Keperluan untuk pengumpulan dan penyediaan bahan biologi untuk kajian hematologi.

Keperluan untuk pengangkutan dan penyimpanan bahan biologi untuk kajian hematologi.

Pengisian arah yang betul untuk kajian sistem hemostasis:

Nama penuh, umur, jantina pesakit

Masa pensampelan darah untuk penyelidikan

Diagnosis klinikal (secara ringkas)

Hematokrit

Sindrom hemoragik (hidung, pendarahan rahim, dll.), trombosis (menunjukkan penyetempatan), kejutan, kegagalan organ berbilang, trauma, sindrom mampatan berpanjangan, terbakar, dll.)

Nyatakan ubat yang diambil yang mempengaruhi parameter hemostasis, menunjukkan dos, kaedah dan tarikh pentadbiran terakhir

Selang masa untuk pensampelan (darah), sekatan diet dan senaman diperhatikan:

Pensampelan darah berjadual dijalankan dari 7 hingga 9 jam pagi dengan pesakit berbaring atau duduk. Apabila mengkaji hemostasis dalam dinamik, adalah wajar untuk mengambil darah dalam kedudukan badan yang sama seperti yang sebelumnya.

Darah diambil semasa perut kosong, 12-14 jam selepas makan terakhir.

Sebelum mengambil darah, adalah wajar pesakit berehat selama 15 minit.

Pengecualian: kajian hemostasis oleh cito, penilaian APTT.

Pada malam sebelum kajian yang dirancang (dalam masa 24 jam), pesakit menahan diri dari penting aktiviti fizikal, pengambilan alkohol. Adalah wajar bahawa pesakit tidak makan makanan berlemak pada malam sebelum pensampelan darah.

Campur tangan pembedahan membawa kepada perubahan hemostasis untuk tempoh beberapa hari hingga beberapa minggu.

Faktor-faktor yang mempengaruhi e hemostasis termasuk suntikan, infusi, transfusi, tusukan, biopsi, urutan, dialisis, pengenalan agen radiopak, imunoscintiografi, sinaran mengion, pemeriksaan endoskopik, diet khas.

PERATURAN UNTUK PENSAMPELAN DARAH

Darah diambil dari vena periferi (biasanya cubital).

Pensampelan darah hanya dijalankan menggunakan sistem pensampelan vakum dalam tabung uji dengan tanda warna khas bergantung kepada antikoagulan yang digunakan ( natrium sitrat 3.2%) dalam nisbah: 1 isipadu natrium sitrat kepada 9 isipadu darah.

Untuk penyelidikan paras platelet mengambil darah dalam tabung uji dengan EDTA(pengekodan warna ungu). Kajian tahap platelet ditetapkan sekiranya tiada ujian darah klinikal atau apabila nilai patologi tahap platelet diperolehi dalam ujian darah klinikal.

Tourniquet pendek dibenarkan, tidak lebih daripada 60 saat. Keluarkan tourniquet sejurus selepas jarum telah memasuki vena. Untuk pensampelan darah untuk kajian sistem pembekuan, adalah penting bahawa anda tidak boleh mengurut urat, mengetuknya.

Gunakan jarum pengumpul darah dengan diameter dalaman 0.7-1 mm (saiz 19-22).

Penggunaan picagari tidak boleh diterima kerana pengaktifan platelet dan faktor pembekuan darah oleh pergerakan bergelora darah dan percampurannya dengan udara (berbuih). Ia dikecualikan apabila menggunakan bekas vakum.

Selepas memasukkan jarum ke dalam urat, pasangkan bekas vakum, darah akan mula mengalir ke dalam bekas secara graviti.

Ambil darah untuk pemeriksaan koagulologi kedua tabung uji, penggunaan pertama untuk kajian lain, contohnya, biokimia. Jika tabung uji pembekuan hendak diambil dahulu, tarik 5 ml darah pertama ke dalam tabung kosong dan buang ke menghalang tromboplastin tisu daripada memasuki sampel.

Perlahan-lahan campurkan darah sejurus selepas pengumpulan tanpa berbuih dengan antikoagulan (terbalikkan tiub 3-4 kali).

Selepas pensampelan bahan biologi, periksa sampel darah. Pemeriksaan sampel darah yang tepat mengelakkan ralat berikut: nisbah isipadu darah/sitrat yang tidak betul; darah beku separa.

Darah dihantar ke makmal dalam masa 45 minit selepas pengumpulannya. Semasa pengangkutan, darah tidak boleh digoncang. Sampel darah tidak boleh diangkut pada suhu di bawah 4°C dan melebihi 30°C.

Pembantu makmal paramedik (ahli teknologi perubatan) menjalankan:

kawalan input darah yang dihantar, termasuk: 1) menyemak ketepatan mengisi borang rujukan. 2) memeriksa kecukupan isipadu darah yang dihantar mengikut label pada tiub, 3) memeriksa sampel untuk ketiadaan bekuan apabila tiub perlahan-lahan condong.

sentrifugasi darah yang dihantar untuk mendapatkan:

plasma kaya platelet ( parameter sentrifugasi: rpm = 1000 rpm (kira-kira 150-200g), masa sentrifugasi 5-7 minit.

Untuk pemilihan keadaan optimum sentrifugasi dipandu oleh daya emparan (g). Anda boleh menggunakan formula:

g = 1.118 x 0.00001r x n2,

di mana r ialah jejari emparan - jarak dalam sentimeter antara paksi pemutar dan pusat tabung uji di tempat duduk emparan; n ialah bilangan pusingan seminit.

plasma miskin platelet parameter sentrifugasi: rpm = ~2500-3000 rpm (kira-kira 1500-2000g), masa sentrifugasi 10-20 minit. Untuk penyingkiran lengkap platelet, sentrifugasi berulang dilakukan, parameter sentrifugasi tetap sama.

3. Selepas sentrifugasi, periksa plasma untuk warna dan ketelusan: sampel hemolisis, plasma ikterik atau lipemik (chylous) tidak tertakluk kepada pemeriksaan.

Selepas sentrifugasi, supernatan dikeluarkan.

Diingini mengkaji parameter hemostasis semasa 2 jam selepas pensampelan darah, tetapi dibenarkan kajian parameter koagulologi dalam dalam masa 4 jam jika plasma telah dipisahkan daripada sedimen eritrosit dan leukosit.

Jika perlu penyimpanan jangka panjang sampel "segar" (selewat-lewatnya 2 jam selepas pensampelan darah) plasma tanpa platelet boleh sekali untuk membeku dan simpan sehingga 2 minggu pada -20°C atau sehingga 6 bulan pada -70°C. Plasma mesti dicairkan dengan cepat air suam(+36°C), gaul sebati dan periksa dengan segera. Selepas pembekuan, perubahan dalam APTT adalah mungkin.

Kaedah penyediaan mikropreparasi untuk kajian hematologi, kaedah penetapan dan pewarnaan.

Kaedah menyediakan smear darah untuk kajian hematologi.

Penyediaan dan pemprosesan cermin mata. Cermin mata bersih baru boleh digunakan selepas degreasing dalam campuran Nikiforov (bahagian yang sama 96% etil alkohol dan eter). Gelas yang digunakan direndam selama sehari dalam larutan sabun hangat atau larutan serbuk pencuci (1 sudu besar serbuk setiap 5 liter air). Sehari kemudian, larutan disalirkan, gelas dibasuh dengan air yang mengalir. Kemudian mereka sekali lagi dituangkan dengan larutan sabun hangat atau larutan serbuk pencuci dan didihkan, direbus dalam larutan yang sama selama 5-10 minit (tidak lebih, untuk mengelakkan kaca mata menjadi kabur). Selepas menyejukkan penyelesaian, ia disalirkan semula, slaid dibilas dengan air yang mengalir, dan setiap slaid dibasuh dengan berus di bawah air yang mengalir. Cermin mata yang dirawat dengan cara ini dibentangkan pada helaian bersih untuk kering. Cermin mata bersih untuk degreasing diletakkan dalam campuran Nikiforov atau 96% etil alkohol selama 60 minit, kemudian disapu kering dan disimpan dalam bekas bersih dengan leher lebar. Cermin mata bersih disyorkan untuk diambil sama ada dengan pinset atau dengan tangan di tepi tepi.

Penyediaan smear. Setitik kecil darah disapu pada slaid kaca kering yang disediakan lebih dekat dengan bahagian pendek dengan batang kaca (atau terus dari tapak tusukan jari). Biarkan kaca dalam kedudukan mendatar dan sapukan darah pada kaca dengan kaca yang kering, bersih, dikisar, pegang pada sudut 45°. Dengan tepi pendek, selepas menunggu sehingga semua darah tersebar di atasnya, mereka dengan cepat ditarik ke atas slaid kaca. Tekanan kuat pada slaid kaca tidak sepatutnya, kerana ini boleh merosakkan sel darah. Calitan dikeringkan di udara dan ditanda (sebaik-baiknya dengan pensel ringkas). Sapuan kering hendaklah sama rata nipis, berwarna kekuningan, saiz yang mencukupi, terletak pada jarak 1.0-1.5 cm dari tepi kaca, menduduki hampir keseluruhan panjang kaca dan berakhir dengan "panicle". Calitan tebal (merah jambu dalam) tidak boleh digunakan, kerana morfologi sel sukar untuk dibezakan di dalamnya.

Calitan kualiti standard diperoleh menggunakan peranti automatik yang direka untuk penyediaan calitan dan dikeluarkan oleh pelbagai syarikat.

Penetapan dan pewarnaan smear darah. Sebelum mengotorkan, smear darah biasanya ditetapkan selama 5-10 minit dalam metil alkohol untuk mengelakkan hemolisis, yang boleh berlaku apabila bersentuhan dengan air semasa proses pewarnaan dengan pewarna larut air atau apabila bersentuhan seterusnya dengan air. Teknik penetapan diterangkan di bawah bersama dengan teknik pewarnaan. Penetapan tidak diperlukan untuk pewarnaan Wright dan Leishman, kerana kotoran ini mengandungi metil alkohol.

Sapuan kering boleh disimpan selama 2 hari di tempat yang kering dan hangat; dalam suasana panas dan lembap tanpa penetapan, ia disimpan lebih sedikit.

Sel darah mengandungi struktur basofilik dan asidofilik yang berbeza dalam tindak balas (pH). Nukleus adalah basofilik dan berwarna biru. Butiran basofil yang sangat basofilik (berasid) juga berwarna biru. Hemoglobin (menjadi asas) mengotorkan asidofilik, iaitu merah. Pewarnaan dengan gabungan pewarna berasid dan asas dipanggil pewarnaan Romanovsky dan mempunyai pelbagai pengubahsuaian (Pappenheim, Wright, Noht, Leishman, Giemsa, Jayner, dll.). Methylene blue biasanya digunakan sebagai pewarna utama, tetapi toluidine blue juga digunakan. Sebagai pewarna asid, eosin, azure I dan azure II digunakan.

Kriteria untuk pewarnaan yang baik: warna merah jambu eritrosit, pewarnaan ungu kebutiran neutrofil pada latar belakang merah jambu, kebutiran azurofilik lembut bagi monosit.

Untuk mencairkan cat, lebih baik menggunakan air suling segar neutral. Air suling basi menjadi berasid kerana penangkapan karbon dioksida dari atmosfera. Jika air suling beralkali, sel darah merah bertukar menjadi warna hijau kebiruan yang kotor; bahagian leukosit yang sepatutnya diwarnakan biru menjadi ungu, butiran eosinofil menjadi kebiruan dan kehijauan bukannya merah jambu, dan butiran neutrofil dikekalkan. Dalam air berasid, eritrosit menjadi jingga terang, dan nukleus leukosit sangat pucat. Yang ideal ialah air suling dengan pH 7.0, yang ditampan untuk memeliharanya. Anda boleh menggunakan tablet penimbal sedia untuk digunakan yang dilarutkan dalam air suling.

Untuk mengotorkan calitan sumsum tulang, pewarnaan pH 7.4-7.5 adalah sesuai.

Kaedah pewarnaan mengikut Noht dan Pappenheim diterima sebagai bersatu.

Reagen untuk penetapan: 1) metil alkohol atau 2) larutan May-Grunwald eosin-metilena biru.

