Vaatimukset biologisen materiaalin keräämiselle ja valmistelulle hematologisia tutkimuksia varten.

Vaatimukset biologisen materiaalin kuljetuksesta ja varastoinnista hematologisia tutkimuksia varten.

Hemostaasijärjestelmän tutkimuksen suunnan oikea täyttö:

Potilaan koko nimi, ikä, sukupuoli

Verinäytteenottoaika tutkimusta varten

Kliininen diagnoosi (lyhyesti)

Hematokriitti

Hemorraginen oireyhtymä (nenän, kohdun verenvuoto jne.), tromboosi (osoita sijainti), sokki, monielinten vajaatoiminta, trauma, pitkittynyt puristusoireyhtymä, palovammat jne.

Ilmoita käytetyt lääkkeet, jotka vaikuttavat hemostaasin parametreihin, ilmoittaen annostuksen, menetelmän ja viimeisen antopäivän

Näytteenottoaikaväliä (veri), ruokavalio- ja liikuntarajoituksia noudatetaan:

Suunniteltu verinäytteenotto suoritetaan klo 7-9 tuntia aamusta kun potilas makaa tai istuu. Kun tutkitaan hemostaasia dynamiikassa, on toivottavaa ottaa verta samassa kehon asennossa kuin edellinen.

Veri otetaan tyhjään mahaan, 12-14 tuntia viimeisen aterian jälkeen.

Ennen veren ottamista potilaan on toivottavaa levätä 15 minuuttia.

Poikkeukset: hemostaasitutkimukset citolla, APTT:n arviointi.

Suunnitellun tutkimuksen aattona (24 tunnin sisällä) potilas pidättäytyy merkittävästä liikunta, alkoholin nauttiminen. On toivottavaa, että potilas ei syö rasvaisia ​​ruokia verinäytteiden aattona.

Kirurginen toimenpide johtaa hemostaasin muutokseen useista päivistä useisiin viikkoihin.

Hemostaasiin vaikuttavia tekijöitä ovat injektiot, infuusiot, verensiirrot, pistokset, biopsiat, hieronta, dialyysi, röntgensäteilyä läpäisevien aineiden käyttöönotto, immunoskintiografia, ionisoiva säteily, endoskooppinen tutkimus, erityisruokavaliot.

VERINÄYTTEEN SÄÄNNÖT

Veri otetaan ääreislaskimosta (yleensä kubitaalista).

Verinäytteet otetaan vain tyhjiönäytteenottojärjestelmällä koeputkissa, joissa on erityinen värimerkintä käytetystä antikoagulantista riippuen ( natriumsitraatti 3,2 %) suhteessa: 1 tilavuus natriumsitraattia 9 tilavuusosaan verta.

Tutkimusta varten verihiutaleiden tasot veren ottaminen koeputkeen EDTA:n kanssa(lila värikoodaus). Verihiutaleiden tason tutkimus määrätään kliinisen verikokeen puuttuessa tai kun verihiutaleiden tason patologiset arvot saadaan kliinisessä verikokeessa.

Lyhyt kiristys on sallittu, enintään 60 sekuntia. Poista kiristysside välittömästi sen jälkeen, kun neula on mennyt laskimoon. Verinäytteiden ottoa varten hyytymisjärjestelmän tutkimista varten on tärkeää, että et voi hieroa suonet, koputtaa niitä.

Käytä verenkeräysneulaa, jonka sisähalkaisija on 0,7-1 mm (koko 19-22).

Ruiskun käyttöä ei voida hyväksyä, koska verihiutaleet ja veren hyytymistekijät aktivoituvat veren myrskyisestä liikkeestä ja sen sekoittumisesta ilman kanssa (vaahtoaminen). Se on poissuljettu tyhjiösäiliöitä käytettäessä.

Kun neula on työnnetty laskimoon, kiinnitä tyhjiösäiliö, veri alkaa virrata säiliöön painovoiman vaikutuksesta.

Ota verta koagulologiseen tutkimukseen toinen koeputki, ensimmäinen käyttö muihin tutkimuksiin, esimerkiksi biokemiallisiin. Jos hyytymiskoeputki otetaan ensin, vedä ensimmäiset 5 ml verta tyhjään putkeen ja hävitä estää kudostromboplastiinin pääsyn näytteeseen.

Sekoita veri varovasti heti keräämisen jälkeen ilman vaahtoamista antikoagulantin kanssa (käännä putki ylösalaisin 3-4 kertaa).

Tarkista verinäyte biologisen materiaalin näytteenoton jälkeen. Verinäytteiden tarkka tarkistus välttää seuraavat virheet: väärä veren/sitraattitilavuuden suhde; osittain hyytynyttä verta.

Veri toimitetaan laboratorioon 45 minuutin kuluessa sen keräämisestä. Kuljetuksen aikana verta ei saa ravistaa. Verinäytteitä ei saa kuljettaa alle 4 °C:n ja yli 30 °C:n lämpötiloissa.

Ensihoitaja-laboratorioavustaja (lääketieteellinen teknikko) suorittaa:

toimitetun veren syöttöohjaus, mukaan lukien: 1) tarkistaa lähetelomakkeen täytön oikeellisuuden. 2) tarkastetaan toimitetun verimäärän riittävyys putkessa olevan etiketin mukaan, 3) tarkistetaan näytteessä hyytymien puuttuminen, kun putkea kallistetaan hitaasti.

toimitetun veren sentrifugointi, jotta saadaan:

verihiutalerikas plasma ( sentrifugointiparametrit: rpm = 1000 rpm (noin 150-200 g), sentrifugointiaika 5-7 minuuttia.

Valintaa varten optimaaliset olosuhteet sentrifugointia ohjaa keskipakovoima (g). Voit käyttää kaavaa:

g = 1,118 x 0,00001r x n2,

missä r on sentrifugin säde - roottorin akselin ja sentrifugin istukassa olevan koeputken keskikohdan välinen etäisyys senttimetreinä; n on kierrosten lukumäärä minuutissa.

verihiutaleiden huono plasma sentrifugointiparametrit: rpm = ~2500-3000 rpm (noin 1500-2000g), sentrifugointiaika 10-20 minuuttia. Verihiutaleiden täydelliseksi poistamiseksi suoritetaan toistuva sentrifugointi, sentrifugointiparametrit pysyvät samoina.

3. Tarkista sentrifugoinnin jälkeen plasman väri ja läpinäkyvyys: hemolysoitua näytettä, ikteristä tai lipeemistä (kyloottista) plasmaa ei tutkita.

Sentrifugoinnin jälkeen supernatantti poistetaan.

toivottavaa tutkia hemostaasiparametreja aikana 2 tuntia verinäytteen ottamisen jälkeen, mutta sallittu koagulologisten parametrien tutkimus 4 tunnin sisällä jos plasma on erotettu erytrosyyttien ja leukosyyttien sedimentistä.

Jos välttämätöntä pitkäaikaissäilytys"tuoreet" näytteet (viimeistään 2 tuntia verinäytteen ottamisen jälkeen) verihiutalevapaa plasma voi olla kerran jäätyä ja säilytä enintään 2 viikkoa -20 °C:ssa tai enintään 6 kuukautta -70 °C:ssa. Plasma on sulatettava nopeasti lämmintä vettä(+36°C), sekoita huolellisesti ja tutki välittömästi. Jäätymisen jälkeen APTT:n muutos on mahdollista.

Hematologisten tutkimusten mikrovalmisteiden valmistusmenetelmät, kiinnitys- ja värjäysmenetelmät.

Menetelmä verinäytteen valmistamiseksi hematologisia tutkimuksia varten.

Lasien valmistus ja käsittely. Uusia puhtaita laseja voidaan käyttää Nikiforovin seoksen rasvanpoiston jälkeen (yhtämäärä 96 % etyylialkoholia ja eetteriä). Käytettyjä laseja liotetaan vuorokausi lämpimässä saippualiuoksessa tai pesujauheliuoksessa (1 ruokalusikallinen jauhetta 5 litraa vettä kohti). Päivää myöhemmin liuos valutetaan, lasi pestään juoksevalla vedellä. Sitten ne kaadetaan uudelleen lämpimällä saippualiuoksella tai pesujauheliuoksella ja kiehutaan, keitetään samassa liuoksessa 5-10 minuuttia (ei enempää, jotta lasit eivät samene). Liuoksen jäähdytyksen jälkeen se valutetaan uudelleen, objektilasit huuhdellaan juoksevalla vedellä ja kukin objektilasi pestään harjalla juoksevan veden alla. Tällä tavalla käsitellyt lasit asetetaan puhtaalle levylle kuivumaan. Puhtaat lasit rasvanpoistoon asetetaan Nikiforovin tai 96-prosenttisen etyylialkoholin seokseen 60 minuutiksi, sitten pyyhitään kuivaksi ja säilytetään puhtaassa astiassa, jossa on leveä kaula. Puhtaat lasit on suositeltavaa ottaa joko pinseteillä tai käsin sivureunoista.

Koivujen valmistus. Pieni veripisara levitetään kuivalle valmistettuun lasilevylle lähemmäksi lyhyttä puolta lasisauvalla (tai suoraan sormenpistokohdasta). Jätä lasi vaakasuoraan asentoon ja levitä veri lasille kuivalla, puhtaalla, hiottu lasilla pitäen sitä 45° kulmassa. Lyhyellä reunalla, odotettuaan, kunnes kaikki veri on levinnyt sen päälle, ne vedetään nopeasti lasilevyn päälle. Lasilevyyn ei saa kohdistua voimakasta painetta, koska se voi vahingoittaa verisoluja. Levyt ilmakuivataan ja merkitään (mieluiten yksinkertaisella lyijykynällä). Kuivuneen sivelynäytteen tulee olla tasaisen ohut, kellertävän värinen, riittävän kokoinen, sijoitettava 1,0-1,5 cm:n etäisyydelle lasin reunoista, peittää melkein koko lasin pituuden ja päättyä "paniikkiin". Paksua (syvän vaaleanpunaista) sivelyä ei pidä käyttää, koska solujen morfologiaa on vaikea erottaa niistä.

Vakiolaatuiset sivelynäytteet saadaan eri yritysten valmistamilla sivellinvalmistukseen tarkoitetuilla automaattisilla laitteilla.

Verinäytteiden kiinnitys ja värjäys. Ennen värjäystä verinäytteet kiinnitetään yleensä 5–10 minuutiksi metyylialkoholiin hemolyysin estämiseksi, joka voi tapahtua joutuessaan kosketuksiin veden kanssa vesiliukoisen väriaineen värjäysprosessin aikana tai myöhemmin kosketuksessa veden kanssa. Kiinnitystekniikat kuvataan alla yhdessä värjäystekniikoiden kanssa. Kiinnitystä ei vaadita Wright- ja Leishman-tahreille, koska nämä tahrat sisältävät metyylialkoholia.

Kuivia vanupuikkoja voidaan säilyttää 2 päivää kuivassa, lämpimässä paikassa; kuumassa, kosteassa ilmassa ilman kiinnitystä niitä säilytetään paljon vähemmän.

Verisolut sisältävät basofiilisiä ja asidofiilisiä rakenteita, jotka eroavat toisistaan ​​​​reaktiossa (pH). Tumat ovat basofiilisiä ja värjäytyvät siniseksi. Erittäin basofiiliset (happamat) basofiilien rakeet ovat myös sinisiä. Hemoglobiini (on emäksinen) värjäytyy asidofiilisesti eli punaiseksi. Värjäämistä happamien ja emäksisten väriaineiden yhdistelmällä kutsutaan Romanovsky-värjäykseksi ja siinä on useita muunnelmia (Pappenheim, Wright, Noht, Leishman, Giemsa, Jayner jne.). Pääväriaineena käytetään yleensä metyleenisinistä, mutta myös toluidiinisinistä. Happamana väriaineena käytetään eosiinia, taivaansinistä I:tä ja taivaansinistä II:ta.

Hyvän värjäytymisen kriteerit: erytrosyyttien vaaleanpunainen väri, neutrofiilien purppuravärjäytyminen vaaleanpunaisella taustalla, monosyyttien hellävarainen atsurofiilinen rakeisuus.

Maalin laimentamiseen on parasta käyttää neutraalia tuoretta tislattua vettä. Vanhentunut tislattu vesi muuttuu happamaksi hiilidioksidin talteenoton vuoksi ilmakehästä. Jos tislattu vesi on emäksistä, punasolut muuttuvat likaisen sinivihreäksi; se osa leukosyyteistä, jotka pitäisi värjätä siniseksi, muuttuu purppuraiseksi, eosinofiilirakeista tulee sinertäviä ja vihertäviä vaaleanpunaisten sijasta ja neutrofiilien rakeet jäävät kiinni. Happamassa vedessä punasolut muuttuvat kirkkaan oransseiksi ja leukosyyttien ytimet ovat hyvin vaaleita. Ihanteellinen on tislattu vesi, jonka pH on 7,0 ja joka puskuroidaan sen säilyttämiseksi. Voit käyttää käyttövalmiita puskuritabletteja, jotka on liuotettu tislattuun veteen.

