადგენლობის ბუფერული ხსნარის pH განისაზღვრება მჟავისა და მარილის ან ფუძისა და მარილის კონცენტრაციების თანაფარდობით და, შესაბამისად, არ არის დამოკიდებული განზავებაზე. როდესაც ხსნარის მოცულობა იცვლება, თითოეული კომპონენტის კონცენტრაცია იცვლება იმავე რაოდენობით.
ბუფერული სიმძლავრე
ბუფერული ხსნარების უნარი შეინარჩუნოს მუდმივი pH შეზღუდულია. იმათ. მჟავას ან ტუტეს დამატება ბუფერული ხსნარის pH-ის მნიშვნელოვანი ცვლილების გარეშე შესაძლებელია მხოლოდ შეზღუდული რაოდენობით.
მნიშვნელობა, რომელიც ახასიათებს ბუფერული ხსნარის უნარს, დაუპირისპირდეს გარემოს რეაქციის ცვლილებას მჟავებისა და ტუტეების დამატებისას, ეწოდება ხსნარის ბუფერული სიმძლავრე (B).
ბუფერული სიმძლავრე იზომება ძლიერი მჟავის ან ფუძის მოლური ეკვივალენტების რაოდენობით, რომელთა დამატება 1 ლიტრ ბუფერულ ხსნარში ცვლის pH-ს ერთით.
მათემატიკურად, ბუფერული სიმძლავრე განისაზღვრება შემდეგნაირად:
B მჟავით (მოლ/ლ ან მმოლ/ლ):
,
სადაც n(1/z HA) არის მჟავის მოლური ეკვივალენტების რაოდენობა, pH 0 და pH არის ბუფერული ხსნარის pH მჟავის დამატებამდე და მის შემდეგ, V B არის ბუფერული ხსნარის მოცულობა.
ტუტეში (მოლ/ლ ან მმოლ/ლ):
,
სადაც n (1/z VOH) არის ტუტეს მოლური ეკვივალენტების რაოდენობა, დანარჩენი აღნიშვნები იგივეა.
ბუფერული სიმძლავრე დამოკიდებულია რამდენიმე ფაქტორზე:
1. ბუფერული ხსნარის დამატებული ნივთიერებებისა და კომპონენტების ბუნებიდან. იმიტომ რომ ზოგიერთ ნივთიერებას შეუძლია შექმნას უხსნადი ნაერთები ან კომპლექსები ან გამოიწვიოს სხვა არასასურველი რეაქციები ბუფერული სისტემის კომპონენტებთან, მაშინ ბუფერული სიმძლავრის კონცეფცია კარგავს თავის მნიშვნელობას.
2. ბუფერული სისტემის კომპონენტების საწყისი კონცენტრაციიდან.
რაც უფრო მეტია მჟავა-ტუტოვანი წყვილის კომპონენტების რაოდენობა ხსნარში, მით მეტია ამ ხსნარის ბუფერული ტევადობა.
ბუფერული ხსნარის კომპონენტების კონცენტრაციების შეფარდების ზღვარი, რომლის დროსაც სისტემა კვლავ ინარჩუნებს თავის თვისებებს. pH ინტერვალი = pK ± 1 ეწოდება სისტემის ბუფერული მოქმედების ზონას. ეს შეესაბამება თანაფარდობის დიაპაზონს მარილით /C თქვენთან 1/10-დან 10/1-მდე.
B-დან (სისხლამდე) \u003d 0,05 მოლ/ლ; B-დან (პლაზმამდე) \u003d 0,03 მოლ/ლ; B-დან (შრატის სისხლი) = 0,025 მოლ/ლ
სისხლის ბუფერული სისტემები
ბუფერული სისტემები განსაკუთრებით მნიშვნელოვანია ორგანიზმების მჟავა-ტუტოვანი ბალანსის შესანარჩუნებლად. უჯრედშიდა სითხეების უმეტესობის pH მნიშვნელობა 6.8-დან 7.8-მდეა.
ადამიანის სისხლში მჟავა-ბაზისური ბალანსი უზრუნველყოფილია ჰიდროკარბონატული, ფოსფატური, ცილოვანი და ჰემოგლობინის ბუფერული სისტემებით. სისხლის პლაზმის ნორმალური pH არის 7,40 ± 0,05.
ჰემოგლობინის ბუფერული სისტემა უზრუნველყოფს სისხლის 35% ბუფერულ სიმძლავრეს: 
. ოქსიჰემოგლობინი უფრო ძლიერი მჟავაა, ვიდრე შემცირებული ჰემოგლობინი. ოქსიჰემოგლობინი ჩვეულებრივ არის კალიუმის მარილის სახით.
კარბონატული ბუფერული სისტემა :
ძალაუფლების მიხედვით პირველ ადგილზეა. იგი წარმოდგენილია ნახშირბადის მჟავით (H 2 CO 3) და ნატრიუმის ან კალიუმის ბიკარბონატით (NaHCO 3, KHCO 3) 1/20 თანაფარდობით. ბიკარბონატის ბუფერი ფართოდ გამოიყენება ორგანიზმში მჟავა-ტუტოვანი დარღვევების გამოსასწორებლად.