Reagen untuk pewarnaan smear mengikut Nokht: 1) penyelesaian asas azure I: 1 g cat dibubarkan dalam 1 liter air suling, dibiarkan dalam pinggan kaca gelap selama 12-14 hari pada suhu bilik, selepas itu ia digunakan; 2) larutan asas kalium eosin: 1 g cat dibubarkan dalam 1 liter air suling, dibiarkan dalam bekas kaca gelap selama 12-14 hari pada suhu bilik, selepas itu ia digunakan; 3) penampan fosfat (campuran Weise), pH 7.4-7.5: campurkan 0.49 g kalium dihidrogen fosfat (KH2PO4) dan 0.909 g natrium hidrogen fosfat (Na2HPO4) dan larutkan dalam 1 liter air suling; 4) penyelesaian kerja azure-eosin: sebelum digunakan, campurkan 25 ml larutan stok azure II, 20 ml larutan stok kalium eosin dan 55 ml larutan penampan (perkadaran pewarna mungkin berbeza-beza, ia ditetapkan secara empirik apabila menyediakan kumpulan baru penyelesaian stok).

Reagen untuk smear pewarnaan mengikut Pappenheim: 1) larutan eosin-metilena biru mengikut May-Grunwald. Sekiranya tiada larutan pewarna siap sedia, ia disediakan dengan melarutkan 1 g cat kering dalam 1 liter metil alkohol; 2) penyelesaian kerja azure-eosin mengikut Nokht.

Penetapan calitan. Larutan penetapan dituangkan ke dalam kuvet atau ke dalam hidangan bermulut lebar dengan penyumbat tanah. Calitan diletakkan di dalam bekas, yang direndam dalam kuvet atau diletakkan satu demi satu dalam pinggan selama 5-10 minit. Bekas dengan gelas dikeluarkan dari larutan penetapan (atau gelas dikeluarkan dengan pinset dan diletakkan di dalam dirian) dan dibiarkan di udara sehingga benar-benar kering.

Mewarna mengikut Nocht. Calitan tetap kering, tanpa dikeluarkan dari bekas, diletakkan dalam kuvet dengan larutan cat yang berfungsi untuk masa yang ditetapkan dengan ketat (20-45 minit), yang dipilih secara empirik untuk setiap kelompok cat. Sekiranya tiada kuvet dengan bekas, gelas diletakkan secara mendatar pada dua batang kaca ("rel") yang diletakkan selari dengan lejang ke atas dan 3-4 ml larutan cat yang berfungsi dituangkan ke atasnya. Bekas dengan gelas dikeluarkan dari kuvet dengan pewarna dan diletakkan di dalam kuvet dengan air paip (jika tiada bekas, cat dari gelas dibasuh dengan air tanpa mengeluarkannya dari batang kaca). Calitan dikeringkan di udara.

Pewarna Pappenheim. Calitan darah tidak tetap kering diletakkan di dalam bekas dan diturunkan ke dalam kuvet dengan larutan May-Grunwald selama 3-5 minit (atau 3-4 ml pewarna dituangkan ke atas sapuan tidak tetap dengan pipet). Bekas dengan calitan dibilas dalam kuvet dengan air suling, dan kemudian diletakkan dalam kuvet dengan pewarnaan azure-eosin mengikut Nokht selama 8-15 minit. Air suling ditambah ke slaid yang diletakkan di atas "rel", tanpa mengeringkan pewarna, selama 1 minit, dan kemudian cat dituangkan ke atas smear selama 8-15 minit, kemudian cat dibasuh dengan air. Calitan dikeringkan di udara.

Mewarna mengikut Romanovsky-Giemsa. Dihasilkan dengan cara yang sama seperti menurut Nokht. Sebagai pewarna, penyelesaian Romanovsky-Giemsa siap sedia digunakan, yang dicairkan sebelum digunakan pada kadar 1 titis pewarna setiap 1 ml air suling. Masa pewarnaan ditetapkan secara empirik untuk setiap kelompok pewarna (25–40 min).

pewarna Wright. Reagen. 0.2 g pewarna Wright (serbuk kering, BDH/E. Merck) dilarutkan dalam 100 ml metanol dan dibiarkan selama beberapa hari. Jika eritrosit tidak diwarnakan dengan cukup jelas, sediakan larutan 0.25% atau 0.3%.

Kemajuan mewarna. Beberapa (kira-kira 8) titis cat disapu pada sapuan, dibiarkan selama 2-3 minit (pastikan cat tidak kering), kemudian jumlah air buffer yang sama dituangkan ke atas sapuan. Jika cat telah matang, buih atau filem dengan kilauan logam akan muncul pada permukaan cat yang dicairkan. Cat yang dicairkan dibiarkan pada smear selama 2-3 minit, dan kemudian dibasuh dengan larutan penampan atau air. Cat tidak boleh dibiarkan mendap pada permukaan sapuan. Jika ini berlaku, smear diisi dengan cat yang tidak dicairkan selama 15-20 saat dan kemudian sekali lagi dengan larutan penimbal atau air.

Penyediaan penimbal fosfat.

Larutan A (0.2 M KH2PO4): Larutkan 27.2 g garam dalam 1 liter air suling.

Larutan B (0.2 M Na2HPO4): Larutkan 35.6 g Na2HPO4 × 2H20 dalam 1 liter air suling.

Untuk mendapatkan 100 ml larutan penimbal dengan pH yang dikehendaki, larutan A dan B hendaklah disalirkan dalam jumlah yang ditunjukkan dalam jadual. Nilai pH diperiksa dengan meter pH.

Penyediaan larutan penimbal fosfat

Penyelesaian, ml	nilai pH

Mewarna Leishman. Reagen. 0.15 g cat kering Leishman dilarutkan dalam 133 ml alkohol metil mutlak. Cat harus larut sepenuhnya, adalah dinasihatkan untuk mengisar kristal cat dalam mortar terlebih dahulu. Simpan cat dalam botol dengan penyumbat kaca, jangan tapis.

Kemajuan mewarna. Dilakukan sama dengan pewarnaan Wright, tetapi dengan pencairan dua kali ganda larutan penimbal. Beberapa titik cat (kira-kira 8) dituangkan ke atas sapuan, disimpan selama 2 minit. Tambah dua kali ganda larutan penimbal (16 titis), kacau dengan goyang dan biarkan selama 7-10 minit. Cat dibasuh dengan air suling dalam 2-3 saat. Dengan pencucian yang lebih lama, warnanya semakin merosot. Calitan dikeringkan dalam rak di udara.

Menyediakan titisan darah yang tebal. Tiga titis darah yang disapu pada slaid kaca pada jarak tertentu antara satu sama lain dikembangkan dengan sudut slaid kaca bersih kepada saiz kira-kira 1 cm diameter, ditandakan dengan pensil, kemudian dikeringkan di udara selama 1-2 jam.

Mewarnai titisan darah yang pekat. Titisan darah tebal tidak tetap. Slaid kaca dengan titisan tebal yang dikeringkan dengan baik diletakkan pada "rel" pada jarak tertentu antara satu sama lain, dan penyelesaian kerja azure-eosin mengikut Nokht dituangkan ke atasnya selama 8-10 minit. Terdapat "pencairan" eritrosit. Kemudian cat disalirkan dan bahagian baru penyelesaian kerja azure-eosin mengikut Nokht dituangkan ke dalam persediaan selama 30-35 minit. Slaid kemudiannya dibilas dengan teliti dengan air suling dan dikeringkan.

Pewarnaan smear secara automatik

Memandangkan salah satu fungsi yang paling diminta dalam makmal hematologi ialah penyediaan dan pewarnaan smear darah, percubaan untuk mengautomasikannya adalah semula jadi.

Sistem penyediaan smear automatik pertama telah dibangunkan oleh Sysmex (Jepun) pada tahun 1990, dan lebih daripada 1600 sistem sedang dipasang di seluruh dunia. Pengalaman luas yang terkumpul dalam tempoh ini digunakan dalam pembangunan sistem generasi baharu - penyediaan calitan dan stesen pewarnaan SP-1000i automatik sepenuhnya dengan kapasiti sehingga 120 calitan sejam. SP-1000i merealisasikan tahap standardisasi dan kualiti yang tinggi dalam penyediaan smear menggunakan kaedah baji pintar, yang membolehkan pengguna melaraskan jumlah sampel darah yang digunakan, sudut bilah smear, kelajuan aplikasi dan masa menunggu, bergantung pada hematokrit sampel ujian, menggunakan daripada 8 hingga 16 tahap peraturan yang berbeza. Pensampelan darah boleh dilakukan secara manual atau automatik dari tiub terbuka atau tertutup. Penyediaan smear automatik dan stesen pewarnaan Sysmex SP-1000i (Jepun)

Sistem ini menggunakan sehingga tujuh protokol pewarnaan boleh disesuaikan secara fleksibel yang membolehkan anda menyeragamkan kualiti pewarnaan smear dan memenuhi keperluan tertinggi. Protokol berikut untuk pewarnaan berganda dan tunggal boleh digunakan: May-Grunwald-Giemsa, Romanovsky dan Romanovsky-Giemsa. Calitan darah diwarnakan dalam sistem kaset khusus yang mengandungi hanya satu slaid setiap kaset. Dengan kaedah ini, hubungan yang baik antara sapuan darah dan reagen pewarnaan terjamin dan tiada penyejatan metanol daripada reagen ke udara. Untuk memastikan penetapan darah yang baik sebelum pewarnaan, langkah berasingan untuk pra-penetapan metanol disepadukan ke dalam proses pewarnaan.

Oleh kerana fleksibiliti protokol pewarnaan, protokol khusus untuk pewarnaan sumsum tulang boleh digunakan.

Kaedah untuk menyediakan smear sumsum tulang untuk kajian hematologi.