Luuytimen värjäykseen värjäys pH 7,4-7,5 on ihanteellinen.

Nohtin ja Pappenheimin mukaiset värjäysmenetelmät hyväksytään yhtenäisiksi.

Kiinnitysreagenssit: 1) metyylialkoholi tai 2) May-Grunwald eosiini-metyleenisiniliuos.

Reagenssit sivelypinnoille Nokht:n mukaan: 1) taivaansinisen I emäksinen liuos: 1 g maalia liuotetaan 1 litraan tislattua vettä, jätetään tummaan lasiastiaan 12-14 vuorokaudeksi huoneenlämpötilaan, minkä jälkeen se käytetään; 2) kaliumeosiinin emäksinen liuos: 1 g maalia liuotetaan 1 litraan tislattua vettä, jätetään tummaan lasiastiaan 12-14 vuorokaudeksi huoneenlämpötilaan, minkä jälkeen se käytetään; 3) fosfaattipuskuri (Weise-seos), pH 7,4-7,5: sekoita 0,49 g kaliumdivetyfosfaattia (KH2PO4) ja 0,909 g natriumvetyfosfaattia (Na2HPO4) ja liuotetaan 1 litraan tislattua vettä; 4) Azure-eosiinin työliuos: sekoita ennen käyttöä 25 ml Azure II:n kantaliuosta, 20 ml kaliumeosiinin kantaliuosta ja 55 ml puskuriliuosta (väriaineiden suhteet voivat vaihdella, ne vahvistetaan empiirisesti valmistettaessa tuoreita varastoliuoseriä).

Reagenssit sivelysolujen värjäykseen Pappenheimin mukaan: 1) May-Grunwaldin mukainen eosiini-metyleenisininen liuos. Jos valmista väriaineliuosta ei ole, se valmistetaan liuottamalla 1 g kuivaa maalia 1 litraan metyylialkoholia; 2) taivaansinisen eosiinin työliuos Nokht.

Tahrojen kiinnitys. Kiinnitysliuos kaadetaan kyvettiin tai leveäsuiseen astiaan, jossa on jauhettu tulppa. Suihkeet asetetaan astiaan, joka upotetaan kyvettiin tai asetetaan yksitellen astiaan 5-10 minuutiksi. Säiliö lasien kanssa poistetaan kiinnitysliuoksesta (tai lasit otetaan pois pinseteillä ja asetetaan telineeseen) ja jätetään ilmaan, kunnes ne ovat täysin kuivia.

Värjäys Nochtin mukaan. Kuivatut kiinteät sivelyt, poistamatta niitä säiliöstä, asetetaan kyvettiin työmaaliliuoksella tiukasti määritellyksi ajaksi (20-45 minuuttia), joka valitaan empiirisesti jokaiselle maalierälle. Säiliöllä varustetun kyvetin puuttuessa lasit asetetaan vaakasuoraan kahdelle lasitangolle ("kiskolle") rinnakkain vedon kanssa ylöspäin ja niille kaadetaan 3–4 ml työmaaliliuosta. Säiliö lasilla otetaan pois kyvetistä väriaineella ja asetetaan kyvettiin, jossa on vesijohtovettä (astioiden puuttuessa lasien maali pestään pois vedellä poistamatta niitä lasitangoista). Levyt ilmakuivataan.

Pappenheim väritys. Kuivat kiinnittymättömät verinäytteet asetetaan säiliöön ja lasketaan kyvettiin, jossa on May-Grunwald-liuosta, 3-5 minuutiksi (tai 3-4 ml väriainetta kaadetaan pipetillä kiinnittymättömään näytteeseen). Säiliö, jossa on sivelyä, huuhdellaan kyvetissä tislatulla vedellä ja asetetaan sitten taivaansininen-eosiiniväriseen kyvettiin Nokht:n mukaan 8-15 minuutiksi. "Kiskoille" asetettuihin objektilasiin lisätään tislattua vettä ilman väriaineen valuttamista 1 minuutiksi, jonka jälkeen maalia kaadetaan sivelylle 8-15 minuutiksi, jonka jälkeen maali pestään pois vedellä. Levyt ilmakuivataan.

Väritys Romanovsky-Giemsan mukaan. Valmistettu samalla tavalla kuin Nokht. Väriaineena käytetään valmista Romanovsky-Giemsa-liuosta, joka laimennetaan ennen käyttöä nopeudella 1 tippa väriainetta / 1 ml tislattua vettä. Väritysaika asetetaan empiirisesti jokaiselle värierälle (25–40 min).

Wrightin väritys. Reagenssit. 0,2 g Wrightin tahraa (kuivajauhe, BDH/E. Merck) liuotetaan 100 ml:aan metanolia ja annetaan seistä useita päiviä. Jos punasolut eivät värjäyty tarpeeksi selvästi, valmista 0,25 % tai 0,3 % liuos.

Värityksen edistyminen. Levitetään muutama (noin 8) tippa maalia sivelypinnalle, annetaan seistä 2-3 minuuttia (varmistu, ettei maali kuivu), sitten kaadetaan vastaava määrä puskuroitua vettä sivelypinnalle. Jos maali on kypsynyt, laimennetun maalin pinnalle muodostuu metallinhohtoinen vaahto tai kalvo. Laimennettua maalia jätetään sivelylle 2-3 minuutiksi ja pestään sitten pois puskuriliuoksella tai vedellä. Maali ei saa antaa laskeutua tahran pinnalle. Jos näin tapahtuu, sivelee täytetään laimentamattomalla maalilla 15-20 sekunnin ajan ja sitten uudelleen puskuriliuoksella tai vedellä.

Fosfaattipuskurin valmistus.

Liuos A (0,2 M KH2PO4): Liuota 27,2 g suolaa 1 litraan tislattua vettä.

Liuos B (0,2 M Na2HPO4): Liuota 35,6 g Na2HPO4 × 2H20 1 litraan tislattua vettä.

Jotta saadaan 100 ml puskuriliuosta, jonka pH on haluttu, liuokset A ja B tulee valuttaa taulukossa ilmoitettujen määrien mukaan. pH-arvo tarkistetaan pH-mittarilla.

Fosfaattipuskuriliuoksen valmistus

Liuos, ml	PH arvo

Leishman väritys. Reagenssit. 0,15 g Leishmanin kuivaa maalia liuotetaan 133 ml:aan absoluuttista metyylialkoholia. Maalin tulee liueta kokonaan, maalikiteet kannattaa hioa etukäteen laastissa. Säilytä maali pullossa, jossa on lasitulppa, älä suodata.

Värityksen edistyminen. Suoritetaan samalla tavalla kuin Wright-värjäys, mutta puskuriliuoksen kaksinkertaisella laimennuksella. Muutama tippa maalia (noin 8) kaadetaan sivelylle, pidetään 2 minuuttia. Lisää kaksinkertainen määrä puskuriliuosta (16 tippaa), sekoita keinuttamalla ja anna vaikuttaa 7-10 minuuttia. Maali pestään pois tislatulla vedellä 2-3 sekunnissa. Pidemmällä pesulla väri heikkenee. Levyt kuivataan telineessä ilmassa.

Paksun veripisaran valmistaminen. Kolme veripisaraa, jotka on kerrostettu lasilevylle tietyn etäisyyden päässä toisistaan, laajennetaan puhtaan lasilevyn kulmassa halkaisijaltaan noin 1 cm:n kokoisiksi, merkitään lyijykynällä ja kuivataan ilmassa 1–2 tuntia.

Värittää paksu veripisara. Paksut veripisarat eivät ole kiinteät. Lasilevyt, joissa on hyvin kuivatut paksut pisarat, asetetaan "kiskoille" tietylle etäisyydelle toisistaan, ja niille kaadetaan Nokht:n mukainen taivaansinisen eosiinin työliuos 8-10 minuutin ajan. On olemassa punasolujen "uuttuminen". Sitten maali valutetaan ja valmisteiden päälle kaadetaan uusi annos Nokht:n mukaista taivaansinisen eosiinin työliuosta 30-35 minuutin ajaksi. Objektilasit huuhdellaan sitten huolellisesti tislatulla vedellä ja kuivataan.

Automaattinen tahrojen värjäys

Koska yksi hematologian laboratorion kysytyimmistä tehtävistä on verinäytteen valmistus ja värjäys, niiden automatisointi on luonnollista.

Sysmex (Japani) kehitti ensimmäisen automaattisen sivelynäytteen valmistusjärjestelmän vuonna 1990, ja tällä hetkellä yli 1600 järjestelmää on asennettu maailmanlaajuisesti. Tänä aikana saatua laajaa kokemusta käytettiin kehitettäessä uuden sukupolven järjestelmää - täysin automatisoitua SP-1000i sivelyvalmisteen valmistus- ja värjäysasemaa, jonka kapasiteetti on jopa 120 sivelyä tunnissa. SP-1000i toteuttaa korkean standardoinnin ja laadun sivelynäytteiden valmistuksessa älykkäällä kiilamenetelmällä, jonka avulla käyttäjä voi säätää levitettävän verinäytteen määrää, levitysterän kulmaa, levitysnopeutta ja odotusaikaa riippuen. koenäytteen hematokriittiin käyttämällä 8–16 eri säätelytasoa. Verinäytteet voidaan ottaa manuaalisesti tai automaattisesti avoimista tai suljetuista putkista. Sysmexin automaattinen sivelyvalmisteen valmistus- ja värjäysasema SP-1000i (Japani)

Järjestelmä käyttää jopa seitsemää joustavasti muokattavissa olevaa värjäysprotokollaa, joiden avulla voit standardoida sivelyvärjäyksen laadun ja täyttää korkeimmat vaatimukset. Seuraavia kaksois- ja yksivärjäysmenetelmiä voidaan käyttää: May-Grunwald-Giemsa, Romanovsky ja Romanovsky-Giemsa. Verinäytteet värjätään erityisessä kasettijärjestelmässä, joka sisältää vain yhden objektilasin kasettia kohden. Tällä menetelmällä taataan hyvä suhde verinäytteen ja värjäysreagenssien välillä eikä metanoli haihdu reagenssista ilmaan. Hyvän veren kiinnittymisen varmistamiseksi ennen värjäystä, värjäysprosessiin on integroitu erillinen vaihe metanolin esikiinnittämiseksi.

Värjäysprotokollan joustavuuden vuoksi voidaan käyttää erityistä protokollaa luuytimen värjäykseen.

Menetelmä luuydinnäytteiden valmistamiseksi hematologisia tutkimuksia varten.