ფოსფატის ბუფერული სისტემა 
.
დიჰიდროფოსფატს აქვს სუსტი მჟავის თვისებები და ურთიერთქმედებს ტუტე პროდუქტებთან, რომლებიც შედიან სისხლში. ჰიდროფოსფატს აქვს სუსტი ტუტეს თვისებები და რეაგირებს უფრო ძლიერ მჟავებთან.
ცილის ბუფერული სისტემა ასრულებს მჟავებისა და ტუტეების განეიტრალების როლს მისი ამფოტერული თვისებების გამო: მჟავე გარემოში პლაზმის ცილები იქცევიან ფუძეებად, ძირითადში - მჟავების მსგავსად: 
ბუფერული სისტემები ასევე გვხვდება ქსოვილებში, რაც ხელს უწყობს ქსოვილების pH-ის შენარჩუნებას შედარებით მუდმივ დონეზე. ქსოვილის ძირითადი ბუფერებია ცილები და ფოსფატები. pH-ის შენარჩუნება ასევე ხორციელდება ფილტვებისა და თირკმელების დახმარებით. ჭარბი ნახშირორჟანგი გამოიყოფა ფილტვების მეშვეობით. აციდოზის დროს თირკმელები გამოყოფენ უფრო მეტ მჟავას მონობაზური ნატრიუმის ფოსფატს, ხოლო ალკალოზის დროს - მეტ ტუტე მარილებს: ნატრიუმის ორფუძიანი ფოსფატი და ნატრიუმის ბიკარბონატი.
პრობლემის გადაჭრის მაგალითები
გამოსავალი:
ჩვენ ვიანგარიშებთ მჟავა ბუფერული ხსნარის pH-ს ფორმულის გამოყენებით, შემდეგ
პასუხი: 5,76
გამოსავალი:
ჩვენ ვიანგარიშებთ ბუფერულ სიმძლავრეს ფორმულის გამოყენებით: 
პასუხი: 0,021 მოლ/ლ
მაგალითი 3
ბუფერული ხსნარი შედგება 100 მლ 0,1 მოლ/ლ ძმარმჟავას და 200 მლ 0,2 მოლ/ლ ნატრიუმის აცეტატისგან. როგორ შეიცვლება ამ ხსნარის pH, თუ მას დაემატება 30 მლ 0,2 მოლ/ლ ნატრიუმის ჰიდროქსიდის ხსნარი.
გამოსავალი:
ჩვენ ვიანგარიშებთ ბუფერული ხსნარის pH-ს ფორმულის გამოყენებით:
როდესაც NaOH ემატება ბუფერულ ხსნარს, მარილის რაოდენობა იზრდება და მჟავის რაოდენობა ბუფერულ ხსნარში მცირდება:
0,006 0,006 0,006
CH 3 COOH + NaOH \u003d CH 3 COONa + H 2 O
ჩვენ ვიანგარიშებთ n (NaOH) \u003d 0,03 ლ 0,2 მოლი / ლ \u003d 0,006 მოლი, შესაბამისად, ბუფერულ ხსნარში მჟავის რაოდენობა მცირდება 0,006 მოლ-ით, ხოლო მარილის რაოდენობა იზრდება 0,006 მოლ-ით.
ჩვენ ვიანგარიშებთ ხსნარის pH-ს ფორმულის გამოყენებით:
აქედან გამომდინარე: pH 2 - pH 1 = 5.82 - 5.3 = 0.52
პასუხი:ბუფერული pH ცვლილება = 0.52.
ამოცანები დამოუკიდებელი გადაწყვეტისთვის
4. 2 მლ სისხლის ტიტრირებისთვის pH საწყისი მნიშვნელობიდან (7.36) საბოლოო მნიშვნელობამდე (7.0) შესაცვლელად საჭირო იყო 1.6 მლ 0.01 M HCl ხსნარის დამატება. გამოთვალეთ მჟავა ბუფერული სიმძლავრე.
5. რამდენი მოლი ნატრიუმის აცეტატი უნდა დაემატოს 300 მლ ძმარმჟავას, რათა წყალბადის იონების კონცენტრაცია 300-ჯერ შემცირდეს (K dis (CH 3 coon) = 1,85,10 -5).
6. ბიოქიმიურ კვლევებში გამოიყენება ფოსფატის ბუფერი pH = 7,4. რა თანაფარდობით უნდა იყოს შერეული ნატრიუმის წყალბადოფოსფატის და ნატრიუმის დიჰიდროფოსფატის ხსნარები 0,1 მოლ / ლ კონცენტრაციით, რათა მიიღოთ ასეთი ბუფერული ხსნარი (pK (H 2 PO 4 -) \u003d 7.4).
7. CBS-ის რა დარღვევები შეინიშნება შემდეგი მაჩვენებლებით: სისხლის pH = 7,20, Pco 2 = 38 მმ Hg. არტ., BO = 30 მმოლ/ლ, SBO = -4 მმოლ/ლ. როგორ აღმოიფხვრას KOS-ის ეს დარღვევა?