Pemeriksaan Sumsum Tulang - Myelogram Soalan pertama yang mesti dijawab oleh pemeriksaan sumsum tulang ialah aspek kuantitatif sel. Adalah diketahui umum bahawa berhubung dengan darah periferal, beberapa nilai berangka untuk bilangan dan peratusan pelbagai jenis sel boleh ditentukan, kerana ia berada dalam keadaan bebas dan diagihkan secara relatif seragam dalam penggantungan darah vaskular. . Perkara yang sama sekali berbeza boleh dikatakan mengenai sumsum tulang: komposisi tisu hematopoietik sangat heterogen dan pengedaran sel sumsum tulang tidak sama. Oleh itu, kiraan langsung myelokaryocytes dalam ruang berubah-ubah dalam julat yang sangat luas, baik dalam keadaan normal dan dalam rangka penyakit yang sama. Nilai yang kami temui dalam individu biasanya berkisar antara 27,000 hingga 112,000 unsur nuklear setiap mm3 (Ursya). Data literatur turun naik dengan lebih meluas, dengan had 12,000 dan 300,000 setiap mm3 (Cartwright, Halaman). Selepas sentrifugasi, 4 lapisan berikut ditemui dalam tiub hematokrit: 1) lapisan kuning lemak atas; 2) plasma; 3) lapisan kelabu-keputihan yang terbentuk daripada sel nuklear; 4) lapisan merah yang terdiri daripada eritrosit. Pengukuran lapisan kelabu-keputihan sel bernukleus (myelocrit) mempunyai nilai terhad atau mengelirukan, kerana nilai yang terdapat pada individu normal juga menunjukkan turun naik yang ketara. Di samping itu, sel nuklear ditemui bukan sahaja dalam lapisan ini, tetapi juga dalam lapisan lemak dan eritrosit. Tetapi sapuan pekat sumsum tulang boleh disediakan dari lapisan kelabu-keputihan selepas penyingkiran plasma supernatan. Mereka telah terbukti berguna dalam proses diagnostik dalam kes di mana smear langsung adalah lemah dalam sel. Memandangkan kiraan kebuk myelokaryocyte dan penentuan myelocrit hanya memberikan hasil anggaran dengan kebolehulangan terhad, kaedah kuantiti ini tidak memuaskan. Bahan yang diekstrak semasa tusukan sedutan adalah sampel sumsum tulang bercampur dengan darah dalam pelbagai perkadaran. Tahap pencairan sumsum tulang dengan darah bergantung kepada beberapa faktor. Pelabelan 32P membuktikan bahawa pencairan sumsum tulang yang disedut dengan darah adalah antara 40% hingga 100%. Walau bagaimanapun, perlu diingatkan bahawa kajian sumsum tulang untuk membuat diagnosis adalah berdasarkan terutamanya pada kajian kualitatif kandungan selular, dan hanya kedua pada nilai kuantitatif kandungan ini. Itulah sebabnya kaedah kuantitatif untuk menentukan sel sumsum tulang terdiri daripada penilaian separa kuantitatif komposisi selular sumsum tulang, berbanding dengan sampel biasa, pada: a) calitan dengan ketulan hancur; b) bahagian histologi. Kajian smear dijalankan terutamanya dengan kanta kering, pada beberapa smear, dengan matlamat berikut: a) penilaian separa kuantitatif jisim sel sumsum tulang; b) penentuan kehadiran dan ketumpatan megakaryocytes; c) pengesanan sel gergasi atau sarang sel abnormal; d) pengenalpastian kawasan yang paling sesuai untuk penyelidikan secara rendaman. Pada calitan yang diperoleh dengan menghancurkan zarah sumsum tulang, tiga zon sepusat berikut dibezakan: a) pusat; b) luaran; c) pertengahan. Zon tengah dibentuk oleh vakuol lemak, sel stroma, granulosit dan banyak sel yang musnah. Zon luar mengandungi sejumlah besar darah, yang mencairkan sel sumsum tulang. Seperti sapuan nipis, ia hanya menyumbang kepada kajian butiran morfologi sel mieloid dan eritrosit. Jisim sel yang paling padat terletak di zon pertengahan, yang membolehkan kajian optimum yang dapat menjelaskan semua soalan yang telah digariskan. Di sini sel-sel sumsum dipelihara dengan baik dan tersusun di pulau kecil atau sarang, seperti yang dilihat dalam sumsum. Semasa mengekalkan topografi sumsum tulang, hasil kajian zon ini lebih homogen dan sesuai dengan keadaan sebenar sumsum tulang, yang disahkan dengan perbandingan dengan imej histologinya. Penentuan separa kuantitatif ketumpatan sel dinyatakan sebagai: a) normal, b) kaya, atau c) kurus berbanding sumsum tulang biasa. Pengenalpastian jisim sel yang normal atau banyak adalah penemuan yang berharga, manakala sumsum tulang yang sedikit perlu dipertimbangkan dengan berhati-hati. Untuk membuktikan kehadiran hipoplasia sebenar, beberapa plat perlu diperiksa, tusukan di beberapa kawasan tulang dan / atau biopsi tulang perlu dilakukan. Maklumat yang paling tepat tentang jisim sel sumsum tulang diperolehi dengan memeriksa bahagian histologi. Pada orang dewasa, nisbah ruang yang diduduki oleh parenkim sel lemak dan aktif biasanya 1:1 atau 2:1. Sesetengah pengarang menganggap sumsum tulang sebagai hiposelular apabila sel hematopoietik menduduki kurang daripada satu perempat daripada ketulan sumsum tulang. Pemeriksaan sumsum tulang kualitatif adalah penting untuk membuat diagnosis. Ia dijalankan, dengan rendaman, kedua-duanya pada sapuan nipis dan, khususnya, pada sapuan dengan ketulan hancur dari zon perantaraan. Pemilihan smear yang diregangkan dan diwarnakan dengan betul dengan sel yang jelas dan dipelihara dengan baik dari segi morfologi adalah disyorkan. Kajian ini menggariskan: a) pengenalpastian pelbagai jenis sel mieloid; b) penentuan tahap kematangan setiap baris sel; c) penjelasan hubungan antara granulosit dan eritroblast (G/E);d) pengenalpastian sel dalam fasa mitosis; e) perihalan sel atipikal yang ditemui. Selepas memeriksa beberapa smear, sama ada "myelogram" deskriptif terperinci disusun (mengandungi kesimpulan yang dibuat selepas mentafsir smear), atau myelogram dalam istilah peratusan, yang ditubuhkan oleh sekurang-kurangnya 300-500 elemen. Terdapat dua cara untuk menyusun peratusan myelogram: 1) memperuntukkan baris sel yang tinggal kepada 100 granulosit; 2) peratus paparan setiap jenis sel daripada jumlah sel sum-sum tulang. Dari sudut pandangan statistik, kaedah terakhir nampaknya lebih betul dan nampaknya mencerminkan gambaran sebenar komposisi selular sumsum tulang. Formula yang ditubuhkan oleh pengarang individu berbeza dengan ketara, kerana sukar untuk menentukan nilai purata sebenar dalam tisu heterogen seperti sumsum tulang. Jadual menunjukkan, menurut Wintrobe, hasil kajian sampel sumsum tulang terpilih daripada 12 individu normal. Mielogram biasa

Parameter Myelogram Nilai min (%) Julat turun naik (%)

Sel retikular 0.9 0.1-1.6 Letupan tidak dibezakan 0.6 0.1-1.1 Myeloblasts 1.0 0.2-1.7

Promyelocytes 2.5 1.0-4.1

Myelocytes neutrophils 9.6 7.0-12.2 Metamyelocytes neutrophils 11.5 8.0-15.0 Stab neutrophils 18.2 12.8-23.7 Segmented neutrophils 18.6 13.1-24.1 Jumlah sel neutrofil 60.8 52.7-68.9 Mielosit eosinofilik 0.1 0.0-0.2 Metamielosit eosinofilik 0.2 0.1-0.4 Eosinofil 2.8 0.4-5.2

Jumlah sel siri eosinofilik 3.2 0.5-5.8 Mielosit basofilik 0.1 0-0.3

Basofil 0.1 0-0.3

Jumlah sel siri basofilik 0.2 0-0.5 Limfoblas 0.1 0-0.2

Prolimfosit 0.1 0-0.2

Limfosit 8.8 4.3-13.3

Jumlah sel limfoid 9.0 4.3-13.7 Monoblas 0.1 0-0.2

Monosit 1.9 0.7-3.1

Plasmablas 0.1 0-0.2

Proplasmosit 0.1 0.1-0.2

Sel plasma 0.9 0.1-1.8

Erythroblasts 0.6 0.2-1.1

Normoblas basofilik 3.6 1.4-5.8 Normoblas polikromatofilik 12.9 8.9-16.9 Normoblas oksifilik 3.2 0.8-5.6

Jumlah sel eritroid 20.5 14.5-26.5 Megakariosit 0.4 0.2-0.6

Mengikut kajian kami tentang orang yang sihat, hasilnya adalah seperti berikut:

sejumlah granulosit 56-70%,

siri erythroblastic 23-30%, siri limfoplasmacytic 5-10%, siri monocyto-macrophage 1-2% dan siri megakaryocyte 0.1-0.8% (Ursya). Perubahan dalam perkadaran baris myeloid biasa atau penggantiannya dengan sel abnormal sering mencadangkan jenis penyakit. Sel retikular kelihatan kurang kerap dan, lebih-lebih lagi, dalam jumlah yang kecil. Secara tidak sengaja, smear (atau kesan sumsum tulang) menunjukkan osteoblas dan/atau osteoklas, yang tidak boleh disalah anggap sebagai sel neoplastik. Kehadiran mereka lebih kerap diperhatikan pada kanak-kanak, kurang kerap pada orang dewasa dengan myelofibrosis primer atau kedua, selepas metastasis karsinoma, dengan leukemia akut, osteoporosis, dll. Nisbah G / E diperolehi dengan membahagikan granulosit dengan bilangan eritroblast. Dalam orang dewasa biasa, nisbah ini purata 3/1 atau 4/1, dengan had dianggarkan pada 2/1 (apabila hanya granulosit tidak matang dimasukkan) dan 5/1 (apabila ia melibatkan semua granulosit - matang dan tidak matang). Nisbah H/E berubah mengikut umur: semasa lahir ia kecil (1.8/1), pada usia 2 minggu ia meningkat kepada 11/1, kemudian secara beransur-ansur menurun, dan pada kanak-kanak berumur satu tahun ia mencapai nilai. seorang dewasa. Nisbah H/E adalah normal dalam kes hipo- atau hiperplasia sumsum tulang global, serta dalam percambahan sel individu yang tidak termasuk dalam pengiraan nisbah ini, contohnya, dalam plasmacytoma. Dalam leukemia, tindak balas seperti leukoma, dan erythroblastopenias, nisbahnya adalah tinggi, manakala dalam anemia dengan hiperplasia erythroblastic, ia adalah rendah atau terbalik (megaloblastik, anemia hemolitik). Sebelum pengeluaran data myelogram yang diperolehi selepas kajian smear, adalah perlu untuk menjelaskan: a) tapak tusukan; b) ketumpatan tulang; c) keadaan di mana sedutan berlaku; d) aspek makroskopik bahan yang dipilih. Pemeriksaan sumsum tulang adalah proses yang kompleks berdasarkan integrasi data yang banyak dan pelbagai. Hasilnya harus mencerminkan kesimpulan umum, lebih berdasarkan inferens daripada pendaftaran mekanikal angka individu, yang, lebih-lebih lagi, turun naik. Kesimpulan mana-mana myelogram harus menjelaskan sama ada diagnosis atau petunjuk untuk kajian tambahan yang timbul daripada kajian sumsum tulang. Dalam penyakit darah, tusukan sedutan membantu menjelaskan diagnosis dengan bantuan smear dan bahagian dengan ketulan dalam 80% kes. Dalam kes lain, biopsi tulang dan pemeriksaan histologi sumsum tulang ditunjukkan. Pemilihan biooptik dan pemeriksaan histologi nampaknya perlu untuk: a) myelofibrosis primer atau sekunder; b) aplasia sumsum tulang atau hipoplasia; c) penyakit yang berlaku dengan lesi jenis granulomatous (cth. , penyakit Godgkin, sarcoidosis, batuk kering, dll.); d) metastasis karsinoma; e) dalam semua kes apabila bahan yang dipilih melalui tusukan tidak memuaskan atau aspek sumsum tulang tidak meyakinkan. Selepas pensampelan biooptik, tera disediakan untuk pemeriksaan sitologi, kerana bahagian histologi memberikan sedikit maklumat tentang butiran struktur sel hematopoietik yang sesak, tidak berselerak dan tidak piawai. Di samping itu, penetapan menyebabkan penarikan balik sel dan pewarnaan histologi kurang selektif daripada pewarnaan sitologi. Itulah sebabnya pemeriksaan lengkap sumsum tulang melibatkan kedua-dua sitologi - pada smear atau kesan, dan histologi - pada bahagian kajian. Harus diingat bahawa kaedah sitologi dan histologi pemeriksaan sumsum tulang tidak dikecualikan, tetapi, sebaliknya, adalah pelengkap: biopsi adalah kaedah kuantitatif dan seni bina, manakala myelogram adalah kualitatif dan sitologi.