Luuydintutkimus – myelogrammi Ensimmäinen kysymys, johon luuydintutkimuksen on vastattava, on solujen määrällinen puoli. On hyvin tunnettua, että perifeerisen veren suhteen voidaan määrittää useita numeerisia arvoja erityyppisten solujen lukumäärälle ja prosenttiosuudelle, koska ne ovat vapaassa tilassa ja suhteellisen tasaisesti jakautuneet verisuoniverisuspensiossa. Luuytimestä voidaan sanoa täysin erilaista: hematopoieettisen kudoksen koostumus on hyvin heterogeeninen ja luuydinsolujen jakautuminen ei ole sama. Siten myelokaryosyyttien suora määrä kammiossa vaihtelee hyvin laajalla alueella, sekä normaalitilassa että saman taudin puitteissa. Yksilöiltä löytämämme arvot vaihtelivat normaalisti välillä 27 000 - 112 000 ydinelementtiä mm3 (Ursya) kohti. Kirjallisuustiedot vaihtelevat vieläkin laajemmin, rajat ovat 12 000 ja 300 000 per mm3 (Cartwright, Page). Sentrifugoinnin jälkeen hematokriittiputkesta löytyy seuraavat 4 kerrosta: 1) ylempi rasvankeltainen kerros; 2) plasma; 3) tumasoluista muodostunut harmahtavavalkoinen kerros; 4) punainen kerros, joka koostuu erytrosyyteistä. Tumasolujen harmahtavan valkean kerroksen (myelokriitti) mittaus on rajallinen tai jopa harhaanjohtava, koska myös normaaleista yksilöistä löytyvissä arvoissa on merkittäviä vaihteluita. Lisäksi ydinsoluja ei löydy vain tästä kerroksesta, vaan myös rasva- ja erytrosyyttikerroksista. Mutta luuydintiivistettä voidaan valmistaa harmaavalkeasta kerroksesta supernatanttiplasman poistamisen jälkeen. Ne ovat osoittautuneet hyödyllisiksi diagnostisessa prosessissa tapauksissa, joissa suorat sivelynäytteet ovat huonoja soluissa. Ottaen huomioon, että myelokaryosyyttien kammiomäärät ja myelokriittimääritykset ovat vain likimääräisiä tuloksia, joiden toistettavuus on rajoitettu, nämä kvantitointimenetelmät eivät ole tyydyttäviä. Imupunktion aikana uutettu materiaali on luuydinnäyte, joka on sekoitettu verta eri suhteissa. Luuytimen laimennusaste verellä riippuu useista tekijöistä. 32P-merkintä osoitti, että aspiroidun luuytimen laimennus verellä on 40–100 %. On kuitenkin huomattava, että luuytimen tutkimus diagnoosin tekemiseksi perustuu ensisijaisesti solusisällön kvalitatiiviseen tutkimukseen ja vasta toissijaisesti tämän sisällön kvantitatiivisiin arvoihin. Tästä syystä kvantitatiiviset menetelmät luuydinsolujen määrittämiseksi koostuvat luuytimen solukoostumuksen puolikvantitatiivisesta arvioinnista normaaleihin näytteisiin verrattuna: a) sivelynäytteitä, joissa on murskattuja kokkareita; b) histologiset leikkeet. Näytteen tutkiminen suoritetaan pääosin kuivalla linssillä, useilla sivelynäöillä seuraavin tavoittein: a) luuytimen solumassan puolikvantitatiivinen arviointi; b) megakaryosyyttien läsnäolon ja tiheyden määrittäminen; c) jättimäisten solujen tai epänormaalien solujen pesien havaitseminen; d) sopivimpien tutkimusalueiden tunnistaminen upottamalla. Luuydinpartikkeleita murskaamalla saaduissa sivelynäöissä erotetaan seuraavat kolme samankeskistä vyöhykettä: a) keskeinen; b) ulkoinen; c) keskitasoa. Keskivyöhykkeen muodostavat rasvavakuolit, stroomasolut, granulosyytit ja lukuisat tuhoutuneet solut. Ulompi vyöhyke sisältää suuren määrän verta, joka laimentaa luuydinsoluja. Kuten ohuet sivelyt, se vain auttaa tutkimaan myeloidisolujen ja punasolujen morfologisia yksityiskohtia. Tihein solumassa sijaitsee välivyöhykkeellä, mikä mahdollistaa optimaalisen tutkimuksen, joka voi selventää kaikkia esitettyjä kysymyksiä. Täällä luuydinsolut ovat hyvin säilyneitä ja järjestetty luodoiksi tai pesiin, aivan kuten luuytimessä näkyy. Samalla kun luuytimen topografia säilyy, tämän vyöhykkeen tutkimuksen tulokset ovat homogeenisempia ja vastaavat luuytimen todellista tilaa, mikä vahvistaa sen histologisiin kuviin verrattuna. Solutiheyden puolikvantitatiivinen määritys ilmaistaan ​​seuraavasti: a) normaali, b) rikas tai c) laiha verrattuna normaaliin luuytimeen. Normaalin tai runsaan solumassan tunnistaminen on arvokas löytö, kun taas niukkaa luuydintä tulee harkita varoen. Varsinaisen hypoplasian osoittamiseksi tulee tutkia useita levyjä, tehdä useille luualueille pisto ja/tai luubiopsia. Tarkimmat tiedot luuytimen solumassasta saadaan tutkimalla histologisia leikkeitä. Aikuisella rasvan ja aktiivisen soluparenkyymin tilan suhde on normaalisti 1:1 tai 2:1. Jotkut kirjoittajat pitävät luuydintä hyposellulaarisena, kun hematopoieettiset solut vievät alle neljänneksen luuytimen kokkareista. Laadullinen luuydintutkimus on välttämätön diagnoosin tekemiseksi. Se suoritetaan upottamalla sekä ohuille sivelylle että erityisesti sivelylle, jossa on murskattuja kokkareita välivyöhykkeestä. On suositeltavaa valita parhaat oikein venytetyt ja värjäytyneet sivelyt, joissa on selkeästi määritellyt ja morfologisesti hyvin säilyneet solut. Tässä tutkimuksessa hahmotellaan: a) erityyppisten myeloidisolujen tunnistaminen; b) kunkin solurivin kypsymisasteen määrittäminen; c) granulosyyttien ja erytroblastien välisen suhteen selventäminen (G/E) d) solujen tunnistaminen mitoosivaiheessa; e) kuvaus havaituista epätyypillisistä soluista. Useiden sivelynäytteiden tutkimisen jälkeen kootaan joko yksityiskohtainen kuvaava "myelogrammi" (joka sisältää näppäilynäytteiden purkamisen jälkeen tehdyt johtopäätökset) tai prosenttimääräinen myelogrammi, joka on määritetty vähintään 300-500 elementillä. On kaksi tapaa koota prosentuaalinen myelogrammi: 1) määrittää loput solurivit 100 granulosyytille; 2) kunkin solutyypin prosenttiosuus luuydinsolujen kokonaismäärästä. Tilastollisesti katsottuna jälkimmäinen menetelmä näyttää oikeammalta ja ilmeisesti heijastaa todellista kuvaa luuytimen solukoostumuksesta. Yksittäisten tekijöiden laatimat kaavat eroavat merkittävästi, koska on vaikea määrittää todellisia keskiarvoja sellaisessa heterogeenisessä kudoksessa kuin luuytimessä. Taulukossa esitetään Wintroben mukaan 12 normaalin yksilön valittujen luuydinnäytteiden tutkimuksen tulokset. Normaali myelogrammi

Myelogrammiparametrit Keskiarvo (%) vaihteluväli (%)

Retikulaariset solut 0,9 0,1-1,6 Erilaistumattomat blastit 0,6 0,1-1,1 Myeloblastit 1,0 0,2-1,7

Promyelosyytit 2,5 1,0-4,1

Myelosyytit neutrofiilit 9,6 7,0-12,2 Metamyelosyytit neutrofiilit 11,5 8,0-15,0 Stab neutrofiilit 18,2 12,8-23,7 Segmentoidut neutrofiilit 18,6 13,1-24,1 Neutrofiilisolut yhteensä 60,8 52,7-68,9 Eosinofiiliset myelosyytit 0,1 0,0-0,2 Eosinofiiliset metamyelosyytit 0,2 0,1-0,4 Eosinofiilit 2,8 0,4-5,2

Eosinofiilisen sarjan solut yhteensä 3,2 0,5-5,8 Basofiiliset myelosyytit 0,1 0-0,3

Basofiilit 0,1 0-0,3

Basofiilisen sarjan solut yhteensä 0,2 0-0,5 Lymfoblastit 0,1 0-0,2

Prolymfosyytit 0,1 0-0,2

Lymfosyytit 8,8 4,3-13,3

Lymfoidisolujen kokonaismäärä 9,0 4,3-13,7 Monoblastit 0,1 0-0,2

Monosyytit 1,9 0,7-3,1

Plasmablastit 0,1 0-0,2

Proplasmosyytit 0,1 0,1-0,2

Plasmasolut 0,9 0,1-1,8

Erytroblastit 0,6 0,2-1,1

Basofiiliset normoblastit 3,6 1,4-5,8 Polykromatofiiliset normoblastit 12,9 8,9-16,9 Oksifiiliset normoblastit 3,2 0,8-5,6

Erytroidisolujen kokonaismäärä 20,5 14,5-26,5 Megakaryosyytit 0,4 0,2-0,6

Terveillä ihmisillä tehtyjen tutkimustemme mukaan tulokset ovat seuraavat:

granulosyyttien määrä 56-70 %

erytroblastisarja 23-30 %, lymfoplasmasyyttisarja 5-10 %, monosyto-makrofagisarja 1-2 % ja megakaryosyyttisarja 0,1-0,8 % (Ursya). Normaalien myeloidirivien osuuden muutos tai niiden korvaaminen epänormaaleilla soluilla viittaa usein sairauden tyyppiin. Retikulaariset solut ilmestyvät harvemmin ja lisäksi pieniä määriä. Aivan vahingossa sivelynäytöissä (tai luuytimen jäljessä) näkyy osteoblasteja ja/tai osteoklasteja, joita ei pidä sekoittaa neoplastisiin soluihin. Niiden esiintyminen havaitaan useammin lapsilla, harvemmin aikuisilla, joilla on primaarinen myelofibroosi tai toissijaisesti, karsinoomien etäpesäkkeiden jälkeen, akuutti leukemia, osteoporoosi jne. G/E-suhde saadaan jakamalla granulosyytit erytroblastien lukumäärällä. Normaalilla aikuisella tämä suhde on keskimäärin 3/1 tai 4/1, raja-arvojen ollessa arviolta 2/1 (kun mukana ovat vain epäkypsät granulosyytit) ja 5/1 (kun se koskee kaikkia granulosyyttejä - kypsiä ja epäkypsiä). H/E-suhde vaihtelee iän myötä: syntyessään se on pieni (1,8/1), 2 viikon iässä se nousee arvoon 11/1, sitten vähitellen laskee ja vuoden ikäisillä lapsilla saavuttaa arvot aikuisesta. H/E-suhde on normaali globaalissa luuytimen hypo- tai hyperplasiassa sekä yksittäisten solujen lisääntymisessä, joita ei ole otettu huomioon tämän suhteen laskennassa, esimerkiksi plasmasytoomassa. Leukemiassa, leukooman kaltaisissa reaktioissa ja erytroblastopeniassa suhde on korkea, kun taas anemiassa, jossa on erytroblastista hyperplasiaa, se on alhainen tai käänteinen (megaloblastinen, hemolyyttinen anemia). Ennen sivelytutkimusten jälkeen saatujen myelogrammitietojen antamista on tarpeen selvittää: a) pistokohta; b) luun tiheys; c) olosuhteet, joissa imu tapahtui; d) valitun materiaalin makroskooppinen puoli. Luuytimen tutkimus on monimutkainen prosessi, joka perustuu lukuisten ja vaihtelevien tietojen yhdistämiseen. Sen tuloksen tulisi heijastaa yleisiä johtopäätöksiä, jotka perustuvat enemmän päätelmiin kuin yksittäisten lukujen mekaaniseen rekisteröintiin, jotka lisäksi vaihtelevat. Minkä tahansa myelogrammin johtopäätöksen tulee selventää joko diagnoosia tai lisätutkimuksia, jotka johtuvat luuytimen tutkimuksesta. Verisairauksissa imupunktio auttaa 80 %:ssa tapauksista selventämään diagnoosia näppäilynä ja kokkareilla. Muissa tapauksissa luubiopsia ja luuytimen histologinen tutkimus ovat aiheellisia. Biooptinen valinta ja histologinen tutkimus näyttävät tarpeellisilta: a) primaarisessa tai sekundaarisessa myelofibroosissa; b) luuytimen aplasia tai hypoplasia; c) sairaudet, joissa esiintyy granulomatoottisia vaurioita (esim. , Godgkinin tauti, sarkoidoosi, tuberkuloosi jne.); d) karsinomatoottinen etäpesäke; e) kaikissa tapauksissa, joissa pistoksen avulla valittu materiaali ei ole tyydyttävä tai luuytimen näkökulma ei ole vakuuttava. Biooptisen näytteenoton jälkeen jäljennökset valmistetaan sytologista tutkimusta varten, koska histologiset leikkeet antavat vain vähän tietoa niiden hematopoieettisten solujen rakenteellisista yksityiskohdista, jotka ovat ahtaissa, ei-hajallaan tai standardoidussa muodossa. Lisäksi kiinnittyminen aiheuttaa solujen vetäytymistä ja histologinen värjäytyminen on vähemmän selektiivistä kuin sytologinen värjäys. Tästä syystä täydelliseen luuytimen tutkimukseen sisältyy sekä sytologinen - näppäileissä tai jäljennöksissä että histologinen - tutkimuksen osissa. On muistettava, että sytologiset ja histologiset luuytimen tutkimuksen menetelmät eivät ole poissuljettuja, vaan päinvastoin täydentävät toisiaan: biopsia on kvantitatiivinen ja arkkitehtoninen menetelmä, kun taas myelogrammi on kvalitatiivinen ja sytologinen.

Menetelmä verisolujen laskemiseksi Goryaev-kammiossa.