სატესტო დავალებები
Tween-20 ფოსფატის სარეცხი ბუფერი იმუნოჰისტოქიმიისთვის არის კონცენტრატი (20x), რომელიც განზავების შემდეგ გამოიყენება რეაგენტების სლაიდების გასარეცხად და იმუნოჰისტოქიმიური ნიმუშების მოკლევადიანი შესანახად პროცედურებს შორის. განზავების შემდეგ, გამოსაყენებლად მზა 0,01 M ხსნარს აქვს pH 7,4±0,1. ამ ფოსფატის ბუფერული მარილის გამოყენება საშუალებას იძლევა არა მხოლოდ უზრუნველყოს მაღალი ხარისხის რეცხვა, არამედ შეინარჩუნოს გამოყენებული ანტისხეულების მორფოლოგიური მახასიათებლები და მათი ეპიტოპები, რაც ხელს უწყობს იმუნოჰისტოქიმიური რეაქციისთვის საჭირო სპეციფიკურ შეკავშირებას. Tween-20-ის დამატება PBS-ში ხელს უწყობს უფრო ეფექტურ რეცხვას და ხელს უშლის არასპეციფიკურ შეღებვას.
|
|
|
ჩვენი უპირატესობები:
ამჟამად ვთანამშრომლობთ ლაბორატორიული რეაგენტების წამყვან უცხოურ მწარმოებლებთან. ჩვენი კლიენტები არიან როგორც არასახელმწიფო, ისე სახელმწიფო დაწესებულებები, მათ შორის სამედიცინო ორგანიზაციები მოსკოვში და რუსეთის სხვა ქალაქებში. რეგულარული მომხმარებლისთვის მოქმედებს ფასდაკლების სისტემა.
მსგავსი სტატიები
-
რუსეთის ფედერაციის მთავრობის დადგენილება 307
თუ კონტრაქტორი არის სახლის მესაკუთრეთა პარტნიორობა, საბინაო მშენებლობა, საბინაო ან სხვა სპეციალიზებული სამომხმარებლო კოოპერატივი ან მმართველი ორგანიზაცია, მაშინ კომუნალური გადასახადის ოდენობის გაანგარიშება და ...
-
როგორ შევამციროთ პოტენცია მამაკაცებში?
ზოგჯერ მამაკაცის გაზრდილმა პოტენციალმა შეიძლება გამოიწვიოს არანაკლებ დისკომფორტი, ვიდრე დაბალი. ძლიერი სქესის ზოგიერთ წარმომადგენელს სურს ლიბიდოს დონის შემცირება, რადგან ერექცია დღეში ათჯერ ხდება. განსაკუთრებით ეს ტენდენცია...
-
ქონების დაზღვევა AlfaStrakhovanie-ში ალფა ქონების დაზღვევის წესები ერთი წლის განმავლობაში
მომსახურება VIP კლიენტებისთვის როგორ გავხდეთ VIP კლიენტი დაზღვევის სახეები ავტო დაზღვევა ბიზნეს საავიაციო დაზღვევა ქონების დაზღვევა იახტებისა და ნავების დაზღვევა კულტურული ქონების დაზღვევა ჯანმრთელობის საერთაშორისო დაზღვევა დაზღვევა...
-
რატომ ოცნებობთ ღალატზე ოცნების წიგნის მიხედვით ოცნების ინტერპრეტაცია სიზმრების ინტერპრეტაცია რატომ ოცნებობთ ღალატზე
ს. კარატოვის ოცნების ინტერპრეტაცია რატომ ოცნებობთ ღალატზე ოცნების წიგნის მიხედვით: ღალატი, შეცვლა - იმის დანახვა, რომ მოგატყუებენ, თქვენი ერთგულების ნიშანია. იმის დანახვა, რაც შეცვალე, დანაკარგია. ასევე იხილეთ: რაზე ოცნებობს ცოლი, რა ოცნებობს ქმარი, რაზე ოცნებობს ...
-
რატომ არის გაჟღენთილი ბრინჯი უფრო ჯანსაღი წონის დაკლებისთვის და როგორ მოვამზადოთ ის სწორად?
კვების საკითხები დიდი პოპულარობით სარგებლობს თანამედროვე ადამიანებში, განსაკუთრებით მათში, ვისაც სურს თავი დააღწიოს არასაჭირო წონას. არსებობს ორი საპირისპირო მოსაზრება ბრინჯის კვების სისტემის და გამოყენებული საკვების შესახებ, როგორიცაა ყავისფერი და ...
-
ფოსფატის ბუფერული ხსნარის მომზადება
ბიოლოგიური მასალის შეგროვებისა და მომზადების მოთხოვნები ჰემატოლოგიური კვლევებისთვის ბიოლოგიური მასალის ტრანსპორტირებისა და შენახვის მოთხოვნები ჰემატოლოგიური კვლევებისთვის. სწორი...