Kaedah untuk mengira sel darah di ruang Goryaev.

bilik Goryaev - peranti yang direka untuk mengira bilangan sel dalam isipadu cecair tertentu. Ia biasanya digunakan untuk menentukan bilangan unsur yang terbentuk dalam sampel darah. Ruang-ruang tersebut terdiri daripada slaid kaca tebal dengan slot melintang yang digunakan padanya, membentuk tiga kawasan rata yang tersusun melintang. Platform tengah dibahagikan dengan slot membujur kepada dua, setiap satunya mempunyai grid terukir di atasnya. Di kedua-dua belah platform tengah di ruang Goryaev terdapat dua lagi 0.1 mm lebih tinggi (dalam ruang Fuchs-Rosenthal 0.2 mm) lebih tinggi daripada yang tengah. Pesawat-pesawat tapak ini berfungsi untuk mengisar penutup penutup sehingga apa yang dipanggil cincin Newtonian muncul. Selepas mengisar kaca penutup, ruang dibuat, ditutup pada dua sisi, dan pada dua yang lain terdapat jurang (ruang kapilari) di mana ruang diisi. Prinsip grid adalah sama. Mereka dibahagikan kepada satu atau satu lagi bilangan segi empat sama, dikumpulkan dalam pelbagai cara. Nilai malar dalam semua grid ialah apa yang dipanggil "persegi kecil", sisinya ialah 1/20 mm, oleh itu, luasnya ialah 1/400 mm2. Menggunakan kamera Goryaev, ia juga mungkin untuk menentukan pembesaran mikroskop. Secara luaran, ia adalah selari telus (slaid kaca), dengan alur dan grid mikroskopik digunakan. Dimensi bahagian kecil sel grid ialah 0.05 mm, dan bahagian besar ialah 0.2 mm. Dalam kes ini, grid digunakan pada platform (bahagian kaca) yang terletak 0.1 mm lebih rendah daripada dua platform bersebelahan. Kawasan-kawasan ini digunakan untuk mengelap slip penutup. Akibatnya, isipadu cecair di atas persegi yang dibentuk oleh bahagian besar grid Goryaev ialah 0.004 mikroliter. Dengan mengira bilangan sel di atas segi empat sama besar, anda boleh mengira ketumpatan jenis sel tertentu dalam penggantungan menggunakan formula: Bilangan sel/ml = bilangan sel di atas petak besar * 2.5 10^5 Menggunakan kamera Goryaev sebagai sejenis standard, anda boleh menentukan pembesaran mikroskop dengan formula: Kg=(m2-m1)/(a*N) di mana kg ialah pembesaran mikroskop; m 1 - kedudukan sempadan kiri sel ruang Goryaev; m 2 - kedudukan sempadan kanan sel atau kumpulan sel; N- bilangan sel antara sempadan yang diukur; a- saiz sel ruang Goryaev (sama dengan 0.05 mm). Ruang Goryaev juga digunakan untuk mengira bilangan sel dalam kultur. Formula untuk mengira sel darah dalam ruang Goryaev ialah - x = (a 400 c) / b, di mana x ialah bilangan elemen berbentuk yang dikehendaki dalam 1 mm3; a - jumlah elemen berbentuk yang dikira dalam isipadu ruang tertentu; b - bilangan petak kecil yang dikira; c - pencairan darah.

Kaedah untuk mengira ookista di ruang Goryaev. Kaedah ini biasanya digunakan apabila menjangkiti haiwan secara eksperimen dengan jumlah ookista yang ditentukan dengan tepat (jumlah mililiter ampaian yang sesuai disuntik ke dalam haiwan). 1 ml penggantungan yang mengandungi ookista diletakkan di dalam ruang Goryaev. Oleh kerana isipadu ruang Goryaev ialah 0.9 m3, bilangan ookista yang dikira didarabkan dengan 1111. Nombor yang terhasil adalah memadai dengan bilangan ookista dalam 1 cm3 larutan. Untuk penentuan yang lebih tepat, pengiraan hendaklah dijalankan sekurang-kurangnya tiga kali, dan kemudian min aritmetik harus diperolehi. Bilangan ookista yang diperlukan untuk jangkitan diukur menggunakan pipet bergraduat. Untuk pengedaran ookista yang lebih seragam dalam medium inkubasi, kandungan tabung uji mesti digoncang berulang kali.

Kiraan eritrosit dalam ruang Goryaev Prinsip. Jumlah darah yang tepat dicampur sama rata dalam jumlah cecair tertentu dan diletakkan di dalam ruang dengan isipadu yang diketahui di mana penggantungan darah diedarkan dalam satu lapisan. Bahagian bawah ruang digraf, yang memungkinkan untuk mengira eritrosit dengan tepat. Reagen: 0.9% larutan natrium klorida. Peralatan khas: mikroskop, kamera Goryaev, tiub ujian makmal atau kapilari dari hemometer Saly. Kemajuan definisi. Tambah 8 ml larutan natrium klorida 0.9% dan 0.02 ml darah ke dalam tabung uji yang kering dan bersih. Hujung pipet disapu terlebih dahulu, darah dihembus ke bahagian bawah tiub, dan pipet dibasuh dengan teliti dengan lapisan atas cecair. Campurkan kandungan tiub dengan baik. Pencairan darah sebanyak 1:400 diperolehi, iaitu, darah dicairkan 400 kali. Dengan penebalan darah, dinasihatkan untuk mencairkannya sebanyak 500, 600, 700, 800 kali. Ruang dan penutup penutup hendaklah dicuci dan dikeringkan. Slip penutup digosok pada ruang supaya cincin berwarna-warni muncul. Ambil setitik darah yang dicairkan dari tabung uji dan isikan ruang dengannya, sapukan pada tepi penutup penutup. Eritrosit dikira 1 minit selepas mengisi ruang di bawah mikroskop pembesaran rendah (objektif x8, x10 atau x15 kanta mata) dengan diafragma bertutup atau kondenser yang diturunkan (dalam medan pandangan yang gelap) . Eritrosit dikira dalam lima petak besar (atau 80 kecil) yang disusun secara menyerong. Eritrosit yang terletak di dalam petak kecil, serta di dinding kiri dan atasnya, diambil kira. Sel yang terletak di garisan kanan dan bawah petak tidak dikira. Pengiraan: Bilangan sel yang dikira dalam 80 petak kecil didarabkan dengan 20,000 pada pencairan darah 1: 400, dengan 25,000 pada pencairan 1: 500, atau dengan 30,000 pada pencairan 1: 600 dan keputusan akhir diperolehi dalam berjuta-juta setiap 1 μl. Dalam kes ini, diandaikan bahawa isipadu satu persegi kecil ialah 1/4000 μl. Untuk mengira sel dalam 1 liter, bilangan sel darah merah dalam 1 µl juga didarabkan dengan 1,000,000. Catatan. Ia tidak dibenarkan untuk mengkaji darah dengan bekuan; kiraan sel serta-merta selepas mengisi ruang (tanpa menunggu 1 minit); penggunaan pipet dan tabung uji yang tidak dicuci dan dikeringkan dengan baik, reagen berkualiti rendah yang menyebabkan hemolisis. Tertakluk kepada semua peraturan pengiraan, ralat akan purata ± 2.5%.

Peraturan pembasmian kuman Selepas digunakan, kamera Goryaev mesti dibasmi kuman penyelesaian 3%. hidrogen peroksida, bilas dengan air suling dan keringkan dengan kain lembut. Simpan kamera di tempat yang kering.

Kaedah kerja pada penganalisis hematologi.

Penganalisis-hematologi- peranti (satu set peralatan) yang direka untuk penyelidikan kuantitatif sel darah dalam makmal diagnostik klinikal. Boleh automatik atau separa automatik. Penganalisis hematologi separa automatik berbeza daripada yang automatik kerana proses mencairkan sampel darah dijalankan oleh peranti berasingan - pencairan. Selepas menyediakan keseluruhan pencairan darah, pengendali mesti memindahkan sampel yang dicairkan ke modul pengukuran. Pada masa ini, penganalisis separa automatik boleh dikatakan tidak dihasilkan.

Penganalisis Hematologi Automatik ialah instrumen automatik sepenuhnya di mana keseluruhan proses analisis dijalankan secara automatik.

Penganalisis automatik moden mampu memproses berpuluh-puluh sampel (dari 60 hingga 120) sejam, dengan ketepatan dan kebolehulangan mengikut spesifikasi, serta menyimpan keputusan ujian dalam memori terbina dalam dan, jika perlu, mencetaknya pada terbina dalam. pencetak haba atau pencetak luaran.

Penganalisis hematologi moden dikelaskan mengikut tatanama penunjuk sel darah yang ditentukan.

Penganalisis hematologi lapan parameter tentukan parameter berikut: kepekatan eritrosit(RBC) leukosit(WBC) platelet(plt) hemoglobin(Hb), serta parameter eritrosit berikut: purata isipadu eritrosit (MCV), purata kandungan hemoglobin eritrosit (MCH), purata kepekatan hemoglobin eritrosit (MCHC), hematokrit(Hct).

Penganalisis hematologi lapan parameter boleh dikatakan tidak dihasilkan pada masa ini.

Penganalisis hematologi kelas 3-diff. Penganalisis hematologi kelas 3-dif, bergantung pada model yang dihasilkan, membolehkan anda menentukan dari 16 hingga 22 penunjuk sel darah. Penganalisis kelas ini, sebagai tambahan kepada parameter yang menentukan penganalisis lapan parameter, menentukan tiga subpopulasi leukosit: kepekatan limfosit (Lm), granulosit (Gr) dan apa yang dipanggil leukosit purata (Mid), serta peratusan mereka Lm%, Gr% dan Mid%. Oleh itu nama kelas 3-dif. Di samping itu, penganalisis hematologi kelas ini menentukan pekali variasi isipadu eritrosit (RDW) dan beberapa penunjuk yang mencirikan platelet: purata isipadu platelet (MPV), pecahan isipadu platelet (Tct) (bersamaan dengan hematokrit), pekali variasi isipadu platelet (PDW).

Maklumat diagnostik penting, yang boleh diperolehi oleh penganalisis hematologi kelas ini, adalah fungsi pengedaran mengikut isipadu eritrosit, leukosit dan platelet - histogram.

Penganalisis hematologi kelas 5-dif. Perbezaan utama antara penganalisis hematologi 5-dif dan penganalisis 3-dif ialah keupayaan mereka untuk mengesan kesemua 5 subpopulasi leukosit: limfosit (Lym), monosit (Mon), neutrofil (Neu), basofil (Bas) dan eosinofil (Eos), serta kandungan peratusan Lym%, Mon%, Neu%, Bas% dan Eos%. Kaedah pengiraan impedans, juga dikenali sebagai Kaunter Coulter, yang digunakan dalam penganalisis 3-dif, tidak dapat membezakan antara neutrofil, basofil dan eosinofil, oleh itu, kaedah pembezaan sel yang berbeza digunakan dalam penganalisis 5-dif. Ia berdasarkan prinsip pembelauan sinaran laser pada sel leukosit dan analisis lanjut tentang sinaran bertaburan. Leukosit "purata" tidak berbeza dalam saiz yang cukup untuk dibezakan dengan kaedah impedans, tetapi ia mempunyai struktur dalaman yang berbeza dan berinteraksi secara berbeza dengan pewarna. Dan kaedah mengesan corak pembelauan ternyata sensitif kepada struktur dalaman sel. Oleh itu, eritrosit dan platelet dikira oleh kaunter Coulter, dan leukosit oleh unit laser yang berasingan.

Kerja 8. Penentuan kuantitatif protein dalam serum darah

4. Komposisi dan sifat protein kompleks

Kerja 9. Sifat kimia hemprotein

Kerja 10. Pengenalpastian komponen karbohidrat glikoprotein

Kerja 11. Tindak balas kualitatif terhadap fosfoprotein

Kerja 12. Penentuan kuantitatif kandungan asid sialik dalam serum darah dengan kaedah Hess

Kerja 13. Sifat kimia nukleoprotein

Asid nukleik

1. Kajian tentang sifat kimia asid nukleik

Kerja 14. Tindak balas kualitatif terhadap komponen asid nukleik

Kaedah kuantitatif untuk penentuan asid nukleik

Kerja 15. Kaedah spektrofotometri untuk penentuan kuantitatif asid nukleik mengikut A.S. Spirin

Kerja 16. Kaedah fotokolorimetrik untuk penentuan kuantitatif asid nukleik

Kerja 17. Kajian fosfolipid

Kerja 18. Tindak balas kualitatif terhadap steroid

Enzim

Tindakan perbandingan enzim dan pemangkin bukan biologi

Kerja 19. Perbandingan tindakan α-amilase air liur dan asid hidroklorik pada tindak balas hidrolisis kanji

2. Pengenalpastian enzim yang tergolong dalam kelas yang berbeza

Kerja 20. Pengesanan oksidoreduktase dalam bahan biologi

Kerja 21. Pengesanan kolinesterase

Dalam serum darah dengan kaedah ekspres Herzfeld dan Stumpf

Kerja 22. Penentuan aktiviti aldolase fruktosa-1,6-bifosfat dalam serum darah mengikut kaedah V.I. Tovarnitsky dan E.N. Voluyskaya