Gorjajevin kammio - laite, joka on suunniteltu laskemaan solujen lukumäärä tietyssä nestetilavuudessa. Sitä käytetään yleensä määrittämään muodostuneiden elementtien lukumäärä verinäytteessä. Kammiot koostuvat paksusta lasilevystä, johon on kiinnitetty poikittaisia ​​rakoja, jotka muodostavat kolme poikittaisesti järjestettyä tasaista aluetta. Keskitaso on jaettu pitkittäisuralla kahteen osaan, joista jokaiseen on kaiverrettu ristikko. Gorjajev-kammion keskitason molemmilla puolilla on kaksi muuta 0,1 mm korkeammalla (Fuchs-Rosenthal-kammiossa 0,2 mm) keskimmäistä korkeammalla. Näiden kohtien tasot hiovat peitinlasia, kunnes ns. Newtonin renkaat ilmestyvät. Peitelasin hiomisen jälkeen syntyy kahdelta sivulta suljettu kammio ja kahdella muulla on aukot (kapillaaritilat), joiden kautta kammio täytetään. Verkon periaate on sama. Ne on jaettu yhteen tai toiseen määrään neliöitä, jotka on ryhmitelty eri tavoin. Vakioarvo kaikissa ruudukoissa on ns. "pieni neliö", jonka sivu on 1/20 mm, joten sen pinta-ala on 1/400 mm2. Goryaev-kameralla on myös mahdollista määrittää mikroskoopin suurennus. Ulkoisesti se on läpinäkyvä suuntaissärmiö (lasilasi), jossa on uria ja mikroskooppinen ristikko. Ristikkosolun pienten jakojen mitat ovat 0,05 mm ja suuret 0,2 mm. Tässä tapauksessa ristikko asetetaan alustalle (lasiosalle), joka sijaitsee 0,1 mm alempana kuin kaksi vierekkäistä alustaa. Näitä alueita käytetään peitinlasin läpäisemiseen. Seurauksena on, että nesteen tilavuus Gorjaev-ruudukon suurten jakojen muodostaman neliön yläpuolella on 0,004 mikrolitraa. Laskemalla solujen lukumäärän suuressa neliössä voit laskea tietyn solutyypin tiheyden suspensiossa käyttämällä kaavaa: Solujen lukumäärä/ml = solujen lukumäärä suuren neliön yläpuolella * 2,5 10^5 Käyttämällä Goryaev-kameraa eräänlaisena standardina, voit määrittää mikroskoopin suurennuksen kaavalla: Kg=(m2-m1)/(a*N) missä kg on mikroskoopin suurennus; m 1 - Goryaev-kammion solun vasemman reunan sijainti; m 2 - solun tai soluryhmän oikean reunan sijainti; N- solujen lukumäärä mitattujen rajojen välillä; a- Gorjajev-kammion kennokoko (vastaa 0,05 mm). Gorjaev-kammiota käytetään myös viljelmässä olevien solujen lukumäärän laskemiseen. Kaava verisolujen laskemiseksi Goryaev-kammiossa on - x = (a 400 c) / b, missä x on muotoiltujen elementtien haluttu lukumäärä 1 mm3:ssa; a - kammion tiettyyn tilavuuteen laskettujen muotoiltujen elementtien summa; b - laskettujen pienten neliöiden lukumäärä; c - veren laimennus.

Menetelmä ookystien laskentaan Gorjaev-kammiossa. Tätä menetelmää käytetään yleensä, kun eläimiä infektoidaan kokeellisesti tarkasti määritetyllä määrällä ookysta (eläimeen ruiskutetaan sopiva määrä millilitraa suspensiota). 1 ml ookystaa sisältävää suspensiota laitetaan Gorjaev-kammioon. Koska Gorjajev-kammion tilavuus on 0,9 m3, laskettujen ookystien määrä kerrotaan 1111:llä. Tuloksena oleva luku vastaa ookystien määrää 1 cm3:ssa liuosta. Tarkempaa määritystä varten laskelmat tulisi suorittaa vähintään kolme kertaa ja sitten laskea aritmeettinen keskiarvo. Infektioon tarvittavien ookystien lukumäärä mitataan asteikolla varustetulla pipetillä. Ookystien tasaisemman jakautumisen varmistamiseksi inkubointialustassa koeputken sisältöä on ravistettava toistuvasti.

Punasolujen määrä Gorjajev-kammiossa Periaate. Tarkka määrä verta sekoitetaan tasaisesti tiettyyn määrään nestettä ja asetetaan kammioon, jonka tilavuus tunnetaan ja jossa verisuspensio jakautuu yhteen kerrokseen. Kammion pohja on piirretty graafisesti, mikä mahdollistaa punasolujen tarkan laskemisen. Reagenssit: 0,9 % natriumkloridiliuos. Erikoisvarusteet: mikroskooppi, Gorjajevin kamera, laboratoriokoeputket tai kapillaari Salyn hemometristä. Määritelmän edistyminen. Lisää 8 ml 0,9 % natriumkloridiliuosta ja 0,02 ml verta kuivaan, puhtaaseen koeputkeen. Pipetin kärki pyyhitään alustavasti, veri puhalletaan putken pohjalle ja pipetti pestään perusteellisesti ylemmällä nestekerroksella. Sekoita putken sisältö hyvin. Saadaan veren laimennus 1:400, eli veri laimennetaan 400 kertaa. Veren paksuuntuessa on suositeltavaa laimentaa se 500, 600, 700, 800 kertaa. Kammio ja peitinlasi tulee pestä ja pyyhkiä kuivaksi. Peitelasia hierotaan kammiota vasten niin, että näkyviin tulee värikkäitä renkaita. Ota koeputkesta pisara laimennettua verta ja täytä sillä kammio peitinlasin reunaan. Punasolut lasketaan 1 min kammion täytön jälkeen pienellä suurennosmikroskoopilla (x8 objektiivi, x10 tai x15 okulaari) peitetty kalvo tai alennettu lauhdutin (tummennetussa näkökentässä) . Punasolut lasketaan viiteen suureen (tai 80 pieneen) neliöön, jotka on järjestetty vinottain. Pienen neliön sisällä sekä sen vasemmalla ja yläseinällä sijaitsevat punasolut otetaan huomioon. Neliön oikealla ja alimmalla rivillä olevia soluja ei lasketa. Laskenta: Laskettu solujen määrä 80 pienessä neliössä kerrotaan 20 000:lla veren laimennuksella 1:400, 25 000:lla laimennuksella 1:500 tai 30 000:lla laimennuksella 1:600 ​​ja lopputulos saadaan miljoonia per 1 μl. Tässä tapauksessa oletetaan, että yhden pienen neliön tilavuus on 1/4000 μl. Solujen laskemiseksi 1 litrassa punasolujen määrä 1 µl:ssa kerrotaan myös 1 000 000:lla. Merkintä. Veren tutkiminen hyytymien kanssa ei ole sallittua; solujen lukumäärä heti kammion täyttämisen jälkeen (odottamatta 1 min); huonosti pestyjen ja kuivattujen pipettien ja koeputkien käyttö, huonolaatuiset hemolyysiä aiheuttavat reagenssit. Kaikkien laskentasääntöjen mukaan virhe on keskimäärin ± 2,5 %.

Desinfiointisäännöt Käytön jälkeen Goryaev-kamera on desinfioitava 3 % liuos vetyperoksidi, huuhtele tislatulla vedellä ja kuivaa pehmeällä liinalla. Säilytä kamera kuivassa paikassa.

Työskentelymenetelmä hematologisilla analysaattoreilla.

Analysaattori-hematologinen- kvantitatiiviseen tutkimukseen suunniteltu laite (laitesarja). soluja verta kliinisissä diagnostisissa laboratorioissa. Voi olla automaattinen tai puoliautomaattinen. Puoliautomaattinen hematologinen analysaattori eroaa automaattisesta siinä, että verinäytteen laimennusprosessi suoritetaan erillisellä laitteella - laimentimella. Kokoverilaimennoksen valmistuksen jälkeen käyttäjän on siirrettävä laimennettu näyte mittausmoduuliin. Tällä hetkellä puoliautomaattisia analysaattoreita ei käytännössä valmisteta.

Automaattinen hematologinen analysaattori on täysin automatisoitu laite, jossa koko analyysiprosessi suoritetaan automaattisesti.

Nykyaikaiset automaattiset analysaattorit pystyvät käsittelemään kymmeniä näytteitä (60-120) tunnissa tarkkuudella ja toistettavuudella spesifikaatioiden mukaisesti sekä tallentamaan testitulokset sisäiseen muistiin ja tarvittaessa tulostamaan ne sisäänrakennettuun muistiin. lämpötulostin tai ulkoinen tulostin.

Nykyaikaiset hematologiset analysaattorit luokitellaan määritettyjen verisolujen indikaattoreiden nimikkeistön mukaan.

Kahdeksan parametrin hematologiset analysaattorit määrittää seuraavat parametrit: pitoisuus punasolut(RBC) leukosyytit(WBC) verihiutaleet(plt) hemoglobiini(Hb), sekä seuraavat punasoluparametrit: erytrosyyttien keskimääräinen tilavuus (MCV), keskimääräinen punasolujen hemoglobiinipitoisuus (MCH), erytrosyyttien keskimääräinen hemoglobiinipitoisuus (MCHC), hematokriitti(Hct).

Kahdeksan parametrin hematologisia analysaattoreita ei käytännössä valmisteta tällä hetkellä.

Hematologiset analysaattorit luokka 3-diff. Luokan 3-dif hematologiset analysaattorit, riippuen tuotetusta mallista, antavat sinun määrittää 16-22 verisolujen indikaattoria. Tämän luokan analysaattorit määrittävät kahdeksan parametrin analysaattoreita määrittävien parametrien lisäksi kolme leukosyyttialapopulaatiota: lymfosyyttien (Lm), granulosyyttien (Gr) ja ns. keskimääräisten leukosyyttien (Mid) pitoisuuden sekä niiden prosenttiosuudet Lm, Gr% ja Mid. Tästä syystä luokan 3-diff nimi. Lisäksi tämän luokan hematologiset analysaattorit määrittävät erytrosyyttitilavuuden variaatiokertoimen (RDW) ja joukon verihiutaleita kuvaavia indikaattoreita: keskimääräisen verihiutaletilavuuden (MPV), verihiutaleiden tilavuuden osuuden (Tct) (analogisesti hematokriittiä), verihiutaleiden tilavuuden variaatiokerroin (PDW).

Tärkeää diagnostista tietoa, joka voidaan saada tämän luokan hematologisilla analysaattoreilla, ovat erytrosyyttien, leukosyyttien ja verihiutaleiden tilavuuden jakautumisfunktiot - histogrammit.

Hematologiset analysaattorit luokka 5-dif. Suurin ero 5-diff-hematologisten analysaattoreiden ja 3-diff-analysaattoreiden välillä on niiden kyky havaita kaikki viisi leukosyyttien alapopulaatiota: lymfosyytit (Lym), monosyytit (Mon), neutrofiilit (Neu), basofiilit (Bas) ja eosinofiilit (Eos), sekä niiden Lym-%, Mon-, Neu-, Bas- ja Eos% -pitoisuudet. Impedanssin laskentamenetelmä, joka tunnetaan myös nimellä Coulter laskuri, jota käytetään 3-dif-analysaattoreissa, ei pysty erottamaan neutrofiilejä, basofiilejä ja eosinofiilejä, joten 5-dif-analysaattoreissa käytetään erilaista solujen erilaistumismenetelmää. Se perustuu periaatteeseen diffraktio leukosyyttisolujen lasersäteily ja hajasäteilyn lisäanalyysi. "Keskimääräiset" leukosyytit eivät eroa kooltaan niin paljon, että ne voidaan erottaa impedanssimenetelmällä, mutta niillä on erilainen sisäinen rakenne ja ne ovat eri vuorovaikutuksessa väriaineiden kanssa. Ja menetelmä diffraktiokuvion havaitsemiseksi osoittautuu herkäksi solujen sisäiselle rakenteelle. Siten punasolut ja verihiutaleet lasketaan Coulter-laskimella ja leukosyytit erillisellä laseryksiköllä.

Työ 8. Proteiinin kvantitatiivinen määritys veren seerumissa

4. Kompleksisten proteiinien koostumus ja ominaisuudet

Työ 9. Hemproteiinien kemiallinen luonne

Työ 10. Glykoproteiinien hiilihydraattikomponentin tunnistaminen

Työ 11. Kvalitatiiviset reaktiot fosfoproteiineille

Työ 12. Veriseerumin siaalihappopitoisuuden kvantitatiivinen määritys Hess-menetelmällä

Työ 13. Nukleoproteiinien kemiallinen luonne

Nukleiinihapot

1. Nukleiinihappojen kemiallisen luonteen tutkimus

Työ 14. Kvalitatiiviset reaktiot nukleiinihappokomponentteihin

Kvantitatiiviset menetelmät nukleiinihappojen määrittämiseksi

Työ 15. Spektrofotometrinen menetelmä nukleiinihappojen kvantitatiiviseen määritykseen A.S. Spirinin mukaan

Työ 16. Fotokolorimetriset menetelmät nukleiinihappojen kvantitatiiviseen määritykseen

Työ 17. Fosfolipidien tutkimus

Työ 18. Laadulliset reaktiot steroideihin

Entsyymit

Entsyymien ja ei-biologisten katalyyttien vertailu

Työ 19. Syljen α-amylaasin ja suolahapon vaikutuksen vertailu tärkkelyksen hydrolyysin reaktioon

2. Eri luokkiin kuuluvien entsyymien tunnistaminen

Työ 20. Oksidoreduktaasien havaitseminen biologisesta materiaalista

Työ 21. Koliiniesteraasin havaitseminen

Veriseerumissa Herzfeldin ja Stumpfin express-menetelmällä

Työ 22. Fruktoosi-1,6-bisfosfaattialdolaasin aktiivisuuden määritys veren seerumissa V. I. Tovarnitskyn ja E. N. Voluyskayan menetelmällä