Pembinaan graf penentukuran

Kerja 23. Penentuan isomerase glukosa fosfat

Dalam serum darah

3. Mengkaji sifat kinetik enzim

Kerja 24. Kinetik tindak balas enzim pada contoh air liur α-amilase

4. Kekhususan tindakan enzim

Kerja 25. Demonstrasi kekhususan substrat mutlak

5. Pengubahsuai aktiviti enzim

Kerja 27. Pengaktif dan perencat α-amilase saliva

tisu otot

Kerja 29. Perencatan katalase darah yang tidak kompetitif

6. Kuantifikasi aktiviti enzim

Kerja 30. Kajian kuantitatif aktiviti ubat laktat dehidrogenase menurut Kornberg

Kerja 31. Kaedah fotokolorimetrik untuk mengkaji aktiviti dehidrogenase laktat dalam serum darah mengikut Sevel dan Tovarek

Kerja 32. Penentuan aktiviti alkali fosfatase dalam serum darah menurut Bodansky

7. Kajian tentang isoenzim

Kerja 33. Pengasingan isoenzim laktat dehidrogenase serum darah melalui elektroforesis dalam gel poliakrilamida mengikut Dietz dan Lubrano

Kerja 34. Penentuan aktiviti γ-glutamyltransferase dalam serum darah

Biokimia pencernaan

Kerja 35. Kajian tentang komponen berasid jus gastrik

Kerja 36. Penentuan keasidan jus gastrik dengan kit diagnostik "Acidotest"

Kerja 37. Hidrolisis protein oleh enzim saluran pencernaan

Kerja 38. Kajian tentang dinamik hidrolisis triasilgliserol di bawah tindakan lipase pankreas

Pertukaran tenaga (biotenaga)

1. Kajian proses pengoksidaan biologi dalam tisu haiwan Kerja 39. Pengesanan cytochrome oxidase dalam tisu otot

Kerja 40. Demonstrasi proses fosforilasi oksidatif dan tindakan uncoupler padanya

Kerja 41. Pengesanan glikolisis dalam tisu otot

Kerja 42. Analisis nukleotida adenin oleh kromatografi lapisan nipis pertukaran ion

Kerja 43. Penentuan aktiviti creatine phosphokinase dalam serum darah menurut Ennor dan Rosenberg

Analisis pigmen dan proses oksidatif organisma fotosintesis

Kerja 44. Tindak balas kualitatif terhadap pigmen tumbuhan

Kerja 45. Penentuan aktiviti peroksidase dalam bahan tumbuhan mengikut kaedah A.N. Boyarkin

Metabolisme karbohidrat

Kerja 46. Penentuan glukosa dalam darah

Kerja 47. Penentuan kuantitatif glukosa dalam darah dengan kaedah glukosa oksidase

Kerja 48. Penentuan kandungan asid laktik dalam darah menurut Barker dan Summerson

Kerja 49. Penentuan kandungan asid piruvat dalam darah menurut Friedemann dan Haugen

metabolisme lipid

Kerja 50

Kerja 51

Kerja 52. Penentuan kolesterol dalam serum darah mengikut kaedah Ilk

Kerja 53. Penentuan kandungan jumlah fosfolipid dalam serum darah

Kerja 54. Pengasingan lipid serum darah dengan kromatografi lapisan nipis

Metabolisme protein dan asid amino

Kerja 55. Penentuan kandungan pecahan protein serum darah dengan kaedah turbidimetri

Kerja 56. Penentuan aktiviti cathepsin dalam serum darah mengikut A.A. Pokrovsky, A.I. Archakov dan O.N.

Cathepsin

Kerja 57. Penentuan aktiviti aspartat dan alanine aminotransferase dalam serum darah menurut Reitman dan Frenkel

Kerja 58. Penentuan aktiviti histidase dalam serum darah mengikut Tabor dan Mehler, diubah suai oleh V.A.

Kerja 59. Penentuan kandungan hidroksiprolin bebas dalam air kencing mengikut Neumann dan Logan, diubah suai oleh p.

Metabolisme bahan bukan protein yang mengandungi nitrogen

1. Kajian produk biasa metabolisme nitrogen

Kerja 60. Penentuan kuantitatif baki nitrogen dalam darah dengan kaedah fotokolorimetrik

Kerja 61. Penentuan kuantitatif urea dalam serum darah dan air kencing

Kerja 62. Penentuan kuantitatif kreatin dan kreatinin dengan kaedah Brown

2. Kajian pertukaran asid nukleik dan nukleotida

Kerja 63. Penentuan aktiviti asid deoksiribonuklease (dnCase) dalam serum darah mengikut A.A.

Kerja 64. Penentuan kandungan asid urik dalam serum darah mengikut kaedah Muller dan Seifert

3. Kajian metabolisme porfirin (pigmen).

Kerja 65. Penentuan bilirubin dan pecahannya dalam serum darah menurut Yendrashik, Cleghorn dan Grof

Patologi molekul

1. Ekspres diagnostik patologi metabolisme asid amino Kerja 66. Pengesanan hyperaminoaciduria

Kerja 67. Nyatakan kaedah untuk mendiagnosis fenilketonuria

Kerja 68. Diagnosis tyrosinosis Ujian Millon untuk tirosin

Kerja 69. Pengesanan alkaptonuria melalui ujian untuk asid homogentisic

Kerja 70

2. Nyatakan diagnostik patologi metabolisme karbohidrat Kerja 71. Pengesanan pentosuria melalui ujian Bial

Kerja 72. Pengesanan fructosuria oleh ujian Selivanov

Kerja 73. Pengesanan mucopolysaccharidoses melalui ujian dengan toluidine blue untuk mucopolysaccharides

Kerja 74. Penentuan kandungan porfobilinogen dalam air kencing

Kerja 75. Penentuan kuantitatif kandungan asid delta-aminolevulinik dalam air kencing

Kerja 76

Pengawal selia metabolik

1. Kajian vitamin Bekerja 77. Tindak balas kualitatif terhadap vitamin

Kerja 78. Penentuan kandungan tiamin dan riboflavin dengan kaedah fluorimetrik dalam penyediaan multivitamin

Kerja 79. Penentuan kuantitatif asid askorbik dalam tumbuhan ubatan

2. Kajian tentang hormon, mediator dan metabolitnya

Kerja 80. Tindak balas kualitatif terhadap hormon protein-peptida.

Kerja 81. Tindak balas kualitatif terhadap hormon - terbitan asid amino

Kerja 82. Tindak balas kualitatif terhadap hormon steroid dan metabolitnya

Kerja 83. Kawal selia tahap insulin dan adrenalin glukosa dalam darah haiwan

Kerja 84. Penentuan kuantitatif histamin dalam darah dengan n-nitroaniline diazotik menurut N.V. Klimkina dan S.I. Plitman

Kajian cecair biologi

1. Ujian darah biokimia Berfungsi 85. Penentuan kandungan hemoglobin dalam darah melalui penyerapan cahayanya

Kerja 86. Penentuan kandungan hemoglobin janin dalam eritrosit manusia

Kerja 87. Penentuan kandungan hemoglobin glikosilasi dalam eritrosit dengan kaedah fotokolorimetrik

Kerja 88. Penentuan kepekatan haptoglobin dalam serum darah dengan kaedah fotokolorimetrik

Kerja 89

Kerja 90. ​​Penentuan aktiviti α-amilase dalam serum darah dengan kaedah amiloclastic

Kerja 91. Penentuan kandungan kalsium dalam serum darah dengan kaedah murexide

Kerja 92. Ujian thymol mengikut Huergo dan Popper

Kerja 93. Tindak balas sublimat-sedimen

Kerja 94. Penentuan kuantitatif kandungan besi dalam serum darah

2. Kajian biokimia air kencing

Kerja 95. Kajian sifat fiziko-kimia air kencing

Kerja 96. Penentuan badan keton dan glukosa dalam air kencing

Kerja 97. Penentuan protein dalam air kencing dengan kaedah Brandenberg-Roberts-Stolnikov

Kerja 98. Penentuan kualitatif indican dalam air kencing

Kerja 99. Pengesanan beberapa pigmen dalam air kencing.

Metabolisme xenobiotik

Kajian proses pengoksidaan dan konjugasi xenobiotik Kerja 100. Mendedahkan aktiviti pernafasan mikrosom

Kerja 101. Kajian oksidatif n-demetilasi dalam mikrosom hati mengikut Our

Kerja 102. Penentuan aktiviti hidroksilase mikrosom hati mengikut Kato dan Gilet

Kerja 103

Kerja 104. Penentuan aktiviti alkohol dehidrogenase dalam serum darah menurut Shkursky et al.

Kerja 105

Kerja 106. Pengesanan asetilasi (penyahaktifan) asid isonicotinic hydrazide (gink) dalam badan

Kajian peroksidasi lipid membran biologi

Kerja 107. Penentuan sensitiviti eritrosit kepada hemolisis peroksida

Kerja 108. Penentuan kadar peroksidasi lipid dalam biomembran

Permohonan

2. Penunjuk biokimia plasma darah

1. Norma klinikal am

2. Pemeriksaan khas air kencing

Jus gastrik

2. Penampan fosfat (0.1 m, pH 5.8-8.0)

3. Penampan Tris (0.1 m, pH 7.1-9.2)

4. Penampan asetat (0.2 m, pH 3.6-5.8)

5. Penampan glisin (0.05 m, pH 8.6-10.6)

3. Penyediaan beberapa reagen

Isi kandungan

2. Penampan fosfat (0.1 m, pH 5.8-8.0)

Na 2 HPO 4 0.2 M, ml	Na 2 H 2 PO 4 0.2 M, ml

3. Penampan Tris (0.1 m, pH 7.1-9.2)

24.2 g tris-(hydroxymethyl)aminomethane dilarutkan dalam kelalang volumetrik 1 l (dalam 500 ml H 2 O). Untuk mendapatkan nilai pH yang diperlukan, isipadu 1 M HCl yang ditunjukkan dalam jadual ditambah dan isipadu dilaraskan kepada 1000 ml dengan air suling.

4. Penampan asetat (0.2 m, pH 3.6-5.8)

Natrium asetat 0.2 M, ml	Asid asetik 0.2 M, ml		Natrium asetat 0.2 M, ml	Asid asetik 0.2 M, ml

5. Penampan glisin (0.05 m, pH 8.6-10.6)

Isipadu glisin dan natrium hidroksida yang ditunjukkan dicampur dan isipadu diselaraskan dengan air suling kepada 200 ml.

	Glisin 0.2 M, ml	NaOH 0.2 M, ml		Glisin 0.2 M, ml	NaOH 0.2 M, ml

3. Penyediaan beberapa reagen

Mengaktifkan penyelesaian. 155 mg glutation terkurang dan 400 mg albumin kristal dimasukkan ke dalam kelalang volumetrik dengan kapasiti 100 ml, ia dilarutkan dalam 50 ml air suling dan pH diselaraskan kepada 8.2 menggunakan larutan NaOH 1 M. Kemudian tambah air ke tanda.

Larutan ammonia perak nitrat. Larutan ammonia pekat ditambah kepada larutan perak 2-3% sehingga mendakan larut.

Penampan asetat pH 3.6. Sediakan dengan mencampurkan 463 ml larutan A dan 37 ml larutan B, cairkan hingga tanda dengan air dalam kelalang volumetrik hingga 1 liter. Penyelesaian A: Cairkan 11.55 ml asid asetik glasier dengan air dalam kelalang volumetrik 1 liter. Penyelesaian B: Larutkan 27.2 g natrium asetat dalam air dalam kelalang 1 liter.

Reagen Biuret (Reagen Benedict). 173 g natrium sitrat dan 100 g natrium karbonat dilarutkan dalam 300 ml air suling dalam tab mandi air. Secara berasingan, 17.3 g kuprum sulfat dibubarkan dalam 300 ml air. Kedua-dua larutan disalirkan dan jumlah isipadu dibawa kepada 1 liter.

larutan penimbal. 2.76 g Veronal dan 2.06 g Medinal dilarutkan dalam 1 liter air suling. Simpan di dalam peti sejuk; jika mendakan muncul, larutan tidak sesuai digunakan.

penggantungan arang batu. 0.25 g arang teraktif dimasukkan ke dalam kelalang volumetrik 100 ml dan dicairkan dengan penimbal asetat pH 3.6. Goncang sebati sebelum digunakan.