Kalibrointikäyrän rakentaminen

Työ 23. Glukoosifosfaatti-isomeraasin määritys

Veriseerumissa

3. Entsyymien kineettisten ominaisuuksien tutkiminen

Työ 24. Entsymaattisten reaktioiden kinetiikka syljen α-amylaasin esimerkissä

4. Entsyymitoiminnan spesifisyys

Työ 25. Absoluuttisen substraattispesifisyyden osoittaminen

5. Entsyymiaktiivisuuden modifiointiaineet

Työ 27. Syljen α-amylaasin aktivaattorit ja estäjät

lihaskudos

Työ 29. Veren katalaasin ei-kilpaileva esto

6. Entsyymiaktiivisuuden kvantifiointi

Työ 30. Lääkelaktaattidehydrogenaasin aktiivisuuden kvantitatiivinen tutkimus Kornbergin mukaan

Työ 31. Fotokolorimetrinen menetelmä laktaattidehydrogenaasin aktiivisuuden tutkimiseksi veren seerumissa Sevelin ja Tovarekin mukaan

Työ 32. Alkalisen fosfataasin aktiivisuuden määritys veren seerumissa Bodanskyn mukaan

7. Isoentsyymien tutkimus

Työ 33. Veriseerumin laktaattidehydrogenaasi-isoentsyymien erotus elektroforeesilla polyakryyliamidigeelissä Dietzin ja Lubranon mukaan

Työ 34. γ-glutamyylitransferaasin aktiivisuuden määritys veren seerumissa

Ruoansulatuksen biokemia

Työ 35. Mahanesteen happamien komponenttien tutkimus

Työ 36. Mahanesteen happamuuden määritys diagnostisella pakkauksella "Acidotest"

Työ 37. Proteiinihydrolyysi ruoansulatuskanavan entsyymeillä

Työ 38. Triasyyliglyserolien hydrolyysin dynamiikan tutkimus haiman lipaasin vaikutuksesta

Energianvaihto (bioenergia)

1. Biologisten hapetusprosessien tutkimus eläinkudoksissa Työ 39. Sytokromioksidaasin havaitseminen lihaskudoksessa

Työ 40. Demonstroidaan oksidatiivisen fosforylaation prosessi ja irrottimien vaikutus siihen

Työ 41. Glykolyysin havaitseminen lihaskudoksesta

Työ 42. Adeniininukleotidien analyysiialla

Työ 43. Veriseerumin krmääritys Ennorin ja Rosenbergin mukaan

Fotosynteettisten organismien pigmenttien ja oksidatiivisten prosessien analyysi

Työ 44. Kvalitatiiviset reaktiot kasvipigmentteihin

Työ 45. Peroksidaasiaktiivisuuden määritys kasvimateriaalista A.N. Boyarkinin menetelmällä

Hiilihydraattiaineenvaihdunta

Työ 46. Veren glukoosin määritys

Työ 47. Veren glukoosin kvantitatiivinen määritys glukoosioksidaasimenetelmällä

Työ 48. Veren maitohappopitoisuuden määritys Barkerin ja Summersonin mukaan

Työ 49. Veren palorypälehappopitoisuuden määritys Friedemannin ja Haugenin mukaan

lipidien aineenvaihdunta

Työ 50

Työ 51

Työ 52. Kolesterolin määritys veren seerumissa Ilk:n menetelmällä

Työ 53. Veriseerumin kokonaisfosfolipidipitoisuuden määritys

Työ 54. Veriseerumin lipidien erotus ohutkerroskromatografialla

Proteiinien ja aminohappojen aineenvaihdunta

Työ 55. Veriseerumin proteiinifraktioiden pitoisuuden määritys turbidimetrisellä menetelmällä

Työ 56. Katepsiinien aktiivisuuden määritys veren seerumissa A.A. Pokrovskyn, A.I. Archakovin ja O.N.

Katepsiinit

Työ 57. Aspartaatti- ja alaniiniaminotransferaasin aktiivisuuden määritys veren seerumissa Reitmanin ja Frenkelin mukaan

Työ 58. Histidaasiaktiivisuuden määritys veren seerumissa Taborin ja Mehlerin mukaan, modifioinut V.A.

Työ 59. Vapaan hydroksiproliinin pitoisuuden määritys virtsasta Neumannin ja Loganin mukaan, modifioitu p.

Typpeä sisältävien ei-proteiiniaineiden aineenvaihdunta

1. Typpiaineenvaihdunnan yleisten tuotteiden tutkimus

Työ 60. Veren jäännöstypen kvantitatiivinen määritys fotokolorimetrisellä menetelmällä

Työ 61. Urean kvantitatiivinen määritys veren seerumista ja virtsasta

Työ 62. Kreatiinin ja kreatiniinin kvantitatiivinen määritys Brownin menetelmällä

2. Nukleiinihappojen ja nukleotidien vaihdon tutkimus

Työ 63. Happaman deoksiribonukleaasin (dnCase) aktiivisuuden määritys veren seerumissa A.A.:n mukaisesti.

Työ 64. Veriseerumin virtsahappopitoisuuden määritys Mullerin ja Seifertin menetelmällä

3. Porfyriinin (pigmentin) aineenvaihdunnan tutkimus

Työ 65. Veriseerumin bilirubiinin ja sen fraktioiden määritys Yendrashikin, Cleghornin ja Grofin mukaan

Molekyylipatologia

1. Aminohappoaineenvaihdunnan patologian pikadiagnostiikka Työ 66. Hyperaminoasidurian havaitseminen

Työ 67. Express-menetelmät fenyyliketonurian diagnosointiin

Työ 68. Tyrosinoosin diagnoosi Millon-testi tyrosiinille

Työ 69. Alkaptonurian havaitseminen homogentisiinihappotestillä

Työ 70

2. Hiilihydraattiaineenvaihdunnan patologioiden pikadiagnostiikka Työ 71. Pentosurian havaitseminen Bial-testillä

Työ 72. Fruktosurian havaitseminen Selivanovin testillä

Työ 73. Mukopolysakkaridoosien havaitseminen testillä toluidiinisinisellä mukopolysakkarideille

Työ 74. Virtsan porfobilinogeenipitoisuuden määritys

Työ 75. Virtsan delta-aminolevuliinihappopitoisuuden kvantitatiivinen määritys

Työ 76

Metabolian säätelijät

1. Vitamiinien tutkimus Työ 77. Laadulliset reaktiot vitamiineihin

Työ 78. Tiamiini- ja riboflaviinipitoisuuden määritys fluorimetrisellä menetelmällä monivitamiinivalmisteissa

Työ 79. Askorbiinihapon kvantitatiivinen määritys lääkekasveissa

2. Hormonien, välittäjien ja niiden aineenvaihduntatuotteiden tutkimukset

Työ 80. Kvalitatiiviset reaktiot proteiini-peptidihormoneihin.

Työ 81. Kvalitatiiviset reaktiot hormoneihin - aminohappojohdannaisiin

Työ 82. Kvalitatiiviset reaktiot steroidihormoneihin ja niiden aineenvaihduntatuotteisiin

Työ 83. Eläinten veren glukoosin insuliini- ja adrenaliinitasojen säätely

Työ 84. Histamiinin kvantitatiivinen määritys verestä diatsotoidulla n-nitroaniliinilla N.V. Klimkinan ja S.I. Plitmanin mukaan

Biologisten nesteiden tutkimus

1. Biokemialliset verikokeet Työ 85. Veren hemoglobiinipitoisuuden määritys sen valon absorptiolla

Työ 86. Sikiön hemoglobiinipitoisuuden määritys ihmisen punasoluissa

Työ 87. Punasolujen glykosyloidun hemoglobiinipitoisuuden määritys fotokolorimetrisellä menetelmällä

Työ 88. Veriseerumin haptoglobiinipitoisuuden määritys fotokolorimetrisellä menetelmällä

Työ 89

Työ 90. α-amylaasiaktiivisuuden määritys veren seerumissa amylolastisella menetelmällä

Työ 91. Veriseerumin kalsiumpitoisuuden määritys mureksidimenetelmällä

Työ 92. Tymolikoe Huergon ja Popperin mukaan

Työ 93. Sublimaatti-sedimenttireaktio

Työ 94. Veriseerumin rautapitoisuuden kvantitatiivinen määritys

2. Virtsan biokemiallinen tutkimus

Työ 95. Virtsan fysikaalis-kemiallisten ominaisuuksien tutkimus

Työ 96. Ketoniaineiden ja glukoosin määritys virtsasta

Työ 97. Proteiinin määritys virtsasta Brandenberg-Roberts-Stolnikov-menetelmällä

Työ 98. Indikaanin laadullinen määritys virtsasta

Työ 99. Joidenkin pigmenttien havaitseminen virtsasta.

Ksenobioottien aineenvaihdunta

Ksenobioottien hapettumis- ja konjugaatioprosessien tutkimus Työ 100. Mikrosomien hengitystoiminnan paljastaminen

Työ 101. Oksidatiivisen n-demetylaation tutkimus maksan mikrosomeissa

Työ 102. Maksan mikrosomien hydroksylaasiaktiivisuuden määritys Katon ja Giletin mukaan

Työ 103

Työ 104. Alkoholidehydrogenaasin aktiivisuuden määritys veren seerumissa Shkursky et al.

Työ 105

Työ 106. Isonikotiinihappohydratsidin (ginkin) asetylaation (inaktivoitumisen) havaitseminen kehossa

Biologisten kalvojen lipidiperoksidaatiotutkimus

Työ 107. Punasolujen herkkyyden määritys peroksidihemolyysille

Työ 108. Lipidiperoksidaationopeuden määritys biokalvoissa

Sovellus

2.Veriplasman biokemialliset indikaattorit

1. Yleiset kliiniset normit

2. Virtsan erityinen tutkimus

Mahalaukun mehu

2. Fosfaattipuskuri (0,1 m, pH 5,8-8,0)

3. Tris-puskuri (0,1 m, pH 7,1-9,2)

4. Asetaattipuskuri (0,2 m, pH 3,6-5,8)

5. Glysiinipuskuri (0,05 m, pH 8,6-10,6)

3. Joidenkin reagenssien valmistus

Sisällysluettelo

2. Fosfaattipuskuri (0,1 m, pH 5,8-8,0)

Na2HPO4 0,2 M, ml	Na2H2PO4 0,2 M, ml

3. Tris-puskuri (0,1 m, pH 7,1-9,2)

24,2 g tris-(hydroksimetyyli)aminometaania liuotetaan 1 l:n mittapulloon (500 ml:aan H20:ta). Vaaditun pH-arvon saamiseksi lisätään taulukossa ilmoitettu 1 M HCl:n tilavuus ja tilavuus säädetään 1000 ml:ksi tislatulla vedellä.

4. Asetaattipuskuri (0,2 m, pH 3,6-5,8)

Natriumasetaatti 0,2 M, ml	Etikkahappo 0,2 M, ml		Natriumasetaatti 0,2 M, ml	Etikkahappo 0,2 M, ml

5. Glysiinipuskuri (0,05 m, pH 8,6-10,6)

Ilmoitetut määrät glysiiniä ja natriumhydroksidia sekoitetaan ja tilavuus säädetään tislatulla vedellä 200 ml:ksi.

	Glysiini 0,2 M, ml	NaOH 0,2 M, ml		Glysiini 0,2 M, ml	NaOH 0,2 M, ml

3. Joidenkin reagenssien valmistus

Aktivoiva ratkaisu. 155 mg pelkistettyä glutationia ja 400 mg kiteistä albumiinia laitetaan 100 ml:n mittapulloon, liuotetaan 50 ml:aan tislattua vettä, ja pH säädetään arvoon 8,2 käyttämällä 1 M NaOH-liuosta. Lisää sitten vettä merkkiin asti.

Hopeanitraatin ammoniakkiliuos. Konsentroitua ammoniakkiliuosta lisätään 2-3-prosenttiseen hopealiuokseen, kunnes sakka liukenee.

Asetaattipuskuri pH 3,6. Valmistetaan sekoittamalla 463 ml liuosta A ja 37 ml liuosta B, laimennetaan vedellä merkkiin asti mittapullossa 1 litraan. Liuos A: Laimenna 11,55 ml jääetikkaa vedellä 1 litran mittapullossa. Liuos B: Liuotetaan 27,2 g natriumasetaattia veteen 1 litran pullossa.

Biureettireagenssi (Benedictin reagenssi). 173 g natriumsitraattia ja 100 g natriumkarbonaattia liuotetaan 300 ml:aan tislattua vettä vesihauteessa. Erikseen 17,3 g kuparisulfaattia liuotetaan 300 ml:aan vettä. Molemmat liuokset valutetaan pois ja kokonaistilavuuteen lisätään 1 litra.

puskuriliuos. 2,76 g Veronalia ja 2,06 g Medinalia liuotetaan 1 litraan tislattua vettä. Säilytä jääkaapissa; jos sakka ilmestyy, liuos ei sovellu käytettäväksi.

hiilen suspensio. 0,25 g aktiivihiiltä laitetaan 100 ml:n mittapulloon ja laimennetaan asetaattipuskurilla pH 3,6. Ravista hyvin ennen käyttöä.

Pelkistävä reagenssi. 1 % askorbiinihappoliuos, valmistettu 0,016 % kuparisulfaattiliuoksella.

Hemoglobiini, 4 % liuos asetaattipuskurissa (pH 4,0). Ensin valmistetaan 8 % hemoglobiiniliuos 8 mol/l urealiuokseen, pidetään 2 tuntia termostaatissa 60°C:ssa ja laimennetaan 2 kertaa asetaattipuskurilla ennen käyttöä.

Glysyyli-glysiini. 0,55 mmol/l, pH 8,3. 3,63 g glysyyliglysiiniä laitetaan 50 ml:n mittapulloon ja täytetään vedellä merkkiin asti (puskuriliuos).

Denaturoiva liuos

Diatsoreagenssi bilirubiinin määritykseen. Valmista kaksi ratkaisua. Ensimmäinen liuos: 3 g sulfaniilihappoa liuotetaan 500 ml:aan tislattua vettä, lisätään 15 ml väkevää suolahappoa (kuumahauteessa), tilavuus säädetään 1 litraan vedellä. Toinen liuos: 0,5 % natriumnitriitin vesiliuos. Sekoita ennen käyttöä 5 ml ensimmäistä liuosta ja 0,25 ml toista.

Diasetyyli, työliuos. 1 ml diasetyyliä laimennetaan tislatulla vedellä 100 ml:n mittapullossa (liuosta säilytetään jääkaapissa). Diasetyylin työliuos valmistetaan ennen käyttöä lisäämällä 24 ml tislattua vettä 1 ml:aan diasetyylin kantaliuosta.

Difenyyliamiinireagenssi. 1 g difenyyliamiinia liuotetaan 100 ml:aan jääetikkaa. Liuokseen lisätään 2,75 ml väkevää rikkihappoa.

Kalibrointiliuos. Emäksinen - 0,75 mmol/l ALA (100 ug/ml) emäksenä: 0,00635 g ALA-hydrokloridia liuotetaan asetaattipuskuriin pH 3,6 50 ml:n mittapullossa. Säilytä jääkaapissa enintään kuukauden ajan. Pääliuoksesta valmistetaan käyttökalibrointiliuos, 1 μg / ml. Valmistele ennen käyttöä laimentamalla kantaliuos asetaattipuskurilla 100 kertaa.

Kalibrointiliuos. 22,5 mg dihydroksiasetonia liuotetaan 25 ml:aan vettä kuumentaen. 1 ml tätä liuosta sisältää 10 μmoolia dihydroksiasetonia. Dihydroksiasetonin kalibrointiliuos kaadetaan useisiin koeputkiin (katso työ), täytetään vaadittuun tilavuuteen ja sitten reaktio suoritetaan samalla tavalla kuin määritettäessä entsyymin aktiivisuutta.

Raudan (30 µmol/l) kalibrointiliuos (standardi).

Mora-suolat valmistetaan ensin.

kofeiinireagenssi. 1 g puhdasta kofeiinia, 7,5 g natriumbentsoaattia, 12,5 g natriumasetaattia liuotetaan 90 ml:aan tislattua vettä, kuumennetaan 50-60 °C:seen, sekoitetaan, jäähdytetään ja täytetään 100 ml:ksi tislatulla vedellä.

Ammoniummolybdaatti typpihapossa. 7,5 g ammoniummolybdaattia liuotetaan 100 ml:aan vettä ja lisätään 100 ml 32-prosenttista typpihappoa.

Virtsa alkaptonuriaan. Patologisen potilaan puuttuessa normaaliin virtsaan lisätään hydrokinonia 20 g/l.

Virtsa hyperaminoasidurialla. Patologisen virtsan puuttuessa normaaliin virtsaan lisätään glysiiniä 1,0 g/l.

Virtsa ja mukopolysakkaridoosi. Patologisen potilaan puuttuessa normaaliin virtsaan lisätään konsuridia tai hepariinia nopeudella 0,05-0,1 g / l.

Virtsa ja pentosuria. Patologisten oireiden puuttuessa virtsaan lisätään ksyluloosia tai ribooosia 1,0 g/l.

Virtsa tyrosinoosilla. Patologisen potilaan puuttuessa tyrosiinia lisätään normaaliin virtsaan nopeudella 0,4-0,5 g / l.

Virtsa fruktosurialla. Patologisen taudin puuttuessa fruktoosia lisätään normaaliin virtsaan nopeudella 0,3-0,4 g / l.

Virtsa kystinuriaan. Ilman patologista kystiiniä lisätään normaaliin virtsaan nopeudella 0,4-0,5 g / l.

Natriumasetaatti 3-vesipitoinen, kyllästetty liuos. 375 g natriumasetaatin 3-vesipitoista (tai 226 g vedetöntä suolaa) liuotetaan 250 ml:aan lämmintä vettä, jäähdytetään huoneenlämpötilaan. Säilytä huoneenlämmössä. Liuoksen tulee olla väritöntä ja läpinäkyvää.

Natriumfosfaatti disubstituoitu 0,25 mol/l. Valmistetaan liuottamalla 9,7 g Na 2 HPO 4 ∙ 12H 2 O tai 18 g Na 2 HPO 4 ∙ 12 H 2 O veteen 200 ml:n pullossa. Kun lisätään 2 ml tätä liuosta 1 ml:aan trikloorietikkahappoliuosta, pH:n tulee olla välillä 5,0-6,0.

Kreatiniinin peruskalibrointiliuos, 10 mmol/l. 113,1 mg kreatiniinia säädetään 100 ml:ksi 0,1 mol/l suolahappoliuoksella. Kalibrointikäyrää muodostettaessa varastoliuoksesta valmistetaan työliuos laimentamalla kantaliuos 100 kertaa vedellä, 1 ml liuosta sisältää 0,1 mmol kreatiniinia. Tämän perusteella saadaan useita koeputkia, joissa on vastaavat kreatiinipitoisuudet.

Hapettava seos tiamiinin määritykseen. 8 ml:aan 1-prosenttista kaliumheksasyanoferraattia (III) lisätään 20 ml 30-prosenttista NaOH-liuosta, sekoitetaan huolellisesti. Valmistele ennen käyttöä.

Orcine-reagenssi. 1 grammaan orsiinia lisätään 500 ml 30-prosenttista suolahappoa (tiheys 1,15 g / cm3). Sekoita kunnes se liukenee ja lisää 4-5 ml 10 % rautakloridiliuosta (III) FeCl 3 . Reagenssia säilytetään tiiviisti suljetussa tummassa pullossa.

p-nitroaniliinin emäksinen kalibrointiliuos. 0,0829 g p-nitroaniliinia laitetaan 100 ml:n mittapulloon, täytetään merkkiin vedellä ja liuotetaan.

Saostuva liuos. Liuota 561 g ammoniumsulfaattia 1 litraan tislattua vettä ja suodata 24 tunnin kuluttua.

Perusfosfaattipuskuriliuos ja sen työliuokset nro 1-4. Liuotetaan 33,5 g NaOH:a 400 ml:aan vettä 500 ml:n mittapullossa ja lisätään 226,8 g KH 2 PO 4 , ravistellaan, kunnes se on täysin liuennut, jäähdytetään ja lisätään vettä merkkiin asti. Emäksisen fosfaattipuskurin työliuosten valmistamiseksi mitataan seuraavat tilavuudet emäksistä fosfaattipuskuria (ml) tilavuudeltaan 100 ml:n mittapulloihin: No. 1 - 92,51; nro 2 - 74,91; nro 3 - 59,18 ja nro 4 - 48,68, jonka jälkeen niiden sisältö tuodaan merkkiin vedellä.

Pikriinihappo, kyllästetty liuos. Tavarapikriinihappo sisältää 15-20 % kosteutta, älä kuivaa happoa. Räjähtävä! Liuota 2 g pikriinihappoa 100 ml:aan vettä kuumentamalla kuumassa hauteessa. Sen jälkeen liuoksen annetaan seistä 24 tuntia välillä sekoittaen. Sitten liuos suodatetaan. Liuos on stabiili ja sitä säilytetään tummassa lasisäiliössä.

Pyrofosfaattipuskuri 0,05 M pH 8,2. Siirretään 4,46 g natriumpyrofosfaattia 200 ml:n mittapulloon, liuotetaan se noin 100 ml:aan vettä, säädetään pH 0,1 M HCl-liuoksella arvoon 8,2 ja lisätään tislattua vettä merkkiin asti.

Pyrofosfaattipuskuri 0,1 M pH 8,5. Siirretään 4,46 g natriumpyrofosfaattia 100 ml:n mittapulloon, liuotetaan se 50 ml:aan vettä, säädetään pH 0,1 M HCl-liuoksella arvoon 8,5 ja lisätään tislattua vettä merkkiin asti.

Toimiva reagenssi. Valmistetaan määrityspäivänä sekoittamalla 30 osaa 0,3 N natriumhydroksidia. 2 osaa 0,5 % fenoliftaleiiniliuosta ja 1 osa 0,12 % kuparisulfaattiliuosta.

Asetoni syanohydriiniliuos. Liuotetaan 1 ampulli asetonisyanohydriiniä (0,5 ml - 0,47 g sarjasta hemoglobiinin määrittämiseksi verestä) 1 litraan tislattua vettä.

Ferriasetoni syanohydriiniliuos. Liuota 200 mg kaliumferrisyanidia ja 1 ampulli (0,5 ml - 0,47 g) asetonisyanohydriiniä 1 litraan tislattua vettä: sitä voidaan käyttää reagenssisarjasta muunnosliuoksen valmistamiseksi veren hemoglobiinin määrittämiseksi. Vakaa useita kuukausia säilytettynä tummassa lasisäiliössä huoneenlämmössä.

Gluoksidaasiliuos. Sisältää noin 300 yksikköä. 1 mg:ssa. Valmistetaan liuottamalla sopiva määrä kuivavalmistetta 10 ml:aan vettä.

Sulfonoidun bato-fenantroliinin liuos. Koeputkessa lisätään 0,5 ml kloorisulfonihappoa 100 mg:aan batofenantroliinia, kuumennetaan kiehuvassa vesihauteessa 30 s, jäähdytetään ja lisätään hitaasti 10 ml kaksi kertaa tislattua vettä, kuumennetaan jälleen vesihauteessa 5 minuuttia. Seos siirretään 200 ml:n pulloon, lisätään 100 ml vettä, liuoksen pH säädetään 4-5 N NaOH:ksi ja lisätään vettä 200 ml:n tilavuuteen.

Jodin liuos kaliumjodidissa (Lugolin liuos). Liuotetaan 20 g kaliumjodidia ja 10 g jodia 100 ml:aan tislattua vettä. Ennen käyttöä liuos laimennetaan 5 kertaa.

p-nitrosodimetyylianiliinin (NDMA) liuos. Kaupallisesti saatavilla oleva NDMA-valmiste kiteytetään uudelleen etyylieetteristä. Alkoholidehydrogenaasin mittaamiseksi liuotetaan 1 mg NDMA:ta 100 ml:aan 0,1 M pyrofosfaattipuskuria (pH 8,5). Saatu liuos suodatetaan paperisuodattimen läpi ja suodos laimennetaan 2 kertaa samalla puskurilla. Säilytä 4°C:ssa kaksi kuukautta.

Ilkan reagenssi. Lisää 5 osaan (tilavuuden mukaan) etikkahappoanhydridiä 1 osa jääetikkaa ja kaada sitten vähitellen 1 osa väkevää rikkihappoa. Säilytä reagenssi kylmässä!

Millon-reagenssi. (Valmiina paineen alla! ) 40 g elohopeaa liuotetaan 57 ml:aan väkevää typpihappoa ensin kylmässä ja sitten kuumennetaan vesihauteessa. Saatu liuos laimennetaan 2 tilavuudella vettä, sen annetaan laskeutua ja valutetaan pois sedimentistä. Säilytä tummassa lasipullossa.

Ammoniummolybdaattireagenssi. 2,5 g ammoniummolybdaattia liuotetaan 60 ml:aan tislattua vettä, suodatetaan. Liuos lisätään 100 ml:n pulloon. Toisessa pullossa 7,5 ml väkevää rikkihappoa lisätään 25 ml:aan tislattua vettä. Toinen liuos lisätään ensimmäiseen, jäähdytetään ja laimennetaan tislatulla vedellä merkkiin. Liuos sopii kuukaudeksi.

Reagenssi "NADI". Dimetyyli-p-fenyleenidiamiinin 1-prosenttinen liuos sekoitetaan yhtä suuren tilavuuden kanssa 1-prosenttista a-naftoliliuosta alkoholissa ja 1,5-prosenttista natriumkarbonaattiliuosta. Liuos on väriltään tummanruskea, eikä siinä saa olla vaaleanpunaista sävyä. Valmistettu 1 tunti ennen oppituntia.