Reagen Pengurangan. 1% larutan asid askorbik disediakan dengan 0.016% larutan kuprum sulfat.

Hemoglobin, larutan 4% dalam penimbal asetat (pH 4.0). Mula-mula, larutan hemoglobin 8% disediakan dalam larutan urea 8 mol/l, disimpan selama 2 jam dalam termostat pada 60°C, dan dicairkan 2 kali dengan penimbal asetat sebelum digunakan.

Glycyl-glycine. 0.55 mmol/l, pH 8.3. 3.63 g glisil-glisin dimasukkan ke dalam kelalang volumetrik 50 ml, ditambah dengan air hingga tanda (larutan penimbal).

Mendenatur penyelesaian

Reagen Diazo untuk penentuan bilirubin. Sediakan dua penyelesaian. Penyelesaian pertama: 3 g asid sulfanilik dibubarkan dalam 500 ml air suling, 15 ml asid hidroklorik pekat ditambah (dalam mandi panas), isipadu diselaraskan kepada 1 liter dengan air. Larutan kedua: 0.5% larutan natrium nitrit berair. Sebelum digunakan, campurkan 5 ml larutan pertama dan 0.25 ml larutan kedua.

Diacetyl, penyelesaian kerja. 1 ml diacetyl dicairkan dengan air suling dalam kelalang volumetrik 100 ml (larutan disimpan di dalam peti sejuk). Larutan kerja diacetyl disediakan sebelum digunakan dengan menambahkan 24 ml air suling kepada 1 ml larutan stok diacetyl.

Reagen diphenylamine. 1 g diphenylamine dibubarkan dalam 100 ml asid asetik glasier. Kepada larutan ditambah 2.75 ml asid sulfurik pekat.

Penyelesaian penentukuran. Asas - 0.75 mmol/l ALA (100 µg/ml) dari segi asas: 0.00635 g ALA hidroklorida dilarutkan dalam penimbal asetat pH 3.6 dalam kelalang volumetrik 50 ml. Simpan di dalam peti sejuk tidak lebih dari sebulan. Penyelesaian penentukuran berfungsi disediakan daripada penyelesaian utama, 1 μg / ml. Sediakan sebelum digunakan dengan mencairkan larutan stok dengan penimbal asetat sebanyak 100 kali.

Penyelesaian penentukuran. 22.5 mg dihydroxyacetone dilarutkan dalam 25 ml air dengan pemanasan. 1 ml larutan ini mengandungi 10 μmol dihydroxyacetone. Larutan penentukuran dihydroxyacetone dituangkan ke dalam beberapa tabung uji (lihat kerja), ditambah kepada isipadu yang diperlukan, dan kemudian tindak balas dijalankan dengan cara yang sama seperti dalam menentukan aktiviti enzim.

Penentukuran (standard) larutan besi (30 µmol/l).

Garam Mora disediakan terlebih dahulu.

reagen kafein. 1 g kafein tulen, 7.5 g natrium benzoat, 12.5 g natrium asetat dilarutkan dalam 90 ml air suling, dipanaskan hingga 50-60°C, dikacau, disejukkan dan dibuat sehingga 100 ml dengan air suling.

Ammonium molibdat dalam asid nitrik. 7.5 g ammonium molibdat dilarutkan dalam 100 ml air dan 100 ml asid nitrik 32% ditambah.

Air kencing untuk alkaptonuria. Sekiranya tiada patologi, hidrokuinon ditambah kepada air kencing normal pada kadar 20 g/l.

Air kencing dengan hyperaminoaciduria. Sekiranya tiada glisin patologi ditambah kepada air kencing biasa pada kadar 1.0 g/l.

Air kencing dengan mucopolysaccharidosis. Sekiranya tiada patologi, chonsuride atau heparin ditambah kepada air kencing normal pada kadar 0.05-0.1 g / l.

Air kencing dengan pentosuria. Sekiranya tiada patologi, xylulose atau ribosa ditambah kepada air kencing pada kadar 1.0 g / l.

Air kencing dengan tyrosinosis. Sekiranya tiada patologi, tirosin ditambah kepada air kencing normal pada kadar 0.4-0.5 g / l.

Air kencing dengan fructosuria. Sekiranya tiada patologi, fruktosa ditambah kepada air kencing normal pada kadar 0.3-0.4 g / l.

Air kencing untuk cystinuria. Sekiranya tiada cystine patologi ditambah kepada air kencing normal pada kadar 0.4-0.5 g / l.

Natrium asetat 3-berair, larutan tepu. 375 g natrium asetat 3-air (atau 226 g garam kontang) dilarutkan dalam 250 ml air suam, disejukkan ke suhu bilik. Simpan pada suhu bilik. Penyelesaiannya hendaklah tidak berwarna dan telus.

Natrium fosfat ternyahsubstitusi 0.25 mol/l. Sediakan dengan melarutkan 9.7 g Na 2 HPO 4 ∙12H 2 O atau 18 g Na 2 HPO 4 ∙12H 2 O dalam air dalam kelalang 200 ml. Apabila menambah 2 ml larutan ini kepada 1 ml larutan asid trichloroacetic, pH hendaklah dalam julat 5.0-6.0.

Larutan penentukuran asas kreatinin, 10 mmol/l. 113.1 mg kreatinin dilaraskan kepada 100 ml dengan larutan asid hidroklorik 0.1 mol/l. Apabila membina graf penentukuran, penyelesaian berfungsi disediakan daripada larutan stok dengan mencairkan larutan stok 100 kali dengan air, 1 ml larutan mengandungi 0.1 mmol kreatinin. Berdasarkan ini, beberapa tabung uji diperolehi dengan kepekatan kreatin yang sepadan.

Campuran pengoksidaan untuk penentuan tiamin. Kepada 8 ml 1% potassium hexacyanoferrate (III) ditambah 20 ml larutan NaOH 30%, gaul sebati. Sediakan sebelum digunakan.

Reagen Orcine. Kepada 1 g orcin tambah 500 ml asid hidroklorik 30% (ketumpatan 1.15 g / cm 3). Kacau sehingga larut dan tambah 4-5 ml larutan besi klorida 10% (III) FeCl 3 . Reagen disimpan dalam botol gelap yang bertutup rapat.

penyelesaian penentukuran asas p-nitroaniline. 0.0829 g p-nitroaniline dimasukkan ke dalam kelalang volumetrik 100 ml, dibuat sehingga tanda dengan air dan dilarutkan.

Penyelesaian memendakan. Larutkan 561 g ammonium sulfat dalam 1 liter air suling dan tapis selepas 24 jam.

Larutan penimbal fosfat asas dan penyelesaian kerjanya No. 1-4. Larutkan 33.5 g NaOH dalam 400 ml air dalam kelalang volumetrik berkapasiti 500 ml dan tambah 226.8 g KH 2 PO 4 , goncang sehingga larut sepenuhnya, sejukkan dan tambah air pada tanda. Untuk menyediakan penyelesaian kerja penimbal fosfat asas, isipadu penimbal fosfat asas (dalam ml) berikut disukat ke dalam kelalang volumetrik dengan kapasiti 100 ml: No. 1 - 92.51; No 2 - 74.91; No. 3 - 59.18 dan No. 4 - 48.68, selepas itu kandungannya dibawa ke tanda dengan air.

Asid pikrat, larutan tepu. Asid picric komoditi mengandungi 15-20% kelembapan, jangan keringkan asid. Letupan! Larutkan 2 g asid picric dalam 100 ml air dengan memanaskan dalam tab mandi panas. Selepas itu, larutan dibiarkan selama 24 jam, kacau sekali-sekala. Penyelesaian itu kemudiannya ditapis. Penyelesaiannya stabil dan disimpan dalam bekas kaca gelap.

Penampan pirofosfat 0.05 M pH 8.2. Pindahkan 4.46 g natrium pirofosfat ke dalam kelalang volumetrik 200 ml, larutkan dalam kira-kira 100 ml air, laraskan pH dengan larutan HCl 0.1 M kepada 8.2 dan tambah dengan air suling hingga tanda.

Penampan pirofosfat 0.1 M pH 8.5. Pindahkan 4.46 g natrium pirofosfat ke dalam kelalang volumetrik dengan kapasiti 100 ml, larutkan dalam 50 ml air, laraskan pH dengan larutan HCl 0.1 M kepada 8.5 dan tambahkan air suling pada tanda.

Reagen berfungsi. Sediakan pada hari penentuan dengan mencampurkan 30 bahagian 0.3 N natrium hidroksida. 2 bahagian 0.5% larutan fenolftalein dan 1 bahagian 0.12% larutan kuprum sulfat.

Larutan sianohidrin aseton. Larutkan 1 ampul sianohidrin aseton (0.5 ml - 0.47 g dari kit untuk penentuan hemoglobin dalam darah) dalam 1 liter air suling.

Larutan Ferriacetone cyanohydrin. Larutkan 200 mg kalium ferricyanide dan 1 ampul (0.5 ml - 0.47 g) aseton sianohidrin dalam 1 liter air suling: ia adalah mungkin untuk digunakan daripada satu set reagen untuk menyediakan penyelesaian mengubah untuk menentukan hemoglobin darah. Stabil selama beberapa bulan apabila disimpan dalam bekas kaca gelap pada suhu bilik.

larutan gluoksidase. Mengandungi kira-kira 300 unit. dalam 1 mg. Sediakan dengan melarutkan jumlah penyediaan kering yang sesuai dalam 10 ml air.

Larutan bato-phenanthroline tersulfonasi. Dalam tabung uji, 0.5 ml asid klorosulfonik ditambah kepada 100 mg bathophenanthroline, dipanaskan dalam mandi air mendidih selama 30 s, disejukkan dan 10 ml air bidistilasi ditambah perlahan-lahan, dipanaskan semula dalam mandi air selama 5 minit. Campuran dipindahkan ke dalam kelalang 200 ml, 100 ml air ditambah, pH larutan diselaraskan kepada 4-5 N NaOH, dan air ditambah kepada isipadu 200 ml.

Larutan iodin dalam kalium iodida (larutan Lugol). Larutkan 20 g kalium iodida dan 10 g iodin dalam 100 ml air suling. Sebelum digunakan, larutan dicairkan 5 kali.

Penyelesaian p-nitrosodimethylaniline (NDMA). Penyediaan NDMA yang tersedia secara komersial dihablur semula daripada etil eter. Untuk mengukur alkohol dehidrogenase, 1 mg NDMA dibubarkan dalam 100 ml penimbal pirofosfat 0.1 M (pH 8.5). Larutan yang terhasil ditapis melalui penapis kertas dan turasan dicairkan 2 kali dengan penimbal yang sama. Simpan pada suhu 4°C selama dua bulan.

Reagen Ilka. Kepada 5 bahagian (mengikut isipadu) anhidrida asetik, tambahkan 1 bahagian asid asetik glasier, kemudian tuangkan 1 bahagian asid sulfurik pekat secara beransur-ansur. Simpan reagen dalam keadaan sejuk!

Reagen Millon. (Bersedia dalam tekanan! ) 40 g merkuri dilarutkan dalam 57 ml asid nitrik pekat, pertama dalam sejuk, dan kemudian dipanaskan dalam mandi air. Penyelesaian yang terhasil dicairkan dengan 2 isipadu air, dibiarkan mengendap dan disalirkan dari sedimen. Simpan dalam botol kaca gelap.

Reagen ammonium molibdat. 2.5 g ammonium molibdat dibubarkan dalam 60 ml air suling, ditapis. Larutan dimasukkan ke dalam kelalang 100 ml. Dalam kelalang lain, 7.5 ml asid sulfurik pekat ditambah kepada 25 ml air suling. Penyelesaian kedua ditambah kepada yang pertama, disejukkan dan dicairkan dengan air suling ke tanda. Penyelesaiannya sesuai untuk sebulan.

Reagen "NADI". Larutan 1% dimetil-p-phenylenediamine dicampur dengan isipadu yang sama bagi larutan 1% α-naphthol dalam alkohol dan larutan natrium karbonat 1.5%. Penyelesaiannya berwarna coklat gelap dan tidak sepatutnya mempunyai warna merah jambu. Disediakan 1 jam sebelum kelas.

Reagen Nasha. 15.4 g ammonium asetat, 0.3 g asid asetik glasier dan 0.2 g asetilaseton ditambah ke dalam kelalang berkapasiti 100 ml, dilarutkan dalam air suling dan isipadu dilaraskan mengikut tanda.

Reagen Nessler. Dalam kelalang volumetrik dengan kapasiti 500 ml, 150 g kalium iodida, 110 g iodin, 100 ml air suling dan kira-kira 140-150 g merkuri logam dicampur dan digoncang kuat selama 15 minit. Dalam kes ini, larutan secara spontan memanaskan badan, dan warna akibat iodin terlarut secara beransur-ansur menjadi pucat. Campuran kemudian disejukkan di bawah air yang mengalir sehingga warna merah yang berbeza dikekalkan, selepas itu kandungannya digoncang sehingga warna merah berubah menjadi kehijauan. Selepas dekantasi, mendakan merkuri dibasuh dengan air. Campurkan larutan dan basuhan, cairkan dengan air hingga 2 liter. Ambil 75 ml larutan yang terhasil ke dalam kelalang volumetrik 0.5 l yang mengandungi 75 ml air dan 350 ml larutan natrium hidroksida 10% dan cairkan dengan air hingga tanda.

Reagen Fehling. Dua penyelesaian disediakan secara berasingan. Penyelesaian 1: Larutkan 200 g garam Rochelle dan 150 g NaOH dalam kelalang volumetrik 1 L dan cairkan hingga tanda dengan air. Penyelesaian 2: dalam kelalang volumetrik dengan kapasiti 1 l, larutkan 40 g kuprum (II) sulfat dalam air dan cairkan dengan air hingga tanda. Campurkan jumlah yang sama bagi larutan ini sebelum digunakan.

Reagen Folin. Dalam kelalang 1 liter, larutkan 1 g natrium tungstat dan 20 g asid fosfomolibdik dalam 750 ml air. Tutup kelalang dengan penyumbat dengan kondenser refluks dan, menghidupkan aliran air di dalam peti sejuk, kandungannya direbus selama 10 jam; kemudian ia disejukkan, dituangkan ke dalam kelalang volumetrik dan isipadu berair reagen dilaraskan kepada 1 liter.

Reagen Erlich. 0.7 g p-dimethylaminobenzaldehyde dibubarkan dalam 150 ml asid hidroklorik pekat, ditambah kepada 100 ml air dan dicampur. Penyelesaiannya harus tidak berwarna atau sedikit kuning. Simpan dalam bekas kaca gelap. Reagen adalah stabil.

Reagen Erlich. Larutkan 1 g p-dimethylaminobenzaldehyde dalam kelalang volumetrik 50 ml dalam 35 ml asid asetik glasier, tambah 8 ml asid perklorik 57% dan buat sehingga tanda dengan asid asetik glasier. Simpan dalam bekas kaca gelap di dalam peti sejuk sehingga seminggu.

Larutan timol alkohol (10%). 10 g timol yang telah dimurnikan dilarutkan dalam 100 ml 96˚ etil alkohol. Mendapatkan timol yang telah disucikan dijalankan seperti berikut. 100 g timol dibubarkan dalam 100 ml 96˚ etil alkohol, ditapis. Tambah 1 liter air suling sejuk ke dalam turasan, goncang kuat-kuat dan biarkan selama 20 minit. Penapis ditapis dan hablur yang tinggal pada penapis dibasuh dua kali dengan air suling sejuk. Keringkan dahulu di atas kertas turas, kemudian selama 2-3 hari dalam desikator di atas kalsium klorida kontang hingga berat tetap.

Penyelesaian standard. Penyediaan larutan piawai dijalankan dengan mencampurkan dua larutan: 1) 0.0962 n larutan barium klorida: 1.175 g kristal BaCl 2 ∙2H 2 O dilarutkan dalam 100 ml air dalam kelalang volumetrik. 2) larutan asid sulfurik 0.2 N. Seterusnya, penggantungan barium sulfat diperoleh: 3 ml larutan barium klorida 0.0962 N dituangkan ke dalam kelalang volumetrik 100 ml dan isipadu diselaraskan dengan larutan asid sulfurik 0.2 N pada suhu + 10 ° C ( pada suhu ini, saiz zarah barium sulfat yang dimendakkan memberikan hasil yang agak stabil).

Larutan penimbal substrat: tuangkan 10 ml air ke dalam tabung uji dan tambahkan 0.028 g L-glutamyl-p-nitroaniline dan 0.082 g natrium klorida dan, tanpa berhenti mengacau, larutkan kandungan tabung uji dalam mandi air mendidih selama 60 saat . Larutan kemudian disejukkan kepada 37°C dan 2.5 ml larutan penimbal ditambah. Larutan substrat yang disediakan disimpan dalam tab mandi air pada suhu 37°C semasa operasi. Larutan substrat yang tidak digunakan boleh disimpan di dalam peti sejuk sehingga seminggu. Substrat tidak larut dengan baik dan mendakan pada suhu bilik. Oleh itu, sebelum digunakan, substrat terhablur dibubarkan dengan memanaskan dalam mandi air mendidih. Pemanasan dan pembubaran substrat boleh diulang tidak lebih daripada dua kali.

Penyelesaian substrat untuk penentuan ALT (penyelesaian No. 1). Sampel 29.2 mg asid α-ketoglutarik dan 1.78 g alanin (0.89 g α-alanine) ditimbang pada neraca analitik dan dilarutkan dalam larutan natrium hidroksida 1 M sehingga mendakan larut sepenuhnya (pH 7.4). Larutan dituangkan ke dalam kelalang 100 ml dan isipadu dilaraskan kepada tanda dengan penimbal fosfat 0.1 M (pH 7.4). Tambah 1 titis kloroform. Penyelesaiannya disimpan beku di dalam peti sejuk.

Penyelesaian substrat untuk penentuan AsAT (penyelesaian No. 2). Sampel 29.2 mg asid α-ketoglutarik dan 2.66 g asid α-aspartik (1.33 g asid α-aspartik) ditimbang pada neraca analitik. Seterusnya, penyelesaian disediakan dengan cara yang sama seperti penyelesaian No.

Larutan substrat untuk penentuan isomerase glukosa fosfat. Larutan penimbal medinal asetat pH 7.4 disediakan (9.714 g natrium asetat dan 14.714 g medinal dilarutkan dalam air dan isipadu diselaraskan kepada 500 ml). Campurkan 8.33 ml larutan 0.03 M garam disodium glukosa-6-fosfat dengan 25 ml penimbal medial asetat; tambah ke dalam campuran 25 ml larutan asid hidroklorik 0.1 M dan cairkan kepada 100 ml dengan air. Simpan sejuk.

Larutan substrat untuk penentuan laktat dehidrogenase. Campurkan 1 ml larutan natrium laktat 1 M, larutan NaCl 9 M, larutan 0.05 M Cl 2 , larutan NAD 10 g/L. 2.5 ml larutan penimbal fosfat 0.5 M (pH 7.4) dan 1 g/l larutan biru nitrotetrazolium ditambah kepada kandungan. Sebelum digunakan, 0.25 ml larutan phenanzine methasulfate dengan kepekatan 1 g / l ditambah kepada campuran.

Larutan substrat untuk penentuan fruktosa bifosfat aldolase. 270 mg garam barium fruktosa bifosfat dilarutkan dalam 3.5 ml asid hidroklorik 1 M. 1 ml larutan natrium sulfat 14% ditambah dan mendakan yang terbentuk dikeluarkan melalui sentrifugasi. Tambah 1 titis natrium sulfat ke dalam supernatan. Kemunculan kekeruhan menunjukkan pemendapan ion barium yang tidak mencukupi. Dalam kes ini, lebih banyak natrium sulfat ditambah dan disentrifugasi semula. Empar diselaraskan dengan larutan natrium hidroksida 3% kepada pH 7.4-7.6, dipindahkan ke dalam kelalang 25 ml dan isipadu dilaraskan kepada tanda. Larutan yang terhasil dicampur dengan 25 ml larutan 0.56 M hidrazin klorida, 25 ml larutan 0.002 M asid monoiodoacetic, 100 ml larutan natrium karbonat 0.5% dan 25 ml air suling. Disimpan dalam peti ais.

Penampan timol-veronal. Dalam kelalang volumetrik 100 ml, campurkan 80 ml larutan penimbal dan 1 ml larutan alkohol 10% timol, goncang dan tambah larutan penimbal pada tanda. Nilai pH hendaklah 7.55.

reagen o-Toluidine. 0.15 g tiourea dilarutkan dalam 94 ml asid asetik glasier dan dicampur dengan 6 ml O-toluidine suling. Disimpan dalam botol gelap.

Fenol tepu dengan air. 35 ml air ditambah kepada 100 g fenol suling dan dikacau, sedikit memanaskan campuran untuk mempercepatkan pembubaran fenol.

Phenolfthalene, penyelesaian yang berfungsi. Sediakan dengan melarutkan 75 mg bahan dalam 15 ml larutan natrium hidroksida 0.1 N, larutan harus tidak berwarna atau sedikit merah jambu, larutan berwarna tidak sesuai untuk digunakan. Untuk meningkatkan kestabilan reagen, 3 mg trilon ditambah kepadanya, yang, dengan mengikat garam logam berat, menghalang autooksidasi fenolftalein oleh oksigen atmosfera.

Fibrin. Fibrin darah lembu dibasuh daripada pigmen darah dalam air mengalir selama beberapa hari sehingga bekuan putih diperoleh. Air diperah keluar, dan fibrin, diisi dengan gliserin, disimpan dalam balang tertutup rapat. Sebelum digunakan, fibrin dibasuh daripada gliserin.

Reagen fosforus-vanillin. 4 bahagian (mengikut isipadu) asid fosforik pekat dicampur dengan 1 bahagian larutan akueus 0.6% vanillin. Reagen disimpan dalam bekas kaca gelap pada suhu bilik.

Fruktosa 1,6-bifosfat, garam natrium. 2.0 ml larutan 10% garam natrium fruktosa-1,6-bifosfat dicairkan dalam kelalang 25 ml dengan air hingga tanda. Stabil apabila disimpan di dalam peti sejuk.

Reagen warna untuk urea. Tablet dari kit untuk penentuan urea yang mengandungi diacetyl monooxime dan thiosemicarbazide dibubarkan dengan memanaskan dalam kelalang 50 ml. Penyelesaiannya stabil selama tiga minggu. Sebelum digunakan, campurkan jumlah yang sama bagi larutan yang disediakan dan larutan asid sulfurik 9.6%.

Larutan alkali β-gliserofosfat. Dalam kelalang volumetrik dengan kapasiti 100 ml tambah 1 g natrium β-gliserofosfat dan 0.85 g medinal, tambah kira-kira 30 ml air suling, larutkan dan bawa isipadu ke tanda dengan air. Dalam kelalang isipadu lain dengan kapasiti 100 ml tambahkan 50 ml larutan β-gliserofosfat yang disediakan, 2.8 ml larutan natrium hidroksida 0.1 M dan bawa ke tanda dengan air suling (larutan pH 8.6). Letakkan di atas cecair kira-kira 3 ml toluena. Simpan penyelesaian di dalam peti sejuk selama tidak lebih daripada 10 hari.

Mengambil darah, menyediakan "smear nipis" dan "titisan tebal"

pergerakan bakteria. Struktur flagel, ketebalan, panjang, komposisi kimia. Penyediaan persediaan tetap dan persediaan sel hidup mikroorganisma.

Reagen tulen secara kimia digunakan untuk menyediakan larutan penimbal. dan gred analitikal, disediakan khas. Reagen disediakan seperti berikut.

Kalium fosfat monosubstitusi, KH 2 PO 4 , berat molekul 136.09. 100 g ubat dibubarkan apabila dipanaskan hingga mendidih dalam 150 ml air. Penyelesaiannya ditapis panas. Dengan kacau berterusan, turasan disejukkan hingga 10 ºС. Kemudian tambah 150 ml etil alkohol. Hablur yang diasingkan dengan kacau berterusan turasan ditapis pada corong sedutan dan dihablurkan semula dalam keadaan yang sama; hablur dikeringkan kepada berat malar pada 105...110 ºС. Dengan kehadiran penyediaan dengan kandungan bahan utama dalam julat 99.9 ... 100.0%, penyediaan awal bahan tidak dijalankan.