Reagenssi Nasha. 15,4 g ammoniumasetaattia, 0,3 g jääetikkaa ja 0,2 g asetyyliasetonia lisätään 100 ml:n pulloon, liuotetaan tislattuun veteen ja tilavuus säädetään merkkiin.

Nesslerin reagenssi. 500 ml:n mittapullossa sekoitetaan 150 g kaliumjodidia, 110 g jodia, 100 ml tislattua vettä ja noin 140-150 g metallista elohopeaa ja ravistellaan voimakkaasti 15 minuuttia. Tässä tapauksessa liuos lämpenee spontaanisti ja liuenneesta jodista johtuva väri muuttuu vähitellen vaaleaksi. Sitten seosta jäähdytetään juoksevan veden alla, kunnes selkeä punainen väri säilyy, minkä jälkeen sisältöä ravistellaan, kunnes punainen väri muuttuu vihertäväksi. Dekantoinnin jälkeen elohopeasakka pestään perusteellisesti vedellä. Yhdistä liuos ja pesuvedet, laimenna ne vedellä 2 litraan. Ota 75 ml saatua liuosta 0,5 l:n mittapulloon, joka sisältää 75 ml vettä ja 350 ml 10 % natriumhydroksidiliuosta, ja laimenna vedellä merkkiin.

Fehlingin reagenssi. Kaksi liuosta valmistetaan erikseen. Liuos 1: Liuota 200 g Rochellen suolaa ja 150 g NaOH:ta 1 litran mittapullossa ja laimenna merkkiin vedellä. Liuos 2: liuotetaan 40 g kupari(II)sulfaattia veteen 1 litran mittapullossa ja laimennetaan vedellä merkkiin. Sekoita yhtä suuret määrät näitä liuoksia ennen käyttöä.

Folinin reagenssi. Liuotetaan 1 litran pullossa 1 g natriumvolframaattia ja 20 g fosfomolybdeenihappoa 750 ml:aan vettä. Sulje pullo palautusjäähdyttimellä varustetulla tulpalla ja keitetään 10 tuntia kytkemällä veden virtaus päälle jääkaapissa; sitten se jäähdytetään, kaadetaan mittapulloon ja reagenssin vesitilavuus säädetään 1 litraksi.

Erlichin reagenssi. 0,7 g p-dimetyyliaminobentsaldehydiä liuotetaan 150 ml:aan väkevää suolahappoa, lisätään 100 ml:aan vettä ja sekoitetaan. Liuoksen tulee olla väritöntä tai hieman kellertävää. Säilytä tummassa lasiastiassa. Reagenssi on stabiili.

Erlichin reagenssi. Liuotetaan 1 g p-dimetyyliaminobentsaldehydiä 50 ml:n mittapullossa 35 ml:aan jääetikkaa, lisätään 8 ml 57-prosenttista perkloorihappoa ja täytetään merkkiin asti jääetikkaalla. Säilytä tummassa lasiastiassa jääkaapissa enintään viikon ajan.

tymolialkoholiliuos (10 %). 10 g puhdistettua tymolia liuotetaan 100 ml:aan 96°:n etyylialkoholia. Puhdistetun tymolin saaminen suoritetaan seuraavasti. 100 g tymolia liuotetaan 100 ml:aan 96°:n etyylialkoholia, suodatetaan. Lisää suodokseen 1 litra kylmää tislattua vettä, ravista voimakkaasti ja anna seistä 20 minuuttia. Suodatin suodatetaan ja suodattimelle jääneet kiteet pestään kahdesti kylmällä tislatulla vedellä. Kuivataan ensin suodatinpaperilla, sitten 2–3 päivää eksikkaattorissa vedettömän kalsiumkloridin päällä vakiopainoon.

Vakioratkaisu. Standardiliuoksen valmistus suoritetaan sekoittamalla kaksi liuosta: 1) 0,0962 n bariumkloridiliuos: 1,175 g kiteistä BaCl 2 ∙2H 2 O liuotetaan 100 ml:aan vettä mittapullossa. 2) 0,2 N rikkihappoliuos. Seuraavaksi saadaan bariumsulfaatin suspensio: 3 ml 0,0962 N bariumkloridiliuosta kaadetaan 100 ml:n mittapulloon ja tilavuus säädetään 0,2 N rikkihappoliuoksella + 10 °C:n lämpötilassa. (tässä lämpötilassa saostetun bariumsulfaatin hiukkaskoot antavat suhteellisen vakaan tuloksen).

Substraatin puskuriliuos: kaada 10 ml vettä koeputkeen ja lisää 0,028 g L-glutamyyli-p-nitroaniliinia ja 0,082 g natriumkloridia ja liuotetaan koeputken sisältö kiehuvassa vesihauteessa 60 sekunnin ajan lakkaamatta sekoittamasta. . Sitten liuos jäähdytetään 37 °C:seen ja lisätään 2,5 ml puskuriliuosta. Valmistettua substraattiliuosta säilytetään käytön aikana vesihauteessa 37 °C:ssa. Käyttämätön substraattiliuos säilyy jääkaapissa jopa viikon ajan. Substraatti on huonosti liukeneva ja saostuu huoneenlämpötilassa. Siksi ennen käyttöä kiteytynyt substraatti liuotetaan kuumentamalla kiehuvassa vesihauteessa. Alustan kuumennus ja liukeneminen voidaan toistaa enintään kaksi kertaa.

Substraattiliuos ALT:n määritykseen (liuos nro 1). Näytteet, joissa on 29,2 mg a-ketoglutaarihappoa ja 1,78 g alaniinia (0,89 g a-alaniinia), punnitaan analyysivaa'alla ja liuotetaan 1 M natriumhydroksidiliuokseen, kunnes sakka on täysin liuennut (pH 7,4). Liuos kaadetaan 100 ml:n pulloon ja tilavuus säädetään merkkiin 0,1 M fosfaattipuskurilla (pH 7,4). Lisää 1 tippa kloroformia. Liuos säilytetään pakastettuna jääkaapissa.

Substraattiliuos AsAT:n määritykseen (liuos nro 2). Näytteet, joissa on 29,2 mg a-ketoglutaarihappoa ja 2,66 g a-asparagiinihappoa (1,33 g a-asparagiinihappoa), punnitaan analyyttisellä vaa'alla. Seuraavaksi liuos valmistetaan samalla tavalla kuin liuos nro 1.

Substraattiliuos glukoosifosfaatti-isomeraasin määrittämiseen. Valmistetaan mediaalinen asetaattipuskuriliuos, pH 7,4 (9,714 g natriumasetaattia ja 14,714 g mediaalia liuotetaan veteen ja tilavuus säädetään 500 ml:ksi). Sekoita 8,33 ml 0,03 M glukoosi-6-fosfaatin dinatriumsuolan liuosta 25 ml:aan mediaalista asetaattipuskuria; lisätään seokseen 25 ml 0,1 M suolahappoliuosta ja laimennetaan vedellä 100 ml:ksi. Pidä kylmänä.

Substraattiliuos laktaattidehydrogenaasin määritykseen. Sekoita 1 ml 1 M natriumlaktaattiliuosta, 9 M NaCl-liuosta, 0,05 M Cl 2:ta, 10 g/l NAD-liuosta. 2,5 ml 0,5 M fosfaattipuskuriliuosta (pH 7,4) ja 1 g/l nitrotetratsoliumsinisiliuosta lisätään sisältöön. Ennen käyttöä seokseen lisätään 0,25 ml fenantsiinimetasulfaattiliuosta, jonka pitoisuus on 1 g / l.

Substraattiliuos fruktoosibisfosfaattialdolaasin määritykseen. 270 mg fruktoosibisfosfaatin bariumsuolaa liuotetaan 3,5 ml:aan 1 M kloorivetyhappoa. Lisätään 1 ml 14-prosenttista natriumsulfaattiliuosta ja muodostunut sakka poistetaan sentrifugoimalla. Lisää 1 tippa natriumsulfaattia supernatanttiin. Sameuden esiintyminen osoittaa bariumionien riittämättömän täydellisen laskeuman. Tässä tapauksessa lisätään lisää natriumsulfaattia ja sentrifugoidaan uudelleen. Sentrifugaatti säädetään 3-prosenttisella natriumhydroksidiliuoksella pH-arvoon 7,4-7,6, siirretään 25 ml:n pulloon ja tilavuus säädetään merkkiin. Saatu liuos sekoitetaan 25 ml:aan 0,56 M hydratsiinikloridiliuosta, 25 ml:aan 0,002 M monojodietikkahappoliuosta, 100 ml:aan 0,5-prosenttista natriumkarbonaattiliuosta ja 25 ml:aan tislattua vettä. Säilytetty jääkaapissa.

Tymoli-veronaalipuskuri. Sekoita 100 ml:n mittapullossa 80 ml puskuriliuosta ja 1 ml tymolin 10-prosenttista alkoholiliuosta, ravista ja lisää puskuriliuos merkkiin asti. pH-arvon tulee olla 7,55.

o-toluidiinireagenssi. 0,15 g tioureaa liuotetaan 94 ml:aan jääetikkaa ja sekoitetaan 6 ml:n kanssa tislattua O-toluidiinia. Säilytetty tummassa pullossa.

Fenoli kyllästetty vedellä. 35 ml vettä lisätään 100 g:aan tislattua fenolia ja sekoitetaan lämmittäen seosta hieman fenolin liukenemisen nopeuttamiseksi.

Fenolftaleeni, työliuos. Valmistetaan liuottamalla 75 mg ainetta 15 ml:aan 0,1 N natriumhydroksidiliuosta, liuoksen tulee olla väritöntä tai hieman punertavaa, värilliset liuokset eivät sovellu työhön. Reagenssin vastustuskyvyn lisäämiseksi siihen lisätään 3 mg trilonia, joka sitomalla raskasmetallien suoloja estää fenolftaleiinin itsehapettumisen ilmakehän hapen vaikutuksesta.

Fibrin. Naudan verifibriiniä pestään veren pigmenteistä juoksevalla vedellä usean päivän ajan, kunnes muodostuu valkoinen hyytymä. Vesi puristetaan pois ja glyseriinillä täytetty fibriini varastoidaan tiiviisti suljetussa purkissa. Ennen käyttöä fibriini pestään glyseriinistä.

Fosfori-vanilliinireagenssi. 4 osaa (tilavuuden mukaan) väkevää fosforihappoa sekoitetaan 1 osaan vanilliinin 0,6-prosenttista vesiliuosta. Reagenssia säilytetään tummassa lasisäiliössä huoneenlämmössä.

Fruktoosi 1,6-bisfosfaatti, natriumsuola. 2,0 ml fruktoosi-1,6-bisfosfaatin natriumsuolan 10-prosenttista liuosta laimennetaan 25 ml:n pullossa vedellä merkkiin asti. Stabiili jääkaapissa säilytettynä.

Värireagenssi urealle. Diasetyylimonooksiimia ja tiosemikarbatsidia sisältävän urean määrittämiseen tarkoitetun pakkauksen tabletti liuotetaan kuumentamalla 50 ml:n pullossa. Liuos säilyy stabiilina kolme viikkoa. Ennen käyttöä sekoita yhtä suuret määrät valmistettua liuosta ja 9,6 % rikkihappoliuosta.

β-glyserofosfaatin alkalinen liuos. Lisätään 100 ml:n mittapulloon 1 g natrium-β-glyserofosfaattia ja 0,85 g mediaalia, lisätään noin 30 ml tislattua vettä, liuotetaan ja täytetään merkkiin vedellä. Lisätään toiseen 100 ml:n mittapulloon 50 ml valmistettua β-glyserofosfaattiliuosta, 2,8 ml 0,1 M natriumhydroksidiliuosta ja täytetään merkkiin asti tislatulla vedellä (liuoksen pH 8,6). Laita nesteen päälle noin 3 ml tolueenia. Säilytä liuos jääkaapissa enintään 10 päivää.

Veren ottaminen, "ohuen sivelyn" ja "paksun pisaran" valmistaminen

bakteerien liikkuminen. Siiman rakenne, paksuus, pituus, kemiallinen koostumus. Kiinteiden valmisteiden ja mikro-organismien elävien solujen valmisteet.

Kemiallisesti puhtaita reagensseja käytetään puskuriliuosten valmistukseen. ja analyyttinen laatu, erityisesti valmistettu. Reagenssit valmistetaan seuraavasti.

Kaliumfosfaatti monosubstituoitu, KH 2 PO 4 , molekyylipaino 136,09. 100 g lääkettä liuotetaan kiehuvaksi lämmitettynä 150 ml:aan vettä. Liuos suodatetaan kuumana. Jatkuvasti sekoittaen suodos jäähdytetään 10 ºC:seen. Lisää sitten 150 ml etyylialkoholia. Suodosta jatkuvasti sekoittaen erotetut kiteet suodatetaan pois imusuppilolla ja kiteytetään uudelleen samoissa olosuhteissa; kiteet kuivataan vakiopainoon 105...110 ºC:ssa. Jos läsnä on valmistetta, jonka pääaineen pitoisuus on välillä 99,9 ... 100,0%, aineen esivalmistelua ei suoriteta.

Disubstituoitu natriumfosfaatti, Na 2HPO 4 12H 2O, molekyylipaino 358,12. Lääkkeen valmistamiseen on kaksi tapaa.

a) 150 g lääkettä liuotetaan 150 ml:aan vettä kuumennettaessa 100 0 C:een. Liuos suodatetaan kuumana ja jäähdytyksen jälkeen saostuneet kiteet suodatetaan pois. Uudelleenkiteytyminen toistetaan kuumentamalla 100 ºC:seen. Uudelleenkiteytettyä valmistetta kuumennetaan posliinikupissa vesihauteessa jatkuvasti sekoittaen, kunnes valmiste on täysin kuiva. Saatua suolaa kuivataan eksikkaattorissa sulatetun kalsiumkloridin päällä päivän aikana. Uudelleenkiteytetyssä valmisteessa (Na 2 HPO 4 · 2H 2 O) pääaineen pitoisuus tarkistetaan. Tätä varten noin 0,5000 g lääkettä liuotetaan 50 ml:aan vettä, lisätään 2...3 ml kyllästettyä natriumkloridiliuosta ja titrataan 0,1 N suolahappoliuoksella metyylipunaindikaattorin läsnä ollessa. . Muuta tarvittaessa näytteen kokoa. 1 ml täsmälleen 0,1 N suolahappoa vastaa 0,0178 g Na 2 HPO 4 2H 2 O.

b) 75 g lääkettä liuotetaan 250 ml:aan vettä, joka on lämmitetty 60 ºC:seen. Liuos suodatetaan kuumana, suodos jäähdytetään jatkuvasti sekoittaen 10 ºC:seen. Saostuneet kiteet suodatetaan pois imusuppilolla ja kiteytetään uudelleen samoissa olosuhteissa. Syntynyttä suolaa kuivataan ensin enintään 30 ºC:n lämpötilassa 24 tuntia, sitten sitä jatketaan uunissa 50 ºC:ssa 3-4 tuntia ja lopuksi 120±5 ºC:ssa vakiopainoon estäen suolaa pääsemästä. sulaminen. Kuivauksen jälkeen suolalla on koostumus Na2HPO4.

Reagenssien valmistamisen jälkeen valmistetaan kaliumfosfaatin monosubstituoidun ja natriumfosfaatin disubstituoidun kantaliuokset.

Annos vedetöntä kaliumfosfaatilla monosubstituoitua KH2PO4:a, joka painaa 9,078 g, liuotetaan veteen ja liuoksen tilavuudeksi säädetään 1 litra. Liuoksen stabiloimiseksi lisää 3-4 tippaa tolueenia.

Osa natriumfosfaatilla disubstituoitua Na2HPO412H20:ta, joka painaa 11,876 g, liuotetaan veteen ja liuoksen tilavuus säädetään 1 litraksi. Liuoksen stabiloimiseksi lisää 3-4 tippaa tolueenia.

Valmistetaan alkuliuoksista fosfaattipuskuriliuokset, joiden pH on 4,94-9,18, taulukon A.2 mukaisesti.

Taulukko A.2 - Fosfaattipuskuriliuos, jonka pH on 4,94 ... 9,18

pH	Na 2 HPO 4 12H 2 O -liuos, ml	KH 2 PO 4 -liuos, ml
4,94	1,0	99,0
5,29	2,5	97,5
5,59	5,0	95,0
5,91	10,0	90,0
6,24	20,0	80,0
6,47	30,0	70,0
6,64	40,0	60,0
6,81	50,0	50,0
6,98	60,0	40,0
7,17	70,0	30,0
7,38	80,0	20,0
7,73	90,0	10,0
8,04	95,0	5,0
8,34	97,5	2,5
8,67	99,0	1,0
9,18	100,0	0,0

Lisäyspäivä: 2015-08-06 | Katselukerrat: 4058 |

Puskuriliuosten pH lasketaan Henderson-Hasselbachin yhtälön mukaisesti:

– happopuskurille yhtälöllä on muoto

– pääpuskurille

Yhtälöt osoittavat, että tietyn koostumuksen puskuriliuoksen pH määräytyy hapon ja suolan tai emäksen ja suolan pitoisuuksien suhteen, eikä se siksi riipu laimennuksesta. Kun liuoksen tilavuus muuttuu, kunkin komponentin pitoisuus muuttuu saman verran.

Puskurikapasiteetti

Puskuriliuosten kyky ylläpitää vakio pH:ta on rajoitettu. Nuo. hapon tai alkalin lisääminen muuttamatta merkittävästi puskuriliuoksen pH:ta on mahdollista vain rajoitetuissa määrin.

Arvoa, joka kuvaa puskuriliuoksen kykyä vastustaa väliaineen reaktion muutosta, kun happoja ja emäksiä lisätään, kutsutaan liuoksen puskurikapasiteetiksi (B).

Puskurikapasiteettia mitataan vahvan hapon tai emäksen mooliekvivalenttimäärällä, jonka lisääminen 1 litraan puskuriliuosta muuttaa pH:ta yhdellä.

Matemaattisesti puskurikapasiteetti määritellään seuraavasti:

B hapolla (mol/l tai mmol/l):

,

missä n(1/z HA) on hapon mooliekvivalenttimäärä, pH 0 ja pH ovat puskuriliuoksen pH ennen ja jälkeen hapon lisäämisen, V B on puskuriliuoksen tilavuus.

Alkalissa (mol / l tai mmol / l):

,

missä n (1/z VOH) on alkalin mooliekvivalenttimäärä, loput nimitykset ovat samat.

Puskurin kapasiteetti riippuu useista tekijöistä:

1. Lisättyjen aineiden ja puskuriliuoksen komponenttien luonteesta. Koska jotkin aineet voivat muodostaa liukenemattomia yhdisteitä tai komplekseja tai aiheuttaa muita ei-toivottuja reaktioita puskurijärjestelmän komponenttien kanssa, jolloin puskurikapasiteetin käsite menettää merkityksensä.

2. Puskurijärjestelmän komponenttien alkupitoisuudesta.

Mitä suurempi määrä happo-emäs-parin komponentteja liuoksessa on, sitä suurempi on tämän liuoksen puskurikapasiteetti.

Puskuriliuoksen komponenttien pitoisuuksien suhteen raja, jossa järjestelmä säilyttää edelleen ominaisuutensa. pH-väliä = pK ± 1 kutsutaan järjestelmän puskurin toimintavyöhykkeeksi. Tämä vastaa suolan /C:n ja sinulle -suhteen vaihteluväliä 1/10 - 10/1.

B - (veri) \u003d 0,05 mol / l; B - (plasma) \u003d 0,03 mol/l; B - (seerumiveri) = 0,025 mol/l

Veripuskurijärjestelmät

Erityisesti hyvin tärkeä puskurijärjestelmät ovat organismien happo-emästasapainon ylläpitämisessä. Useimpien solunsisäisten nesteiden pH-arvo on välillä 6,8-7,8.

Ihmisveren happo-emäksinen tasapaino saadaan aikaan hiilikarbonaatti-, fosfaatti-, proteiini- ja hemoglobiinipuskurijärjestelmillä. Veriplasman normaali pH-arvo on 7,40 ± 0,05.

Hemoglobiinipuskurijärjestelmä tarjoaa 35 % puskurikapasiteetin verestä: . Oksihemoglobiini on vahvempi happo kuin pelkistetty hemoglobiini. Oksihemoglobiini on yleensä kaliumsuolan muodossa.

Karbonaattipuskurijärjestelmä : sijoittuu ensimmäisellä sijalla voiman suhteen. Se on edustettuna hiilihappo(H 2 CO 3) ja natrium- tai kaliumbikarbonaatti (NaHCO 3, KHCO 3) suhteessa 1/20. Bikarbonaattipuskuria käytetään laajalti korjaamaan happo-emäshäiriöitä kehossa.

Fosfaattipuskurijärjestelmä . Dihydrofosfaatilla on ominaisuuksia heikko happo ja on vuorovaikutuksessa vereen joutuvien alkalisten tuotteiden kanssa. Hydrofosfaatilla on heikon alkalin ominaisuuksia ja se reagoi vahvempien happojen kanssa.

Proteiinipuskurijärjestelmällä on amfoteeristen ominaisuuksiensa ansiosta happoja ja emäksiä neutraloiva rooli: happamassa ympäristössä plasman proteiinit käyttäytyvät emästen tavoin, emäksisessä ympäristössä happojen tavoin:

Kudoksissa on myös puskurijärjestelmiä, mikä auttaa pitämään kudosten pH:n suhteellisen vakiona. Tärkeimmät kudospuskurit ovat proteiinit ja fosfaatit. PH:n ylläpito tapahtuu myös keuhkojen ja munuaisten avulla. Ylimääräinen hiilidioksidi poistetaan keuhkojen kautta. Asidoosia sairastavat munuaiset erittävät enemmän hapanta yksiemäksistä natriumfosfaattia, ja alkaloosissa - enemmän emäksisiä suoloja: kaksiemäksistä natriumfosfaattia ja natriumbikarbonaattia.

Esimerkkejä ongelmanratkaisusta

Ratkaisu:

Laskemme sitten happopuskuriliuoksen pH:n kaavalla

Vastaus: 5,76

Ratkaisu:

Laskemme puskurikapasiteetin kaavalla:

Vastaus: 0,021 mol/l

Esimerkki 3

Puskuriliuos koostuu 100 ml:sta 0,1 mol/l etikkahappoa ja 200 ml:sta 0,2 mol/l natriumasetaattia. Miten tämän liuoksen pH muuttuu, jos siihen lisätään 30 ml 0,2 mol/l natriumhydroksidiliuosta.

Ratkaisu:

Laskemme puskuriliuoksen pH:n kaavalla:

Kun NaOH:ta lisätään puskuriliuokseen, suolan määrä kasvaa ja hapon määrä puskuriliuoksessa vähenee:

0,006 0,006 0,006

CH 3 COOH + NaOH \u003d CH 3 COONa + H 2 O

Laskemme n (NaOH) \u003d 0,03 l 0,2 mol / l \u003d 0,006 mol, joten puskuriliuoksessa hapon määrä vähenee 0,006 mol ja suolan määrä kasvaa 0,006 mol.

Laskemme liuoksen pH:n kaavalla:

Näin ollen: pH 2 - pH 1 = 5,82 - 5,3 = 0,52

Vastaus: puskurin pH-muutos = 0,52.

Tehtäviä varten itsenäinen päätös

4. 2 ml:n verta titraamiseksi pH:n muuttamiseksi alkuperäisestä arvosta (7,36) lopulliseen arvoon (7,0) oli tarpeen lisätä 1,6 ml 0,01 M HCl-liuosta. Laske happopuskurin kapasiteetti.

5. Kuinka monta moolia natriumasetaattia on lisättävä 300 ml:aan etikkahappoa, jotta vetyionien pitoisuus pienenee 300-kertaiseksi (K dis (CH 3 coon) = 1.85.10 -5).

6. Biokemiallisissa tutkimuksissa käytetään fosfaattipuskuria, jonka pH = 7,4. Missä suhteessa tulee sekoittaa natriumvetyfosfaatin ja natriumdivetyfosfaatin liuoksia, joiden pitoisuus on 0,1 mol / l, jotta saadaan tällainen puskuriliuos (pK (H 2 PO 4 -) \u003d 7,4).

7. Mitä CBS-häiriöitä havaitaan seuraavilla indikaattoreilla: veren pH = 7,20, Pco 2 = 38 mm Hg. Art., BO = 30 mmol / l, SBO = -4 mmol / l. Kuinka poistaa tämä KOS-rikkomus?

Testitehtävät

Tween-20 Fosphate Wash Buffer for Immunohistochemistry on konsentraatti (20x), jota käytetään laimentamisen jälkeen reagenssilevyjen pesuun ja immunohistokemiallisten näytteiden lyhytaikaiseen säilytykseen toimenpiteiden välillä. Laimentamisen jälkeen käyttövalmiin 0,01 M liuoksen pH on 7,4±0,1. Tämän fosfaattipuskuroidun suolaliuoksen käyttö mahdollistaa korkealaatuisen pesun lisäksi myös käytettyjen vasta-aineiden ja niiden epitooppien morfologisten ominaisuuksien säilyttämisen, mikä helpottaa immunohistokemiallisen reaktion edellyttämää spesifistä sitoutumista. Tween-20:n lisääminen PBS:ään tehostaa pesua ja ehkäisee epäspesifistä värjäytymistä.

Edumme:

Tällä hetkellä teemme yhteistyötä johtavien ulkomaisten kanssa. Asiakkaamme ovat sekä ei-valtiollisia että valtion instituutioita, mukaan lukien lääketieteelliset organisaatiot Moskovassa ja muissa Venäjän kaupungeissa. Kanta-asiakkaille on alennusjärjestelmä.