Natrium fosfat tersubstitusi, Na 2 HPO 4 12H 2 O, berat molekul 358.12. Terdapat dua cara untuk menyediakan ubat.

a) 150 g ubat dilarutkan dalam 150 ml air apabila dipanaskan hingga 100 0 C. Larutan ditapis panas dan, selepas disejukkan, hablur yang dimendakkan ditapis. Penghabluran semula diulang dengan memanaskan hingga 100 ºС. Penyediaan penghabluran semula dipanaskan dalam cawan porselin dalam tab mandi air dengan kacau berterusan sehingga penyediaan benar-benar kering. Garam yang terhasil dikeringkan dalam desikator di atas gabungan kalsium klorida pada siang hari. Dalam penyediaan penghabluran semula (Na 2 HPO 4 ·2H 2 O), kandungan bahan utama diperiksa. Untuk melakukan ini, kira-kira 0.5000 g ubat dibubarkan dalam 50 ml air, 2 ... 3 ml larutan natrium klorida tepu ditambah dan dititrasi dengan larutan asid hidroklorik 0.1 N dengan kehadiran penunjuk metil merah. . Jika perlu, buat pelarasan pada saiz sampel. 1 ml tepat 0.1 N asid hidroklorik sepadan dengan 0.0178 g Na 2 HPO 4 2H 2 O.

b) 75 g ubat dibubarkan dalam 250 ml air yang dipanaskan hingga 60 ºС. Penyelesaian ditapis panas, turasan disejukkan dengan kacau berterusan hingga 10 ºС. Kristal yang dimendakkan ditapis pada corong sedutan dan dihablurkan semula dalam keadaan yang sama. Garam yang terhasil mula-mula dikeringkan pada suhu tidak melebihi 30 ºС selama 24 jam, kemudian ia terus dikeringkan dalam ketuhar pada 50 ºС selama 3-4 jam, dan akhirnya pada 120±5 ºС kepada berat malar, menghalang garam daripada lebur. Selepas pengeringan, garam mempunyai komposisi Na 2 HPO 4 .

Selepas menyediakan reagen, larutan stok kalium fosfat monosubstituted dan natrium fosfat tersubstitusi disediakan.

Sebahagian daripada monosubstitusi kalium fosfat kontang KH 2 PO 4 seberat 9.078 g dilarutkan dalam air dan isipadu larutan dilaraskan kepada 1 liter. Untuk menstabilkan larutan tambahkan 3-4 titis toluena.

Sebahagian daripada natrium fosfat tersubstitusi Na 2 HPO 4 12H 2 O, seberat 11.876 g, dilarutkan dalam air dan isipadu larutan dilaraskan kepada 1 liter. Untuk menstabilkan larutan tambahkan 3-4 titis toluena.

Daripada larutan awal sediakan larutan penimbal fosfat dengan pH 4.94 hingga 9.18 mengikut Jadual A.2.

Jadual A.2 - Larutan penimbal fosfat dengan pH 4.94 ... 9.18

pH	Na 2 HPO 4 12H 2 O larutan, ml	larutan KH 2 PO 4, ml
4,94	1,0	99,0
5,29	2,5	97,5
5,59	5,0	95,0
5,91	10,0	90,0
6,24	20,0	80,0
6,47	30,0	70,0
6,64	40,0	60,0
6,81	50,0	50,0
6,98	60,0	40,0
7,17	70,0	30,0
7,38	80,0	20,0
7,73	90,0	10,0
8,04	95,0	5,0
8,34	97,5	2,5
8,67	99,0	1,0
9,18	100,0	0,0

Tarikh ditambah: 2015-08-06 | Pandangan: 4058 |

pH larutan penimbal dikira mengikut persamaan Henderson-Hasselbach:

– untuk penimbal asid, persamaan mempunyai bentuk

– untuk penimbal utama

Persamaan menunjukkan bahawa pH larutan penimbal bagi komposisi tertentu ditentukan oleh nisbah kepekatan asid dan garam atau bes dan garam, dan oleh itu tidak bergantung kepada pencairan. Apabila isipadu larutan berubah, kepekatan setiap komponen berubah dengan bilangan kali yang sama.

Kapasiti penampan

Keupayaan larutan penimbal untuk mengekalkan pH malar adalah terhad. Itu. menambah asid atau alkali tanpa mengubah pH larutan penimbal dengan ketara hanya boleh dilakukan dalam kuantiti terhad.

Nilai yang mencirikan keupayaan larutan penampan untuk menentang peralihan tindak balas medium apabila asid dan alkali ditambah dipanggil kapasiti penampan larutan (B).

Kapasiti penampan diukur dengan bilangan mol yang setara dengan asid atau bes kuat, penambahannya kepada 1 liter larutan penimbal mengubah pH sebanyak satu.

Secara matematik, kapasiti penimbal ditakrifkan seperti berikut:

B oleh asid (mol/l atau mmol/l):

,

di mana n(1/z HA) ialah bilangan mol setara asid, pH 0 dan pH ialah pH larutan penimbal sebelum dan selepas penambahan asid, V B ialah isipadu larutan penimbal.

Dalam alkali (mol / l atau mmol / l):

,

di mana n (1/z VOH) ialah bilangan mol setara alkali, sebutan selebihnya adalah sama.

Kapasiti penampan bergantung kepada beberapa faktor:

1. Daripada sifat bahan tambahan dan komponen larutan penimbal. Kerana sesetengah bahan boleh membentuk sebatian atau kompleks tidak larut atau memberikan tindak balas lain yang tidak diingini dengan komponen sistem penampan, maka konsep kapasiti penampan kehilangan maknanya.

2. Daripada kepekatan awal komponen sistem penampan.

Semakin banyak bilangan komponen pasangan asid-bes dalam larutan, semakin besar kapasiti penampan larutan ini.

Had nisbah kepekatan komponen larutan penimbal, di mana sistem masih mengekalkan sifatnya. Selang pH = pK ± 1 dipanggil zon tindakan penampan sistem. Ini sepadan dengan julat nisbah Dengan garam /C kepada-anda dari 1/10 hingga 10/1.

B kepada (darah) \u003d 0.05 mol / l; B kepada (plasma) \u003d 0.03 mol / l; B kepada (darah serum) = 0.025 mol / l

Sistem penimbal darah

terutamanya sangat penting sistem penampan adalah dalam mengekalkan keseimbangan asid-bes organisma. Nilai pH kebanyakan cecair intrasel adalah dalam julat dari 6.8 hingga 7.8.

Asid - keseimbangan asas dalam darah manusia disediakan oleh sistem penampan hidrokarbonat, fosfat, protein dan hemoglobin. Nilai pH normal plasma darah ialah 7.40 ± 0.05.

Sistem penampan hemoglobin menyediakan 35% kapasiti penampan darah: . Oxyhemoglobin adalah asid yang lebih kuat daripada hemoglobin yang dikurangkan. Oksihemoglobin biasanya dalam bentuk garam kalium.

Sistem penimbal karbonat : menduduki tempat pertama dari segi kuasa. Ia diwakili asid karbonik(H 2 CO 3) dan natrium atau kalium bikarbonat (NaHCO 3, KHCO 3) dalam nisbah 1/20. Penampan bikarbonat digunakan secara meluas untuk membetulkan gangguan asid-bes dalam badan.

Sistem penimbal fosfat . Dihidrofosfat mempunyai sifat asid lemah dan berinteraksi dengan produk alkali yang memasuki darah. Hidrofosfat mempunyai sifat alkali lemah dan bertindak balas dengan asid yang lebih kuat.

Sistem penimbal protein memainkan peranan meneutralkan asid dan alkali kerana sifat amfoteriknya: dalam persekitaran berasid, protein plasma berkelakuan seperti bes, dalam asid seperti asas:

Sistem penampan juga terdapat dalam tisu, yang menyumbang kepada mengekalkan pH tisu pada tahap yang agak tetap. Penampan tisu utama ialah protein dan fosfat. Mengekalkan pH juga dilakukan dengan bantuan paru-paru dan buah pinggang. Karbon dioksida yang berlebihan dikeluarkan melalui paru-paru. Buah pinggang dengan asidosis merembeskan lebih banyak asid natrium fosfat monobes, dan dengan alkalosis - lebih banyak garam beralkali: natrium fosfat dibasik dan natrium bikarbonat.

Contoh penyelesaian masalah

Penyelesaian:

Kami mengira pH larutan penimbal asid menggunakan formula , kemudian

Jawapan: 5,76

Penyelesaian:

Kami mengira kapasiti penimbal menggunakan formula:

Jawapan: 0.021 mol/l

Contoh 3

Larutan penimbal terdiri daripada 100 ml 0.1 mol/l asid asetik dan 200 ml 0.2 mol/l natrium asetat. Bagaimanakah pH larutan ini akan berubah jika 30 ml larutan natrium hidroksida 0.2 mol/l ditambahkan padanya.

Penyelesaian:

Kami mengira pH larutan penimbal menggunakan formula:

Apabila NaOH ditambahkan ke dalam larutan penampan, jumlah garam meningkat dan jumlah asid dalam larutan penimbal berkurangan:

0,006 0,006 0,006

CH 3 COOH + NaOH \u003d CH 3 COONa + H 2 O

Kami mengira n (NaOH) \u003d 0.03 l 0.2 mol / l \u003d 0.006 mol, oleh itu, dalam larutan penampan, jumlah asid berkurangan sebanyak 0.006 mol, dan jumlah garam meningkat sebanyak 0.006 mol.

Kami mengira pH larutan menggunakan formula:

Oleh itu: pH 2 - pH 1 = 5.82 - 5.3 = 0.52

Jawapan: perubahan pH penimbal = 0.52.

Tugasan untuk keputusan bebas

4. Untuk mentitrasi 2 ml darah untuk menukar pH daripada nilai awal (7.36) kepada nilai akhir (7.0), perlu menambah 1.6 ml larutan HCl 0.01 M. Kira kapasiti penimbal asid.

5. Berapa mol natrium asetat mesti ditambah kepada 300 ml asid asetik untuk mengurangkan kepekatan ion hidrogen sebanyak 300 kali (K dis (CH 3 coon) = 1.85.10 -5).

6. Dalam kajian biokimia, penimbal fosfat dengan pH = 7.4 digunakan. Dalam nisbah apakah larutan natrium hidrogen fosfat dan natrium dihidrogen fosfat harus dicampur dengan kepekatan 0.1 mol / l setiap satu untuk mendapatkan larutan penampan sedemikian (pK (H 2 PO 4 -) \u003d 7.4).

7. Apakah pelanggaran CBS yang diperhatikan dengan penunjuk berikut: pH darah = 7.20, Pco 2 = 38 mm Hg. Seni., BO = 30 mmol / l, SBO = -4 mmol / l. Bagaimana untuk menghapuskan pelanggaran KOS ini?

Tugasan ujian

Penimbal Basuh Tween-20 Phosphate untuk Imunohistokimia ialah pekat (20x) yang, selepas pencairan, digunakan untuk mencuci slaid reagen dan penyimpanan jangka pendek spesimen imunohistokimia antara prosedur. Selepas pencairan, larutan 0.01 M sedia untuk digunakan mempunyai pH 7.4±0.1. Penggunaan garam penampan fosfat ini membolehkan bukan sahaja untuk menyediakan pencucian berkualiti tinggi, tetapi juga untuk mengekalkan ciri-ciri morfologi antibodi yang digunakan dan epitopnya, yang memudahkan pengikatan khusus yang diperlukan untuk tindak balas imunohistokimia. Penambahan Tween-20 pada PBS menggalakkan pencucian yang lebih cekap dan menghalang pewarnaan tidak spesifik.

Kelebihan kami:

Pada masa ini kami bekerjasama dengan pengeluar reagen makmal terkemuka asing. Pelanggan kami adalah institusi bukan negara dan negara, termasuk organisasi perubatan di Moscow dan bandar lain di Rusia. Bagi pelanggan tetap ada sistem diskaun.